Abstracto

Objetivo:Investigar el mecanismo molecular por el cualFórmula Bushen Kaixuan Tongluo basada en Cistancheejerce un efecto protector renal en ratones con enfermedad renal diabética (DKD) al regular la vía de señalización del monofosfato de adenosina cíclico (AMPc).

Métodos:Se alimentaron de forma adaptativa treinta ratones db/db macho libres de patógenos específicos (SPF) durante 3 semanas. Se consideró que los ratones con niveles aleatorios de glucosa en sangre en la vena de la cola mayores o iguales a 11,1 mmol·L⁻¹ y una proporción de microalbúmina/creatinina urinaria mayor o igual a 30 mg·g⁻¹ se consideraron modelados con éxito. Los ratones modelados fueron asignados aleatoriamente a cinco grupos (n=6 por grupo): grupo modelo, grupos de fórmula Bushen Kaixuan Tongluo de dosis baja, media y alta (7, 14 y 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) y un grupo de irbesartán (20 mg·kg⁻¹·d⁻¹). Se utilizaron seis ratones db/m como grupo en blanco.

El tratamiento tuvo una duración de 12 semanas mediante administración intragástrica. Se monitorearon las condiciones generales, el peso corporal y los indicadores de función renal. Después de la intervención, se midió la glucosa en sangre en ayunas (FBG). Se utilizó un analizador bioquímico automático para evaluar la creatinina sérica (SCr), el nitrógeno ureico en sangre (BUN), la microalbúmina urinaria (uALB), la relación albúmina-creatinina (ACR), la aspartato aminotransferasa (AST), la alanina aminotransferasa (ALT), el colesterol total (TC), los triglicéridos (TG), la leptina (LEP), la proteína sérica glicosilada (GSP) y la insulina (INS).

La histopatología del tejido renal se evaluó mediante tinción HE, PAS y tricrómico de Masson. La inmunohistoquímica (IHC) detectó expresiones de proteína quinasa A (PKA) y proteína de unión al elemento de respuesta a AMPc (CREB). La transferencia Western analizó los niveles de PKA, PKA fosforilada (p-PKA), CREB, CREB fosforilada (p-CREB) y Bcl-2. Se utilizó PCR en tiempo real para evaluar las expresiones de ARNm de PKA, CREB y Bcl-2.

Resultados:En comparación con el grupo en blanco, el grupo modelo mostró letargo, actividad reducida y un aumento significativo del peso corporal (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

En comparación con el grupo modelo, los grupos tratados con fórmula mostraron una mejor condición general y una tendencia a la baja en el peso corporal. BUN, uALB, ACR, TC, GSP e INS se redujeron significativamente (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

El análisis histopatológico reveló que el grupo modelo mostraba características clásicas de DKD, como engrosamiento de la membrana basal glomerular, expansión de la matriz mesangial y depósito de colágeno en el tubulointersticio. Estos cambios patológicos se aliviaron en todos los grupos de tratamiento.

Los resultados de IHC mostraron expresiones de p-PKA y p-CREB significativamente disminuidas en el grupo modelo (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

La transferencia Western mostró que los niveles de p-PKA/PKA, p-CREB/CREB y Bcl-2 se redujeron significativamente en el grupo modelo (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

La PCR en tiempo real confirmó la regulación negativa del ARNm de PKA, CREB y Bcl-2 en el grupo modelo (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Conclusiones:ElFórmula Bushen Kaixuan Tongluo basada en Cistanchemejora la función hepática y renal, corrige los trastornos del metabolismo de lípidos y glucosa en ratones db/db. Su efecto protector renal está asociado con la regulación positiva de laVía de señalización de AMPc/PKA/CREB, que reduce la fibrosis renal y el estrés oxidativo, protegiendo así la función renal.

