Actividad antioxidante de Lactobacillus Plantarum NJAU-01 en un modelo animal de envejecimiento

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Resumen

Fondo:El exceso de especies reactivas de oxígeno (ROS) puede causar daños graves al cuerpo humano y puede causar diversas enfermedades crónicas. Los estudios han encontrado que las bacterias del ácido láctico (BAL) tienen efectos antioxidantes y antienvejecimiento, y son recursos importantes para el desarrollo de antioxidantes microbianos. El objetivo de este artículo era explorar el papel potencial de una cepa antioxidante, Lactobacillus plantarum NJAU-01, seleccionada del producto cárnico curado en seco tradicional Jinhua Ham, en la regulación de la senescencia subaguda inducida por D-galactosa en ratones. Un total de 48 ratones Kun Ming libres de patógenos específicos (ratones SPF KM) se asignaron de forma aleatoria en 6 grupos: grupo de control con inyección de solución salina estéril, grupo de envejecimiento con inyección subcutánea de D-galactosa, grupos de tratamiento con inyección de D-galactosa y administración intragástrica de 10', 10 grados y 10 grados FU/mL L.plantarum NJAU-01, y grupo control positivo con inyección de D-galactosa y administración intragástrica de 1 mg/mL de Vitamina C.

Resultados:Los resultados mostraron que el grupo de tratamiento de L. plantarum NJAU-01 a 10 grados FU/mL mostró una mayor capacidad antioxidante total (T-AOC) y actividades enzimáticas antioxidantes de superóxido dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GSH-Px) y catalasa (CAT) que aquellos de los otros grupos en suero, corazón e hígado. En contraste, el contenido del marcador de estrés oxidativo malondialdehído (MDA) mostró niveles más bajos que los otros grupos (P<0.05). the="" antioxidant="" capacity="" was="" improved="" with="" the="" supplement="" of="" the="" increasing="" concentration="" of="" l.="" plantarum="">

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Conclusiones:Por lo tanto, este estudio demuestra que L plantarum NJAU-01 puede aliviar el estrés oxidativo al aumentar las actividades de las enzimas involucradas en la resistencia a la oxidación y disminuir el nivel de oxidación de lípidos en ratones. Palabras clave: Lactobacillus Plantarum NJAU-01, Jinhua Halm, Envejecimiento animal inducido por D-galactosa, Malondialdehído, Capacidad antioxidante

Fondo

La oxidación es un proceso necesario para el metabolismo celular en el cuerpo. Las especies reactivas de oxígeno (ROS) como radicales libres producidos por reacciones endógenas de oxidación-reducción (REDOX) fueron responsables de la oxidación. Sin embargo, cuando las células reciben estímulos externos inducidos por el estrés oxidativo, la producción excesiva de ROS supera la capacidad celular de eliminación de ROS [1]. Algunos datos de investigación han demostrado que el estrés oxidativo está relacionado con la vida útil de los organismos [2] La incapacidad de metabolizar las ROS restantes puede causar daños graves al cuerpo humano y puede causar varias enfermedades crónicas relacionadas con el envejecimiento, como la diabetes, enfermedades cardíacas, lípidos elevados en sangre, artritis, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares [3]. Normalmente, el organismo dispone de una serie de enzimas o no enzimas y sistemas de reparación que intervienen en la defensa antioxidante y los protegen del daño oxidativo [4-6]. Por ejemplo, el ácido ascórbico consume oxígeno a través de la autooxidación, reduciendo los iones metálicos para reducir el potencial de oxidación-reducción y participando en la defensa antioxidante [7]. La superóxido dismutasa (SOD) es capaz de convertir los radicales superóxido dañinos en peróxido de hidrógeno [8]. La catalasa (CAT) participa en la defensa antioxidante celular al descomponer el peróxido de hidrógeno, evitando así que la reacción de Fenton produzca radicales libres de hidroxilo [9]. Sin embargo, las ROS superfluas provocarían daño oxidativo causado por muchos factores como la irradiación (rayos X, rayos Y, ultravioleta), reactivos químicos (iones metálicos, HONO, HOCl y HOBr), fármacos y sus metabolitos, e incluso de fumar. Estos sistemas antioxidantes naturales en el cuerpo a menudo son insuficientes para prevenir el daño oxidativo, lo que requiere suplementos antioxidantes como la astaxantina y el ácido fólico [10]. Por lo tanto, la búsqueda de un enfoque disponible que pueda aliviar o inhibir el daño oxidativo celular ha recibido una atención considerable.

