Propiedades químicas de un manoglucano de Cistanche Deserticola

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1. Materiales

Se utilizaron pastas orales para caballos de dos fabricantes diferentes que contenían 10 mg/g (A) o 20 mg/g (B) de ivermectina, respectivamente. Se realizó el ensayo cuantitativo de ivermectina y el contenido fue del 104,4 al 107,7 por ciento de la concentración declarada.

2. Prueba de disolución

La prueba se realizó con una Ph. Eur. aparato de paletas (Pharma Test, Heinberg, Alemania), con agitaciones de 75 rpm o 50 rpm, a 37 -0,5 C. Lauril sulfato de sodio (BDH Chemicals, Poole, Inglaterra) 0,5 por ciento (w /v) se utilizó solución acuosa como medio de disolución (900 ml). La pasta (4 g de A o 2 g de B) se colocó en el recipiente con una jeringa con una cánula (A) o dejando caer la muestra en la superficie del medio de disolución (B). Después de los intervalos de tiempo (15, 30, 45, 60 min y 2 h), se extrajo una muestra del medio de disolución (2 ml), se filtró a través de un filtro de vidrio y se analizó.

3. Análisis de HPLC

La determinación de ivermectina se realizó con un método de HPLC modificado como se describe en Ph. Eur. Las soluciones analizadas se diluyeron con metanol (1:10). El sistema de HPLC constaba de una columna octadecilo (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), un integrador D-12500 A, un detector UV-Vis L{{7} }, bomba L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Alemania). Se utilizó como fase móvil una mezcla de acetonitrilo:metanol:agua (64:24:16) con un caudal de 1,9 ml/min. El volumen de la muestra inyectada fue de 20 ml y la detección se realizó a 254 nm.

4. Estudios de solubilidad

Se agitó un acceso de la sustancia en matraces de vidrio herméticamente cerrados con un solvente adecuado (Tabla 1) durante 20 h a 37 0.1 C. Las suspensiones se filtraron y el filtrado, después de la dilución en metanol, se analizó por HPLC. .

5. Estabilidad en solución ácida

Las soluciones de ivermectina en HCl {{0}}.1 M se almacenaron en viales de vidrio bien cerrados a 20 C y 37 C. Los cromatogramas de las soluciones se registraron en t ¼ 0 y después de 1, 2 y 6 h. Se calcularon el área de la ivermectina (tiempo de retención 10,5 min) y picos adicionales.

Referencias

Orientación de la FDA para la industria: formas de dosificación semisólidas no estériles SUPAC-SS. Cambios de escalamiento y posteriores a la aprobación: química, fabricación y controles; pruebas de liberación in vitro y documentación de bioequivalencia in vivo. Mayo de 1997. Directrices de la FIP para pruebas de disolución de productos orales sólidos (1997) Disolutos. Tecnología 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Directrices de la FIP/AAPS para las pruebas de disolución/liberación in vitro de formas de dosificación novedosas/especiales, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artículo 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School de Ciencias Farmacéuticas, Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín, Pekín, China

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Recibido el 13 de febrero de 2004, aceptado el 4 de abril de 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Centro de Investigación Moderna de Medicina Tradicional China, Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín, No. 38, Xueyuan Road , distrito de Haidian, Pekín 100083, China Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Un nuevo manoglucano deCistanche deserticade China se caracteriza. El compuesto es responsable de una estimulación leve de la proliferación de linfocitos T y B inducida por mitógenos.

Cistanche deserticaYC Ma es un holoparásito que crece en las raíces de la planta dicotiledónea Haloxylon ammodendron Bunge, que está ampliamente distribuida en el noroeste de China. Como es un tónico importante en la medicina oriental, se han reivindicado muchos componentes activos y actividades farmacológicas (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Estas propiedades podrían estar asociadas con algunos de los componentes polisacáridos deCistancheque aún no han sido investigados. Los polisacáridos pécticos mitógenos y los polisacáridos neutros se han aislado y caracterizado a partir deCistanche deserticade Mongolia (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Aquí presentamos las propiedades químicas de un nuevo manoglucano deCistanche deserticade China, que es responsable de la estimulación leve de la proliferación de linfocitos T y B inducida por mitógenos. Después de los tallos deCistanche deserticaYC Ma se extrajeron con etanol al 95 por ciento, se usó agua destilada fría para extraer el residuo. El extracto en agua fría se precipitó con EtOH, la proteína se eliminó y se dializó, obteniendo el polisacárido crudo CCDP. El polisacárido crudo se fraccionó en una columna DEAE y una columna Sephadex G-150 para producir un polisacárido sin proteínas (CDP-6), que comprendía glucosa (89,2 por ciento) y manosa (1{{58} }.4 por ciento ), y de los cuales el Sr promedio se estimó en 6.8 -104. El polisacárido CDP-6 mostró [a 20 D 42 (c 1, H2O). Las configuraciones absolutas de los azúcares se determinaron mediante GC de TMS (–)-2-glucósidos de butilo. Se metiló CDP-6 (Needs et al. 1993), se hidrolizó, se convirtió en acetatos de alditol y se analizó mediante GC y GC-MS (Tabla). Este resultado, junto con los datos de la relación molar del análisis de metilación, sugirió que CDP-6 tiene un Glcp predominantemente 1,6-ligado y un esqueleto 1,6- vinculado en menor medida ramificado en O{{ 24}} de manosa. El análisis de metilación de dos polímeros (CDP-6-1, CDP-6–2) de hidrólisis parcial confirmó que CDP-6 tiene una columna vertebral que consta de 1,6-residuos de glucosilo enlazados y 1,6-residuos de manosilo enlazados, que están sustituidos en O-3 de manosa por ramas que consisten en los residuos de glucosilo enlazados 1,6- terminales y 1,3,{{38} }residuos de manosilo enlazados. De acuerdo con las relaciones molares y la literatura (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), el espectro de RMN 13C de CDP-6 mostró señales debidas a los carbonos anoméricos del a- d-Glcp (C{{45 }} a 98,4 ppm), bd-Map (C-1 a 104,3–104,9 ppm) y ad-Map (C-1 a 100,0 ppm). El espectro de RMN de 1H de CDP-6-2 en D2O mostró señales de protones correspondientes a ad-Glcp (H-1 a 4,94–4,95 ppm) y a-d-Map (H-1 a 4,96–5,00 ppm). El espectro de RMN de 13C de CDP-6-2 en D2O mostró señales de protones correspondientes a aD-Glcp (C-1 a 98,6 ppm) y ad-Map (C-1 a 98,4 ppm). Se informa que los manoglucanos tienen un esqueleto de glucopiranano 1,4-enlazado y de manopiranano 1,4-enlazado (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 tiene algunas características estructurales diferentes por su a-1,6-Glcp vinculado y b-1,6-esqueleto de mapa vinculado, y está sustituido por ramas de manoglucano (Higo.). Para investigar el uso deCistanche deserticaen medicina popular, se evaluó el efecto de CDP-6 en los sistemas de células T y B. Se encontró que estimulaba levemente la proliferación de linfocitos T y B inducida por mitógenos.

