Cistanche Tubulosa protege las neuronas dopaminérgicas mediante la regulación de la apoptosis y el factor neurotrófico derivado de células gliales: in vivo e in vitro-Ⅱ

Pruebas de comportamiento

Prueba de natación (Zhu et al., 2014)

La coordinación del movimiento corporal en ratones se midió mediante la prueba de natación. Los ratones se colocaron individualmente en un tanque de agua (25 cm de altura y 10 cm de diámetro) que contenía 10 cm de agua y se probaron en un ambiente tranquilo para registrar su duración estacionaria durante 5 minutos.

Prueba de campo abierto (Kawai et al., 1998)

La actividad locomotora se midió mediante la prueba de campo abierto. Los ratones fueron probados en un ambiente tranquilo y con poca luz y se colocaron individualmente en un recipiente acrílico transparente de 30 cm × 30 cm × 15 cm con una rejilla de separación de 6 cm × 6 cm en el fondo. A los ratones se les dio 10 minutos para adaptarse al entorno y luego se midió la deambulación del número de cuadrícula y la frecuencia de cría de ratones individuales cinco veces consecutivas para obtener valores medios.

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Muestreo de tejido cerebral

Antes del muestreo de tejido, los ratones fueron alimentados ad libitum con libre acceso al agua y recibieron intervención farmacológica durante 14 días consecutivos. Se seleccionaron cuatro ratones de cada grupo y se decapitaron rápidamente. El SN (Bregma: −2,75 mm −2,92 mm) de cada animal se aisló y se colocó en hielo. Los tejidos cerebrales se enjuagaron con 0.Solución de cloruro de sodio helada al 9 % para eliminar la sangre y se secaron en papel de filtro antes de almacenarlos a -80 ◦ C. Se anestesiaron por vía intraperitoneal cuatro ratones de cada grupo y se les abrió el pecho. Luego se insertó una aguja de infusión en el ventrículo izquierdo de cada animal. Para eliminar la sangre del sistema circulatorio, se cortó la orejuela auricular derecha y se infundió al animal solución salina normal a 4◦C hasta que el hígado palideció para asegurar la perfusión sucesiva. Una vez que el efluente de la aurícula derecha se volvió claro, se perfundió a cada animal con fijador de paraformaldehído al 4%. Después de la perfusión, el tejido cerebral de cada animal se diseccionó cuidadosamente y se fijó posteriormente en paraformaldehído al 4% durante 24 h. Luego, los tejidos cerebrales fijados se enjuagaron con agua corriente, se deshidrataron en una serie graduada de soluciones de etanol y se aclararon en una solución de xileno. A esto le siguió la inmersión e inclusión en parafina.

Cambios en la cantidad de DA medidos por HPLC

El SN nanopolvo de cada grupo se colocó en un baño de hielo que contenía 0.Solución de cloruro de sodio al 9 % (proporción 1:9). El tejido cerebral se homogeneizó utilizando un disruptor celular ultrasónico y se centrifugó a 1200 rpm durante 20 minutos a 4 ◦ C para obtener el sobrenadante. Para HPLC, se utilizó una columna Hypersil AA-ODS (2,1 mm x 200 mm, 5 µm) a una temperatura de columna de 30 ◦ C. La detección de fluorescencia se realizó a 280 nm λex y 340 nm λem. El volumen de inyección fue de 10 µL.

Expresión de TH, GDNF, GFR 1 y Ret detectada por inmunohistoquímica

Se aislaron secciones de parafina (de 5 µm de espesor) de tejido cerebral individual de cada animal y se colocaron en un baño de agua tibia a 40◦C para aplanarlas y adherirse a los portaobjetos de vidrio. Todos los portaobjetos de tejido se incubaron en un horno a 60 ◦ C durante 3 a 6 h, seguido de desparafinado con xileno, deshidratación en gradiente de etanol y recuperación de antígeno mediante incubación en un tampón de ácido cítrico y calentamiento en un microondas durante 20 minutos. Luego, los portaobjetos de tejido se incubaron en una solución de H2O2 al 3% a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después de lavarlos tres veces en PBS, los portaobjetos de tejido se incubaron con suero normal en una cámara cerrada a temperatura ambiente durante 20 minutos. La tinción inmunohistoquímica se realizó según las instrucciones del fabricante. Se utilizó un analizador de imágenes Motic Med 6.0 para calcular el valor de la densidad óptica integrada en las células teñidas positivamente.