Las bacterias del ácido láctico (BAL) se han encontrado y utilizado ampliamente en productos cárnicos fermentados. Además de mejorar los nutrientes, el sabor y la conservación de los alimentos fermentados, las BAL también tienen características probióticas adicionales [11, 12]. Algunos estudios han encontrado que las BAL tienen efectos antioxidantes y antienvejecimiento, y son recursos importantes para el desarrollo de antioxidantes microbianos [13]. Por ejemplo, se descubrió que el caso de Lactobacillus separado del licor casero chino alivia eficazmente la peroxidación de lípidos y mejora el metabolismo de los lípidos debido a la capacidad de eliminación de colesterol alto y la capacidad de adhesión de células intestinales humanas [14]. Previamente, hemos aislado y analizado una bacteria de ácido láctico mediante la capacidad antioxidante total del jamón de Jinhua y la hemos identificado como Lactobacillus plantarum mediante la detección de características bioquímicas, morfología colonial y secuenciación de 16 s rDNA, denominada L. plantarum NJAU{{10} } [15]. L. plantarum NJAU-01 mostró un excelente poder de eliminación y poder reductor de los radicales libres DPPH, los radicales libres hidroxilo y los radicales libres del anión superóxido in vitro [16]. En el modelo celular junto con el sensor electroquímico, la capacidad del macrófago RAW264.7 en respuesta al estrés oxidativo mejoró significativamente mediante la incubación con L. planta-tarum NJAU-01 [15].Extracto de Cistanche Anti Radiaciónademás, l plantarum NJAU-01 también podría aliviar el grado de oxidación de proteínas en salchichas fermentadas [17]. Así, L. plantarum NJAU-01 ha demostrado tener un efecto antioxidante in vitro, lo que promete ser utilizado potencialmente para regular el estrés oxidativo in vivo.

Cistanche puede antienvejecimiento

Por lo tanto, es esencial evaluar el efecto antioxidante de L. Plantarum NJAU-01 in vivo utilizando el modelo animal, que puede observar de manera efectiva la absorción, el transporte y el metabolismo en animales. Se han desarrollado ratones de envejecimiento inducido por D-galactosa para simular la aparición de daño oxidativo en el proceso de envejecimiento del cuerpo durante décadas [18]. La D-galactosa contribuye a la generación de ROS a través de la reacción con aminoácidos para formar productos finales de glicación a través de glicación no enzimática con los beneficios de baja toxicidad, proceso de oxidación lento y ningún efecto letal [19,20]. Se ha informado a menudo que el modelo de ratones de envejecimiento inducido por D-galactosa evalúa la capacidad antioxidante de probióticos como L-carnitina, ácido ursólico y L. Plantarum AR501 [19,21,22]. Por lo tanto, estos ratones maduros inducidos por el envejecimiento de la D-galactosa se utilizaron para la investigación preliminar del papel de L. plantarum NJAU-01 en el alivio del estrés oxidativo en ratones. L. planta-tarum NJAU-01 se alimentó a ratones envejecidos inducidos por D-galactosa para evaluar sus efectos antioxidantes in vivo midiendo la capacidad antioxidante total (T-AOC), las actividades enzimáticas antioxidantes de SOD, glutatión peroxidasa (GSH-Px) y CAT, así como el contenido del marcador de estrés oxidativo malondialdehído (MDA) en suero, corazón e hígado de ratones.hierba de cistancheEsto proporcionará la base para futuras investigaciones sobre el desarrollo y la utilización de L. plantarum NJAU-01 como probiótico.

Resultados

Peso corporal e índices de órganos en ratones.

