Caracterización de la inmunidad de las células T en madres infectadas con el virus de la hepatitis B crónica con tarifa de alanina transaminasa posparto

Abstracto

Fondo:

Las tasas posparto de alanina transaminasa (ALT) ocurren con frecuencia en madres con infección crónica por el virus de la hepatitis B (VHB) que reciben terapia antiviral anteparto (AVT). Nuestro objetivo fue caracterizar la inmunidad de las células T en madres infectadas por el VHB que experimentaron tasas de ALT posparto.

Métodos:

Veinte mujeres embarazadas infectadas con el VHB que recibieron AVT entre las 26 y 28 semanas de gestación se inscribieron y siguieron hasta las 15 a 18 semanas después del parto. Entre las 20 mujeres embarazadas infectadas con el VHB, 6 experimentaron ALT posparto (madres AF), mientras que 14 no (madres NAF). Los fenotipos y funciones de los linfocitos T se analizaron mediante citometría de flujo.

Existe una cierta relación entre la alanina aminotransferasa (ALT) posparto y la inmunidad. La alanina aminotransferasa es una enzima de la membrana interna de las células hepáticas, que participa en el metabolismo de los aminoácidos y tiene una alta sensibilidad a la lesión de las células hepáticas. En el período posparto, la alanina aminotransferasa puede estar elevada debido a los ajustes corporales durante el embarazo y el parto. La ALT alta puede reflejar una función hepática alterada, lo que puede conducir a una disminución de la inmunidad. El hígado es un importante órgano inmunológico en el cuerpo humano. La función hepática deteriorada puede afectar la inmunidad del cuerpo, afectar la capacidad del cuerpo para resistir a los patógenos y causar diversas enfermedades.

Por lo tanto, la ALT alta posparto puede indicar que la inmunidad del cuerpo está debilitada y es necesario fortalecer la regulación de los hábitos de vida y la ingesta nutricional para mejorar la inmunidad y mantener la salud del hígado. Al mismo tiempo, cuando una madre tiene ALT alta, debe buscar atención médica a tiempo para conocer la causa y realizar el tratamiento correspondiente. Desde este punto de vista, la importancia de la inmunidad es importante. Además de las mujeres embarazadas, también debemos prestar atención a la inmunidad, especialmente a la mejora de la inmunidad. Cistanche puede mejorar significativamente la inmunidad. Cistanche es rico en varias sustancias antioxidantes, como vitamina C, carotenoides, etc. Estos ingredientes pueden eliminar los radicales libres, reducir el estrés oxidativo y mejorar la resistencia del sistema inmunológico.

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Resultados:

En comparación con las madres con NAF, los niveles cuantitativos de HBsAg en las madres con AF disminuyeron significativamente a las 6–8 o 15–18 semanas después del parto. Solo se encontraron diferencias significativas en los niveles de HBeAg entre estos grupos en el momento del parto. Los números de células T reguladoras (Treg) en las madres con AF fueron más bajos que los de las madres con NAF antes de AVT; sin embargo, no hubo diferencias significativas en los números de Treg en otros puntos de seguimiento. La expresión de otros fenotipos de células T fue similar entre los dos grupos. Las células T en madres con FA produjeron más citocinas proinflamatorias (IFN-, IL-21, TNF-, IL-2) o menos citocinas antiinflamatorias (IL-10) que las de NAF madres antes, durante o después del tratamiento antiviral. La proporción de IFN- a IL-10 producida por las células T CD4 más o las células T CD8 más fue mayor en las madres con AF que en las madres con NAF durante el embarazo o después del parto.

Conclusiones:

Las características de la inmunidad de las células T fueron distintas entre las madres con tarifa de ALT posparto y aquellas sin tarifa de ALT desde el embarazo hasta el posparto, lo que indicó que la inmunidad de las células T podría estar involucrada en la tarifa de ALT posparto.

Palabras clave:

Virus de la hepatitis B, Posparto, Tarifa de alanina transaminasa, Inmunidad de células T.

Fondo

A nivel mundial, la infección por el virus de la hepatitis B (VHB) sigue siendo un importante problema de salud pública. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estimó que en 2015, 257 millones de personas vivían con una infección crónica por VHB y que las enfermedades relacionadas con el VHB provocaban 887000 muertes al año en todo el mundo [1]. En países altamente endémicos, la transmisión maternoinfantil (MTCT, por sus siglas en inglés) es la principal vía de transmisión del VHB; aproximadamente el 40-50 por ciento de los pacientes con HBsAg plus adquieren infecciones a través de la transmisión maternoinfantil [2]. Según las últimas estimaciones de la OMS, la proporción de niños menores de 5 años con infección crónica por el virus de la hepatitis B ha disminuido del 5 % en el período previo a la vacunación desde la década de 1980 hasta principios de la década de 2000 a menos del 1 % en 2019 [1] .

