Estudio experimental sobre el efecto protector de los glucósidos totales de cistanche (CTG) en la lesión por reperfusión isquémica renal
Mar 09, 2022
Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correo electrónico:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU junio, ZHAO Xi
Resumen:Objetivo Establecer el modelo en rata de shock hemorrágico y reanimación para observar el efecto protector deglucósidos totales de cistanche(CTG)en el riñónlesión por isquemia-reperfusión. Métodos Las ratas SD se aleatorizaron en un grupo de operación simulada, un grupo de choque y reanimación (grupo experimental) y un grupo CTG, con 10 ratas en cada uno. Después del modelado, las ratas del grupo CTG recibieron la inyección intraperitoneal de 400 mg/kg de CTG. En el grupo experimental y el grupo de operación simulada, se inyectó solución salina física 3 ml. Se determinaron los niveles de Cr, BUN y Cys － C para detectar la función renal en cada grupo. La citometría de flujo se utilizó para detectar la tasa de apoptosis de las células renales. Se usó ELISA para detectar la expresión de XIAP en tejido renal. Resultados En comparación con el grupo experimental, los niveles de Cr, BUN y Cys － C aparentemente se redujeron en elCTG(P ＜ {{0}}.01), y se redujo la apoptosis de las células renales (P ＜ 0.01). CTG mejoró significativamente la expresión de XIAP (P<0.05). conclusion="">CTGtrae el efecto protector sobrereperfusión isquémicalesión renal en las ratas, que posiblemente esté relacionada con la promoción de la expresión de XIAP.
【Palabras clave】 Riñón; lesión por reperfusión isquémica; glucósidos totales de Cistanche; XIAP; Apoptosis Celular
Lesión por isquemia-reperfusión (I/R)es un fenómeno fisiopatológico común del daño renal en el proceso de shock hemorrágico, trauma severo, trasplante renal y cirugía de tumores renales. Los estudios han demostrado que la apoptosis es un vínculo importante en el daño de la función renal causado por la lesión por I/R [1]. El inhibidor de la proteína de la apoptosis ligado al cromosoma X (XIAP) es uno de los inhibidores endógenos de la apoptosis más fuertes encontrados hasta ahora [2]. Hay pocos estudios sobre el efecto antiapoptótico de XIAP en tejido renal después de una lesión por I/R.Cistanche glucósidos totales(CTG) son de la lista Compuestos de glucósidos de feniletanol extraídos deCistanchetienen diversas funciones biológicas. Existen pocos estudios sobre su protección renal tras lesión por I/R. En este experimento, se estableció un modelo de rata de reanimación por choque hemorrágico y un modelo de lesión sistémica por I/R para explorar el efecto protector del pretratamiento con CTG en el riñón contra la lesión por I/R y explorar su posible mecanismo.
Efectos de la cistanche: prevenirLesión por isquemia-reperfusión (I/R)
1 Material y métodos
1.1 Materiales experimentales
1.1.1 Animales de laboratorio 30 ratas SD macho sanas y limpias, proporcionadas por el Centro Experimental de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai, número de certificado de animal: SYXK (Shanghai) 2009-0069, peso corporal (320 ± 30) g.
1.1.2 Reactivo experimentalCTG(adquirido de Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., número de lote: 20081516); pentobarbital sódico (número de lote: P3761), yoduro de propidio (PI), Rhodamin123 (ambos comprados (de Sigma, EE. UU.); kit de determinación ELISA para ratas XIAP (adquirido de Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., número de lote CSB-ELO26172MO) .
1.1.3 Instrumento de laboratorio Lector de microplacas (American Thermo Company); Detector fisiológico multiparámetro (adquirido a NIHON KOHDEN Company, Japón); citómetro de flujo (adquirido de Becton-Dickinson Company, EE. UU.); Trocar de 24 G (Shandong Jierui Medical Equipment Company).
1.2 Métodos experimentales
1.2.1 Preparación del modelo animal Las ratas SD se mantuvieron en ayunas 12 horas antes del experimento y se anestesiaron mediante una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (50 mg/kg). Las ratas se fijaron en posición supina y se hizo una incisión de 3 cm en la parte inferior izquierda del abdomen y se separaron. En la arteria femoral se inserta un trocar de 24 G, se conecta un tester fisiológico multiparámetro, se hepariniza una jeringa de 20 ml y se baja la presión arterial a 40 mm Hg. La presión arterial cae a 40 mm Hg. Se considera que ha comenzado el shock y se mantiene la presión arterial durante 90 minutos. Es (13 ± 3) ml, y luego se devuelve lentamente la sangre autóloga en la jeringa. Se tarda unos 30 minutos en restaurar la presión arterial a más del 90 por ciento del valor básico. Se considera que la reanimación es exitosa [3]. Saque la aguja del trocar, ligar la arteria femoral y coser la incisión. Una vez que las ratas se despertaron, se las devolvió a la jaula para su observación y tuvieron libre acceso a comida y agua. 24 horas después de la reanimación, las ratas se anestesiaron con pentobarbital sódico (50 mg/kg) mediante inyección intraperitoneal, laparotomía y se recogieron 5 ml de sangre de la vena cava inferior. Las ratas se sacrificaron inmediatamente y los riñones izquierdo y derecho se extrajeron para su uso.