Ninguno de los animales murió durante el período de alimentación y se incluyeron los datos de todos los ratones. Los efectos de diferentes tratamientos con L. plantarum NJAU-01 en los índices de órganos de ratones se muestran en la Tabla 1. Los ratones del grupo de mayor edad inyectados con D-galactosa mostraron un peso corporal significativamente menor en comparación con el de los otros grupos (P<0.05). no="" significant="" difference="" was="" ob-served="" in="" kidney="" liver="" index="" and="" lung="" be-tween="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" treatment="" groups="" normal="" positive="" group="" aging="" model="" p="">0.05). El índice cardíaco del grupo del modelo de envejecimiento fue significativamente más alto en comparación con el del grupo normal (P<>

Actividad de T-AOC en suero, corazón e hígado de ratones La actividad de T-AOC de ratones entre diferentes grupos de tratamiento se muestra en la Fig. 1. La actividad de T-AOC del grupo modelo de ratones envejecidos fue de 6,68 U/mL, y mientras en corazón, suero e hígado fueron 6,62, 3,55 y 3,58 U/mg de proteína, respectivamente, que fueron inferiores a otros grupos (P<0.05). in="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" lp3="" group,="" serum,="" heart,="" and="" liver="" had="" significantly="" higher="" t-aoc="" than="" the="" other="" groups=""><0.05). the="" liver="" t-aoc="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). however,="" the="" antioxidant="" activity="" of="" the="" heart="" and="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" lp3="" group=""><0.05). the="" above="" results="" indicate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" t-aoc="" of="" the="" mice="" in="" a="" dose-dependent="">

Actividad de SOD en suero, corazón e hígado de ratones

Las actividades de SOD de los ratones del grupo modelo de envejecimiento en suero, corazón e hígado de ratones fueron de 16,72 U/ml, 18,93 U/mg de proteína y 44,82 U/mg de proteína, respectivamente, que fueron significativamente más bajas que las del grupo de control (P<0.05,fig.2).in contrast,the="" sod="" activity="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice="" in="" vc="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" aging="" model="" group="" and="" control="" group=""><0.05). the="" sod="" activity="" in="" heart="" of="" mice="" lp2="" group="" was="" 61.85="" mg="" which="" not="" significantly="" different="" from="" that="" positive="" control="" p="">0.05). Por otro lado, las actividades de SOD en suero, corazón e hígado del grupo de dosis alta fueron de 48,83 U/mL, 74,67 U/mg de proteína y 69,55 U/mg de proteína respectivamente, que fueron significativamente más altas que las de los otros grupos (P<0.05). these="" results="" showed="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" could="" alleviate="" the="" oxidative="" damage="" induced="" by="" d-galactose="" to="" the="" body,="" and="" increase="" sod="">

GSH-Px en suero, corazón e hígado de ratones

El grupo LP3 presentó mayor actividad de GSH-PX que la de los ratones de otros grupos en suero, corazón e hígado (P<0.05, fig.="" 3).="" the="" gsh-px="" activity="" in="" the="" heart="" and="" liver="" tissues="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" signifi-cantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" for="" the="" serum="" gsh-px="" activity="" between="" lp1="" and="" control="" group="" p="">0.05). Además, los grupos modelo de envejecimiento en el corazón y el hígado de ratones fueron 50,39 U/mL, 8,48 U/mg de proteína y 62,67 U/mg de proteína respectivamente, mostrando una actividad GSH-Px más baja que el otros grupos (P<0.05). therefore,l.="" plantarum="" njau-01="" has="" an="" enhancing="" effect="" on="" the="" antioxidant="" enzymatic="" activity="" of="" gsh-px="" in="" mice,="" and="" the="" strain="" concentration="" is="" related="" to="" the="" antioxidant="">