Reducir la incidencia de TMI sigue siendo un desafío importante. Los estudios han demostrado que los niveles de ADN del VHB en las madres infectadas por el VHB son un factor de riesgo independiente para la TMI [3–5]. Se informó que la TMI no ocurrió en madres con una carga viral < 6 log10 copias/mL [6]. Los estudios han demostrado que junto con la administración de la vacuna contra el VHB y la inmunoglobulina, la terapia antiviral antes del parto (AVT) puede reducir aún más la incidencia de TMI en mujeres embarazadas con cargas virales altas [7–9]. Los estudios anteriores se centraron principalmente en la eficacia y la seguridad de la AVT, así como en la probabilidad y la gravedad del aumento de la alanina transaminasa (ALT) materna después del parto [10]. Las características del brote de ALT posparto son principalmente anomalías de leves a moderadas, que pueden resolverse espontáneamente en la mayoría de las madres [11]. Actualmente, sigue siendo controvertido si la intervención antiviral durante el embarazo aumenta la incidencia de brotes de ALT posparto [7, 12, 13].

El éxito del embarazo depende del sistema inmunitario de una mujer embarazada, que no solo necesita tolerar los antígenos paternos, sino que también necesita proteger a la mujer y al feto en crecimiento contra los patógenos invasores [14]. Durante las diversas etapas del embarazo, el sistema inmunológico de las mujeres embarazadas cambia dinámicamente. La inmunidad proinflamatoria es dominante en el primer trimestre del embarazo, mientras que la segunda fase del embarazo es predominantemente antiinflamatoria. La inmunidad proinflamatoria vuelve a ser dominante en la última etapa del embarazo [15]. Los estudios han demostrado que la frecuencia de las células T reguladoras (Treg) en la sangre periférica de las mujeres embarazadas disminuye durante el embarazo, lo que puede deberse a cambios en los niveles de estrógeno y progesterona [16]. Esta disminución también puede ocurrir debido a que las Treg maternas migran a la superficie materno-fetal para prevenir el rechazo materno-fetal, lo que resulta en una disminución de la frecuencia de Treg en sangre periférica [17].

Por lo tanto, el estado inmunitario de las mujeres embarazadas con infección crónica por VHB es diferente al de las mujeres con infección crónica por VHB que no están embarazadas. Estas alteraciones se revierten rápidamente después del parto. Las hipótesis actuales infieren que las alteraciones en el sistema inmunitario durante el embarazo podrían ser responsables de una alta tasa de tasas de ALT posparto en mujeres infectadas por el VHB [18]. Sin embargo, no se han investigado las características inmunológicas de las madres infectadas por el VHB que experimentan la tasa de ALT posparto.

Este estudio tuvo como objetivo caracterizar la inmunidad de las células T de las madres infectadas con el VHB y explorar los mecanismos inmunológicos de la tarifa de ALT posparto al comparar la inmunidad de las células T de las madres infectadas con el VHB que experimentaron la tarifa de ALT posparto con madres infectadas con el VHB sin tarifa de ALT.

Pacientes y métodos

Pacientes

Desde septiembre de 2017 hasta abril de 2020, 20 mujeres embarazadas con infecciones crónicas por VHB que recibieron la intervención antiviral profiláctica (telbivudina o tenofovir) para la prevención de la TMI fueron inscritas y seguidas en el Hospital Nanfang en Guangzhou, China. Estas mujeres embarazadas se encontraban en la fase de inmunotolerancia de la infección crónica por VHB en el momento de la inscripción, mostrando positividad para HBeAg, nivel normal de ALT y alto nivel de ADN del VHB (mayor o igual a 6 log10 UI/mL) antes de la intervención antiviral. Todos los sujetos reclutados para este estudio dieron negativo para el virus de la hepatitis C y el virus de la inmunodeficiencia humana. Además, se excluyeron aquellos que recibían tratamiento concurrente con fármacos citotóxicos, inmunomoduladores y glucocorticoides, así como aquellos con enfermedades sistémicas malignas importantes, cirrosis hepática, enfermedades cardíacas o disfunciones renales.

Se administró AVT a corto plazo a los sujetos a partir de las semanas 26 a 28 de gestación hasta el parto. Fueron visitadas en la semana 26 a 28 de gestación (antes de la intervención antiviral), 1 mes después de la intervención antiviral, en el parto, 6 a 8 semanas posparto y 15 a 18 semanas posparto. La tarifa ALT se definió como mayor o igual a 2 × límite superior normal (LSN). Las madres con tarifa ALT (madres AF) eran madres infectadas por el VHB que experimentaban una tarifa ALT posparto (n=6), mientras que las madres sin tarifa ALT (madres NAF) eran madres infectadas por el VHB con ALT posparto<2×ULN (n=14).