Experimental

1. Procedimientos generales

La rotación óptica se midió con un polarímetro automático W22-1S. Los espectros IR se determinaron en un espectrómetro Perkin-Elmer 599B. El análisis de GC se realizó en un instrumento Agilent HP6890N, equipado con un detector FID. La GC-MS se realizó en un instrumento Finnigan Trace GC-MS. La homogeneidad y el Mr de CDP-6 se estimaron a partir de la curva de calibración del volumen de elución de los dextranos estándar, que se realizó en

un aparato de la serie Agilent 1100 con una columna Shodex KS-805. Los espectros de RMN de 1H y RMN de 13C se registraron con un instrumento INOVA-500. El contenido de proteína se analizó por el método de Bradford (Andre et al. 1975). Los monosacáridos se analizaron en cuanto a su acetato de alditol después de haber sido hidrolizados (TFA 2 M, 2 h, 110 °C), reducidos y acetatos. Los hidrolizados se analizaron mediante TLC en una placa de gel de sílice que contenía fosfato dihidrógeno de sodio al 5 % en BuOH-EtOAc-alcohol isopropílico-HOAC––H2Opiridina (3,5: 10: 6: 3,5: 3: 3) y los azúcares se detectaron rociando con orcinol. -H2SO4. Los acetatos de alditol resultantes se analizaron por GLC utilizando una columna capilar HP-5 (30 m 0,32 mm). El CDP-6 se metiló mediante el método de Ciucanu, seguido de hidrólisis, y se analizó como acetato de alditol parcialmente metilado mediante GC-MS. Tras la hidrólisis parcial, los productos se dializaron y separaron, obteniendo dos polímeros, CDP-6-1 y CDP-6–2.

2. Material vegetal

La planta se recolectó en la provincia de Mongolia Interior en China en agosto de 2001 y fue identificada por Hu-Biao Chen, Departamento de Medicina Natural, Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín. Se depositó un espécimen de prueba [E-1-(9)] de esta planta en la Facultad de Ciencias Farmacéuticas de la Universidad de Pekín. 3. Extracción, aislamiento y purificación del polisacárido CDP-6 El tallo deCistanche deserticaYC Ma (1500 g) se extrajeron con etanol al 95 por ciento (6 l) a reflujo. El residuo seco insoluble en etanol se maceró tres veces con agua destilada fría por 12 h. El extracto de agua fría se filtró y el filtrado se centrifugó. Después de la precipitación con cuatro volúmenes de EtOH (agitación y reposo durante 24 horas a 4°C), se obtuvo el producto precipitado (35,5 g). La proteína del precipitado se eliminó por el método de Savage. Después de la disolución en agua destilada, el residuo (25,5 g) se dializó y liofilizó (rendimiento: 10,6 g). El polisacárido crudo (8 g) se disolvió en agua destilada (100 mL, 8 por ciento p/v) y se separó usando una columna DEAE (70 5 cm, el gradiente de NaCl 0–2 M, por 1,5 L). Se obtuvo una fracción eluida con agua (600 mg). Se purificó una muestra (250 mg) mediante cromatografía de permeación de gel en columna en columnas Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml por fracción). Las fracciones de CDP-6 (1500–1600 ml) se agruparon, dializaron y liofilizaron. Después de ser desalado por Sephadex G-25 (60 1 cm). Se obtuvo CDP-6 (110 mg) y se determinó como un pico único mediante HPSGC.

Reconocimiento:El autor agradece al Dr. Baomei Shao y al Prof. Xiaoming Gao, Facultad de Ciencias Médicas Básicas, Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín, por medir la actividad inmunomoduladora de la CDP-6.