Actividad CAT en suero, corazón e hígado de ratones

Como se muestra en la Fig. 4, las actividades de CAT en suero, corazón e hígado de ratones LP3 fueron de 22,98 U/mL, 137,99 U/mg de proteína y 136,31 U/mg de proteína respectivamente, que poseían una actividad de CAT más alta que la de otros tratamientos. grupos (P<0.05), indicating="" that="" the="" concentration="" of="" the="" strain="" had="" a="" marked="" effect="" on="" the="" cat="" activity.="">crecimiento del pene cistanchePor el contrario, el grupo modelo de envejecimiento mostró una actividad de CAT más baja que la de los ratones en los otros grupos en suero, corazón e hígado de ratones (P<0.05). as="" for="" vc="" group,="" it="" presented="" higher="" cat="" activity="" than="" the="" control="" group="" and="" aging="" model="" group="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice=""><0.05). these="" findings="" demonstrate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" cat="" activity="" in="" mice="" serum,="" heart="" and="" liver="">

Contenido de MDA en suero, corazón e hígado de ratón

El contenido de MDA en suero, corazón e hígado de ratones en el grupo modelo de envejecimiento fue significativamente mayor que el grupo control (P<0.05, fig.="" 5).="" the="" serum="" mda="" content="" of="" mice="" in="" the="" lp3="" group="" was="" 14.29="" nmol/ml,="" and="" the="" mda="" contents="" in="" the="" heart="" and="" liver="" were="" 8.00="" and="" 26.49="" nmol/mg="" protein,="" respectively,="" being="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" other="" groups=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" mda="" content="" among="" the="" positive="" control="" lp1="" and="" lp2="" groups="" p="">0.05).

Discusión

El modelo de ratones de envejecimiento subagudo por inducción de D-galactosa es ampliamente utilizado y reconocido [14,23,24]. El modelo implica la inyección continua de D-galactosa, que se reduce a galactosa mediante la galactosa reductasa dentro de las células, lo que provoca un cambio en la presión osmótica entre la célula y el medio ambiente y, a continuación, la inflamación y el envejecimiento de la célula [25]. Las enzimas intracelulares que alivian el estrés oxidativo, como SOD, CAT y GSH-Px, no son suficientes para eliminar las especies reactivas de oxígeno cuando las células del cuerpo están sujetas a estrés oxidativo agudo. Es un método directo y eficaz para estudiar la actividad antioxidante de las LAB inyectando LAB en ratones de envejecimiento subagudo inducidos por D-galactosa y comparando la actividad antioxidante enzimática, como SOD, GSH-Px y CAT con el grupo de control [21].

En este estudio, el grupo del modelo de envejecimiento y el grupo de control positivo (inyección con Vc) se compararon con diferentes dosis del grupo de tratamiento con L. plantarum NJAU-01. El índice de órganos es la relación entre el peso de un órgano en el animal de experimentación y su peso corporal; un aumento en el coeficiente de órganos indica congestión, edema o hiperplasia del órgano, mientras que una disminución en el coeficiente de órganos indica atrofia de órganos y otras enfermedades degenerativas. cambios. El índice de órganos también se utilizó para expresar los cambios en el grado de envejecimiento como se evidencia en los estudios de Yu et al. (2016) y Xu et al. (2016)[18,26]. El presente estudio reveló que los ratones en el grupo modelo de envejecimiento tenían un peso más bajo y un índice cardíaco más alto que los ratones en los otros grupos. La administración de D-galactosa disminuyó significativamente la actividad enzimática antioxidante en suero, corazón e hígado de ratones en el grupo modelo de envejecimiento. Se sugirió que los suplementos de L. plantarum NJAU-01 reducen la lesión hepática de ratones con estrés oxidativo inducido por D-galactosa al regular las actividades anormales de SOD, GSH-Px y CAT a niveles normales. Está de acuerdo con los estudios informados al investigar el papel antioxidante de las cepas objetivo, incluidas L. plantarum AR113 y ARS01 [12], L. del-brueckii subsp. bulgaricus F17 [27]. Por lo tanto, el modelo de envejecimiento de ratones subagudos con D-galactosa en el estudio actual es eficiente para proporcionar evidencia confidencial para investigar la capacidad antioxidante de BAL in vivo.

