3.3. Actividades antioxidantes del aceite de semilla de calabaza

Según estudios relevantes,cistanchees una hierba común que se conoce como "la hierba milagrosa que prolonga la vida". Su principal componente escistanósido, que tiene varios efectos tales comoantioxidante, antiinflamatorio, ypromoción de la función inmunológica. El mecanismo entre la cistanche y el blanqueamiento de la piel radica en el efecto antioxidante de la cistancheglucósidos. La melanina en la piel humana es producida por la oxidación de tirosina catalizada portirosinasa, y la reacción de oxidación requiere la participación de oxígeno, por lo que los radicales libres de oxígeno en el cuerpo se convierten en un factor importante que afecta la producción de melanina. Cistanche contiene cistanosido, que es un antioxidante y puede reducir la generación de radicales libres en el cuerpo, inhibiendo así la producción de melanina.

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Todas las muestras de aceite de semilla de calabaza redujeron los radicales DPPH• de manera dependiente de la dosis (Figura 1). PSO2 demostró una inhibición de DPPH• mayormente efectiva, y se encontró que PSO2 a una concentración del 5 por ciento p/v mostró una inhibición significativa de los radicales DPPH• en comparación con PSO1, COM1 y COM2 (p < 0.05) . Además, el ácido linoleico (LA), que era la principal composición de ácidos grasos en las muestras de aceite de semilla de calabaza, también redujo los radicales DPPH• de manera dependiente de la dosis, lo que indica que el LA podría ejercer efectos biológicos en el aceite de semilla de calabaza. Aunque los mecanismos del ácido linoleico para reaccionar con los radicales aún no están claros. Un estudio anterior de Yu (2001) informó que los ácidos linoleicos reaccionaban directamente con los radicales libres DPPH• pero tenían una fase de retraso y no mostraban actividad de eliminación de radicales. Sin embargo, los ácidos linoleicos conjugados reaccionaron y extinguieron los radicales DPPH• tanto en ambientes hidrofílicos como lipofílicos [51].

Por otro lado, PSO1, PSO2, COM1 y COM2 en una concentración de 10 por ciento p/v redujeron ABTS• más radicales. PSO2 mostró la mayor inhibición de ABTS• plus en comparación con PSO1, COM1, COM2 y LA (p<0.005). Interestingly, PSO2 exhibited comparable ABTS•+ inhibition with ascorbic acid, which was a positive control (Figure 2).

La actividad antioxidante de las muestras de aceite de semilla de calabaza en función del potencial antioxidante en la reducción del hierro férrico (Fe3 plus) a hierro ferroso (Fe2 plus) se muestra en la Figura 3. Esta investigación presentó el poder antioxidante reductor férrico equivalente de PSO1, PSO2, COM1 , COM2 y LA a una concentración de 10 por ciento p/v. Por otro lado, el ácido ascórbico, que fue un control positivo, mostró el valor más alto de EC1 (p< 0.05）.

PSO1, PSO2, COM1, COM2 y LA inhibieron la peroxidación de lípidos en varias concentraciones (0.25 por ciento, 0.5 por ciento y 1 por ciento p/v) de manera dependiente de la dosis, como se muestra en la Figura 4. La inhibición por LA, PSO1 y COM1 fue casi completa a la concentración de 1 por ciento p/v. No hubo una inhibición significativamente diferente de la peroxidación lipídica entre los grupos. Además, el -tocoferol demostró una inhibición eficaz de la peroxidación de lípidos en concentraciones más bajas que las muestras de aceite de semilla de calabaza.

