Extracto etanólico de fenogreco: sus mecanismos moleculares contra el envejecimiento de la piel y las funciones mejoradas por nanoencapsulación 2

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2.5.Efecto del extracto de fenogreco y LNF sobre la viabilidad celular y la producción de colágeno en células de fibroblastos dérmicos humanos

Para investigar la citotoxicidad del LNF formulado, las células se trataron con extractos de blanco, LNF y fenogreco a {{0}} ug/mL (dilución doble) durante 24 h. La viabilidad celular se midió usando un ensayo MTT. Como se muestra en la Figura 6a, la viabilidad celular disminuyó en las células tratadas con extracto, mientras que no se observó ningún efecto en las células en blanco y tratadas con LNF. Los datos indicaron que LNF mostró menor toxicidad que el extracto. Investigamos más a fondo la capacidad de LNF en la inducción de la producción de colágeno en células de fibroblastos dérmicos humanos. Las células se trataron con 7 ug/mL de extracto y 1{{20}}0 ug/mL de LNF (7 ug/mL de equivalencia de extracto), junto con partículas en blanco como control, para7 y 14 días. Como se muestra en la Figura 6b, para el tratamiento con LNF, la cantidad de colágeno teñido aumentó en un 30 % y un 50 % a los 7 y 14 días, respectivamente, en comparación con el tratamiento con extracto. Además, en la Figura 2a, el LNF formulado mejoró la actividad anticolagenasa, ya que la IC5o se redujo significativamente a 0,21 ± 0,03 mg/ml en comparación con el extracto de fenogreco (0,57 ± 0,02 mg/ml). Estos resultados demostraron que la formulación de LNF podría potenciar la inducción de la producción de colágeno en las células de fibroblastos dérmicos humanos y mejorar la actividad anticolagenasa del extracto de fenogreco. Es posible que la nanoformulación del extracto de fenogreco mejore significativamente su potencia como ingrediente activo en productos antienvejecimiento.

2.6. Papel del LNF formulado en la inhibición de MMP1, MMP9, IL-6 e IL-8 después de la exposición a los rayos UV

A continuación, investigamos algunos posibles mecanismos de LNF en la actividad antienvejecimiento. La exposición a los rayos UV es uno de los principales reguladores del envejecimiento de la piel, ya que se ha informado que induce la expresión de ciertos miembros de la familia de las metaloproteinasas de matriz (MP), lo que provoca el colapso del colágeno, incluidas MMP1, MMP3 y MMP9 [34,35]. . Observamos que la exposición a los rayos UV era altamente tóxica para las células de la piel cocultivadas (Figura 7a) y mejoraba la producción de citocinas MMP1 y MMP9 (Figura 7b). Además, los tratamientos con extracto de fenogreco y LNF formulado pudieron reducir significativamente las secreciones. de MMP1 y MP9 en comparación con las células de control después de la irradiación UV. Estos resultados fueron consistentes con el tratamiento de rutina y resveratrol como control de agente antienvejecimiento. En particular, la reducción de las expresiones de MMP1 y MMP9 en las células tratadas con LNF fue significativamente menor que en el tratamiento con extracto. Por lo tanto, LNF podría reducir las secreciones de MPI y MMP9 tras la exposición a los rayos UV y, posteriormente, prevenir el envejecimiento de la piel fotoinducido.