Los resultados de investigaciones anteriores han indicado que el mecanismo antioxidante de las LAB se manifiesta principalmente en los siguientes aspectos: iones metálicos quelados, sistemas de enzimas antioxidantes autótrofas, producción de metabolitos antioxidantes, aumento de la actividad de las enzimas antioxidantes del huésped, control de las vías de señalización antioxidantes. , y la regulación del grupo de bacterias intestinales [28]. Estos aspectos juegan un papel crítico en el alivio de enfermedades cuyo desarrollo involucra estrés oxidativo [29]. La MDA se considera el biomarcador de la peroxidación lipídica y puede conducir a la polimerización reticulada de macromoléculas, lo que desempeña un papel potencial en la citotoxicidad y la genotoxicidad. El contenido de MDA generalmente se usa como base para evaluar el grado de peroxidación lipídica y reflejar el nivel de daño a las células [30].beneficios de la salsa cistancheEl estudio actual encontró que los ratones con estrés oxidativo inducido por D-galactosa habían reducido significativamente los niveles de MDA en suero, corazón e hígado al inyectarles L. plantarum NJAU-01, lo que indica que L. plantarum puede reducir efectivamente la formación de peróxido de lípidos en ratones. Esto es consistente con el estudio in vitro, que mostró la capacidad efectiva de eliminación de radicales libres de la cepa L. plantarum NJAU-01 [16]. De manera similar, los lechones destetados alimentados con L. plantarum ZLP001 presentaron un contenido sérico de MDA más bajo (4,1 nmol/ml) que el grupo control (6,23 nmol/ml), lo que demuestra que L. Plantarum ZLP001 poseía actividad antioxidante [31]. El estudio actual sugirió que los suplementos de L. plantarum NJAU-01 podrían aliviar esencialmente el grado de oxidación de lípidos en ratones inducidos con D-galactosa, protegiéndolos del estrés oxidativo.

Hay un conjunto de sistemas de defensa enzimáticos que eliminan los radicales libres en el cuerpo, como SOD, GSH-Px y CAT, que eliminan sinérgicamente los radicales superóxido, los radicales hidroxilo y el peróxido de hidrógeno, respectivamente [32] La oxidación de radicales libres y el antioxidante El sistema de defensa del organismo se encuentra en un estado de equilibrio dinámico. Cuando el cuerpo está expuesto a estímulos que inducen estrés oxidativo, este equilibrio dinámico puede verse interrumpido. La producción excesiva de ROS daña las proteínas, los lípidos y las moléculas de ácido nucleico, lo que en última instancia conduce al envejecimiento de los organismos y al desarrollo de diversas enfermedades [3]. La SOD puede convertir los radicales superóxido en peróxido de hidrógeno, que sigue siendo citotóxico y puede generar radicales hidroxilo mediante la reacción de Fenton [34]. El radical hidroxilo es una de las ROS más activas, que puede reaccionar con la materia orgánica en la célula con una velocidad de reacción rápida y un efecto destructivo [35]. Además, CAT puede descomponer los radicales hidroxilo para participar en la defensa antioxidante celular [36]. En condiciones fisiológicas, las células pueden producir enzimas antioxidantes, como GSH-Px, para protegerlas del daño oxidativo [25]. Este estudio mostró que L. plantarum NJAU-01 puede mejorar significativamente las actividades de SOD, GSH-Px, CAT y T-AOC en suero, corazón e hígado de ratones, lo que indica que L. plantarum NJAU-01 alivia el daño oxidativo causado por la D-galactosa. Este efecto puede atribuirse a dos aspectos.L. plantarum NAJU-01 puede promover la actividad de enzimas antioxidantes en ratones, regulando el equilibrio de ROS a niveles normales en ratones. Por otro lado, también podría eliminar los radicales libres y actuar de forma sinérgica con SOD, GSH-Px y CAT para reducir el estrés oxidativo. La regulación de las actividades de las enzimas antioxidantes por parte de las bacterias probióticas también se informó para Lactobacillus fermentum [37] y Lactobacillus fermentum ME-3 [38]. Este estudio demuestra que L. planta-tarum NJAU-01 ejerce un efecto antioxidante en ratones y es una alternativa prometedora a los antioxidantes sintéticos o derivados de plantas. Por lo general, se usa como antioxidante de fuente biológica para el estudio de iniciadores de salchichas o productos funcionales [18]. Aunque la investigación sobre la actividad antioxidante de las BAL ha captado una gran atención en los últimos años, las investigaciones sobre el mecanismo subyacente de la antioxidante de L. Plantarum NJAU-01, en particular, las vías metabólicas, la expresión de proteínas y la regulación de la la flora son todavía escasas. Además, el cruce y la complementación de múltiples mecanismos antioxidantes en las bacterias del ácido láctico requieren más investigación.