Análisis de transferencia Western en tejidos cerebrales de ratones

Este estudio evaluó la expresión de proteínas de tirosina hidroxilasa (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 y Bax. El lisado cerebral de cada grupo se homogeneizó durante 3{{10}} min en hielo, seguido de una centrifugación a baja temperatura, 20,000 rpm, a 4 ◦C durante 5 min para recoger el sobrenadante. Las muestras de proteínas se separaron bajo presión constante usando un gel SDS-PAGE al 10% como se describe anteriormente. La concentración de anticuerpo primario: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0.8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0.34 mg/ml y Bax 0,11. mg/ml. El procedimiento fue el mismo que el anterior.

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Análisis estadístico

Este estudio utilizó el software estadístico SPSS 20.0 para el procesamiento y análisis de datos. Los valores de los parámetros se expresaron como media ± desviación estándar (¯x ± S). Se utilizó ANOVA para el análisis de datos de un solo factor. Se utilizó LSD o la prueba de Games-Howell para comparar los grupos. PAG< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

RESULTADOS

Los componentes activos del nanopolvo de C. tubulosa

En el rango de escaneo de 200 a 400 nm, ECH en C. tubulosa y VER en 330 nm tuvieron el pico de absorción máximo, que apareció en 20 minutos. ICA tuvo picos de absorción máximos a 270 nm y apareció después de 20 minutos (Figura 1A). Los resultados mostraron que las muestras negativas no interfirieron con la detección (Figura 1B). Las muestras y el control tuvieron los mismos picos cromatográficos y la muestra negativa no tuvo ninguno. Esto demostró que los demás ingredientes de la muestra no interfirieron con el componente que se estaba midiendo. Además, los tres componentes y los picos adyacentes pueden alcanzar la línea base de separación y el grado de separación fue superior a 1,5.

C. tubulosa Nanopolvo redujo MPP+ -Citotoxicidad inducida en células MES23.5

La viabilidad de las células MES23.5 se redujo significativamente al aumentar las concentraciones de MPP+. La Figura 2F muestra la citotoxicidad significativa de diferentes concentraciones de MPP+.

El nanopolvo de C. tubulosa redujo la citotoxicidad inducida por MPP+-y mejoró la viabilidad de las células MES23.5. La Figura 2G muestra que dosis de nanopolvo de C. tubulosa de 10 a 250 µg/ml ejercieron efectos protectores dependientes de la dosis en las células MES23.5 tratadas con MPP+-.

Efecto citomorfológico del nanopolvo de C. tubulosa

Las células MES23.5 normales tenían buena adhesión celular y tenían forma de huso con límites celulares y sinapsis claros. Las células MES23.5 dañadas por MPP+- mostraron una mala adhesión y contracción celular, y muchas quedaron suspendidas en el medio con sinapsis contraídas. Estas células estaban agregadas, encogidas y redondas con vacuolas en su interior, y los núcleos estaban desintegrados o colapsados. El nanopolvo de C. tubulosa en diferentes dosis mejoró la citomorfología de las células MES23.5 en diferentes grados al mejorar la adhesión celular y la eliminación sináptica del grupo vehículo. Las células MES23.5 en el grupo de tratamiento con dosis altas de C. tubulosa mostraron una morfología similar a la del grupo de control normal (Figuras 2A-E).

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre la expresión de TH y la apoptosis en las células

La Figura 3 muestra una reducción significativa en la expresión de la proteína TH en el grupo de vehículo. La expresión de la proteína TH aumentó de manera diferente en los grupos tratados con diferentes dosis de C. tubulosa. Sin embargo, la prueba de LSD mostró que no había diferencias significativas entre los tres grupos tratados.

La Figura 4 muestra los resultados de la evaluación de la apoptosis mediante citometría de flujo. La tasa de apoptosis en el grupo del vehículo fue significativamente mayor que en los otros grupos. Las células tratadas con diferentes dosis de nanopolvo de C. tubulosa mostraron diferentes grados de disminución en la tasa de apoptosis en comparación con el grupo del vehículo. Las células del grupo de tratamiento con dosis medias y altas de C. tubulosa tuvieron la mejora más significativa en la tasa de apoptosis en comparación con los otros grupos de tratamiento con C. tubulosa. La prueba de LSD mostró que no había diferencias significativas entre los dos grupos tratados, pero sí también entre el grupo de dosis baja.