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Además, la exposición de la UVR en la piel humana también puede mediar en la inducción de la inflamación y la activación de citocinas proinflamatorias, como TNF- e interleucinas, incluidas IL-1, IL-2, IL{{4} } e IL-8 [36]. Luego examinamos la función de LNF en la inhibición de la producción de citoquinas inflamatorias estimuladas por UV, incluidas IL-6 e IL-8. En la Figura 7c, observamos que la radiación UV mejoró significativamente la producción de IL{{ 11}} e IL-8 citocinas en células cutáneas cocultivadas. Se observó una disminución significativa en las expresiones de IL-6 e IL-8 con el tratamiento con extracto de fenogreco en comparación con el control. Curiosamente, el tratamiento con extracto de fenogreco exhibió inhibiciones de IL-6 e IL-8 considerablemente más altas en comparación con la rutina, donde estas actividades inhibidoras fueron similares a las de los grupos tratados con resveratrol. En particular, las expresiones de IL-6 e IL-8 en las células tratadas con LNF fueron significativamente más bajas en comparación con el grupo de extracto de fenogreco después de la exposición a los rayos UV. Juntos, estos resultados indicaron que el LNF podría potencialmente inhibir la producción de IL-6 e IL-8 mediada por UV y, posteriormente, prevenir la inflamación de la piel y el envejecimiento de la piel fotoestimulados.Como consecuencia, estos resultados sugieren que el extracto etanólico de fenogreco y su nanoformulación podrían potencialmente utilizarse como ingredientes activos para la prevención del envejecimiento.

3. Discusión

Se ha demostrado que el extracto de fenogreco posee actividades antioxidantes, antirradicales y antiinflamatorias en varios estudios [29,37], aunque su propiedad antiarrugas aún no se ha explotado. Esta investigación fue la primera en identificar una actividad antienvejecimiento del extracto de fenogreco utilizando un ensayo inhibidor de colagenasa in vitro. Estudios previos han sugerido el uso de extractos de plantas con actividad anti-colagenasa como ingrediente activo en productos cosmecéuticos como el extracto de orujo de uva [38], extracto de té verde [39] y extracto de hongos [40]. Además, nunca se ha informado sobre el efecto del extracto de fenogreco en la producción de colágeno en células de fibroblastos dérmicos humanos. Tamara et al. (2006) ha demostrado el efecto de los flavonoides sobre la síntesis de colágeno en fibroblastos humanos usando rutina, como compuesto activo del extracto de fenogreco, que ayuda a aumentar el colágeno [41]. Este estudio de fenogreco mostró su prometedora capacidad antienvejecimiento y representó a la rutina como un marcador biológico.

En este estudio se usó rutina (3),4',5.7-tetrahidroxiflavona-3-rutinósido) ya que es un glucósido de flavonol que se ha informado en varias plantas, incluida Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, y fenogreco[17]La rutina posee actividades antioxidantes, citoprotectoras, anticancerígenas, neuroprotectoras y cardioprotectoras, proponiendo su aplicación en la prevención del envejecimiento y de las enfermedades relacionadas con el envejecimiento. Nuestros resultados mostraron que el extracto preparado mostró una gran cantidad de contenido de rutina, que apenas se encontró o detectó como componente del extracto de fenogreco en otros estudios. La mayoría de los otros estudios han informado que la trigonelina es un componente químico importante del extracto de fenogreco [18,37,38,42-47].

Incluso el extracto de fenogreco posee una actividad potencial como agente antienvejecimiento. Su color y estabilidad siguen siendo un desafío para esta aplicación. Se ha informado que la nanoencapsulación es una tecnología específica capaz de estabilizar, enmascarar el olor, mejorar la solubilidad en agua, controlar la liberación de compuestos biológicos [48,49] y mejorar la apariencia física de los productos naturales. Liponiosoma se ha aplicado en este estudio debido a sus propiedades únicas, que se componen de fracciones hidrofílicas e hidrofóbicas, que pueden encapsular una amplia gama de sustancias con diferentes solubilidades [50]. Formulamos liposomas encapsulados con extracto de fenogreco (LNF), que es un vehículo híbrido que comprende características de liposomas y niosomas. Los componentes híbridos del LNF desarrollado se confirmaron mediante la temperatura de fusión mediante DSC, lo que refleja las características térmicas de los liposomas y los niosomas.

