Efecto del equinacósido en ratas con isquemia cerebral

Abstracto: Objetivo Estudiar el efecto deequinósido(ECH) sobre neurotransmisores monoamina en el líquido extracelular del cuerpo estriado en ratas con isquemia cerebral focal, y explorar el posible mecanismo del efecto neuroprotector de ECH en el cerebro. Métodos Las ratas SD se dividieron aleatoriamente en un grupo de control, un grupo modelo, un grupo de dosis alta y baja de ECH y un grupo de ligustrazina (CXQ). Las ratas de cada grupo recibieron los medicamentos correspondientes o solución salina fisiológica por vía intraperitoneal una vez al día durante 7 días. Al tercer día de administración, se incrustó la funda de la sonda en el cuerpo estriado del cerebro. Una hora después de la última administración, se realizó el modelo de isquemia cerebral focal (MCAO) en ratas. Una vez realizado el modelo, se realizó inmediatamente la microdiálisis. El dializado se inyectó en el detector electroquímico de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC-ECD) para determinar el contenido de noradrenalina (NE), dopamina (DA), 5-hidroxitriptamina (5-HT), 3 ,4-ácido dihidroxifenilacético (DOPAC), ácido homovanílico (HVA), 5-ácido hidroxiindolacético (HIAA) en el líquido extracelular del cuerpo estriado de cada grupo. Resultados En comparación con el grupo de control, los niveles de NE, DA y 5-HT en el grupo modelo aumentaron, y los metabolitos ácidos DOPAC, HVA y HIAA también aumentaron. En comparación con el grupo modelo, los contenidos de seis sustancias en los grupos de dosis alta y baja de ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) y CXQ disminuyeron. Conclusión El efecto neuroprotector de la ECH puede estar relacionado con el aumento de los neurotransmisores monoamina después de la isquemia cerebral.

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Palabras clave: equinósido; Isquemia cerebral; Estriado; HPLC-ECD; Neurotransmisores y metabolitos de monoaminas.

Equináceo(ECH) es un componente eficaz de los glucósidos feniletanoides aislados y purificados deCistanche deserticola, una planta especial en Xinjiang. Los estudios han demostrado que la ECH tiene efectos neuroprotectores como antioxidación [1-2], protección nerviosa [3-4], antienvejecimiento [5] y mejora del aprendizaje y la memoria [6-8]. Los resultados de Chen Hong et al. confirmó que ECH tiene un efecto protector sobre las neuronas DA en la enfermedad de Parkinson [9]. Los neurotransmisores monoaminas son un tipo de sustancias importantes que regulan las actividades fisiológicas del cuerpo.El contenido en el tejido puede reflejar los procesos de biosíntesis, liberación, absorción e inactivación de neurotransmisores [10-11]. En la actualidad, no existe ningún informe relevante sobre el efecto de la ECH sobre los transmisores de monoaminas en el cerebro de ratas con isquemia cerebral. En este estudio, se investigó el efecto de la ECH sobre el contenido de neurotransmisores monoaminas en el líquido extracelular del cuerpo estriado de ratas con isquemia cerebral mediante el uso de tecnología de microdiálisis cerebral, y se exploró preliminarmente el posible mecanismo de la ECH sobre la neuroprotección cerebral.

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1.Material

1.1 animales de experimentación

Ratas SD, ♂, masa corporal 250 ~ 300 g (compradas en el Centro Experimental de Animales de Xinjiang, número de licencia: 2009-0053).

1.2 Fármacos y reactivos

ECH es donado por el profesor Tu Pengfei, Facultad de Farmacia de la Universidad de Pekín (pureza superior al 95 %); Norepinefrina (NE), dopamina (DA), 5-hidroxitriptamina (5-HT), ácido 3,4-dihidroxifenilacético (DOPAC), ácido homovanílico (HVA)

5-ácido hidroxiindolacético (HIAA) es Sigma; clorhidrato de tetrametilpirazina inyectable (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cemento de fosfato de zinc (producto de Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., compuesto de líquido y polvo, mezclado con tiempo); 1-alquilsulfato de sodio (DIKMA); Hidrato de ácido cítrico (Instituto de Investigación de Química Fina Tianjin Jinke); Citrato trisódico (Acros); ácido etilendiaminotetraacético disódico (JTTakerChemicalco); Metanol (DIKMA); acetonitrilo (DIKMA); El líquido de perfusión para microdiálisis cerebral es una inyección de cloruro de sodio compuesto (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Toda el agua utilizada es agua re-vaporizada.

1.3 Instrumento

aparato estereotáctico americano de cerebro de rata BAS4100; Sonda CMA/12 y funda para sonda; Dispositivo para animales conscientes CMA/120; microbomba CMA/402; Colector automático de muestras de baja temperatura CMA/150. bomba de infusión Esa 5600A; bomba de infusión Esa 5600A; Dispositivo automático de inyección de muestras Esa 542; el detector electroquímico CoulArray de Esa; Electrodo de trabajo de carbón vítreo y electrodo de referencia Ag/AgCl; columna C18 (DIKMA, ODS5 µm, 150 mm × 4,6 mm); estación de trabajo de cromatografía CoulArraywin (empresa Esa); Mezclador Vortex (tipo QL-861); Probador de acidez de escritorio (HANNA-211); Centrífuga de sobremesa de alta velocidad (tipo XYJ-2).

2.Método

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2.1 Agrupación y administración de animales

Treinta ratas se dividieron aleatoriamente en cinco grupos: ① Grupo de control: 1 ml · kg-1 · d-1 solución salina normal; ② Grupo modelo: solución salina normal 1 ml · kg-1 · d-1; ③ Modelo+ligustrazina (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Modelo+ECH grupos de dosis alta y baja (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; A todos los animales de cada grupo se les inyectó por vía intraperitoneal durante 7 días.

