Efectos de Cistanche deserticola en la lesión pulmonar aguda en ratas con sepsis

Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

[Resumen]Objetivo: Estudiar el efecto deCistanche deserticolaen agudolesión pulmonar(ALI) en ratas con sepsis. Métodos: El modelo de sepsis se realizó mediante ligadura cecal y punción. Se realizaron los exámenes histopatológicos y se midieron los marcadores biológicos de ALI. Resultados: Bajo un microscopio de luz en el grupo salino, hubo edema deinterespacio pulmonar, un gran número de eritrocitos y neutrófilos, y proteína plasmática en las cavidades alveolares. ElpulmónEl peso húmedo / seco, la tasa de neutrófilos y el contenido de proteínas en el líquido de lavado alveolar pulmonar permeabilidad vascular pulmonar y permeabilidad alveolar pulmonar y MDA, SOD, así como MPO, aumentaron significativamente. En el grupo conCistanche deserticolatratamiento, estos índices de ALI fueron significativamente más bajos que los del grupo con solución salina.

Conclusión:Cistanche deserticolatiene grandes efectos sobre ali en ratas con sepsis. El mecanismo terapéutico es posiblemente a través de la inhibición de neutrófilos y radicales libres oxidativos.

【Palabras clave】Sepsis; Lesión pulmonar aguda; Cistanche deserticola

La sepsis es una emergencia clínica y una enfermedad crítica, y la búsqueda de medicamentos de tratamiento efectivos siempre ha sido un problema importante en la investigación clínica y básica. La patogénesis de la medicina tradicional china de la sepsis es la deficiencia de la rectitud y la exuberancia del mal. La terapia de ataque para la prosperidad maligna del cuerpo es una de las medidas de tratamiento efectivas.Cistanchees un tónico tradicional de la medicina china. Los estudios farmacológicos han confirmado que tiene funciones protectoras, como mejorar la tasa de síntesis de ADN celular y resistir los radicales libres de oxígeno. El autor observa experimentalmente el efecto deCistanche sobre el daño por problemas pulmonaresen sepsis, con el fin de proporcionar una exploración efectiva para el tratamiento de la sepsis.

Cistanche Echinacoside tratar la enfermedad pulmonar

1 Material y métodos

1. 1AnimalSalud 40 ratas macho 5D, con un peso de 200 ~ 250 g, proporcionadas por el Centro de Animales Experimentales de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Huazhong, número de inspección de calidad: TJLA-2008-1670 se dividieron aleatoriamente en 3 grupos: 8 grupo salino normal, Ig / Había 12 ratas en el grupo de pasta de berenjena mL y 12 en el grupo de 5g / mLCistanchegrupo. Los animales de experimentación recibieron los fármacos correspondientes por sonda de rutina durante 15 días, dos veces al día (elCistancheEl extracto de deserticola fue proporcionado por la sala de preparación de medicina tradicional china de este hospital), y la dosis de 200 mg / kg se utilizó en los animales de experimentación de acuerdo con el método de literatura U] 12 minutos después de la ligadura cecal y la perforación. Colección de ejemplares.

1.2Examen histológico pulmonar en rata.Tome una pequeña cantidad del lóbulo izquierdo del animalpulmónde cada grupo, fijarlo con formaldehído al 10%, incrustar parafina la sección y tinciones he, observar con un microscopio óptico ordinario, y sobre esta base, tomar elpulmónproblema para hacer 1mm3 por 25 Se fijó en solución de glutaraldehído al%, luego se fijó en solución de tetróxido al 1%, se deshidrató con etanol y acetona, se incrustó en Epon 81, se preparó secciones ultrafinas, se tiñó con uranio-plomo y se observó mediante microscopio electrónico de transmisión.

1.3Determinación de la relación de peso húmedo/seco del problema pulmonar de rata, la relación de recuento celular en el líquido de lavado alveolar y el contenido de proteína Relación de peso.Otro grupo de ratas se sometió a un lavado alveolar después de la toracotomía, y el líquido de lavado se sometió a un recuento celular y clasificación celular bajo un microscopio. El método de azul brillante de Coomassie se utiliza para determinar el contenido de proteínas y calcularpulmóníndice de permeabilidad (proteína del líquido de lavado alveolar/proteína plasmática, LPI).

1.4Cambios en la permeabilidad vascular pulmonar (PVP) en ratasDe acuerdo con el método introducido por Zhou et al. (2), después de la administración, los animales de cada grupo se sometieron a ligadura cecal y perforación, y se utilizó la inyección de vena femoral de 50 mg / kg de lantano para abrir el pecho y extirpar los pulmones. Elimine los problemas circundantes, remoje elPulmonesen la solución de formamida (la cantidad de formamida es de 20 mg / 100 g de peso corporal), incubada en una incubadora de 45-50T durante 72 horas, espere hasta que se lixivien todos los pigmentos en los problemas, saque los problemas, centrífuga y tome el sobrenadante, use un espectrofotómetro ultravioleta para realizar colorimetría a 620 nm y calcule el contenido de etanol de acuerdo con la curva estándar para determinar el cambio de PVP.