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El estrato córneo es una capa externa de la piel que funciona como una barrera eficaz contra las sustancias nocivas al restringir su transporte a través de la piel. Sin embargo, se ha demostrado que el uso de nanotransportadores mejora la administración transdérmica al mejorar la penetración de fármacos o sustancias a través de esta barrera[51]. Para investigar la potencia de LNF en la administración transdérmica, se ha empleado la penetración en la piel porcina ex vivo, ya que sus características anatómicas son en su mayoría similares a las de la piel humana, en términos de grosor de la piel, estructura folicular y densidad del cabello [52]. Nuestros resultados muestran que la permeabilidad de LNF fue mayor y más profunda que el extracto de fenogreco y la rutina, y el perfil de liberación de LNF tuvo una liberación más lenta que el extracto de fenogreco, lo que sugiere que el LNF formulado fue notablemente superior a los del extracto en la penetración de la piel. Además, el LNF formulado mejoró la actividad anticolagenasa, ya que IC-A se redujo significativamente a 0.205±0.03 mg/mL en comparación con el fenogreco extracto (0.567±0.02 mg/mL). Estos resultados demostraron que la formulación de LNF podría potenciar la inducción de la producción de colágeno en las células de fibroblastos dérmicos humanos y mejorar la actividad anticolagenasa del extracto de fenogreco. La nanoformulación del extracto de fenogreco ayuda potencialmente a mejorar su potencia usándolo como ingrediente activo para la prevención del envejecimiento.

La exposición a la radiación UV es el principal factor de envejecimiento extrínseco de la piel, conocido como envejecimiento prematuro o fotoenvejecimiento [53,54]. La radiación provoca la activación de los receptores de la superficie celular de los queratinocitos y fibroblastos de la piel, lo que conduce a una inducción de expresiones de matriz extracelular dérmica, especialmente la familia de metaloproteinasas de matriz (MP). Se ha demostrado que la exposición crónica a dosis bajas de UVA provoca un aumento de los niveles de ARNm de colagenasa-1 (MMP1), estromelisina-1 (MMP3) y gelatinasa A (MMP2)[55]. Como consecuencia, se produce la degradación de las fibras elásticas de colágeno de la piel, así como el cese de la síntesis de colágeno nuevo. Este fenómeno afecta la integridad, la elasticidad y las estructuras de la piel, luego de la desregulación de las funciones protectoras de la piel, lo que explica la formación de arrugas y signos de envejecimiento de la piel [54,56]. Además, la exposición de UVR en la piel humana media una expresión de TNF-alfa, que es un importante regulador de la cascada inflamatoria en la piel. La radiación UV también inicia la activación tanto de la inflamación como de las secreciones de citocinas proinflamatorias, como la interleucina-2 (IL-2) y la interleucina-6 (1L-6) [36] . Como resultado, esta respuesta inflamatoria inducida por UVR tiene un papel importante en la inducción de piel quemada con signos de enrojecimiento, irritación y eritema [35,59].

Por tanto, para prevenir la causa del envejecimiento prematuro, sería ideal el hallazgo de algunos principios activos novedosos con estas funciones preventivas. Nuestros resultados demostraron que la formulación de LNF podría potenciar la inducción de la producción de colágeno en las células de fibroblastos dérmicos humanos, podría reducir las secreciones de MP1, MP9, IL-6 e IL-8 tras la exposición a los rayos UV y podría mejorar la actividad anti-colagenasa del extracto de fenogreco. Por lo tanto, un extracto etanólico de fenogreco y su nanoformulación podrían tener un uso potencial como ingrediente activo novedoso en productos cosmecéuticos y esa nanoencapsulación puede mejorar la función y la actividad del extracto de fenogreco como agente antienvejecimiento. 4.Materiales y Métodos

4.1.Materiales Vegetales y Reactivos Químicos

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98 por ciento de pureza), tampón de tricina, colagenasa de clostridium histolyticum y FALGPA (N-[3(2-furil)acril)-Leu-Gly-Pro-Ala), rojo directo 80, ácido pícrico y sulfóxido de dimetilo. adquirido de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE. UU.) El acetonitrilo, el acetato de etilo, el etanol absoluto, el ácido fórmico, el fosfato de sodio deshidratado, el fosfato de hidrógeno disódico, el ácido clorhídrico y el hidróxido de sodio se adquirieron de Carlo Erba (Emmendingen, Alemania). El etanol de calidad comercial se adquirió de Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Tailandia). El colesterol se adquirió de Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Tailandia). La mezcla de propilenglicol y solubilizante se adquirió de S.Tong Chemicals Co,Ltd. (Nonthaburi, Tailandia). El oleato de sorbitán se adquirió de Croda Co., Ltd. (Bangkok, Tailandia). El fosfolípido (Phospholipon 90G) se adquirió de Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Tailandia). El acetato de tocoferol se adquirió de Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Tailandia). El conservante se adquirió de Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Tailandia). El paraformaldehído se adquirió de Himadia Laboratories (Mumbai, India) y el bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio se adquirió de Calbiochem (Burlington, MA, EE. UU.).

4.2.Extracción

El polvo de semilla de fenogreco (500 g) se maceró con etanol al 95 por ciento (1:5) durante 3 días. La extracción se repitió tres veces (3 x 2500 ml). Se filtró toda la solución de extracto y se evaporó el etanol a 100 mbar a 40 grados utilizando un evaporador rotatorio (Heidolph, Schwabach, Alemania). El extracto obtenido fue la pasta aceitosa de color marrón amarillento con un rendimiento del 5 por ciento (p/p) y se mantuvo a 4 grados hasta su uso.

4.3. Validación de UHPLC e identificación de rutina en extracto de fenogreco

El trihidrato de rutina, como marcador estándar, se utilizó para analizar el extracto de fenogreco. El método UHPLC fue desarrollado y validado en términos de linealidad, exactitud, precisión y sensibilidad[31,32] por un sistema Shimadzu LC-30 AD UHPLC que comprende un detector de matriz de diodos SPD-M20A y un muestreador automático SIL-30AC. El método utilizó una columna SUPLECO Titan C18 (5 cm × 2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, EE. UU.) a 30 grados y detectó una longitud de onda de 26{{ 19}} nm. La fase móvil fue adaptada de Kenny et al. [45]. Brevemente, se preparó 0.05 por ciento v/v de solución de ácido fórmico en agua ultrapura (A) y 0.05 por ciento v/v de ácido fórmico en acetonitrilo (B) con un flujo de 0,25 ml/min en modo de gradiente: la condición inicial fue 10 % B durante 1,0 min, aumentó a 75 % B durante 3,5 min, disminuyó a 10 % B durante 0,75 min y se mantuvo durante 0,25 min.

4.4. Ensayo de colagenasa

Se realizó un ensayo de colagenasa para determinar la actividad anticolagenasa [60]. La solución de la mezcla, que contenía 25 μL de solución tampón de tricina 50 mM (pH 7,5), 25 μL de 2 unidades/mL de colagenasa (clostridium histolyticum tipo IA), y 25 μL de la muestra, se preparó y se incubó a temperatura ambiente durante 15 mín. Para iniciar la reacción, se agregaron 10 uL del sustrato sintético y 2 mM de N-[3-(2-Furyl) acriloil-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) a la solución de la mezcla y se incubó. durante 20 min. El cambio en la absorbancia de cada sobrenadante se midió a 340 nm (lector de microplacas Synergy H1) y los valores de ICso se calcularon trazando una curva de regresión lineal que mostraba las concentraciones de muestra en el eje x y el porcentaje de inhibición en el eje y. El porcentaje de inhibición se calculó utilizando la siguiente ecuación:

4.5.Cultivo celular

Se adquirieron células de fibroblastos dérmicos humanos de la American Type Culture Collection: ATCC (PCS-201-010) y se adquirieron queratinocitos humanos inmortalizados (HaCaT) de Cell Lines Service, Alemania (Cat. No. 300493). Las células se cultivaron en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Gibco, Reino Unido) complementado con FBS al 10 por ciento (Gibco, Reino Unido), penicilina al 1 por ciento (100 unidades/ml) y estreptomicina (100 ug/ml) (Gibco, St. Louis , MO, EE. UU.). Las células se incubaron a 37 grados bajo un ambiente de dióxido de carbono al 5 por ciento.