Conclusiones

Este estudio preliminar demostró el efecto de L. plan-term NJAU-01 aislado de jamón de Jinhua en el modelo de envejecimiento de ratones inducido por D-galactosa. Se encontró que la adición de L. Plantarum NJAU-01 durante el proceso de alimentación de los ratones puede aumentar significativamente la actividad de las enzimas antioxidantes y disminuir el contenido de MDA. Este estudio confirma la posibilidad de que L. planta-tarum NJAU-01 sea un bioantioxidante y sienta las bases para un mayor estudio del mecanismo antioxidante de L.plantarum.

Métodos

Cepa bacteriana y preparación animal.

L. plantarum NJAU{{0}} (CGMCC14194) se seleccionó del producto cárnico curado en seco tradicional jamón Jinhua utilizando métodos de identificación morfológica, bioquímica y genética molecular [15]. Esta cepa tenía una alta actividad antioxidante y se conservó en la Facultad de Ciencias e Ingeniería de Alimentos de la Universidad de Yangzhou [16]. Lactobacillus Plantarum NJAU-01 se conservó como stocks congelados (-80 grados) en caldo De Man, Rogosa, Sharpe (MRS) (Bio-way Technology Co., Ltd, Shanghái, China) complementado con un 20 por ciento (v/v) glicerol. La cepa del inóculo al 1 por ciento se activó dos veces y se cultivó en 10 ml de caldo MRS a 37 grados durante 18 horas. A continuación, se inoculó la suspensión bacteriana de 100 μL en el medio MRS sólido mediante el diluidor automático y la placa (Referencia 414,000, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francia). El medio sólido MRS inoculado se cultivó a 37 grados durante 24 h, y el recuento viable se contó mediante el contador automático de colonias HD (Scan 1200, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francia) y el grado Scan. software versión 8.0 (Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francia). Se detectó que la concentración de la suspensión bacteriana era de 2 × 10' CFU/mL, y el cultivo de la cepa de 10 mL se centrifugó a 6,000 g durante 10 min a 4 grados para desechar el sobrenadante. El sedimento se lavó tres veces con solución salina estéril y luego se disolvió en 20 mL de solución salina estéril, obteniendo 1 x 10 grados FU/mL de L. plantarum NJAU-01. Luego, se extrajo una alícuota de 2 mL de suspensión bacteriana a 1 × 10 grados FU/mL en un tubo nuevo para combinar con 18 mL de solución salina estéril para preparar una dosis de bacterias de 1 × 10 grados FU/mL. De forma análoga, la concentración de 1x107 UFC/mL se realizó mediante la dilución de una suspensión bacteriana de 1x10 grados FU/mL. Los ratones KM de grado SPF (hembra, 4 semanas de edad, con un peso de 18-20 g) se eligieron para el animal de experimentación. El alimento para animales y las camas fueron proporcionados por el Instituto de Medicina Comparada de la Universidad de Yangzhou (Yangzhou, Jiangsu, China). Todos los experimentos con animales fueron aprobados por los Comités de Ética y Bienestar Animal de la Universidad de Yangzhou y cumplieron con las pautas del Comité Administrativo Institucional y el Comité de Ética de Animales de Laboratorio (número de licencia de IACUC: 201811009). Los ratones se criaron a 20±2 grados con una humedad relativa del 55±5 por ciento. Las ratas se alimentaron al azar con una dieta estándar para ratas durante un ciclo de luz y oscuridad de medio día (fase de luz de 7:00 a. m. a 7:00 p. m.). Se criaron cuatro ratones en una jaula, alimentados con agua y una dieta libre de patógenos. Todos los materiales, incluidas las tapas, los comederos, los biberones y la ropa de cama se esterilizaron en autoclave antes de su uso. Los ratones se aclimataron durante una semana antes del establecimiento del modelo de envejecimiento de los ratones.

