ABSTＲACTUAR

Objetivo: aclarar si en generalcistanósidos(GC) mejoradisfunción congnitivaratones que envejecen rápidamente (SAMP8) mediante la mediación de receptores de andrógenos específicos (AＲ) en elregulación de la expresión de proteínas sinápticas． 

Métodos: Un total de ratones SAMP8 machos de 76 7- meses de edad se dividieron aleatoriamente en el grupo modelo, el grupo GC, el grupo GC + flutamida (F), el grupo GC + fulvestrant (ICI), el grupo F y el grupo ICI. Las funciones de aprendizaje y memoria de los ratones de cada grupo se probaron con el laberinto acuático de Morris. Se utilizaron transferencias Western y RT-PCR para probar lanivel de expresión de sinaptofisina(SYN), densidad postsináptica － 95 (PSD － 95) y el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) de ratones en cada grupo.

Resultados: Los GC mejoraron significativamente el aprendizaje y la función cognitiva de los ratones SAMP8.

En comparación con el grupo GC, la función de aprendizaje y memoria de los ratones en el grupo GC + F y GC + ICI se redujo significativamente. Los resultados de la transferencia Western y la RT-PCR mostraron que el nivel de expresión de BDNF, SYN y PSD－ 95 aumentaron significativamente a nivel de proteína y de gen en el grupo de GC en comparación con el grupo Modelo (P ＜ 0． {{ 11}}5)． El nivel de expresión de SYN aumentó en el grupo GC + F y GC + ICI, y los niveles de expresión de BDNF y PSD － 95 disminuyeron significativamente en el grupo GC + F y GC + ICI en comparación con el grupo GC (P < 0． 05) ．

Conclusión: Los GC pueden mediar específicamente AＲ para mejorar la plasticidad sináptica en ratones SAMP8, lo que a su vez mejora el aprendizaje y la función cognitiva.

PALABRAS CLAVE:Cistanósidos generales; Receptor de andrógenos; Plasticidad sinaptica; ratones SAMP8

Suplemento Cistanche Mejora de la función cognitiva Suplemento dietético PhGs75% Ech 30% Act 12%

enfermedad de alzheimer(AD) es un comúnenfermedad neurologica degenerativa, clínicamente caracterizado por un deterioro progresivo de la función cognitiva y cambios en el estado mental y psicológico [1]. Los estudios han encontrado que los niveles de testosterona en pacientes masculinos con EA son significativamente más bajos que en hombres normales.

Elfunción cognitiva de los pacientesha mejorado en diversos grados despuésterapia de reemplazo de cetonas[2], lo que indica que las disminuciones relacionadas con la edad en los niveles de andrógenos pueden ser un factor de riesgo para la EA en hombres mayores.

Cistanche deserticola glucósidos totales (cistanósidos generales, GC) son uno de los principales extractos de Cistanche deserticola, que pueden mejorar el aprendizaje relacionado con la EA ydisfunción congnitiva[3]. Además, la administración de GC por sonda aumentó significativamente los niveles de testosterona en animales [4]. Los GC también tienen la función de promover el yang y pueden ejercer

Efectos farmacodinámicos similares a los andrógenos. Estudios anteriores han informado que la testosterona puede mejorar el aprendizaje y las funciones cognitivas de los animales modelo con EA, y este proceso depende de la mediación de un receptor de andrógenos específico (receptor de andrógenos, AR) [5].

Es bien sabido que la disfunción cognitiva en pacientes con EA está estrechamente relacionada con la plasticidad sináptica. Sin embargo, aún no está claro el mecanismo específico a través del cual los GC regulan la plasticidad sináptica y, por lo tanto, mejoran el aprendizaje y las funciones cognitivas. Este estudio tuvo como objetivo explorar si los GC median la ARＲ específica para afectar la plasticidad sináptica y, por lo tanto, mejorar el aprendizaje y las funciones cognitivas en la EA.

1 Materiales y métodos

1.1 Animales y equipos de experimentación.

Se compraron ratones SAMP8 macho de 3- meses de edad en la Facultad de Medicina de la Universidad de Pekín (SCXK [Beijing] 2016-0010) y se criaron hasta los 7 meses de edad. Los animales se mantuvieron en un ambiente limpio a (24 ± 1) grados y

Los animales contaron con iluminación natural, libre acceso a alimento y agua, y se les brindó atención humanitaria de acuerdo con los principios de las 3R para el uso de animales de experimentación. Este estudio experimental ha sido aprobado por el Comité de Ética con Animales Experimentales de Baotou Medical College (Baotou Medical College No. 20201102).