La actividad antioxidante juega un papel importante en los compuestos naturales para trabajar contra el estrés oxidativo, proporcionar beneficios para la salud y mejorar algunas enfermedades. Un número considerable de estudios ha demostrado que el aceite de semilla de una variedad de plantas contiene antioxidantes en forma de fenoles, tocoferoles y fitoesteroles [52,53]. La aparición de polifenoles y carotenoides en el aceite de semilla de calabaza estimuló el sistema de defensa antioxidante y previno la hipertensión, la aterosclerosis, la diabetes tipo 2 y el cáncer [R]. En un análisis anterior, se encontró que el aceite de semilla de calabaza tiene actividad antioxidante con una capacidad equivalente de Trolox de 0.664 ± 0.09 a 1.18 ± 0.04 µM Trolox/g [55 ]. Del mismo modo, Boujemaa I et al. (2020) informaron que C. maxima mostró una mayor actividad antioxidante que C. moschata y C. pepo [56], lo que puede describirse en parte por las mayores cantidades de PUFA, tocoferoles y compuestos fenólicos [18,57]. Recientemente, las actividades antioxidantes del aceite de semilla de calabaza se midieron mediante cuatro métodos, incluidos los ensayos DPPH•, ABTS• plus, FRAP y FTC. El resultado demostró que PSO2 presentó un mayor valor de actividad secuestrante que PSO1, COM1 y COM2, lo que redujo significativamente los radicales de DPPH• y ABTS• plus y FeSO4. Aunque PSO2 presentó un menor rendimiento de ácido linoleico que los demás, exhibió actividades antioxidantes comparables pero con excelentes propiedades de eliminación de radicales DPPH•. El ejercicio de actividades de eliminación de PSO2 podría derivar de compuestos bioactivos como carotenoides, tocoferoles y compuestos fenólicos, respaldados por estudios previos [52–54]. Se puede concluir que la extracción enzimática acuosa del aceite de semilla de calabaza fue un método de extracción potente y apoyó la liberación de más componentes bioactivos para mejorar las actividades antioxidantes. Por lo tanto, todas las muestras de aceite de semilla, especialmente PSO2, demostraron poder antioxidante y podrían ser útiles en aplicaciones relacionadas con los beneficios para la salud y el tratamiento médico.

3.4. Actividad antienvejecimiento del aceite de semilla de calabaza

PSO1, PSO2, COM1 y COM2 inhibieron la actividad de la hialuronidasa en varias concentraciones (00,25 %, 00,5 % y 1 % p/v) de forma dependiente de la dosis. En concentraciones bajas ({{10}}.25 por ciento p/v), PSO1, PSO2 y COM1 mostraron una inhibición altamente efectiva (aproximadamente 70–100 por ciento) e inhibió significativamente la actividad hialuronidasa en comparación con COM2 (p < 0,05) como se muestra en la Figura 5. El ácido oleanólico (OA), que era un control positivo, también disminuyó la actividad hialuronidasa. LA, un componente principal del aceite de semilla de calabaza, realizó la inhibición más alta (120,6 ± 0,7 por ciento), lo que inhibió significativamente la actividad hialuronidasa en comparación con otras muestras de aceite de semilla de calabaza y OA (p < 0,05).

Las actividades anticolagenasa de las muestras de aceite de semilla de calabaza se muestran en la Figura 6. PSO1, PSO2 y COM1 inhibieron la actividad colagenasa, mientras que COM2 no lo hizo. PSO1 y PSO2 (1 por ciento p/v) mostraron una actividad inhibidora de colagenasa significativa en comparación con COM1 y COM2, respectivamente (p < 0.05). El OA como control positivo también presentó inhibición de la actividad colagenasa. Sin embargo, LA no afectó a la colagenasa en este experimento. Esta podría ser la razón por la que COM2, que contenía el mayor contenido de LA, no afectó a la colagenasa.

Las actividades anti-elastasa de las muestras de aceite de semilla de calabaza se muestran en la Figura 7. Solo PSO1 a una concentración de 1 por ciento p/v inhibió la actividad de elastasa y disminuyó significativamente la actividad de elastasa en comparación con PSO2, COM1 y COM2 (p < {{7 }}.05). LA mostró un efecto similar con PSO1 y OA. Además, OA como control positivo presentó la mayor inhibición de la actividad de la elastasa y disminuyó significativamente la actividad de la elastasa en comparación con PSO1, PSO2, COM1, COM2 y LA (p < 0,05).

La salud y la belleza de la piel se consideran uno de los factores más importantes del "bienestar" en los seres humanos, por lo que en los últimos años se han establecido varias estrategias antienvejecimiento [58]. La radiación ultravioleta o el fotoenvejecimiento inducen estrés oxidativo, que es una causa importante del proceso de envejecimiento de la piel humana, así como de la pigmentación de la piel [59]. Normalmente, el cuerpo humano puede generar enzimas antioxidantes como superóxido dismutasas (SOD), catalasas y glutatión peroxidasa (GSH) para extinguir las especies reactivas de oxígeno (ROS) [50], pero se necesitan más agentes antioxidantes. En la actualidad, los extractos de aceites vegetales y de semillas se han utilizado para productos farmacológicos y cosméticos debido a sus propiedades antioxidantes, que se basan en compuestos bioactivos que incluyen fenoles, tocoferoles y fitoesteroles, lo que mejora el envejecimiento de la piel [23,60]. Investigaciones anteriores encontraron que el aceite de semilla de Camellia japonica inducía la síntesis de colágeno humano tipo I con un alto efecto humectante; sin embargo, inhibió la actividad de MMP1 [61]. Aceite de semilla de granada enriquecido con AGPI y efecto antioxidante y sus productos; las nanoemulsiones y cremas mejoraron la función de barrera de la piel [62]. Sin embargo, se han realizado pocas investigaciones sobre las propiedades cosméticas del aceite de semilla de calabaza, en consecuencia, este estudio se centró en determinar la inhibición de las enzimas hialuronidasa, colagenasa y elastasa que involucran actividades antienvejecimiento. Los resultados encontraron que PSO1 y PSO2 inhibían potencialmente la enzima hialuronidasa, así como COM1 y COM2, que mostraban efectos similares para inhibir la actividad hialuronidasa. Además, PSO1 y PSO2 redujeron significativamente la actividad de la enzima colagenasa, y COM1 redujo ligeramente la actividad de la enzima. Solo PSO1 realizó la inhibición de la enzima elastasa. Por lo tanto, se puede determinar que la extracción enzimática acuosa del aceite de semilla de calabaza (PSO1 y PSO2) tuvo actividades antienvejecimiento más potentes que muestran actividades antihialuronidasa, anticolagenasa y antielastasa que el aceite de semilla de calabaza prensado en frío ( COM1 y COM2), que se correlacionan con sus actividades antioxidantes. En resumen, los resultados respaldaron que PSO1 y PSO2 muestran efectos antienvejecimiento efectivos y podrían aplicarse a cosméticos para la piel.

3.5. Actividad antitirosinasa del aceite de semilla de calabaza

La hiperpigmentación es otro problema de la piel que puede ocurrir después de la exposición a los rayos UV. La melanogénesis juega un papel importante en la pigmentación de la piel que está controlada por la acción de la enzima tirosinasa para producir el pigmento melanina. Inicialmente, la tirosinasa hidroxila la L-tirosina y la convierte en L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA), que luego se oxida a DOPA-quinona y finalmente a pigmentos de melanina [63]. Las actividades anti-tirosinasa cuando se usaron L-DOPA y tirosina como sustratos de muestras de aceite de semilla de calabaza se presentan en la Figura 8. PSO1, PSO2, COM1 y COM2 inhibieron la actividad de tirosinasa que usó L-DOPA como sustrato de manera dependiente de la dosis , excepto COM2. PSO1 mostró la actividad inhibidora de tirosinasa más alta a una concentración de 0.5 por ciento y 1 por ciento p/v en comparación con PSO2, COM1 y COM2 (p<0.05). Likewise, all pumpkin seed oil samples inhibited tyrosinase activity when tyrosine was used as a substrate. The inhibitions were in a dose-dependent manner, except COM2. PSO2 showed the highest tyrosinase inhibitory activity at a concentration of 0.5% and 1% w/v when compared with PSO1, COM1, and COM2 (p<0.05). Similarly, LA performed tyrosinase inhibition in a dose-dependent manner, and kojic acid (positive control) also decreased tyrosinase activity in both substrates. It was indicated that PSO1 and PSO2 had potent anti-tyrosinase activities, supporting their use in applications for whitening skin.

Actualmente, varios investigadores han investigado muchos compuestos naturales utilizados como ingredientes para productos para blanquear la piel [64]. El aceite de semilla de té, rico en ácido oleico y poder antioxidante, inhibió las actividades de tirosinasa y TPR-2, lo que condujo a la supresión del proceso de melanogénesis [65]. Además, el informe de Hong Xin Cui, et al. (2018) encontraron que el aceite de semilla de Torreya grandis reveló una potente actividad antioxidante para inhibir la actividad de la tirosinasa, a través de la reducción del suministro de oxígeno en la reacción de la tirosinasa [66]. Nuestros hallazgos demostraron que el aceite de semilla de calabaza exhibió actividad de la enzima tirosinasa. PSO1 presentó una inhibición significativa de la tirosinasa al usar L-DOPA como sustrato. PSO2 informó una inhibición significativa de la tirosinasa al usar tirosina como sustrato. Nuestros resultados indicaron que la extracción enzimática acuosa de aceite de semilla de calabaza (PSO1 y PSO2) también tiene poderosas actividades anti-tirosinasa para efectos blanqueadores a través de su actividad antioxidante.

4. Conclusiones

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