Efectos de Cistanche sobre los cambios de ATPasa en mitocondrias hepáticas de ratas con septicemia

Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correo electrónico:audrey.hu@wecistanche.com

Pandilla Wang Zhiqiang Yin

Resumen: Objetivo:Para estudiar el cambio deActividad ATPasa de mitocondrias hepáticas en sepsisy el efecto deCistancheen eso.Métodos:40 ratas SD se dividieron aleatoriamente en grupo de operación simulada, grupo de control de 12-horas, grupo de administración de 12-horas, grupo de control de 16-horas y grupo de administración de 16-horas. lossepticemiael modelo se replicó mediante ligadura y perforación cecal (C LP) y se comparó. La tasa de supervivencia del grupo, la presión arterial media (MAP), el hígadomitocondrial ATPasacambios de actividad.Resultados:Después de que las ratas replicaron el modelo de sepsis, elATPasaactividad del higadomitocondriasdisminuyó, y la tasa de supervivencia de 24-horas disminuyó significativamente. losATPasaactividad de las mitocondrias hepáticas después de la administración deCistanchemejoró significativamente en comparación con el grupo de control (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Conclusión:Disminución mitocondrialActividad ATPasa en sepsis, la sobrecarga de calcio celular, y el edema y la necrosis son las causas directas de muerte enratas sépticas. Cistanche mejora la actividad ATPasaes un mecanismo importante para el tratamiento desepticemia.

Palabras clave: Cistanche, cistanche sepsis mitocondrias enzima ATP

Septicemiaes una enfermedad clínicamente crítica. Aunque los antibióticos se han actualizado en los últimos 30 años, la tasa de mortalidad por sepsis no ha disminuido significativamente y todavía llega al 50 por ciento [1]. El tratamiento antibacteriano occidental de "eliminación del mal" por sí solo no mejora el pronóstico desepticemia.En la patogénesis de la MTC, la sepsis pertenece a la "justicia de la deficiencia y el mal", el tratamiento debe basarse en el principio de "fortalecer el cuerpo" y "eliminar el mal". La medicina tradicional china ha mostrado un gran potencial en el tratamiento de la sepsis.Septicemiacomplicada por falla multiorgánica es la causa fundamental de la alta tasa de mortalidad, y el daño de la estructura celular es la base patológica microscópica de la falla multiorgánica [2]. Cistanche es una medicina tradicional china para tónico, estudios farmacológicos modernos han demostrado queCistanchetiene el efecto de resistir la peroxidación de ésteres de membrana y proteger la función celular [3]. la función deenergía mitocondrialEl metabolismo es una de las funciones básicas de las células, y la actividad deATPasaes un indicador importante para medir la función deenergía mitocondrialmetabolismo. En este experimento, observamos los cambios deATPasaactividad de las células hepáticas enratas sépticasy la relación entre los efectos deCistanchesobre él y la mortalidad de las ratas y tuvo como objetivo proporcionar una base teórica y una exploración efectiva para el tratamiento clínico de "fortalecimiento" desepticemia.

Cistanche

1. Materiales y métodos

1.1 Reactivos

Cistanchefue comprado en Xinjiang (identificado por el profesor Tan Defu de la Facultad de Medicina de la Universidad de las Tres Gargantas). Se tomaron 200 g de Cistanche seca y se decoctó dos veces en agua destilada. El filtrado se evaporó y se concentró a una concentración de 1 g/ml. Pentobarbital sódico (001104), Grupo Farmacéutico Nacional de China Shanghai ChemicalReactivoCompañía;Reactivo ATPasa(20030108), Instituto de Investigación de Bioingeniería de Nanjing Jiancheng.