Evaluaciones virológicas y serológicas

Los niveles séricos de HBsAg y HBeAg se midieron utilizando un ensayo Roche Elecsys (Roche, Basilea, Suiza). Los niveles séricos de ADN del VHB se determinaron cuantitativamente mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real utilizando un kit de diagnóstico de ácido nucleico comercial (Sansure Biotech, Changsha, China) con un límite inferior de detección (LOD) de 100 UI/mL. Los marcadores serológicos y los ensayos de ADN del VHB se realizaron en el Laboratorio de Investigación de Hepatitis Virales del Hospital Nanfang (Guangzhou, China). Los niveles séricos de ALT y aspartato transaminasa (AST) se analizaron en el Departamento de laboratorio clínico del Hospital Nanfang (Guangzhou, China).

Análisis de citometría de flujo de células mononucleares de sangre periférica (PBMC)'

Se obtuvieron muestras venosas de sangre periférica de mujeres individuales antes, durante y después de suspender la intervención antiviral. Las PBMC se aislaron mediante centrifugación en gradiente de densidad Ficoll-Hypaque y se crioconservaron en nitrógeno líquido para su análisis diferido [19]. Para el análisis de citometría de flujo, las PBMC descongeladas se tiñeron con tinción de células muertas fijables Live/Dead (eBioscience, San Diego, CA, EE. UU.) durante 10 min a temperatura ambiente. A continuación, las células se tiñeron durante 30 min a 4 grados en la oscuridad utilizando los siguientes anticuerpos (Abs): complejo proteico de clorofila de peridinina (PerCP)–Cy5.5- o isotiocianato de fluoresceína (FITC)-antiCD4 (clones SK3 y RAP -T4, respectivamente; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.), FITC- o aloficocianina (APC)-anti-CD8 (clon RPA-T8; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.), ficoeritrina (PE)-anti -CD45RA (HI100; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.), PE–CY7-anti-CD62L (clon DREG-56; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.), PE–CY 7-anti-CD25 (clon M-A251; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.), APC-anti-CD69 (clon FN50; Biolegend, San Diego, CA, EE. UU.), PE–CY{{34 }}anti-CD38 (clon HIT2; BioLegend, San Diego, CA, EE. UU.) y PE-anti-PD-1 (clon MIH4; BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.). La tinción intranuclear APC-anti-forkhead box P3 (FOXP3; clon PCH101; eBioscience, San Diego, CA, EE. UU.) se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las células teñidas se evaluaron mediante citometría de flujo con el sistema BD FACSDiva (BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.) y los datos se analizaron con el software FlowJo (TreeStar Inc., Ashland, OR, EE. UU.) [20].

Análisis de citometría de flujo de tinción de citoquinas intracelulares (ICS)

Para analizar la producción de citocinas intracelulares, se estimularon 5 × 105 células/pocillo con 5 ug/mL de anticuerpo monoclonal anti-CD3 (mAb; clon 145-2C11; BD Biosciences) y 5 ug/mL de mAb anti-CD28 soluble (clon 37.51; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.) en una 96-placa de fondo graso bien a 37 grados durante 24 h. Se agregó Brefeldin A (10 ug/mL; BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.) durante las últimas 6 h de incubación. Las células se tiñeron con tinción de células muertas fijables Live/Dead (eBioscience, San Diego, CA, EE. UU.) a temperatura ambiente. Después de lavarlas, las células se tiñeron con PerCP-Cy5.5-antiCD4 y FITC-anti-CD8 a 4 grados durante 30 min. Las células teñidas en la superficie se fijaron y permeabilizaron con un reactivo de fijación/permeabilización (BD Biosciences, San Jose, CA, EE. B27; BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.), PE-antiinterleucina (IL)-10 (clon JES3-9D7; Biolegend, San Diego, CA, EE. UU.), PE-anti- IL-21 (clon 3A3-N2.1; BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.), APCanti-factor de necrosis tumoral (TNF)- (clon 6401.1111; BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.), EE. UU.), PE-anti-IL-2 (clon MQ1-17H12; BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.) y PE-Cy7-anti-IL{{55} } (clon 8D4-8; BD Biosciences San Jose, CA, EE. UU.) durante 30 min. Los análisis se realizaron utilizando el sistema BD FACSDiva (BD Biosciences, San Jose, CA, EE. UU.) y el programa FlowJo (TreeStar Inc., Ashland, OR, EE. UU.) [21].

análisis estadístico

Los datos se expresaron como la mediana con un intervalo de confianza (IC) del 95 por ciento o como un rango intercuartílico. La prueba no paramétrica U de Mann-Whitney se utilizó para el análisis estadístico basado en pruebas de hipótesis de dos colas utilizando el software GraphPad Prism (v.8.0; GraphPad Software, San Diego, CA, EE. UU.). valores p<0.05 were considered significant.