1.2.2 Agrupación de animales y administración Se dividieron aleatoriamente 30 ratas en un grupo de cirugía simulada, un grupo de reanimación con choque (grupo experimental) y un grupo CTG, con 10 ratas en cada grupo.
Al grupo experimental se le inyectó por vía intraperitoneal 3 ml de solución salina normal 2 horas antes de la sangría. En elCTGgrupo, se administró CTG 2 horas antes de la sangría de las ratas, y la dosis se inyectó en la cavidad abdominal a una dosis de 400 mg/kg. Al grupo de operación simulada solo se le realizó anestesia, laparotomía y separación de la arteria femoral, colocación de trócares e incisiones de sutura, etc., no se realizó sangría ni reanimación, y el resto fue igual al grupo experimental.
1.3 Indicadores y métodos de prueba
1.3.1 Determinación de creatinina en sangre (Cr), nitrógeno ureico (BUN), cistatina C Cr, BUN y cistatina C son determinados por el laboratorio de nuestro hospital. La cistatina C es un marcador endógeno de cambios en la tasa de filtración glomerular. Cuando la función renal está alterada, la tasa de filtración glomerular disminuye y la concentración de cistatina C en la sangre puede aumentar más de 10 veces. La precisión diagnóstica de la cistatina C es significativamente mejor que la de la creatinina sérica.
1.3.2 Determinación de la tasa de apoptosis celular Se utilizó citometría de flujo para detectar la tasa de apoptosis de las células renales. Tome el riñón y córtelo con una cuchilla, agregue un poco de PBS y transfiéralo a un tubo de ensayo. Agregue 0.3 por ciento de tripsina para la digestión en un baño de agua a 37 grados e incube durante 20 min. Cuando la sustancia en el tubo de ensayo se vuelva turbia, agregue el doble de PBS para detener la digestión, filtre con una malla de nylon de malla 300, deseche las impurezas y use una centrífuga de baja temperatura. Centrifugar a 1500 g / s para 5 min, desechar el sobrenadante, ajustar la concentración celular a 1 × 106 ~ 1,5 × 106/ml, tomar 0,4 ml de la suspensión celular anterior, y agregar 10 ul/ml Rhodamin123 0 ．4 ml, incubar en un Baño María a 37 grados protegido de la luz, tapar el tubo de ensayo, enjuagar dos veces con PBS después de 30 min, luego centrifugar a 1500 g/s por 5 min, desechar el sobrenadante y enjuagar nuevamente de la misma manera. Añadir PI 0,4 ml, teñir durante 15 min y comprobar el porcentaje de células normales, necróticas y apoptóticas en el riñón. De acuerdo con la afinidad de estos dos tintes en varios tipos de células, se sabe que solo las células coloreadas con PI son células muertas, solo las células coloreadas con Rhodamin123 son células vivas y ambas células coloreadas son células apoptóticas.
1.3.3 Se utilizó inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) para detectar la expresión de XI-AP en tejidos de riñón de rata. Se tomaron riñones de cada grupo y se trataron tejidos renales frescos con lisado de tejido. Centrifugar a 1500 g/s en una centrífuga de baja temperatura durante 5 min. Tome el sobrenadante y opere de acuerdo con las instrucciones del XI-AP ELISA Kit. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. es responsable de las pruebas.
1.4 Procesamiento estadístico
Todos los datos se analizaron estadísticamente con el software SPSS17.0 y los datos se expresaron como media ± desviación estándar (x ± s) y P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
glucósidos totales de cistanche
2 resultados
2.1 Índices de función renal Cr, BUN, Cistatina C La comparación de Cr, BUN, Cistatina C en el grupo experimental fue significativamente mayor que en el grupo de operación simulada (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
En comparación con el grupo experimental, los valores de Cr, BUN y Cistatina C en elCTGgrupo se redujeron significativamente, y la diferencia fue estadísticamente significativa (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabla 1 Comparación de los índices de función renal Cr, BUN y Cistatina C de ratas en cada grupo (x ± s)
Nota: En comparación con el grupo de operaciones simuladas, un P<{{0}}.01; comparado="" con="" el="" grupo="" experimental,=""><>
2.2 La tasa de apoptosis de las células renales y la expresión de XIAP en el tejido renal. Sólo unas pocas células en el tejido renal del grupo de operación simulada experimentan apoptosis.
El número de apoptosis en el grupo experimental aumentó significativamente y la diferencia fue estadísticamente significativa en comparación con el grupo de operación simulada (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
El grupo de operación simulada solo tuvo una expresión débil de XIAP, mientras que el grupo experimental tuvo un aumento significativo en la expresión de XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabla 2 Comparación de la tasa de apoptosis y la expresión de XIAP de células de riñón de rata en cada grupo (x± s)
Nota: En comparación con el grupo de operaciones simuladas, aP<{{0}}. 01;="" comparado="" con="" el="" grupo="" experimental,="" b=""><0. 05,=""><0.>
3 Discusión
El mecanismo de la lesión renal I/R es muy complicado. Es un proceso patológico que ocurre a través de muchas vías bajo la acción de diversos factores, como la sobrecarga de iones de calcio, el daño por peroxidación lipídica, la apoptosis y la necrosis, entre los que se encuentran las caspasas endógenas. La apoptosis dependiente de caspasas es una de las principales formas de alteración del epitelio tubular renal. daño celular inducido por lesión renal I/R [4]. La familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) es el único inhibidor de caspasa encontrado en células de mamífero hasta el momento, que puede prevenir eficazmente la aparición de apoptosis. XIAP es el miembro inhibidor de caspasa más fuerte de la familia IAP, que puede inhibir la apoptosis celular causada por una variedad de estímulos patológicos y desempeñar un efecto protector en los órganos dañados [5].
En la actualidad, el método para establecer modelos animales de lesión por I/R renal consiste principalmente en extirpar un lado del riñón y pinzar el otro lado del pedículo renal o la arteria renal [6] para simular el estado del trasplante de riñón. El autor utilizó en este estudio el modelo de shock hemorrágico/reanimación, más cercano al proceso fisiopatológico de isquemia-reperfusión sistémica que ocurre en el shock traumático clínico. En este experimento, el BUN, la Cr y la cistatina en sangre de ratas SD aumentan significativamente la cantidad de C y la función renal se deteriora gravemente. Es un modelo animal ideal para estudiar la lesión renal I/R.
CTG es un importante componente medicinal de la medicina tradicional chinaCistanche. Cistanche, que es de naturaleza cálida, dulce y salada, pertenece al meridiano del riñón y del intestino grueso y originalmente estaba contenido en la Materia Médica de Shennong. "Ben Jing", dice: "Mantiene cinco trabajos y siete lesiones, nutre el medio, nutre los cinco órganos internos, fortalece el yin y nutre la esencia y el qi". También."Cistanchese ha utilizado en mi país durante dos mil años. Ocupa el primer lugar en fórmulas para aumentar la fuerza en el pasado, y solo superado por el ginseng en fórmulas nutritivas.Cistanchepuedenmejorar la función sexual, regular el sistema neuroendocrino y mejorar la función inmunológica del cuerpo. Antioxidantes, promueven el metabolismo del material, protegen el miocardio isquémico y otras funciones.. Como principal ingrediente medicinal deCistanche, CTG tiene muchas funciones. Investigación sobre el cerebroisquemia-reperfusiónmodelo
Los estudios han encontrado queCTGpuede reducir los aminoácidos excitatorios en el tejido cerebral después de la isquemia-reperfusión y proteger el tejido cerebral de las ratas SD [7]. CTG tiene un efecto antioxidante en los tejidos del ratón y tiene un cierto efecto protector sobre la hipoxia cerebral aguda en ratones y el daño del músculo cardíaco en ratones [8]. CTG puede mejorar significativamente el comportamiento neurológico de ratones modelo con Parkinson e inhibir la disminución en el número de neuronas de dopamina en la sustancia negra [9]. Al mejorar la actividad de las enzimas captadoras de radicales libres, prevenir la peroxidación de lípidos, inhibir la deposición de péptido amiloide en el cerebro e inhibir la apoptosis de las células cerebrales, CTG aumentó significativamente la capacidad de aprendizaje y memoria de ratones con enfermedad de Alzheimer inducida por péptido amiloide [10]. Este estudio mostró que después de la aplicación del pretratamiento con CTG, los contenidos de BUN, Cr y cistatina C en sangre de ratas SD disminuyeron significativamente y se redujo el daño de la función renal. CTG aumentó la proteína inhibidora de la apoptosis XIAP en los tejidos renales de lesión por I/R y bloqueó las células. La aparición de apoptosis juega un papel protector en el daño del riñón.
referencias
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