1.2 Modelo animal de experimentación y agrupación

40 ratas macho SD (adquiridas en el Centro de Animales Experimentales de la Facultad de Medicina de Tongji, Universidad de Ciencia y Tecnología de Huazhong), se dividieron aleatoriamente en 5 grupos: grupo de operación simulada (n=8), control de 12-horas grupo (n=8), 12-hora grupo de administración (n=8), 16-hora grupo de control (n=8), 16-hora grupo de administración (n=8). El grupo de operación simulada y el grupo de control recibieron solución salina normal por sonda, y el grupo de administración recibió por sonda 1 g/ml de Cistanche, dos veces al día, durante un máximo de 15 días. losmodelo de sepsisfue replicado por ligadura cecal y perforación [4]. Antes de la operación, los animales pudieron beber agua y ayunaron durante 12 horas.

1.3 Determinación de la presión arterial media

Se insertó la vena yugular con una aguja en el cuero cabelludo, se usó heparina para la anticoagulación, se canuló la arteria carótida común izquierda al arco aórtico y se conectó el catéter de fabricación propia al instrumento biológico multicanal, y el promediopresion arterial(MAPA) fue registrado. Experimente después de que el MAP se estabilice.

1.4 Determinación de la actividad ATPasa mitocondrial

Tome 6 g de hígado de rata y colóquelo rápidamente en medio de separación de 0 grados [250mmol de sacarosa, 2mmol de etoxi-etil piperazina 2-etilsulfónico, 0,1mmol de ácido etilendiaminotetraacético, pH7,4], abrir y lavar las impurezas, Separar la suspensión del medio (1:10), homogeneizar con homogeneizador eléctrico de teflón (1200r/min), centrifugar a 2000r/min durante 10 minutos, conservar el sobrenadante, centrifugar a 10000r /min durante 15 minutos, desechar el sobrenadante, tomar el precipitado y suspenderlo en 2ml de medio de separación para obtener unasuspensión mitocondrial. Todo el proceso se lleva a cabo a 0 a 4 grados. El método de determinación de fósforo [5] se utilizó para medirActividad ATPasa(el kit se compró en el Instituto de Ingeniería Biológica de Nanjing Jiancheng).

1.5 Procesamiento estadístico

Todos los datos experimentales se expresan como media±desviación estándar (X±S), y el software SPSS realiza un análisis unidireccional de varianza y análisis de correlación.

extracto de cistanche

2. resultados

2.1 El efecto de Cistanche sobre la presión arterial media y la mortalidad de ratas 24-hora

La presión arterial del grupo de control disminuyó significativamente a las 12 horas después de la ligadura y perforación cecal, y se hizo más evidente a las 16 horas. En comparación con el grupo de operación simulada, hubo una diferencia significativa. La presión arterial deltratamiento de cistanchese mejoró el grupo. La tasa de mortalidad del grupo de control fue significativamente mayor que la del grupo de operación simulada, y la tasa de mortalidad del grupo de administración fue significativamente menor que la del grupo de control correspondiente.

2.2 El efecto de Cistanche sobre la actividad ATPasa mitocondrial

las actividades deATPasa de sodio y potasio, ATPasa de calcio, ATPasa de magnesio y ATPasa de calcio y magnesioen el grupo de administración fueron significativamente más altos que los del grupo de control correspondiente, alcanzando el nivel del grupo de operación simulada, que se correlacionó positivamente de manera significativa con la reducción demortalidad de ratas (r=0.834) ).

Cistanche

3. Discusión

Na más -K más -ATPasa, también conocida como bomba de sodio-potasio, juega un papel fisiológico importante en el mantenimiento de las actividades fisiológicas de la célula, la temperatura corporal y el metabolismo normal, y regula el equilibrio de iones dentro y fuera de la célula.en sepsis, existe una disfunción grave de la bomba de sodio en la membrana mitocondrial interna, lo que provocamitocondrialedema. losNa más -K más -ATPenzima está dañada, el desequilibrio demitocondrialaumenta la concentración de iones, se inhibe la actividad enzimática del metabolismo energético, se agota el suministro de energía celular y se produce un edema citotóxico. Al mismo tiempo, aumenta la permeabilidad de la membrana, lo que finalmente conduce a la muerte celular. En el experimento, encontramos que las mitocondriasNa más -K más -ATPasala actividad de los hepatocitos sépticos se redujo significativamente (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na más -K más -ATPasaactividad demitocondrias del higadoaumentó significativamente (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">ratas sépticasse redujo significativamente. Los resultados experimentales sugieren que la disminución deActividad de Na más -K más -ATPasase correlaciona positivamente con el desarrollo desepsis en ratas. La inhibición deActividad de Na más -K más -ATPasa, el edema celular y la muerte que conducen a una falla orgánica múltiple pueden ser el rápido desarrollo de la sepsis. Uno de los mecanismos importantes. En los últimos años, ha habido muchos informes sobreNa más -K más -ATPasay muchas enfermedades, que han llamado la atención de los trabajadores clínicos y básicos. Es de gran importancia estudiar la ley de cambios en la actividad deNa más -K más -ATPasay su regulación [6]. Poco se sabe sobre el mecanismo específico deNa más -K más -ATPasaen el desarrollo y resultado desepticemia,y se necesita más investigación.