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre la expresión de la proteína Bcl2/Bax en las células

La Figura 5 muestra que la expresión de la proteína Bcl2 en las células del grupo de vehículo fue significativamente menor en comparación con el grupo de control normal. Por el contrario, la expresión de la proteína Bax en las células del grupo vehículo fue significativamente mayor que en el grupo control normal. Los grupos de tratamiento con C. tubulosa mostraron una mayor expresión de la proteína Bcl2 y una disminución de la expresión de la proteína Bax en células MES23.5 tratadas con MPP+-. Entre los tres grupos tratados hubo diferencias significativas en la prueba de LSD. Estos efectos dependieron de la dosis.

Pruebas de comportamiento

Los resultados de la prueba de natación sugirieron que los ratones del grupo del vehículo tenían duraciones estacionarias relativamente largas, que aumentaron con el tiempo. El día 14, los ratones del grupo del vehículo tuvieron una duración estacionaria significativamente más larga que los ratones del grupo de control normal. La duración estacionaria de los ratones en

la dosis bajaC. tubulosaEl grupo de tratamiento no fue significativamente diferente del de los ratones en el grupo de vehículo. Sin embargo, la duración estacionaria de los ratones en el grupo de tratamiento con dosis altas de C. tubulosa fue significativamente menor que la de los ratones en el grupo de vehículo.

Los resultados de la prueba de campo abierto sugieren que después del daño inducido por MPTP en los ratones, los ratones del grupo del vehículo demostraron una disminución significativa en su capacidad de actividad espontánea, como lo muestra la frecuencia de cría. Después de un 14- día de administración deNanopolvo de C. tubulosa, los ratones en los grupos de tratamiento de dosis moderada y alta tuvieron frecuencias de cría significativamente más altas en comparación con los ratones en el grupo de vehículo (Figuras 6A, B).

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre el contenido de DA en ratones

Los cambios en el contenido de DA del SN se determinaron mediante HPLC. Se encontró que el contenido de DA en el cerebro del grupo de vehículos se redujo significativamente. El contenido de DA en el cerebro de ratones con EP en el grupo de tratamiento con dosis bajas de C. tubulosa no difirió significativamente del de los ratones en el grupo de vehículo. Sin embargo,Tratamiento de C. tubulosaaumentó los niveles de DA en el cerebro de ratones con EP de una manera dependiente de la dosis. Los cerebros de ratones con EP tratados con dosis altas de C. tubulosa tenían un contenido de DA significativamente mayor que los cerebros de ratones en el grupo del vehículo (Figura 6C).

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre la expresión de TH en ratones

El número de células TH positivas y el nivel de expresión de la proteína TH en el SN de ratones con EP inducida por MPTP fueron menores en comparación con los ratones del grupo de control. Después del tratamiento con C. tubulosa, el número de células TH positivas y el nivel de expresión de la proteína TH en el SN de ratones con EP inducida por MPTP aumentaron, con una diferencia significativa entre el grupo de tratamiento con dosis altas de C. tubulosa y el grupo con vehículo. mediante prueba de LSD; y hubo diferencias significativas entre los tres grupos tratados (Figura 7).

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre la expresión proteica de GDNF y sus receptores, GFR 1 y Ret en ratones

La expresión de la proteína de GDNF y sus receptores, GFR 1 y Ret, en las células teñidas positivamente, se evaluó mediante inmunohistoquímica. Se utilizó análisis de transferencia Western para evaluar los niveles de expresión de proteínas en el SN de los diferentes grupos de ratones. Los hallazgos para los diferentes grupos fueron similares utilizando los dos métodos de detección. La expresión de GDNF y sus proteínas receptoras, GFR 1 y Ret, en células teñidas positivamente en el SN de los ratones del grupo vehículo, fue significativamente menor que en los ratones del grupo de control normal. Diferentes dosis de tratamiento con C. tubulosa aumentaron la cantidad de células GDNF-, GFR 1- y Ret positivas (Figuras 8A-S).

La expresión de proteínas de GDNF, GFR 1 y Ret en el SN de los ratones del grupo de vehículo fue significativamente menor que en los ratones del grupo de control. El aumento de las concentraciones de tratamiento deC. tubulosa nanopodermejoró significativamente la expresión de estas proteínas. La expresión de proteínas de GDNF, GFR 1 y Ret en el SN de los ratones en el grupo de tratamiento con dosis altas de C. tubulosa fue significativamente mayor que en los ratones en el grupo de vehículo (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Efecto del nanopolvo de C. tubulosa sobre la expresión proteica de Bcl2/Bax en ratones

La expresión de la proteína Bcl2 se redujo significativamente y la expresión de la proteína Bax aumentó significativamente en el SN de los ratones del grupo vehículo (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISCUSIÓN

EP y apoptosis

La EP es un trastorno neurodegenerativo. Según Zhang et al. (2005), la prevalencia es del 10,7% en la población china mayor de 55 años y del 1,67% en la población mayor de 65 años. El número de pacientes con EP ha aumentado anualmente con la aceleración del envejecimiento global, lo que supone una pesada carga financiera para las familias de los pacientes. y la sociedad en general. En el cerebro, las neuronas dopaminérgicas participan principalmente en la síntesis y secreción de DA. Están ampliamente distribuidos en el sistema nervioso central y localizados principalmente en el SN (80%). TH es la enzima limitante de la velocidad clave para la síntesis de DA. Por tanto, la inhibición de la actividad de TH reduce la síntesis de DA (Huot y Parent, 2007). Los principales cambios patológicos y bioquímicos de la EP son la apoptosis de las neuronas dopaminérgicas en el SN, una reducción significativa de la DA nigroestriatal y la formación de cuerpos de Lewy en las neuronas dopaminérgicas (Dexter y Jenner, 2013). La etiología de la EP implica factores genéticos asociados, factores ambientales y envejecimiento del sistema nervioso (Allam et al., 2005). La patogénesis de la EP sigue sin estar clara en la medicina moderna. Desde finales de la década de 1960, la terapia de reemplazo con levodopa se ha utilizado con éxito para tratar la EP y ha sido reconocida como un importante punto de inflexión en el tratamiento de la EP. Sin embargo, la aplicación a largo plazo de esta terapia causa efectos secundarios y la terapia no trata las causas subyacentes de la EP (Del Sorbo y Albanese, 2008). Por lo tanto, la investigación activa de nuevos fármacos o métodos de tratamiento dirigidos a la protección de las neuronas dopaminérgicas es crucial para el tratamiento de la EP.

En estudios anteriores, la aplicación del marcaje del extremo de mella dUTP mediado por desoxinucleotidil transferasa terminal indicó que 0.6% a 4,8% de las neuronas dopaminérgicas en el SN de pacientes con EP mostraron apoptosis (Mochizuki et al., 1996). La microscopía electrónica mostró características apoptóticas, incluida la condensación cromática y cuerpos apoptóticos en células dopaminérgicas (Anglade et al., 1997). Tompkins y cols. (1997) realizaron un análisis ultraestructural de autopsias de tejido cerebral de pacientes con EP, EA y enfermedad difusa de cuerpos de Lewy (DLBD). Encontraron cuerpos apoptóticos en la capa densa del SN en pacientes con EP y DLBD, lo que proporciona evidencia concluyente de apoptosis neuronal en la EP y enfermedades relacionadas. Por tanto, la reducción o supresión de la apoptosis en las neuronas dopaminérgicas es fundamental para el tratamiento de la EP.

Estudios anteriores demostraron que el MPTP inducía síntomas similares a los de la EP. El MPTP cruza la barrera hematoencefálica y es metabolizado por monoaminooxidasas tipo B en los astrocitos. Posteriormente se convierte en MPP+ tóxico, que se acumula en las mitocondrias de las neuronas dopaminérgicas mediante la ingesta de proteínas del transportador DA. Genera así un exceso de radicales libres de oxígeno que inhiben la actividad del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial y la síntesis de ATP. Estos eventos promueven aún más la formación de radicales libres y reacciones de estrés oxidativo y, finalmente, conducen a la degeneración y muerte de las neuronas dopaminérgicas. Por lo tanto, este estudio utilizó MPP+ para establecer un vehículo in vitro en neuronas dopaminérgicas MES23.5 y MPTP para inducir un ratón vehículo para verificación mutua. Según los resultados del ensayo MTT, MPP+ redujo significativamente la viabilidad de las células MES23.5, lo que sugiere que MPP+ era citotóxico para las neuronas dopaminérgicas. Los resultados también demostraron que C. tubulosa mejoró eficazmente la expresión de proteínas antiapoptóticas e inhibió el aumento de la apoptosis inducida por MPP+-.

PD y GDNF

GDNF es un factor neurotrófico, que fue aislado por primera vez por Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) también demostraron que el GDNF tenía efectos nutricionales específicos sobre las neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo de ratas. GDNF, neurturina (NTN), persefina (PSP) y artemina (ART) constituyen la familia GDNF. Son proteínas secretoras estructuralmente similares y funcionalmente relacionadas (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

El receptor de GDNF consta de dos componentes. El primer componente, GFR, está fijado a la membrana externa del glicosilfosfatidilinositol (GPI) y anclado a la superficie de la conexina. El segundo componente es la proteína Ret. Las investigaciones han demostrado que existen cuatro tipos diferentes de GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 y GFR 4. GFR 1 es un receptor de alta afinidad de GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). La proteína Ret es un receptor funcional de GDNF. La molécula homodímera de GDNF se une directamente a GFR 1 para formar complejos e interactúa con Ret, lo que resulta en la dimerización y activación de Ret. Debido a la autofosforilación de Ret, Ret activa varias vías de señalización de TH comunes. En ausencia de proteína Ret, GDNF provoca la fosforilación de proteínas de MAPK, PI-3 y PLC-, además de la expresión de ARNm y la actividad funcional de C-fos a través de su proteína receptora, GFR 1 (He et al., 2008).

Los estudios han demostrado que el GDNF tuvo el efecto protector más fuerte sobre las neuronas dopaminérgicas (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). En vehículos que utilizan MPTP e 6-hidroxidopamina (6-OHDA) para inducir daño en las neuronas dopaminérgicas, el GDNF protege las neuronas dopaminérgicas al reducir la apoptosis y promover el crecimiento axonal para inducir la diferenciación de las células madre (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin et al. (1993) demostraron que el GDNF promovía específicamente la viabilidad, la diferenciación y el crecimiento axonal de las neuronas dopaminérgicas para promover la captación de DA en las neuronas. El estudio también demostró que el GDNF no solo previno la toxicidad aguda sino que también alivió la toxicidad a largo plazo de MPP+ u 6-OHDA en neuronas dopaminérgicas, previniendo además la muerte celular en células estresadas o dañadas (Yu et al., 2010). Además, el GDNF promovió la proliferación y diferenciación de células madre neurales hacia neuronas dopaminérgicas en el mesencéfalo (Lindsay, 1995) para rescatar a las neuronas dopaminérgicas de la degeneración retrógrada (Hong-Juan et al., 2011).

Los estudios han demostrado que la expresión de GDNF en el SN se redujo significativamente en vehículos animales (Yang et al., 2010). Esto sugiere que puede ser uno de los mecanismos de patogénesis en ratas con EP. La inyección de 5 a 15 µg/d de GDNF en el ventrículo lateral o cuerpo estriado de un animal vehículo inducido por MPTP durante tres meses consecutivos promovió la reparación nigroestriatal del sistema dopaminérgico en el animal vehículo (Grondin et al., 2002). Los estudios del tratamiento con GDNF para la EP en vehículos animales han demostrado que la inyección intracerebral de GDNF en diferentes regiones del cerebro, como el SN, el núcleo caudado y el ventrículo lateral, mejoró los trastornos del movimiento asociados con los modelos animales de EP, incluida la disminución de la actividad motora, la rigidez muscular y temblor (Grondin et al., 2002). Sin embargo, el GDNF no puede atravesar directamente la barrera hematoencefálica. Por tanto, la inyección cerebral local de GDNF implica riesgos sustanciales y dificultades en la aplicación clínica. Todavía se están estudiando aplicaciones para introducir GDNF exógeno a través de microesferas de liberación controlada, cápsulas de liberación sostenida y genes virales (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Dadas las limitaciones de diversas técnicas para introducir GDNF exógeno en el cerebro, los agentes neuroprotectores que promueven la liberación de GDNF endógeno son importantes para la aplicación clínica.

PD yC. tubulosaNanopolvo

La EP es más común en adultos de mediana edad y ancianos. La teoría de la MTC considera que la EP se localiza principalmente en el cerebro y se debe principalmente a deficiencias hepáticas y renales, además de insuficiencia de energía vital y sangre. Según esta teoría, el tratamiento de la EP debería centrarse en tonificar los riñones y la médula ósea.Yang et al. (2010)utilizaron ensayos clínicos aleatorizados, doble ciego y controlados con placebo y descubrieron que la terapia combinada con Madopar y recetas tonificantes de los riñones alivió las disfunciones motoras de los pacientes con EP. El resultado del tratamiento fue mejor que una terapia única con Madopar. La eficacia del tratamiento de la monoterapia con MTC o la prescripción de compuestos en la EP se ha confirmado en modelos animales de EP y aplicaciones clínicas. Las aplicaciones de la medicina tradicional china para tonificar los riñones y promover la circulación sanguínea redujeron la dosis de monoterapia para la EP con Madopar. Algunos estudios han sugerido que la MTC mejoró los síntomas de la EP y protegió las neuronas dopaminérgicas, lo que podría haber estado estrechamente relacionado con la promoción de la expresión endógena de GDNF.Hong-Juan et al., 2011; Qiao y otros, 2012).

El compuesto tonificante de los riñones utilizado en este estudio,C. tubulosananopolvo, contenidocistanche, epimedio, yRhizoma poligonati. La investigación moderna sugiere que la composición química decistanchees ECH, que protege las neuronas dopaminérgicas en el SN en los ratones con EP inducida por MPTP e inhibe la reducción de DA y el transportador de DA (Zhao y otros, 2010). Además, previene la 6-reducción de DA inducida por OHDA y protege las neuronas dopaminérgicas del cuerpo estriado (Chen y otros, 2007). Epimedium inhibe la activación de caspasa-3 y ejerce funciones neuroprotectoras (Liu y otros, 2011). Los flavonoides epimedios promueven eficazmente la proliferación y diferenciación de células madre neurales (Yao y otros, 2010).

En este estudio,C. tubulosaEl nanopolvo antagonizó el aumento de MPP.+-Apoptosis inducida de forma dosis dependiente. Mejoró significativamente la expresión de TH en elin vitrovehículo y tuvo importantes efectos antiapoptóticos en las neuronas dopaminérgicas. Los ratones vehículo inducidos por MPTP mostraron trastornos de conducta y redujeron significativamente la expresión de TH en los tejidos del mesencéfalo y los niveles de DA, que son características patológicas típicas de la EP. diferentes dosis deC. tubulosaEl nanopolvo acortó la duración estacionaria, mejoró las actividades autónomas, mejoró los trastornos del comportamiento, elevó los niveles de DA en el cerebro y aumentó la expresión de TH en los vehículos. Estos resultados sugirieron queC. tubulosaEl nanopolvo ejerció efectos protectores en las neuronas dopaminérgicas, mejorando así los trastornos del comportamiento de los vehículos. diferentes dosis deC. tubulosaEl nanopolvo aumentó la expresión de la proteína GDNF y sus proteínas receptoras en el cerebro de ratones vehículo. dosis altaC. tubulosaEl tratamiento aumentó significativamente la expresión de Bcl2 y redujo la expresión de Bax, lo que sugirió queC. tubulosananopolvopodría promover la expresión y secreción de GDNF en el cerebro de ratón dañado por MPTP. Además, podría ejercer efectos neuroprotectores en las neuronas dopaminérgicas y minimizar la apoptosis neuronal a través de las funciones de apoyo neurotrófico del GDNF.

Este estudio demostró queC. tubulosaEl nanopolvo ejerció efectos protectores en las neuronas dopaminérgicas en ambos.in vitroyen vivoy mayor expresión de TH para mejorar el contenido de DA. También mejoró los trastornos del comportamiento en ratones vehículo inducidos por MPTP, reguló la expresión de proteínas de GDNF y sus proteínas receptoras en el SN y tuvo efectos antiapoptóticos en los ratones con EP. El mecanismo subyacente a los efectos clínicos deC. tubulosaEl nanopolvo en la EP puede implicar aumentar el contenido de GDNF endógeno en el cerebro y así reducir el daño a las neuronas dopaminérgicas.

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