Resultados

Características clínicas de madres con infección crónica por VHB

The clinical characteristics are comparable between the AF mothers and the NAF mothers. No statistically significant differences were found between the two groups in terms of age, number of births, weeks of gestation, AVT duration, or delivery methods. The levels of ALT or AST in HBV-infected mothers from the AF group or NAF group were all within the normal range before the antiviral intervention, and the median levels of ALT (interquartile range) were 22.00 (15.50, 23.50) and 21.00 (15.75, 24.25) U/L, respectively, while the median levels of AST (interquartile range) were 21.00 (16.50, 29.00) and 19.00 (16.75, 21.25) U/L, respectively, and no statistically significant differences were found. ALT and AST were within 1×ULN during antiviral treatment in the NAF mothers (including one month after antiviral intervention and at delivery), while one mother from the AF mothers had ALT over 2×ULN and her ALT levels returned to normal at delivery. Other AF mothers maintained ALT and AST levels in the normal range (1×ULN) during the antiviral intervention. At 6–8  weeks postpartum, 2 mothers (33.33%) from the AF group developed transient ALT>2×ULN. Another 4 mothers had ALT>2 × LSN a las 15–18 semanas posparto. Dos madres del grupo de FA continuaron con anomalías en la ALT y se reinició la terapia antiviral después del parto (Tabla 1).

Características virológicas y serológicas de las madres infectadas por el VHB durante el embarazo y el puerperio

Los niveles medianos de HBsAg en las madres con AF fueron más bajos que los de las madres con NAF antes de la intervención antiviral, durante la AVT o después de la interrupción del tratamiento antiviral después del parto. Se encontraron diferencias significativas solo a las 6–8 semanas y 15–18 semanas después del parto (p=0.459, p=0.294, p=0.415, p=0 .027, p=0.021). Todas las madres experimentaron una ligera disminución en los niveles de HBsAg durante AVT y niveles aumentados después del parto (Fig. 1A). Además, los niveles de HBeAg en el grupo AF fueron más bajos que los del grupo NAF en 5 puntos de seguimiento desde las 26 a las 28 semanas de gestación hasta las 15 a 18 semanas después del nacimiento, con una diferencia estadísticamente significativa solo entre los dos grupos ocurriendo en el parto (p=0.035) (Fig. 1B). Con respecto a los niveles de ADN del VHB, no se encontraron diferencias significativas entre las madres AF y NAF en ninguno de los puntos de seguimiento (Fig. 1C).

Comparación de los fenotipos de células T CD4 más de madres con FA y NAF antes, durante y después de la AVT

Para analizar las características de los fenotipos de células T CD4 más T en madres con FA, comparamos las diferencias en la expresión fenotípica de células T CD4 más basadas en la presencia de CD45RA, CD62L, CD38, CD69 y PD-1 entre la FA y Grupos NAF antes, durante y después de la intervención antiviral (Fig. 2A-E). No se observaron diferencias significativas en la expresión de CD45RA, CD62L, CD38 o PD-1 por las células T CD4 plus en ninguno de los puntos de seguimiento. Sin embargo, encontramos que el marcador de activación CD69 fue expresado por las células T CD4 más en las madres con AF a una tasa significativamente mayor que en las madres con NAF a las 26–28 semanas de gestación (antes de la intervención antiviral) y 15–18 semanas después del nacimiento (p=0.04, p=0.04) (Fig. 2D). Examinamos más a fondo la cantidad de Tregs (CD4 más CD25 más Foxp3 más) entre los dos grupos antes, durante y después de la intervención antiviral y descubrimos que la cantidad de Tregs en las madres con AF era significativamente mayor que la de las madres con NAF antes de la intervención antiviral (es decir, a las 26–28 semanas de gestación) (p=0.02). No hubo diferencias significativas en las cantidades de Tregs entre los dos grupos durante y después de suspender la intervención antiviral (Fig. 2F).

Comparación de los fenotipos de células T CD8 más de madres con FA y NAF antes, durante y después de la AVT

En la Fig. 3A se muestran gráficos FACS representativos que muestran los fenotipos de las células T CD8 plus en función de la presencia de CD45RA, CD62L, CD38, CD69 y PD-1. Desde las 26 a las 28 semanas de gestación hasta las 15 a 18 semanas después del nacimiento, el número de células CD8 más CD45RA más, CD8 más CD62L más células, CD8 más CD38 más células, CD8 más CD69 más células y CD8 más PD-1 las células plus fueron similares entre las madres AF y NAF (Fig. 3B-F).

Las células T CD4 plus en madres con FA produjeron más citocinas proinflamatorias