Establecimiento del modelo de envejecimiento en ratones.

El modelo subagudo de envejecimiento en ratones inducido por D-galactosa se estableció y se refirió a Zhao et al. con ligeras modificaciones [39]. El método de administración de galactosa se realizó mediante inyección subcutánea en el cuello y la espalda. Se asignó aleatoriamente un total de 48 ratones SPF en 6 grupos (8 ratas/grupo) después de una semana de aclimatación. Los números aleatorios se generaron usando la función estándar=ALEATORIO() en Microsoft Excel. A los ratones de todos los grupos, excepto del grupo de control, se les inyectó por vía subcutánea 500 mg de D-galactosa por kg de peso corporal (Shanghai Blue Season Biological Co.,Ltd, Shanghai, China) durante 4 semanas una vez al día (solución de D-galactosa, 50 g/L). Al grupo de control se le inyectó 10 ml de solución salina estéril por kg de peso corporal. Además, los tres grupos de tratamiento recibieron dosis intragástricas de L.dosis de cistanche tubulosa redditPlantarum NJAU-01 (10' CFU/mL, 10 grados CFU/mL y 10 grados FU/mL) a 20 mL por kg de peso corporal, y designado como grupo LP1, grupo LP2 y grupo LP3, respectivamente. Los ratones del grupo de control y del grupo de mayor edad se alimentaron por vía intragástrica con solución salina estéril a razón de 20 ml/kg al día. Los ratones del grupo de control positivo se trataron con 1 mg/ml de vitamina C (Vc) a razón de 20 ml/kg al día. Todo el experimento duró cuatro semanas.

Preparación de muestras de tejido

Los ratones fueron sacrificados hasta un estado inconsciente mediante inyección intraperitoneal de isoflurano al 3 por ciento. El cese de los latidos del corazón y la falta de respuesta al estímulo nocivo (pellizco de la pata trasera) se utilizaron como criterios para verificar la muerte. Se extrajo el globo ocular de los ratones y se extrajo sangre. Luego, la sangre se centrifugó inmediatamente a 3,00xg durante 10 min a 4 grados para obtener el suero y se almacenó a -20 grados hasta su análisis. Después de ser sacrificados, los ratones fueron ejecutados inconscientemente tirando de las vértebras cervicales, y se extrajeron el hígado, el corazón, el bazo, los riñones, los pulmones y el cerebro, y se pesaron para determinar los índices de los órganos. Las muestras de hígado y corazón se homogeneizaron en homogeneizado de tejido al 10 por ciento con NaCl al 0,9 por ciento, y el sobrenadante se recogió por centrifugación como se mencionó anteriormente.

Detecciones de parámetros

El T-AOC y las actividades enzimáticas antioxidantes de SOD, GSH-Px y CAT, y los contenidos de MDA se determinaron utilizando el kit de ensayo de capacidad antioxidante total (método ABTS, A015-2-1), ensayo de superóxido dismutasa (SOD) (método WST-1, A001-1-2), kit de ensayo de glutatión peroxidasa (GSH-PX) (método colorimétrico, A0060201), kit de ensayo de catalasa (CAT) (método colorimétrico, A007-2-1 ) y kit de ensayo de malondialdehído (MDA) (método TBA, A003-2-1), respectivamente. Todos los kits se adquirieron de Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute Co, Ltd (Nanjing, Jiangsu, China). Todas las muestras se analizaron por triplicado y los procedimientos de detección se realizaron de acuerdo con las instrucciones.

análisis estadístico

Los datos se analizaron utilizando el software Data Processing System 7.05 (Hangzhou Ruifeng Information Technology Co., Ltd, Hangzhou, China). Se comparó la diferencia de medias mediante el nuevo método de rango complejo de Duncan. La prueba de significación estadística se realizó al nivel 0.05 (P<>

Este artículo está extraído de Ge et al. BMC Microbiología (2021) 21:182 https://doi.org/10.1186/s12866-021-02248-5