2.2 Método de modelado y microdiálisis.

Cada rata fue enterrada con una cánula el tercer día de administración: las ratas fueron anestesiadas con hidrato de cloral al 10% (3,5 ml·kg-1), fijadas en el aparato estereotáctico cerebral BAS4100 y las Se implantó un catéter sonda en el cuerpo estriado izquierdo (coordenadas AP:+0.2 mm; ML: - 3.0 mm; DV: - 3.5 mm) en relación con el "Mapa estereotáctico del cerebro de rata" de GeorgePaxinos. Después de la última administración, las ratas fueron anestesiadas 1 hora después y se les hizo un modelo de isquemia cerebral focal (modelo MCAO) utilizando el método de sutura Longa mejorado de Yang Zanzhang [12]. El hilo de pescar en el grupo de control se insertó solo 10 mm y los demás pasos fueron los mismos que en el grupo de operación. Después del modelado, inserte la sonda de microdiálisis en estado de conciencia y libre movimiento, y use solución Ringer para μ. El microdializado cerebral se recogió a 4 grados y un tubo de dializado se recogió a los 20 minutos. Después de recolectar cada tubo de dializado, se almacenará inmediatamente en un refrigerador de - 20 grados y se transferirá a un refrigerador de - 70 grados después de la diálisis. La tasa de recuperación de la sonda se midió antes de su uso, que se utilizó para convertir la concentración de neurotransmisores monoamina en el dializado.

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2.3 Análisis HPLC-ECD

Configuración de la fase móvil: la fase móvil contiene 829 ml de 0.15 mol · L-1 tampón de ácido cítrico-citrato de sodio por litro; 0.1mol · L-1 EDTA disódico 1ml; Metanol 150ml; {{10}}alquilsulfato de sodio 0.283g. Establezca el caudal de la fase móvil en 0.7 ml · min-1 y la temperatura del horno de columna en 28 grados. El voltaje de trabajo del detector electroquímico es 200mV, 400mV y 600mV, con 2, 3 y 4 canales respectivamente; La ganancia es 2nA. El volumen de inyección es de 25 μl. La curva estándar se dibuja con una solución estándar mixta de gradiente de 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1.

2.4 Procesamiento estadístico

Los datos experimentales se expresan en campo x ± s y los datos de mediciones repetidas se analizan utilizando el software estadístico SPSS13.0.

La figura 1-6 muestra los cambios en los niveles de NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA y 5-HT en el líquido extracelular del cuerpo estriado de la rata. En la figura se puede ver que después de la isquemia cerebral, los neurotransmisores monoamina en el líquido extracelular del cuerpo estriado tienen un trastorno metabólico y el contenido de cada neurotransmisor ha aumentado. Dentro de un cierto rango, el aumento es más evidente a medida que se prolonga el tiempo de isquemia. A los 90 minutos de isquemia, la concentración de DA y NE en el líquido extracelular del cuerpo estriado era más de tres veces el nivel del grupo de control. Los niveles de NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA y 5-HT en el grupo de control disminuyeron de mayor a menor, lo que puede estar relacionado con la isquemia temporal del cerebro izquierdo después de la ligadura de la arteria carótida común izquierda. y los daños causados ​​al insertar la sonda. Desde la curva de cambio, ECH y CXQ pueden reducir la concentración máxima de DA, DOPAC, HIAA, HVA y 5-HT después de la isquemia cerebral, y CXQ y ECH en dosis altas son más obvios. El desplazamiento hacia abajo de la curva temporal de cada neurotransmisor indica que la ECH puede inhibir el aumento de neurotransmisores y sus metabolitos en el cerebro de ratas con isquemia cerebral.

                                                                           Fig2 Efecto del equinósido sobre el nivel extracelular de DA en el cuerpo estriado de ratas

Fig.3 Efecto del equinosido sobre el nivel extracelular de DOPAC en el cuerpo estriado de ratas Fig.4Efecto del equinosido sobre el nivel extracelular del VIHV en el cuerpo estriado de ratas

Fig5 Efecto del equinosido sobre el nivel extracelular de HVA en el cuerpo estriado de ratas Fig6 Efecto del equinosido sobre el nivel extracelular de 5-HT instriatum de ratas

4.Discusión

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El mecanismo de lesión cerebral causada por isquemia cerebral es complejo. En el caso de la isquemia cerebral, los neurotransmisores monoaminérgicos del cerebro se alteran y el contenido de NE, DA y 5-HT se reduce significativamente. Cuanto más grave es la isquemia cerebral, menores son los contenidos de NE, DA y 5-HT en el tejido cerebral [13]. El método de microdiálisis intracerebral demostró que el contenido de neurotransmisores monoamina aumentó en el líquido extracelular durante la isquemia cerebral, duró todo el período isquémico y aumentó aún más con la prolongación del tiempo de isquemia. Los resultados experimentales fueron consistentes con el informe [14].equinósidoes un componente eficaz de los glucósidos feniletanoides aislados y purificados de Cistanche deserticola, una planta especial de Xinjiang. Tiene muchos efectos neuroprotectores, como antienvejecimiento, mejora del aprendizaje y la memoria y apoptosis antineuronal.. En este estudio, se utilizó microdiálisis cerebral avanzada nacional combinada con tecnología de detección HPLC-ECD para explorar preliminarmente el efecto deequinósidosobre neurotransmisores monoamínicos y sus metabolitos en el líquido extracelular del cuerpo estriado de ratas experimentales con isquemia cerebral. Los resultados mostraron que la ECH puede reducir el aumento de neurotransmisores monoamina en el líquido extracelular del cuerpo estriado causado por la isquemia cerebral y tiene un mejor efecto en la mejora del daño del tejido isquémico cerebral.