Después de la estimulación anti-CD3/anti-CD28, analizamos los niveles de citocinas secretadas por las células T CD4 plus en 6 madres con AF y 14 con NAF mediante citometría de flujo. En la Fig. 4A se muestran diagramas de puntos FACS representativos de la producción de citoquinas a partir de células T CD4 plus. Antes del tratamiento antiviral (a las 26–28 semanas de gestación, Fig. 4B), las células T CD4 más en las madres con FA secretaron más IFN-, IL-21 e IL-2 que las células T CD4 más en las madres con NAF madres (p=0.007, p=0.035, p=0.021). Además, parece que la secreción de TNF- por las células T CD4 plus fue mayor en las madres con AF que en las madres con NAF (p=0.087). Sin embargo, en comparación con las células T CD4 plus de madres NAF, las células de madres AF mostraron una capacidad reducida para secretar citocina antiinflamatoria IL-10 (p=0.024). La secreción de IL-4 por las células T CD4 plus no fue significativamente diferente entre los dos grupos (p > 0,999) (Fig. 4B). Durante AVT (incluido un mes después de la terapia antiviral y en el momento del parto), no hubo diferencias estadísticamente significativas en la secreción de diversas citocinas por parte de las células T CD4 plus entre las madres AF y NAF (Fig. 4C, D). Después de detener la intervención antiviral (incluso a las 6 a 8 semanas posparto y a las 15 a 18 semanas posparto), la capacidad de las células T CD4 más para secretar IFN- fue mayor en las madres con AF que en las madres con NAF (p=0.049 , p=0.035). Además, las madres con FA mostraron una secreción atenuada de IL-10 a las 15–18 semanas posparto (p=0.004) (Fig. 4E, F). Finalmente, al comparar la relación de frecuencia de células T CD4 más secretoras de IFN con células T CD4 más secretoras de IL-10-en madres con FA con la de madres con NAF en todos los puntos de seguimiento, encontramos que la relación en madres con FA fue significativamente mayor que el de las madres NAF (p=0.002, p=0.046, p=0.001, p=0.005) antes de la intervención antiviral, un mes después de la intervención antiviral, en el momento del parto y entre las 15 y 18 semanas posparto. A las 6–8 semanas posparto, no hubo una diferencia significativa en la proporción de citoquinas proinflamatorias/antiinflamatorias producidas por las células T CD4 más, pero se observó una tendencia similar (p=0.072) (Fig. 4G).

Las células T CD8 plus de madres con FA producen más citocinas proinflamatorias

Gráficos de puntos FACS representativos de citocinas proinflamatorias (IFN-, IL-21, TNF- e IL-2) y citocinas antiinflamatorias (IL-4 e IL-10 ) producido por las células T CD8 plus se muestran en la Fig. 5A. Al comparar la secreción de citocinas proinflamatorias y antiinflamatorias de las células T CD8 plus en las madres con AF con la de las madres con NAF antes, durante y después de la AVT, encontramos que la cantidad de IFN- -que secreta CD8 plus Las células T en las madres con AF fueron significativamente más altas que las de las madres con NAF a las 26–28 semanas de gestación y a las 6–8 semanas después del parto (p=0.046, p=0.035). La cantidad de células T CD8+ secretoras de IL-10-en el grupo NAF fue significativamente mayor que en el grupo AF en todos los puntos de seguimiento (p=0.005, p=0. 044, p=0.039, p=0.025, p=0.002) (Fig. 5B–F). Además, después de analizar la proporción de células T CD8 más secretoras de IFN- -a células T CD8 más secretoras de IL-10-en cada punto de seguimiento, se encontró que las madres con AF tenían una proporción significativamente mayor de estas células que la de las madres NAF antes y después de suspender AVT (6–8 semanas posparto y 15–18 semanas posparto) (p=0.007, p=0.046, p{{50} }.027). La proporción mediana de las madres con AF fue más alta que la de las madres con NAF a las 30–32 semanas de gestación o parto, pero no se observó una diferencia significativa (p=0.127, p=0.058) (Figura 5G). Brevemente, la capacidad de las células T CD8 más para secretar factores proinflamatorios en el grupo AF fue mayor que en el grupo NAF, mientras que la capacidad para secretar el factor antiinflamatorio IL-10 fue significativamente más débil que en el grupo NAF. el grupo NAF.

Discusión

En los últimos años, las pautas de la hepatitis B recomendaron que la intervención antiviral se debe administrar a las mujeres embarazadas con niveles altos de ADN del VHB para bloquear la transmisión maternoinfantil y retirarse después del parto [22–24]. Se informó que algunas de las madres infectadas por el VHB que se sometieron a intervenciones antivirales al final del embarazo experimentaron tasas de ALT posparto después de la abstinencia del fármaco [25–28]. El gran tamaño de la muestra y el estudio retrospectivo mostraron que los niveles elevados de ALT y los niveles detectables de ADN del VHB en el momento del parto eran factores de riesgo independientes para las tasas de enfermedad posparto [27]. Sin embargo, hay datos limitados sobre la inmunidad de las células T en pacientes infectadas por el VHB con anomalías de la ALT posparto. Por lo tanto, en el presente estudio, buscamos examinar la inmunidad de las células T de las madres infectadas con el VHB que experimentaron la tasa de ALT posparto, para explorar los mecanismos inmunológicos que podrían ser la base de las tasas de ALT posparto.