1.5Determinación de malondialdehído (MDA) en el problema pulmonar de rataSe utilizó el método del ácido tiobarbitúrico (TBA) para determinar la actividad de la MDA. Agregue 4 ml de ácido sulfúrico de 1.67mol / L. 0.541% de ácido fosfónico a la muestra de prueba de 50 ml, mezcle bien, centrifugue a 3000r / min durante 10 minutos y procese la precipitación una vez más como se mencionó anteriormente, luego agregue 1 ml de agua destilada doble, solución de TBA de 1 ml, baño anhidro al 95% durante 60 minutos, extracción con 5 ml de n-butanol, tetra etoxi propano como estándar, la concentración final de lnmol / L, espectrofotómetro de fluorescencia a 532 nm para medir la absorbancia.

1.6Determinación de la superóxido dismutasa (SOD) en problemas pulmonares de rataDe acuerdo con el método en la literatura [4], la actividad soD se determinó mediante el método Huangpuyin oxidasa (kit comprado en el Instituto de Ingeniería Biológica Nanjing Jiancheng).

1.7Determinación de mieloperoxidasa (MPO) en ratapulmónproblema.Tome el problema pulmonar para lavar la sangre residual tanto como sea posible en solución salina isotónica, y colóquelo en un tampón de fosfato que contenga 0.5% de bromuro de cetilo trimetil (PH6. 0) Haga el 5% del homogeneizado y opere de acuerdo con las instrucciones del kit.

1.8Métodos estadísticosUtilice el software estadístico SPSS y mida los datos en forma (x±s), utilizando la prueba t y la prueba X2.

Cistanche

2 resultados

2.1 Comparación de la relación peso húmedo/seco depulmónLos problemas, la relación de recuento celular y el contenido de proteínas en el líquido de lavado alveolar en cada grupo se muestran en la Tabla 1. ElpulmónLa relación peso húmedo/seco en el grupo salino fue significativamente mayor que en elCistanchegrupo (P<0.05 or="" 0.01).="" the="" cell="" count="" ratio="" and="" protein="" content="" in="" the="" alveolar="" lavage="" fluid="" of="" the="">Cistanchelos grupos fueron significativamente más bajos que los del grupo salino (P<0.05 or="" 0.01).="" 0.="" 01),="" and="" with="" the="" increase="" of="" the="" dose="" concentration,="" it="" shows="" a="" significant="">

Tabla 1 Comparación de la relación peso húmedo/seco del problema pulmonar y la relación de recuento celular y contenido de proteínas en el líquido de lavado alveolar de ratas en cada grupo (X ± S)

En comparación con el grupo salino normal, P<0.><001. below="" is="" the="">

2.2 Comparación de los cambios morfológicos de los problemas pulmonares de las ratas de cada grupo. Observación general: ElPulmonesen el grupo salino estaban significativamente agrandados y de color rojo oscuro, con diversos grados de congestión y edema en la superficie, y un gran número de infartos pulmonares en el borde; los pulmones en elCistancheel grupo fue de color rojo claro con una superficie congestión leve y edema, sin infarto pulmonar evidente. La observación con microscopio de luz mostró que en el grupo salino, había congestión e edema intersticial alveolar y pulmonar, un gran número de infiltración difusa de neutrófilos en la cavidad alveolar, formación de algún absceso y diversos grados de atelectasia, necrosis y enfisema compensatorio. , Trombo y formación similar de membrana transparente. Las lesiones mencionadas anteriormente en el grupo cistanche se redujeron significativamente. En el grupo salino, las células epiteliales alveolares se hincharon, los corpúsculos lamelares se vaciaron obviamente, se formaron grandes vacuolas, las células endoteliales capilares se hincharon, las células endoteliales se lesionaron continuamente, el espacio intercelular se ensanchó, los capilares y las membranas basales alveolares se aflojaron y ensancharon. Engrosamiento irregular, espesor desigual. En el grupo cistanche, las células epiteliales alveolares no estaban hinchadas, el vaciado del corpúsculo lamelar se redujo, el número de vacuolas formadas fue pequeño, la conexión entre las células endoteliales capilares fue cercana a la normalidad y la membrana basal estaba ligeramente suelta y engrosada irregularmente. En comparación con el grupo de cistanche Ig/niL, el grupo de cistanche de 5 g/ml tuvo un rango menor de cambios morfológicos de problemas pulmonares, y el grado de lesión pulmonar fue más ligero.