 

 

 

 

Fórmula Bushen Kaixuan Tongluo basada en Cistanche paramejorar la función hepática y renal

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Palabras clave

Enfermedad renal diabética (ERD);
Fórmula Bushen Kaixuan Tongluo;
cistanche;
vía de señalización de AMPc;
Medicina Tradicional China (MTC)

 

Remedio a base de cistanche

 

Fondo

La enfermedad renal diabética (ERT), una de las complicaciones microvasculares más graves de la diabetes, es una de las principales causas de enfermedad renal terminal (ESRD) en todo el mundo. Su creciente prevalencia plantea un desafío importante para los sistemas de salud pública. Las características de la DKD incluyen expansión progresiva de la matriz mesangial glomerular, fibrosis tubulointersticial y proteinuria persistente. La patogénesis implica interacciones complejas entre los trastornos del metabolismo de la glucosa y los lípidos, el estrés oxidativo y la activación anormal de diversas vías de señalización.

Los tratamientos actuales de primera línea incluyen principalmente inhibidores del sistema renina-angiotensina (RAS), que ayudan a reducir la hipertensión glomerular y retrasar la proteinuria temprana. Sin embargo, son menos eficaces en pacientes con fibrosis tubulointersticial establecida, y 30 a 40% progresa a ESRD.

Por lo tanto, explorar nuevos mecanismos de DKD y encontrar objetivos terapéuticos eficaces y seguros es de interés clínico y científico urgente. La medicina tradicional ofrece una regulación de objetivos múltiples con menos efectos secundarios, lo que la hace más adecuada para su uso a largo plazo en la enfermedad renal crónica. ElFórmula Bushen Kaixuan Tongluo basada en Cistanchees una mezcla de hierbas validada empíricamente para la DKD, que en ensayos clínicos anteriores ha demostrado mejorar los síntomas y retrasar la progresión de la enfermedad.

Sin embargo, su mecanismo molecular, en particular su interacción con vías de señalización clave, sigue siendo poco conocido. La evidencia sugiere quecampamento/PKA/CREBLa vía puede mitigar la fibrosis renal, pero los estudios relacionados son limitados. Este estudio se centra en esta vía para dilucidar cómo estoFórmula a base de cistanchemejora la DKD.

 

Materiales y métodos

1. animales

30 ratones macho db/db (7 semanas de edad, grado SPF, peso corporal: 37,58 ± 0,62 g)

6 ratones db/m de la misma edad (peso corporal: 24,38 ± 0,35 g)

Proveedor: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licencia: SCXK (Su) 2020-0009 y SYXK (Jing) 2020-0033

Aprobación de ética: BUCM2024041506-2090

2. Composición herbaria

La fórmula Bushen Kaixuan Tongluo incluye (en gramos):
cistanche(reemplaza al astrágalo crudo) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosa laevigata 20, Euryale ferox (frito) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Todas las hierbas fueron autenticadas por un farmacéutico autorizado y preparadas mediante decocción en agua, reducidas al vacío y secadas por aspersión para formar un polvo. La concentración final fue de 1,43 g·mL⁻¹ de hierbas crudas.

3. Reactivos e Instrumentos

(Consulte el texto original para obtener listados detallados).

 

Diseño experimental

Evaluación del modelo

Después de 3 semanas de alimentación adaptativa, los ratones con glucosa en sangre aleatoria mayor o igual a 11,1 mmol·L⁻¹ y ACR mayor o igual a 30 mg·g⁻¹ se consideraron modelos DKD exitosos.

Agrupación y dosificación

Grupo en blanco (db/m): agua

Grupo modelo: agua

Dosis baja: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Dosis media: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Dosis alta: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Grupo irbesartán: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Duración: 12 semanas con alimentación y bebida gratuitas.

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Recolección y análisis de muestras

Orina:Recogido durante 24 horas, centrifugado y almacenado a –20 grados.

Sangre:Recogido mediante extracción orbital, centrifugado y almacenado a –80 grados

Riñones:Dividido para patología (fijado con formalina), proteína (nitrógeno líquido) y expresión genética (congelado)

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Métodos de detección

Análisis bioquímico:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP y uALB

Histopatología:HE, PAS, tinción de Masson

IHC:Expresión de proteínas p-PKA y p-CREB.

Transferencia occidental:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -actina

PCR en tiempo real:Expresión de ARNm de PKA, CREB y Bcl-2.

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Tabla 1. Secuencias de cebadores

Gene	Cebador delantero (5′–3′)	Imprimación inversa (5′–3′)	Longitud (pb)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTGAGTCCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCCGTTGATGGCAACA	95