Evaluación de la actividad antifatiga de las saponinas totales de Radix Notoginseng

Xu Yong-xin y Zhang Jian-jun

Facultad de Educación Física, Universidad de Zhengzhou, Zhengzhou, República Popular China

Para más información: ali.ma@wecistanche.com

Antecedentes y objetivos:

Se han informado varias actividades biológicas de saponinas totales de Radix notoginseng (TSRN), una medicina tradicional china. El presente estudio se llevó a cabo para investigar laactividad antifatigade TSRN en ratones Kunming macho.

Métodos:

Los ratones se dividieron en cuatro grupos. Al primer grupo designado como grupo de control se le administró agua destilada por sonda todos los días. Los grupos segundo, tercero y cuarto designados como grupos de tratamiento con TSRN recibieron TSRN de 20, 40 y 80 mg/kg de peso corporal/día, respectivamente. El tratamiento continuó durante 28 días. Se determinó el tiempo de natación exhaustivo, el lactato en sangre y el contenido de glucógeno tisular de los ratones después de nadar.

Resultados:

TSRN extendió el tiempo de natación exhaustivo de los ratones, retrasó efectivamente el aumento de lactato en la sangre y aumentó el contenido de glucógeno tisular.

Interpretación y conclusiones:

TSRN mostró prometedoractividad antifatigaen un modelo animal. Sin embargo, se necesitan más estudios para dilucidar el mecanismo del efecto de TSRN enfatiga.

Palabras clave: Actividad antifatiga - lactato - natación - saponinas totales de Radix notoginseng

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen se cultiva en todo el suroeste de China, Birmania y Nepal. La raíz, la parte de uso común de esta planta llamada Radix notoginseng o Sanchi, tiene una larga historia como remedio en la medicina tradicional oriental1-3. En China, R. notoginseng se usa para promover la circulación sanguínea, eliminar la estasis sanguínea, inducir la coagulación sanguínea, aliviar la hinchazón, retrasarfatiga,y aliviar el dolor4,5. Se informa que R. notoginseng es beneficioso para la enfermedad cardíaca coronaria, la enfermedad vascular cerebral, el cáncer, la diabetes mellitus, así como para mejorar el aprendizaje y la memoria en estudios experimentales6-8. Estos efectos terapéuticos se atribuyen a sus ingredientes activos, a saber, saponinas, flavonoides y polisacáridos9-11. Las saponinas totales de R. notoginseng (TSRN) se consideran los principales ingredientes activos y son una mezcla de más de 20 saponinas de tipo Dammarane, incluido el ginsenósido Rg1, Rg2, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd, Re, Rh, F2 , y notoginsenósido R1, R2, R3, R4, R6, Fab, Fc, Fe, etc12. Aunque se conocen muchas actividades biológicas y funciones farmacológicas de TSRN. Se sabe que ha habido estudios limitados que investigan sus efectos sobrefatiga física. Por lo tanto, el presente estudio fue diseñado para investigar laactividad antifatigade saponinas totales de R. notoginseng en un modelo de rata.

Material y Métodos

El estudio se realizó en el Laboratorio de Bioquímica de la Universidad de Zhengzhou (Zhengzhou, China). Materiales vegetales: La muestra seca de R. notoginseng se obtuvo de Henan Chinese Herbal Medicine Company (Zhengzhou, China) y fue autenticada por el Departamento de Botánica de la Universidad de Zhengzhou (Zhengzhou, China). La muestra fue identificada por características macro-morfológicas y microscópicas y cromatografía en capa fina (TLC). Con base en la Farmacopea China, se identificó como la raíz de

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen. Preparación de saponinas totales de R. notoginseng (TSRN):

Se molió R. notoginseng seco hasta polvo y se pasó a través de un tamiz de malla 40. TSRN fue preparado por el método de Sun et al13. En resumen, las muestras alimentadas (1 kg) se extrajeron con etanol al 70 por ciento a 100 grados (3 x 4 l) y se concentraron al vacío (40 grados) para evaporar el disolvente y obtener un volumen pequeño. Después de extraer con éter (3 x 0,5 l), la porción de la capa de agua se extrajo con n-butanol hasta que la capa de n-butanol se volvió incolora. La solución de n-butanol se concentró y se secó al vacío (60 grados). El extracto seco se sometió a cromatografía en columna de resina D101, se lavó con H2O y se eluyó con etanol para dar TSRN. TSRN contenía 64,3 ± 1,15 por ciento de notoginsenósido según lo determinado por cromatografía de capa fina y método espectrofotométrico.

animales:

Ratones Kunming macho, con un peso de entre 18- 22 g, se obtuvieron del Centro de animales de laboratorio, Facultad de medicina de la Universidad de Zhengzhou (Zhengzhou, China), y se alimentaron con una dieta comercial y agua ad libitum. La dieta comercial consistía en 12 por ciento de grasas, 60 por ciento de carbohidratos y 28 por ciento de proteínas. Los animales se alojaron bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12-h a una temperatura de 22 ± 1 grado y una humedad de 50 ± 5 por ciento. Se permitió que los ratones se aclimataran al entorno del laboratorio durante al menos 1 semana antes de los experimentos. La autorización ética para realizar los experimentos en animales se obtuvo del Comité Institucional de Ética Animal.

Agrupación de animales:

Noventa y seis ratones se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos, cada uno de los cuales constaba de 24 ratones. Al primer grupo designado como grupo de control (Control) se le administró agua destilada por sonda todos los días. A los grupos segundo, tercero y cuarto designados como grupos de tratamiento con TSRN se les administró TSRN de 20, 40 y 80 mg/kg de peso corporal/día, respectivamente. La administración de agua destilada o TSRN se continuó durante 28 días. Las dosis de TSRN y 28 días de tiempo de tratamiento utilizadas en este estudio se confirmaron como adecuadas y efectivas en ratones probados, según experimentos preliminares.

Prueba de natación exhaustiva:

Después del tratamiento final con TSRN o agua destilada, los ratones se dejaron descansar durante 30 min. Luego, se sacaron ocho ratones de cada grupo para una prueba de natación exhaustiva. Los animales se colocaron en el tanque de natación (50 × 50 × 40 cm) a 30 cm de profundidad con agua mantenida a 25 ± 2 grados. La cola de cada ratón se cargó con un paquete de piezas de plomo, que representaba el 10 por ciento de su peso corporal. El agotamiento se determinó observando la pérdida de los movimientos coordinados y la falta de retorno a la superficie en 10 segundos14. Inmediatamente se registró el tiempo de natación.

Medición de parámetros bioquímicos relacionados con la fatiga:

Después del tratamiento final con TSRN o agua destilada, los ratones se dejaron descansar durante 30 min. Luego, se sacaron ocho ratones de cada grupo para análisis de lactato en sangre. Se obligó a los ratones a nadar durante 30 minutos después de la carga de peso (2 por ciento del peso corporal), y se recogió sangre de la vena de la cola antes y después de nadar. Los contenidos de lactato en sangre se midieron de acuerdo con los procedimientos recomendados proporcionados por el kit de diagnóstico comercial (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China). Los ocho ratones restantes se sacaron de cada grupo para análisis de glucógeno tisular. Se obligó a los ratones a nadar durante 90 minutos sin cargas. Después de descansar durante una hora, los ratones se sacrificaron por dislocación cervical bajo anestesia. Se recogieron el hígado y los músculos gastrocnemios15. Los contenidos de glucógeno tisular se analizaron de acuerdo con los procedimientos recomendados proporcionados por el kit de diagnóstico comercial (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China).

análisis estadístico

: Todas las pruebas se realizaron por triplicado. Los datos experimentales se expresaron como media ± desviación estándar. Se realizaron análisis de varianza unidireccional (ANOVA), LSD y pruebas T3 de Dunnett para determinar la diferencia significativa entre las muestras dentro del intervalo de confianza del 95 por ciento, usando el software SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU).

Resultados

Efectos de TSRN en el tiempo de natación exhaustivo de ratones:

El tiempo de natación exhaustiva del tercer y cuarto grupo aumentó significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" the="" control="" group.="" however,="" the="" exhaustive="" swimming="" time="" of="" the="" second="" group="" showed="" no="" significant="" changes="" compared="" with="" the="" control="" group="" (fig.="" 1).="" the="" swimming="" time="" of="" the="" second,="" third,="" and="" fourth="" groups="" increased="" by="" 21.15,="" 27.41,="" and="" 34.01="" percent,="" respectively.="">

Efectos de TSRN en el contenido de lactato en sangre de ratones después de nadar:

No hubo diferencias significativas en el contenido de lactato en sangre entre los grupos de tratamiento con TSRN y el grupo de control antes de nadar. Después de nadar, el contenido de lactato en sangre de cada grupo de tratamiento con TSRN disminuyó significativamente (P<0.05) when="" compared="" to="" the="" control="" group="" (fig.="" 2).="" the="" results="" indicated="" that="" the="" blood="" lactate="" contents="" of="" the="" second,="" third="" and="" fourth="" groups="" decreased="" by="" 47.14,="" 57.59,="" and="" 61.96="" percent,="">

Efectos de TSRN en el contenido de glucógeno tisular de ratones después de nadar:

Después de nadar, el contenido de glucógeno muscular y hepático de cada grupo de tratamiento con TSRN aumentó significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" that="" of="" the="" control="" group="" (fig.="" 3).="" the="" liver="" glycogen="" contents="" of="" tsrn="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.12,="" 115.84,="" and="" 153.58="" percent,="" respectively.="" the="" muscle="" glycogen="" contents="" of="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.54,="" 83.74,="" and="" 73.98="" percent,="">

Discusión

El presente estudio fue diseñado para investigar la actividad antifatiga de las saponinas totales de R. notoginseng (TSRN). El nado forzado de los animales se ha empleado como criterio de su capacidad de trabajo físico. Muchos estudios señalaron que la natación tiene ventajas sobre otras formas de ejercicio, incluida la cinta de correr16-19. Para estandarizar la carga de trabajo y reducir el tiempo de natación, se añadían pesos en porcentajes específicos de peso corporal en el pecho o la cola del animal17,20. El presente estudio mostró que TSRN extendió el tiempo de natación exhaustiva de los ratones, lo que indicó que TSRN tenía actividad antifatiga y podría elevar la tolerancia al ejercicio. Para explorar los mecanismos, se determinaron algunos parámetros bioquímicos en los ratones después de nadar. El lactato sanguíneo es el producto de la glucólisis de los carbohidratos en condición anaeróbica, y la glucólisis es la principal fuente de energía para el ejercicio intenso en poco tiempo21,22. Por lo tanto, el lactato en sangre es uno de los indicadores importantes para juzgar el grado de fatiga deportiva. En el presente estudio, el TSRN retrasó efectivamente el aumento de lactato en sangre y la aparición de fatiga. La energía para el ejercicio se deriva inicialmente de la descomposición del glucógeno, después del ejercicio extenuante, el glucógeno muscular se agotará y, más tarde, la energía provendrá de la glucosa circulante liberada por el hígado. Así, los contenidos de glucógeno hepático y muscular son parámetros sensibles relacionados con la fatiga23-25. En el presente estudio, el TSRN aumentó significativamente el contenido de glucógeno tisular de los ratones después de nadar. En conclusión, los resultados sugirieron que TSRN tenía actividad antifatiga, lo que prolongaba el tiempo de nado exhaustivo de los ratones, retrasó efectivamente el aumento de lactato en la sangre y aumentó el contenido de glucógeno tisular. Se necesitan más estudios para dilucidar el mecanismo exacto del efecto de TSRN sobre la fatiga.

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