La estabilidad del calcio y el magnesio intracelulares es la base material necesaria para mantener la respuesta de liberación intracelular y la transmisión de información [7]. En el experimento, la disminución deActividad de Ca2 más -ATPasaen el grupo de control afecta directamente la actividad de la bomba de calcio, y la disminución de la actividad de la bomba de calcio debilita el papel demitocondrialbomba de calcio para excretar Ca2 más fuera de la célula, y Ca2 más sobrecarga enmitocondrias. La sobrecarga de calcio en las mitocondrias es una causa importante demitocondrialtrastorno de fosforilación oxidativa, daño estructural y necrosis celular [8, 9]. La sobrecarga de Ca2 plus reduce el potencial de la membrana mitocondrial y el contenido de ATP tisular [10], y la utilización de energía de las células tisulares se ve afectada. Ca2 plus puede activar la fosfolipasa en la mitocondria, causar daño almembrana mitocondrial, destruyen la función normal de síntesis de ATP de las mitocondrias y dificultan la producción de energía mitocondrial [11]. Trastornos demetabolismo del calcio mitocondrialpuede afectar directamentefunción respiratoria mitocondrial, causandooxígeno mitocondrialtrastornos de absorción y oxidación de protones en la cadena de transporte de electrones [12]. Al mismo tiempo, el aumento de Ca2 plus puede agravar el daño de la peroxidación de ésteres a las mitocondrias [13]. Todo esto conduce, directa o indirectamente, a la falla del suministro de energía celular y la muerte de tejidos y órganos, y acelera el desarrollo de cambios patológicos en la sepsis. En el experimento, también encontramos que las actividades deM g2 más -ATPasa y Ca2 más -M g2 más -ATPasa en ratas sépticastambién se redujeron significativamente.Mg2 más -ATPasa y Ca2 más -M g2 más -ATPasason sustancias importantes para mantener el equilibrio intracelular de calcio y magnesio. Widner informó que la disminución de los iones de magnesio intracelulares es el factor que induce el daño celular irreversible, y la proporción de Mg 2 plus / Ca 2 plus es un indicador importante que refleja el daño irreversible de las células [14]. losMg2 más -ATPasa y Ca2 más -M g2 más -ATPasaactividades de laCistanche-grupo administrado se mejoraron, ATPase es una sulfhidrilasa, yCistanchetiene un efecto de peroxidación de éster anti-membrana, que puede ser debido a la mejora deATPasaactividad por Cistanche Bases de Química y Bases de Farmacología [15].

en la sepsis, mitocondrialtrastorno del metabolismo energético, disminuciónactividad de la enzima ATP, el edema mitocondrial, la sobrecarga de calcio intracelular y el trastorno del equilibrio calcio-magnesio son las causas directas de la muerte celular por sepsis y la insuficiencia multiorgánica.Cistancheantagoniza la peroxidación de ésteres de membrana, mejora la actividad ATPasa, mantiene la homeostasis del calcio y magnesio intracelular y protege el funcionamiento normal de las funciones celulares.Cistanchees un mecanismo importante para reducir la mortalidad deratas sépticas. Demuestra las buenas perspectivas deCistanche en el tratamiento de la sepsis