4.6. Contenido de colágeno y tinción roja de Picrosirius

Se sembraron células de fibroblastos dérmicos humanos a razón de 2,5 × 104 células/pocillo en placas de 48 pocillos y se incubaron durante 24 h. A continuación, las células se trataron con diversas concentraciones de liponiosoma sin extractos (indicado como blanco), extracto de fenogreco encapsulante de liponiosoma (LNF) y extracto de fenogreco durante 7 y 14 días, con 005 por ciento DMSO utilizado como control de vehículos. Los medios se cambiaron cada 2 días. A continuación, las células se lavaron con PBS y se fijaron con 100 ul de PFA al 4 % durante 10 min. Las células se lavaron con PBS (dos veces) y se tiñeron con 100 uL de soluciones de rojo directo 80 al 0,1 por ciento durante 10 min. Después de teñir, se añadió HCl 0,01 N en etanol al 70 por ciento para lavar el exceso de tinte. El colágeno teñido se disolvió con 10 ul de NaOH 0,5 N y la absorbancia se midió a 540 nm utilizando un lector de microplacas (lector de microplacas Synergy H1). El porcentaje de contenido de colágeno se calculó utilizando la siguiente ecuación:

4.7.Ensayo de viabilidad celular

Se sembraron células de fibroblastos dérmicos humanos a razón de 2 x 104 células/pocillo en placas de 96 pocillos y se incubaron durante 24 h. Después de la incubación, se añadieron diferentes concentraciones (0-100 ug/mL) de los liposomas sin extractos (en blanco), LNF y extracto de fenogreco y se cultivaron durante 24 h. Luego, se agregaron 100 μL de MTT (1 mg/mL) a cada pocillo y se incubaron durante 4 h. Se añadió DMSO para disolver el producto de formazán. La absorbancia se midió a 570 nm utilizando un lector de microplacas (lector de microplacas Synergy Hl). El porcentaje de viabilidad celular se calculó utilizando la siguiente ecuación:

4.8.Formulación de Liponiosomas

Se empleó la emulsión previa después de la homogeneización para la formulación de liposomas. Se usó una mezcla de fosfolípidos y emulsionantes para formar una bicapa lipídica esférica y se usó colesterol para mejorar la rigidez de las partículas [15]. Brevemente, la lecitina de soja, el colesterol y el emulsionante se dispersaron en propilenglicol y se calentaron a 70-80 grados (fase oleosa), como se muestra en la Tabla 2. El extracto de fenogreco se disolvió en propilenglicol/agua (fase acuosa) y se calentó en el mismo baño de agua. La solución acuosa del extracto se añadió continuamente a los componentes lipídicos y se homogeneizó a 8000-100 rpm durante 5-10 min usando agitación de alta velocidad (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, EE. UU.). La mezcla se enfrió a 50 grado y se añadió acetato de tocoferol y se homogeneizó durante 10 min más para obtener LNF. La morfología de LNF se observó mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM, JEOL, Peabody, MA, EE. UU.), con el tamaño hidrodinámico, el índice de polidispersidad Pdl y el potencial zeta investigados mediante dispersión de luz dinámica (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, REINO UNIDO). La confirmación del comportamiento de fusión de los liposomas se investigó usando calorimetría diferencial de barrido (DSC, Mettler Toledo DSC1). La viscosidad de la muestra se midió con un viscosímetro digital Brookfield (modelo HBDV-IIIU CP). Brevemente, se usaron 0,5 g de muestras y se examinó la viscosidad usando un husillo CP-40, con la velocidad controlada a 0,5 rpm durante 20 min a temperatura ambiente.