Los principales reactivos del experimento son:Cistanche deserticola glucósidos totales(GC, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); antagonista del receptor de andrógenos: flutamida (Sigma Company, EE. UU.); antagonista del receptor de estrógeno-fulvestrant (ICI 182780, EE.UU.) Med Chem Express); Anticuerpo BDNF anti-ratón de conejo,

anticuerpo PSD-95, anticuerpo SYN, anticuerpo -actina (Proteintech Company de los Estados Unidos); solución de electroforesis de proteínas, solución de transferencia de proteínas, TEMED, tampón de acrilamida, persulfato de amonio, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); Kit de síntesis de ADNc, detección cuantitativa de fluorescencia Talent

Kit de reactivos (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), etc. El equipo experimental principal incluye un tanque de electroforesis de placa vertical, un aparato de electroforesis, un tanque de transferencia, un agitador de tinción (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), un sistema de análisis de imágenes de gel de proteínas. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), instrumento de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real (EE.UU. Roche), etc.

1.2 Agrupación y administración

Dos ratones murieron naturalmente durante el proceso de alimentación, y los 78 ratones restantes se dividieron aleatoriamente en el grupo modelo, el grupo GC, el grupo GC + flutamida (F), el grupo GC + fulvestrant (ICI), el grupo F, el ICI.

Grupos de 13 animales cada uno. Excepto por el grupo modelo, el grupo F y el grupo ICI, a los otros grupos se les administraron continuamente GC en una dosis de 50 mg/(kg·d) durante 30 días.

A partir del día 24 después de la administración de GC, el grupo de GC + flutamida (F) y el grupo de GC + fulvestrant (ICI) recibieron una inyección intraperitoneal de F (5 mg/kg/d) 30 minutos después de la administración de GC. por sonda. ), ICI (1 mg/kg/d), inyección continua durante 7 días. Ajuste la concentración de dosificación para garantizar que el volumen gástrico máximo de los ratones sea 0, 5 ml, 1 vez/d.

1. Prueba del laberinto acuático de 3 Morris

Los ratones se adaptaron al entorno acuático con un día de antelación. El laberinto acuático de Morris duró 6 días. Los primeros 5 días fueron la prueba de posicionamiento y navegación. Los ratones fueron entrenados una vez al día en cada uno de los cuatro cuadrantes durante 1 minuto cada vez. Cada intervalo de entrenamiento fue de 15 minutos y los registros se registraron al mismo tiempo. Latencia de escape de la prueba de posicionamiento y navegación del animal; el sexto día, retire la plataforma del agua y realice una prueba de exploración espacial. Registre el número de cruces de plataforma y el porcentaje de tiempo pasado en el cuadrante objetivo del mouse. el cuadrante objetivo) y la trayectoria de natación de exploración espacial (trayectoria de natación de la prueba de sonda espacial) y otros indicadores.

1.4 Detección de transferencia Western

Expresión de proteínas relacionadas con la sinapsis SYN, PSD-95 y BDNF. Después de la prueba del laberinto acuático de Morris, todos los ratones fueron anestesiados de forma rutinaria, les decapitaron las cabezas, les extirparon el cerebro y les quitaron los hipocampos. El tejido del hipocampo se lisó con proteínas, se rompió mediante ultrasonido a 4 grados, se dejó en hielo durante 30 minutos y se centrifugó a 12,{5}} r/min durante 15 minutos a 4 grados. Se tomó el sobrenadante y se midió la concentración de proteínas mediante el método BCA. Después de cargar la proteína, realice electroforesis en gel de apilamiento a un voltaje constante de 80 V, electroforesis en gel de separación a un voltaje constante de 120 V y transferencia húmeda a un flujo constante de 300 mA; Saque la membrana de PVDF, bloquéela con leche descremada al 5% durante 80 minutos a temperatura ambiente y lave la membrana tres veces con TBST. 15 min/tiempo, el anticuerpo primario se incubó durante la noche en una mesa agitadora a 4 grados; al día siguiente, la membrana se lavó 3 veces con TBST.

15 min/tiempo, el anticuerpo secundario se incubó a temperatura ambiente durante 2 h, luego se realizó el desarrollo del color ECL y se realizaron imágenes con un sistema de imágenes de quimioluminiscencia. -actina se utilizó como referencia interna y el valor de densidad óptica de la banda se analizó utilizando el software Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲDetección

La expresión de ARNm de SYN, PSD-95 y BDNF se extrajo del ARN total del tejido del hipocampo según el método de extracción Trizol y se generó ADNc después de la transcripción inversa. El kit de detección cuantitativa de fluorescencia Talent se utilizó para la detección cuantitativa de fluorescencia relativa. El experimento se repitió tres veces y los resultados se convirtieron a 2 - y se analizó ΔΔCT. Los cebadores de actina de ratón, SYN, PSD-95 y BDNF fueron diseñados por Shanghai Sangon Company, y las secuencias de los cebadores se muestran en la Tabla 1.

1.6 Análisis estadístico

A través del software estadístico SPSS 25. 0 para el procesamiento, se utilizó el software Graphpad Prism 8 para dibujar gráficos estadísticos y se utilizó ANOVA unidireccional para comparar medias por pares de múltiples muestras. P<0. 05 significa que la diferencia es estadísticamente significativa.