2.3 La comparación del LPI y el PVP de ratas en cada grupo se muestra en la Tabla 2. El LPI y el PVP del grupo salino fueron significativamente más altos que los del grupo Cistanche (PV0,05 o 0,01). El LPI y el PVP del grupo Cistanche fueron más bajos, lo que tuvo una relación dosis-efecto significativa.

2.4 La comparación de la actividad de MDA. CÉSPED. MPO en elpulmónlos problemas de las ratas en cada grupo se muestran en la Tabla 3. El contenido de MDA en elpulmónEl problema del grupo salino fue significativamente mayor que el del grupo salinoCistanchegrupo, mientras que la actividad soD y la actividad MPO en el problema pulmonar del grupo Cistanche aumentaron significativamente (F<0.05 or="">

3 Discusión

La insuficiencia orgánica múltiple es la causa raíz de la condición irreversible y la alta tasa de mortalidad en la etapa tardía de la sepsis (5). La protección de la función de los órganos es de gran importancia para reducir la alta tasa de mortalidad clínica de la sepsis. El pulmón es el primer órgano de insuficiencia orgánica múltiple. 1/3 de los pacientes con sepsis mueren de lesión pulmonar aguda (ALI) y síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA). El principal mecanismo fisiopatológico de ali es la acumulación de un gran número de neutrófilos en el problema pulmonar y se activa y se adhiere a las células endoteliales vasculares. Al mismo tiempo, la concentración de coenzima II oxidasa reducida que transfiere electrones individuales aumenta, causando estallidos respiratorios, generando una gran cantidad de radicales libres de oxígeno y causando daño y función de las membranas celulares y las estructuras de membrana a través de una fuerte oxidación. Obstáculos(6). El peróxido lipídico refleja el cambio de los radicales libres de oxígeno en el problema y está directamente relacionado con el grado de lesión pulmonar (7). En el sistema de oxidación antirradical enzimática y no enzimática del cuerpo, la actividad de SOD mantiene una buena correlación con el grado de daño problemático (7). En comparación con el grupo de solución salina fisiológica, las actividades de MDA y SOD del grupo de Cistanche mostraron diferencias estadísticamente significativas. Cistanche tiene las funciones de mejorar la función inmune, antienvejecimiento y mejorar la tasa de síntesis de ADN celular. Los resultados experimentales mostraron que el coeficiente pulmonar, el PLT, la relación de neutrófilos del líquido de lavado alveolar y la permeabilidad vascular pulmonar del grupo Cistanche disminuyeron significativamente, la actividad de MDA del problema pulmonar disminuyó, la SOD aumentó significativamente y la actividad de MPO disminuyó. Al mismo tiempo, la observación morfológica mostró que el grado de daño del problema pulmonar se redujo significativamente, la infiltración de neutrófilos se redujo y el grupo de Cistanche de 5 g / ml tuvo menos lesión pulmonar que el grupo de Cistanche ig / ml, y hubo una buena relación dosis-efecto. Sugiere que Cistanche tiene un efecto protector significativo sobre ALI. El mecanismo puede ser: (1) Inhibir la migración de células inflamatorias en elPulmones, reducir los radicales libres de oxígeno producidos por los neutrófilos y otras células activadas para que la biopelícula esté protegida; (2) Promover la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas, y proteger contra el efecto de la lesión pulmonar; (3) Mejorar la función inmune de los fagocitos y reducirpulmóndaño problemático causado por la endotoxina. Los resultados experimentales proporcionan una base experimental para el tratamiento de la lesión pulmonar aguda en la sepsis clínica mediante el fortalecimiento del cuerpo y el fortalecimiento de la deficiencia.

Referencias

[1] Jin Huiming. Modelo de sepsis después de la ligadura cecal y perforación [J]. Chinese Journal of Pathophysiology "990, 6 (2): 126 ~ 127.

[2] Zhou WG, Mc Collum MO, Levine BA, et al. Papel del factor activador de plaquetas en la pancreatitis asociada a la lesión pulmonar aguda en la rata [J]. Am J Pathol, 1992, 140: 971 -979.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Métodos experimentales de la medicina moderna [M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 2007: 508.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing. Ciencia moderna de laboratorio bioquímico clínico [M]. Beijing: People's Military Medical Press, 2008: 896.

[5] Luo Zhengyao. Estudios de choque [M]. Tianjin: Tianjin Science and Technology Press, 2008: 345.

[6] Xanthous CA, Hall JB. Samsel RW. Endotoxina en enfermedades humanas, parte 2Efecto biológico y evaluación clínica de los terios antiendotoxinas[J]