Para evaluar la estabilidad de LNF, las partículas se mantuvieron a 4 grados, 25 grados y 40 grados durante 3 meses, y se examinaron los cambios en el tamaño y la morfología de las partículas.

El extracto de fenogreco (LF y NF) para encapsulación de liposomas y nocivos se formuló utilizando un método similar al LNF. LF se preparó sin la adición de oleato de sorbitán a la fase oleosa, mientras que el niosoma (NF) se preparó sin la adición del componente fosfolípido. Sus caracterizaciones fisicoquímicas se informaron en la Tabla complementaria S1.

4.9.Porcentajes de Eficiencia de Encapsulación y Carga Bioactiva

La eficiencia de encapsulación (porcentaje EE) y la carga bioactiva (porcentaje BL) de LNF se calcularon determinando la cantidad de fármaco encapsulado usando una técnica de ultrafiltración. La cantidad de rutina se utilizó como marcador estándar. Después de disolver 20 mg/mL de LNF en agua DI, se centrifugó a 80,000 rpm durante 4 h. Se recogió el sobrenadante y luego se evaluó la rutina no encapsulada mediante una técnica de cromatografía líquida de ultra alta resolución (UHPLC) [61]. El porcentaje de EE y el porcentaje de BL se calcularon mediante las siguientes ecuaciones:

4.10.Célula de difusión de Franz

Se investigó un estudio permeable in vitro de 7 mg/mL de extracto de fenogreco y LNF en un sistema de células de difusión de Franz [62]. La membrana sintética (disco de ultrafiltración Biomax 500 kDa, Merck, MA, EE. UU.) se colocó entre un compartimento donante y uno receptor. Se agitó solución salina tamponada con fosfato (PBS) con un pH de 5,5 a 50 rpm (37 grados) y se usó como medio receptor. Se aplicaron extracto de fenogreco y LNF sobre la membrana en la tapa de la célula donante. Las muestras se permearon a través de la membrana y se recogieron del compartimento del receptor a las 0, 2, 4, 6, 8, 12 y 24 h. La rutina permeada acumulada se evaluó y calculó mediante la técnica UHPLC.

4.11.Permeabilización de la piel porcina

La penetración de LNF a través de la piel porcina se visualizó mediante un microscopio de masas de imágenes (IMS, SHIMADZU, modelo: iMScopoe TRIO, Kioto, Japón). La piel porcina se cortó en 1,5 × 1,5 cm2. La rutina, el extracto de fenogreco y LNF se aplicaron sobre la piel porcina cortada y se almacenaron a 4 grados durante 24 h. Las muestras se cortaron con un criostato, se colocaron en un portaobjetos de vidrio recubierto de óxido de indio y estaño y se rociaron con una sustancia matriz de 9-aminoacridina (9-AA). Las muestras se almacenaron a-20 grados antes del análisis. Se analizó una superposición de las imágenes ópticas de la rutina a 609,15 m/z.

4.12. Caracterización de calorímetros diferenciales de barrido (DSC)

Se realizó un análisis de calorimetría de barrido diferencial (DSC) para determinar el punto de fusión de LNF utilizando un calorímetro de barrido diferencial (DSC, Mettler Toledo DSC1) [63]. Después de un pesaje preciso, las muestras se colocaron en bandejas de aluminio y se sellaron con una tapa. En el proceso de escaneo, se aplicó una tasa de calentamiento de 10 grados en el rango de temperatura de 25 a 350 grados bajo una purga de gas nitrógeno a 40 mL/min. 4.13. Construcción de células de piel humana cocultivadas

Se sembraron células de fibroblastos dérmicos humanos a razón de 8,5 × 104 células/pocillo en insertos de cultivo de 12 pocillos (Corning, Corning, NY, EE. UU.) y se cultivaron durante 24 h. La segunda y tercera capas de fibroblastos dérmicos se añadieron repetidamente sobre la primera capa en días consecutivos. Después de 24 horas de agregar la tercera capa, se sembró HaCaT a 8,5 × 10 grados de células/pozo en las capas de fibroblastos formadas y se cultivó durante otras 24 horas antes del experimento.