Nuestro estudio encontró que el 95 por ciento (19/20) de las mujeres embarazadas infectadas con el VHB mantuvieron la normalización de la ALT durante el período antiviral. Las tarifas posparto de ALT aparecieron en el 30 por ciento (6/20) de las madres HBsAg plus /HBeAg plus después de suspender la intervención antiviral, entre los cuales 4 casos regresaron espontáneamente a la normalidad y los otros 2 casos requirieron reiniciar el tratamiento antiviral. Encontramos que los niveles de HBsAg en las madres con AF fueron significativamente más bajos que los de las madres con NAF a las 6 a 8 semanas y a las 15 a 18 semanas después del parto. Este resultado mostró que las madres con infección crónica por VHB con niveles más bajos de HBsAg son propensas a tener una tasa de ALT después del parto.

Se ha informado que puede ocurrir daño hepático posparto debido a cambios en el estado inmunitario materno [11, 18]. En este estudio, encontramos que antes del tratamiento antiviral (a las 26–28 semanas de gestación), en comparación con las cantidades de Treg en las madres con NAF, las de las madres con AF disminuyeron y las células T en las madres con AF secretaron cantidades significativamente más altas de citocinas proinflamatorias. (IFN-, IL-21, IL-2) y menos cantidad de citocinas antiinflamatorias (IL-10). La proporción de citoquinas proinflamatorias (IFN-) a citoquinas antiinflamatorias (IL-10) en las células T CD4 plus o CD8 plus fue mayor en las madres con FA que en las madres con NAF antes, durante o después de la AVT. Las Treg se reconocen actualmente como células T CD4 plus que muestran efectos inmunosupresores significativos. El mantenimiento de la tolerancia inmunológica se manifiesta principalmente por el efecto inmunosupresor de las Treg en las respuestas de las células T específicas del VHB, lo que conduce a una infección crónica [29, 30]. Además, las citocinas proinflamatorias (como IFN- e IL-12) previenen la tolerancia inmunológica y erradican los virus, mientras que las citocinas antiinflamatorias (IL-10) mantienen la tolerancia inmunológica [31, 32].

En comparación con las madres NAF, las madres AF tenían una frecuencia de Treg más baja entre las 26 y 28 semanas de gestación, una inmunidad proinflamatoria más fuerte y una inmunidad antiinflamatoria más débil desde las 26 a 28 semanas de gestación hasta las 15 a 18 semanas después del parto. Estos resultados indicaron que las madres infectadas por el VHB tenían características distintas de inmunidad de células T, que desempeñaron un papel importante en las tasas de ALT posparto. Aquellas madres con una frecuencia más baja de Treg y una proporción más alta de citoquinas proinflamatorias a citoquinas antiinflamatorias en las células T CD4 plus o CD8 plus tendrán más probabilidades de experimentar una tasa posparto de ALT. De lo anterior, inferimos que cuando la inmunidad proinflamatoria es dominante (es decir, las células T secretan más citocinas proinflamatorias y menos citocinas antiinflamatorias; las cantidades de Treg disminuyen) en mujeres embarazadas infectadas con VHB, la tolerancia inmunológica de los pacientes tiende a disminuir. atenuarse, por lo que es más probable que ocurran tarifas de ALT posparto.

Debido a que las diferencias en el perfil de citocinas proinflamatorias/antiinflamatorias existían desde las 26 a 28 semanas de gestación (antes de la AVT) y seguían siendo significativas hasta las 15 a 18 semanas posteriores al parto, consideramos que las distintas características de la inmunidad de las células T no fueron causados ​​por AVT ni por el estado del embarazo. Al inicio del estudio, las madres infectadas por el VHB exhibieron distintas características de inmunidad de células T, aunque sus parámetros bioquímicos eran normales. Por lo tanto, es necesario monitorear los niveles de ALT posparto en mujeres embarazadas con infección crónica por VHB y se debe prestar más atención a aquellas con índice de ALT porque es probable que experimenten la transición de la fase de inmunotolerancia a la fase de eliminación inmunológica.

Este estudio estuvo limitado por la falta de un análisis de seguimiento a largo plazo de madres HBsAg más/HBeAg más con carga viral alta que no se sometieron a AVT; en consecuencia, no pudimos analizar si AVT afectó la incidencia y la gravedad de las tarifas de ALT posparto. Además, el tamaño de la muestra de este estudio fue pequeño, especialmente en el grupo de FA. Se necesitan más estudios con tamaños de muestra más grandes para validar aún más los resultados de este estudio.

Conclusión

En este estudio, encontramos que las características de la inmunidad de las células T eran distintas entre las madres con AF y NAF desde el embarazo hasta el posparto. La inmunidad de las células T en las madres con FA se caracterizó por una menor frecuencia de Treg y una mayor proporción de citoquinas proinflamatorias a citoquinas antiinflamatorias en las células T CD4 plus o CD8 plus. Los resultados indicaron que el estado inmunitario materno podría desempeñar un papel importante en la tasa de ALT posparto en madres infectadas por el VHB. Por lo tanto, las madres infectadas por el VHB con ALT en el posparto deben ser monitoreadas de cerca porque pueden experimentar la transición de la fase de inmunotolerancia a la fase inmunoactiva.

abreviaturas

ALT: alanina transaminasa; VHB: virus de la hepatitis B; AVT: terapia antiviral anteparto; AF: tarifa ALT; NAF: tarifa no ALT; Treg: linfocito T regulador; OMS: La Organización Mundial de la Salud; TMI: transmisión de madre a hijo; ULN: El límite superior de lo normal; AST: aspartato transaminasa; PBMC: células mononucleares de sangre periférica; PerCP: proteína de clorofila de peridinina; FITC: isotiocianato de fluoresceína; APC: aloficocianina; PE: ficoeritrina; FOXP3: Caja de horquilla P3; ICS: tinción de citoquinas intracelulares; mAb: anticuerpo monoclonal; IFN: interferón; IL: interleucina; TNF: factor de necrosis tumoral; IC: Intervalo de confianza.

Expresiones de gratitud

Agradecemos a las madres inscritas en este estudio y a nuestros colegas del Departamento de Enfermedades Infecciosas del Hospital de Nanfang por su ayuda en la recolección de muestras y datos clínicos.

Contribuciones de los autores

ZHL, YFG, JH y MTH diseñaron el estudio. MTH recolectó muestras, realizó los experimentos, realizó los análisis estadísticos y redactó el manuscrito. XRY, XLZ y YHH recopilaron datos clínicos y realizaron un seguimiento de los pacientes. ZHL, YFG, JH y MTH revisaron el manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.

Fondos

Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvención No.81673243), la Subvención Nacional de Investigación de China del Decimotercer Plan Quinquenal para Proyectos Clave en Enfermedades Infecciosas (2017ZX10201201) y el Proyecto de Medicina Sanming en Shenzhen ( SZSM201911001).

Disponibilidad de datos y materiales.

Los conjuntos de datos utilizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente a pedido razonable.

Declaraciones

Aprobación ética y consentimiento para participar

Este estudio fue realizado por Buenas Prácticas Clínicas, siguiendo las normas locales y los principios éticos descritos en la Declaración de Helsinki. El protocolo del estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional del Hospital Nanfang, Universidad Médica del Sur (IRB No. NFEC-2019-197), y se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los sujetos.

Consentimiento para publicación

No aplica.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Detalles del autor

Departamento de Enfermedades Infecciosas, Hospital Nanfang, Universidad Médica del Sur, Guangzhou 510515, China. 2 Dirección actual: Departamento de Enfermedades Infecciosas, Tercer Hospital Popular de Huizhou, Universidad Médica de Guangzhou, Huizhou 516002, China. 3 Dirección actual: Departamento de Obstetricia y Ginecología, Rama Zengcheng del Hospital Nanfang, Universidad Médica del Sur, Guangzhou 511340, China. 4 Departamento de Administración de Infecciones Nosocomiales, Hospital Zhujiang, Universidad Médica del Sur, Guangzhou 510280, China. 5 Centro de Enfermedades del Hígado, Hospital de Shenzhen de la Universidad Médica del Sur, Shenzhen 518000, China.

Referencias

1. Organización Mundial de la Salud. Hoja informativa sobre la hepatitis B. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b. Consultado el 27 de julio de 2020.

2. Su W, Chen S, Yang C, Chuang P, Chang H, Chang M. El impacto de la inmunización universal contra la hepatitis B infantil en la reducción de la tasa de portadores de hepatitis B en mujeres embarazadas. J Infecciones Dis. 2019;220(7):1118–26.

3. Peng T, Cai Q, Yang M, Chen S, Chen F, Wang M, Peng L, Wong G, Shen C, Cheng W, et al. Tendencias epidemiológicas y características virológicas de la infección por el virus de la hepatitis B en mujeres embarazadas y recién nacidos. Arco Virol. 2019;164(5):1335–41.

4. Trault NA, Levy MT, Cheung KW, Jourdain G. Hepatitis viral y embarazo. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2021;18(2):117–30.

5. Yi W, Pan CQ, Hao J, Hu Y, Liu M, Li L, Liang D. Riesgo de transmisión vertical de la hepatitis B después de la amniocentesis en madres con antígeno HBs positivo. J Hepatol. 2013;60(3):523–9.

6. Zou H, Chen Y, Duan Z, Zhang H, Pan C. Factores virológicos asociados con el fracaso de la inmunoprofilaxis pasiva-activa en bebés nacidos de madres HBsAg positivas. J hepatitis viral. 2012;19(2):e18–25.

7. Pan CQ, Duan Z, Dai E, Zhang S, Han G, Wang Y, Zhang H, Zou H, Zhu B, Zhao W, et al. Tenofovir para prevenir la transmisión de hepatitis B en madres con carga viral alta. N Engl J Med. 2016;374(24):2324–34.

8. Brown RJ, McMahon BJ, Lok AS, Wong JB, Ahmed AT, Mouchli MA, Wang Z, Prokop LJ, Murad MH, Mohammed K. Terapia antiviral en la infección viral crónica por hepatitis B durante el embarazo: revisión sistemática y metanálisis . hepatología. 2016;63(1):319–33.

9. Funk AL, Lu Y, Yoshida K, Zhao T, Boucheron P, van Holten J, Chou R, Bulterys M, Shimakawa Y. Eficacia y seguridad de la profilaxis antiviral durante el embarazo para prevenir la transmisión maternoinfantil del virus de la hepatitis B : una revisión sistemática y metanálisis. Lancet Infect Dis. 2021;21(1):70–84.

10. Li Z, Duan X, Hu Y, Zhou M, Liu M, Kang K, Cai H, Yi W, Fu D, Gao X. Eficacia y seguridad de lamivudina o telbivudina en la prevención de la transmisión de la hepatitis B de madre a hijo virus: un estudio del mundo real. Biomed Res Int. 2020;2020:1374276.

11. Bzowej NH, Tran TT, Li R, Belle SH, Smith CI, Khalili M, Chung R, Tsai N, Trault N. Tarifas totales de alanina aminotransferasa (ALT) en mujeres norteamericanas embarazadas con infección crónica por hepatitis B: resultados de una estudio observacional prospectivo. Soy J Gastroenterol. 2019;114(8):1283–91.

12. Zhang H, Pan CQ, Pang Q, Tian R, Yan M, Liu X. El uso de telbivudina o lamivudina al final del embarazo reduce de manera segura la transmisión perinatal del virus de la hepatitis B en la práctica de la vida real. hepatología. 2014;60(2):468–76.

13. Jourdain G, Ngo-Giang-Huong N, Harrison L, Decker L, Khamduang W, Tierney C, Salvadori N, Cressey TR, Sirirungsi W, Achalapong J, et al. Tenofovir versus placebo para prevenir la transmisión perinatal de la hepatitis B. N Engl J Med. 2018;378(10):911–23.

14. Zhang YH, Sol HX. Moléculas de punto de control inmunitario en el embarazo: enfoque en las células T reguladoras. Eur J Inmunol. 2020;50(2):160–9.

15. Chatterjee P, Chiasson VL, Bounds KR, Mitchell BM. Regulación de las citocinas antiinflamatorias interleucina-4 e interleucina-10 durante el embarazo. inmunol frontal. 2014;5:253.

16. Mjosberg J, Svensson J, Johansson E, Hellstrom L, Casas R, Jenmalm MC, Boij R, Matthiesen L, Jonsson JI, Berg G, et al. La progesterona y el 17 beta-estradiol inducen la reducción sistémica de CD4dim CD25highFoxp3 más Treg funcionalmente supresores en el segundo trimestre del embarazo humano. J Immunol. 2009;183(1):759–69.

17. Tilburgs T, Roelen DL, van der Mast BJ, de Groot-Swings GM, Kleijburg C, Scherjon SA, Claas FH. Evidencia de migración selectiva de células T reguladoras brillantes CD4 más CD25 específicas del feto de la sangre periférica a la decidua en el embarazo humano. J Immunol. 2008;180(8):5737–45.

18. Joshi SS, Cfn CS. Hepatitis B y embarazo: características virológicas e inmunológicas. Hepatol Comun. 2019;4(2):157–71.

19. Bøyum A. Aislamiento de linfocitos, granulocitos y macrófagos. Scan J Immunol. 1976;5(s5):9–15.

20. Barathan M, Mohamed R, Vadivelu J, Chang LY, Vignesh R, Krishnan J, Sigamani P, Saeidi A, Ram MR, Velu V, et al. Los linfocitos T CD8 plus de pacientes con infección crónica por el VHC expresan múltiples puntos de control inmunitarios negativos tras la estimulación con péptidos del VHC. Inmunocelular. 2017;313:1–9.

21. Huang M, Gao Y, Liao D, Li J, Tang B, Ma Y, Yin X, Li Y, Liu Z. Efectos de la exposición intrauterina al HBeAg derivado de la madre sobre la inmunidad de las células T en la sangre del cordón umbilical. Scan J Immunol. 2020;92(2):e12914.

22. Asociación Europea para el Estudio del Hígado. EASL 2017 Guías de práctica clínica sobre el manejo de la infección por el virus de la hepatitis B. J Hepatol. 2017;67(2):370–98. 23. Sociedad China de Hepatología, Asociación Médica China; Sociedad China de Enfermedades Infecciosas, Asociación Médica China. Las guías de prevención y tratamiento de la hepatitis B crónica (versión 2019). Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2019;27(12):938–61.

24. Hou J, Cui F, Ding Y, Dou X, Duan Z, Han G, Jia J, Mao Q, Li J, Li Z, et al. Algoritmo de manejo para interrumpir la transmisión maternoinfantil del virus de la hepatitis B. Clin Gastroenterol Hepatol. 2019;17(10):1929–36.

25. Giles M, Visvanathan K, Lewin S, Bowden S, Locarnini S, Spelman T, Sasadeusz J. Predictores clínicos y virológicos de las tasas hepáticas en mujeres embarazadas con hepatitis B crónica. Gut. 2015;64(11):1810–5.

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