4.14.Investigación de la viabilidad celular y la secreción de MMP después de la exposición a los rayos UV en células cutáneas cocultivadas

Se pretrataron células de piel humana cocultivadas con 7 ug/mL de extracto y 100 ug/mL de LNF (7 ug/mL de equivalente de extracto), junto con 100 ug/mL de blanco y 10 ug/mL de resveratrol como control positivo , durante 24 h. A continuación, las células de la piel cocultivadas se lavaron dos veces con PBS y se sometieron a 5 J/cm2 de radiación UVA y 30 mJ/cm2 de radiación UVB (Solar Simulators, NY, EE. UU.). Después de la irradiación UV, las células de la piel cocultivadas se incubaron adicionalmente con las muestras analizadas durante 24 h. Luego se recogió el sobrenadante para las cuantificaciones de MMP1 y MP9. Los niveles de secreciones de MMP1 y MMP9 inducidas por UV en células de piel humana cocultivadas se midieron mediante kits de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (MMP1: ab215083 y MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, Reino Unido) de acuerdo con los protocolos de fabricación.

Se evaluó la viabilidad de las células de piel humana cocultivadas después de la exposición a los rayos UV utilizando un kit de ensayo de viabilidad de células luminiscentes CellTiter-Glo (Promega, Madison, WI, EE. UU.). Después de 24 h de exposición a los rayos UV, las células de la piel cocultivadas se lavaron dos veces con PBS y se agregaron 100 μL de Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, EE. UU.) a cada pocillo. Después de 10 min de incubación, se añadieron 50 uL de reactivo CellTiter-Glo y se incubó a temperatura ambiente durante 10 min. A continuación, se midió la señal luminiscente utilizando un luminómetro de microplacas (SpectraMax L, Molecular Devices).

4.15.Análisis estadístico

Los resultados se representaron como media ± desviación estándar (DE). Las diferencias significativas se analizaron mediante una prueba de Student o un análisis de varianza de una o dos vías (ANOVA) seguido de la prueba post hoc de Tukey (GraphPad Prism 9), con valores de p<0.05 considered="" statistically="">

5. Conclusiones

Colectivamente, esta investigación produjo dos sugerencias alternativas. En primer lugar, la rutina no solo se observó en términos de protección contra la radiación ultravioleta y sustancia antioxidante, sino que también se usó como un marcador estándar de huellas dactilares cromatográficas y una referencia clave de la actividad antienvejecimiento del extracto de semillas de fenogreco en polvo. En segundo lugar, se demostraron los mecanismos moleculares subyacentes al extracto etanólico contra el envejecimiento. El extracto mostró nuevas propiedades biológicas, como la actividad anticolagenasa, la inducción de la producción de colágeno y la inhibición de la degradación del colágeno, lo que se refiere a un posible agente antienvejecimiento natural alternativo para los productos antienvejecimiento. Las técnicas de encapsulación se pueden utilizar para proteger los compuestos bioactivos y los procesos de degradación química y física, y prolongar su actividad biológica hasta su uso. Esta técnica también reduce la toxicidad de los extractos de hierbas. En este estudio, los liposomas formulados son altamente estables y tienen una liberación prolongada. La nanoformulación también puede mejorar la potencia del extracto de fenogreco en las propiedades antienvejecimiento. Sobre la base de este estudio, sugerimos que LNF podría aplicarse potencialmente como un ingrediente activo prometedor en la prevención del envejecimiento de la piel.

Este artículo está extraído de Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals