Exploración del mecanismo de la fórmula de Cistanche que regula la piroptosis mediada por inflamatorios NLRP3 en el tratamiento de la prostatitis crónica
Jun 05, 2025
Objetivo:
Este estudio tuvo como objetivo investigar laMecanismo por el cual una fórmula herbaria basada en Cistancheregula la activación delinflamasoma NLRP3e inhibepiroptosisen el tratamiento deProstatitis crónica tipo III (CP/CPPS).
Métodos:
(1) Experimento con animales:
Se asignaron aleatoriamente cincuenta ratas SD macho a cinco grupos: control, modelo y tratado con la fórmula Cistanche enbaja (4,9 g/kg), media (9,8 g/kg) y alta (19,6 g/kg)dosis, con 10 ratas en cada grupo. Excepto el grupo control, todas las ratas fueron inducidas conProstatitis tipo IIImediante inyección intraprostática de extracto de proteína de próstata combinado con CFA. Después del modelado exitoso, las ratas recibieron administración intragástrica diaria de solución salina normal (grupos de control y modelo) o laFórmula a base de cistanchedurante 30 días.
La inflamación del tejido prostático se evaluó medianteTinción con hematoxilina-eosina (HE). SueroIL-1yIL-18fueron medidos porELISA, mientras que los marcadores de estrés oxidativo (MDA, CÉSPED, yGSH-Px) fueron evaluados bioquímicamente.expresión NLRP3en el tejido prostático fue detectado porinmunohistoquímica, yNiveles de proteína NLRP3, caspasa-1 y GSDMDfueron analizados usandomancha occidental.
(2) Experimento celular:
Células epiteliales de la próstata humana (RWPE-1)se dividieron en control, modelo,fórmula de cistanche, yInhibidor de NLRP3 (MCC950)grupos. Excepto el grupo control, todas las células fueron estimuladas conLPS (100 ng/ml, 4 h)yATP (5 mmol/ml, 30 min)para inducir piroptosis. Después del modelado, los grupos de control y modelo recibieron suero blanco, mientras que elgrupo cistancherecibió6,25 ug/ml de suero que contiene fármaco. El grupo inhibidor fue tratado conMCC950.
captación de PIyExpresión de caspasa-1fueron evaluados a través decitometría de flujo. liberación de LDHse midió bioquímicamente.Niveles de sobrenadante IL-1 y IL-18fueron cuantificados por ELISA.mancha occidentalfue utilizado para detectarNLRP3, caspasa-1 y GSDMDexpresión.
Resultados:
(1) Experimento con animales:
En comparación con el grupo de control, el grupo modelo exhibió una importante infiltración de células inflamatorias, degeneración epitelial y edema intersticial en el tejido prostático. ElGrupos tratados con Cistanchemostraron reducciones dependientes de la dosis en estos cambios patológicos.
Niveles séricos IL-1 y IL-18aumentaron significativamente en el grupo modelo (P<0.01) y disminuyó significativamente en elCistanche grupos de dosis baja, media y alta (P<0.01).
niveles de MDAfueron elevados en el grupo modelo (P<0.01) pero se redujo significativamente con el tratamiento con Cistanche (P<0.01).
Niveles de SOD y GSH-Pxdisminuyeron en el grupo modelo (P<0.05) y aumentó significativamente en todos los grupos tratados con Cistanche (P<0.01, P<0.05).
Inmunohistoquímicamostró elevadoexpresión NLRP3en el grupo modelo, que se redujo significativamente con el tratamiento con Cistanche.
mancha occidentalLos resultados revelaron un aumento en los niveles de proteína deNLRP3, caspasa-1 y GSDMDen el grupo de modelos (P<0.01), todos los cuales fueron significativamente inhibidos por Cistanche (P<0.01).
(2) Experimento celular:
ElTasa de absorción de PI, Expresión de caspasa-1, yliberación de LDHaumentaron significativamente en el grupo modelo (P<0.01), pero se redujo significativamente tanto en elcistancheyMCC950grupos (P<0.01).
IL-1 y IL-18 nivelesen el sobrenadante fueron significativamente elevados en el grupo modelo (P<0.01) y disminuyó significativamente en elcistancheygrupos inhibidores (P<0.01).
mancha occidentalmostró un aumento significativo de la expresión de las proteínas NLRP3, Caspasa-1 y GSDMD en el grupo modelo (P<0.01), que fueron significativamente regulados a la baja en elcistancheygrupos inhibidores (P<0.01).
Conclusión:
ElFórmula herbaria a base de cistancheejerce efectos terapéuticos sobreProstatitis crónica tipo IIIporinhibir la activación del inflamasoma NLRP3, reduciendo asíActivación de caspasa-1, previniendoEscisión de GSDMD y piroptosis., y suprimiendoliberación de citocinas proinflamatorias. Estos hallazgos sugieren quecistanchepuede ser una promesaRemedio herbario natural para CP/CPPS, ofreciendoantiinflamatorio, antioxidante, yinhibidor de la piroptosisefectos a través de la modulación delNLRP3/Caspasa-1/GSDMDvía de señalización.
palabras clave: prostatitis crónica; fórmula de Guihuang;Inflamatoma NLRP3; piroptosis; muerte celular programada
beneficios de cistanche para la salud de la próstata
Fórmula herbaria a base de cistanche para la prostatitis crónica: estudio experimental del mecanismo y la eficacia
Prostatitis crónica (PC)Es una de las afecciones más comunes en urología y salud masculina. Los estudios epidemiológicos muestran que aproximadamente8.4%de los varones adultos en China experimentan síntomas de prostatitis [1]. Según elInstitutos Nacionales de Salud (NIH)clasificación, la prostatitis se clasifica en cuatro tipos, conProstatitis tipo III (síndrome de dolor pélvico crónico, CP/CPPS)representando más de90%de todos los casos crónicos [2]. La prostatitis tipo III provoca dolor pélvico y disfunción urinaria y, a menudo, se acompaña de malestar psicológico como ansiedad y depresión, lo que afecta significativamente la calidad de vida [3–4].
En la Medicina Tradicional China (MTC), la prostatitis crónica corresponde a síndromes como el "Síndrome de Lin" o el "Jing Zhuo", y está causada principalmente por factores patógenos comohumedad, calor, estasis sanguínea y estancamiento[5–7]. Elfórmula guihuang, utilizado tradicionalmente para tratar la parálisis cerebral/SDPC con calor húmedo y estasis sanguínea, se ha modificado en este estudio para utilizarcistanchecomo componente central, formando una novelaFórmula herbaria a base de cistanche. Esta fórmula modificada tiene como objetivo mejorar los síntomas urinarios y la inflamación pélvica con amboseficacia clínica y seguridad [8–10].
Cistanche tubulosa en el desierto
pastillas a base de fórmula cistanche con 75% de glucósido
Servicio de apoyo de Wecistanche: contáctenos para obtener un precio mayorista
Correo electrónico:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Antecedentes y mecanismo
Nuestros estudios anteriores demostraron que la fórmula herbaria basada en Cistanche alivió significativamente las lesiones similares a la prostatitis en modelos de rata al reducir la inflamación patológica y suprimir las citoquinas proinflamatorias. Este efecto está asociado con la inhibición dePI3KyNF-κBvías de señalización [11].
Se ha dirigido mayor atención hacia lainflamasoma NLRP3, un complejo multiproteico que regula las respuestas inflamatorias. La activación del inflamasoma NLRP3 conduce a la liberación de citoquinas inflamatorias como IL-1 y IL-18, lo que contribuye a la cascada inflamatoria en CP/CPPS [12-13]. Investigando sicistanchepuede modular la activación del inflamasoma NLRP3 es crucial para comprender sumecanismo antiinflamatorioen el tratamiento de la prostatitis crónica.
1. Materiales
1.1 Animales y células
Se obtuvieron ratas SD macho (6 semanas de edad, 240–260 g) de SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. [SCXK (Jing) 2019-0010], alojadas en condiciones SPF con libre acceso a alimentos y agua. La temperatura ambiente se mantuvo a (23 ± 2) grados y la humedad a (60 ± 5) %. Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética Animal del Hospital Xiyuan, Academia de Ciencias Médicas Chinas de China (Nº de ética: 2020XLC005-3). células epiteliales de la próstata normales (RWPE-1, ATCC, número de catálogo IM-H299) se utilizaron para experimentos in vitro en el paso 5.
1.2 Fórmula a base de hierbas
ElFórmula a base de cistancheconsta de las siguientes hierbas tradicionales (en gramos):
cistanche 12 g
Curcuma longa (Cúrcuma) 10 g
Angélica sinensis 12 g
Magnolia officinalis 10g
Boswellia carteri (Incienso) 5 g
Commiphora myrrha (Mirra) 5 g
Lonicera japonica (Madreselva) 15 g
Hedyotis difusa 15 g
Plantago asiática (hierba de plátano) 15 g
Citrus reticulata (Cáscara de Mandarina) 10 g
Los gránulos de hierbas fueron proporcionados por el Departamento de Farmacia del Hospital Xiyuan y fabricados por Kangrentang Pharmaceutical Co., Ltd. (N.º de lote: 19018391).
Palabras clave SEO:
Cistanche para la prostatitis crónica, remedio a base de hierbas para CPPS, MTC para el síndrome de dolor pélvico, Inflamación de la próstata por cistanche, Hierbas antiinflamatorias naturales para hombres., Modulación inmune de Cistanche.
1.3 Reactivos y kits
Kit de ensayo de proteína BCA (Beyotime, n.º de catálogo P0010)
Kits ELISA IL-1 y IL-18 (Bioswamp, n.º de catálogo ZN2877, ZN2883)
Kit de ensayo de piroptosis/caspasa-1 (inmunoquímica, n.º de catálogo 9145)
Anticuerpo NLRP3 (Novus, n.º de catálogo NBP2-12446)
CFA (adyuvante completo de Freund, Sigma, n.º de catálogo C104202)
Reactivos comunes: Xileno, etanol absoluto, goma neutra (Sinopharm)
Kits de estrés oxidativo: SOD, MDA, GSH-Px, LDH (Nanjing Jiancheng, Cat# A001-3, A003-2, BC1190, 20121225)
Anticuerpos: Anti-GSDMD, Caspasa-1, GAPDH (Abcam, Cat# ab219800, ab179515, ab8245)
MCC950 (inhibidor de NLRP3, Selleck, n.º de catálogo S8930)
Anticuerpo PYCARD/ASC (Thermo, Cat# PA5-95826)
1.4 Instrumentos
Microscopio óptico (Nikon Eclipse Ti-SR, Japón)
Microtomo (Leica RM2016, Shanghai)
Escáner de diapositivas digital (3D HISTECH Pannoramic MIDI, Hungría)
Centrífuga refrigerada de alta velocidad (Thermo Fisher IECCL31R, EE. UU.)
Equipo de electroforesis (CAVOY PP-1150, MP-8001, MP-3030, Beijing)
Incubadora agitadora (Qilinbeier TS-2000A, Jiangsu)
Molinillo criogénico (Jingxin JXFSTPRP-CL-BSC, Shanghai)
Incubadora de CO₂ (Sanyo MCO-20AIC, Japón)
Lector de microplacas (Bio-Rad DNM-9602, Beijing)
Analizador bioquímico (Rayto Chemray 800, Shenzhen)
Citómetro de flujo (Beckman CytoFLEX S, EE. UU.)
2. Métodos
2.1 Establecimiento del modelo
(1) Modelo animal
Basado en experiencias previas de modelado, un modelo de rata de autoinmuneProstatitis crónica tipo IIIfue establecido porinyección intraprostáticade extracto de proteína de próstata purificado mezclado con adyuvante completo de Freund (CFA) [14]. El modelado exitoso estuvo determinado por características patológicas que incluyen: engrosamiento de la cápsula prostática, desaparición de los pliegues glandulares, destrucción de los acinos, edema estromal significativo, estructura borrosa, infiltración masiva de linfocitos, monocitos y células plasmáticas. Se observaron células de músculo liso e hiperplasia del tejido conectivo en los tabiques prostáticos, con notabledilatación y congestión vascular. Bioquímicamente, el modelo fue confirmado poraumento de leucocitosycuerpos de lecitina disminuidosen homogeneizado de próstata.
(2) Modelo celular
Siguiendo los informes de la literatura y los experimentos previos [15-17], unmétodo de estimulación de dos pasosSe utilizó para activar elinflamasoma NLRP3en RWPE-1 celdas. Paso 1: Las células fueron tratadas conLPS (100 ng/mL)durante 4 horas para iniciar el cebado inflamasómico. Paso 2: Luego, las células se trataron conATP (5 mmol/ml)durante 30 minutos como señal de activación. Las condiciones óptimas del modelo se seleccionaron utilizandoTasa de absorción de PIcomo marcador.
2.2 Agrupación
(1) Grupos de estudio de animales
Las ratas se dividieron aleatoriamente encinco gruposusando una tabla de números aleatorios:
grupo de control
Grupo modelo
Grupo de dosis bajas de fórmula Cistanche
Cistanche fórmula grupo dosis media
Grupo de dosis alta de fórmula Cistanche
Cada grupo estaba formado por 10 ratas. Todos los grupos excepto el grupo de control fueron sometidos a modelado. Eldosis humana equivalentede la fórmula basada en Cistanche se calculó como 109 ÷ 70 × 6.3=9.8 g/kg para eldosis media, condosis bajaa 4,9 g/kg ydosis altaa 19,6 g/kg [11]. Dedía 3 post-modelado, los grupos de tratamiento recibieron administración intragástrica diaria de las dosis respectivas delFórmula herbaria a base de cistanchepara30 días consecutivos, mientras que los grupos de control y modelo recibieron volúmenes iguales de solución salina.
(2) Grupos de estudio celular
RWPE-1 celdas se dividieron en cuatro grupos:
grupo de control: cultivado con suero blanco
Grupo modelo: tratado con LPS (100 ng/mL, 4 h) y ATP (5 mmol/mL, 30 min)
grupo cistanche: tratado con6,25 ug/mL de suero medicado con fórmula Cistanche
grupo MCC950: modelo +Inhibidor del inflamasoma NLRP3 MCC950
2.3 Recolección de muestras
Después de 30 días de tratamiento, las ratas fueron anestesiadas con isoflurano. Se recogió sangre de la aorta abdominal y se centrifugó a 3000 rpm durante 10 minutos para aislar el suero, que se almacenó a -80 grados duranteELISAy análisis bioquímicos.
Lóbulo prostático izquierdo: fijado en paraformaldehído al 4% para histopatología, inmunohistoquímica e inmunofluorescencia.
Lóbulo prostático derecho: conservado ennitrógeno líquidoparaAnálisis de transferencia Western.
2.4 Detección del índice animal
2.4.1 Tinción HE
Se utilizó tinción con hematoxilina y eosina (HE) para observar la infiltración inflamatoria en los tejidos de la próstata. Se evaluaron los cambios morfológicos en glándulas, conductos y estructuras intersticiales bajo un microscopio óptico.
2.4.2 ELISA para IL-1 y IL-18
Se utilizaron kits ELISA para cuantificarIL-1yIL-18niveles en suero de rata. Las muestras se procesaron siguiendo el protocolo ELISA estándar y se analizaron en450 nmutilizando un lector de microplacas.
2.4.3 Detección bioquímica de MDA, SOD, GSH-Px
niveles séricos deMDA, CÉSPED, yGSH-Pxse midieron utilizando kits comerciales para evaluar el estrés oxidativo en los tejidos de la próstata.
2.4.4 Inmunohistoquímica (IHC) para NLRP3
Las secciones de tejido de la próstata se sometieron a desparafinización, recuperación de antígenos, bloqueo e incubación conanticuerpo anti-NLRP3 (1:1000). Se realizó tinción con DAB y contratinción con hematoxilina. La expresión de NLRP3 se observó microscópicamente.
2.4.5 Inmunofluorescencia para GSDMD
Se incubaron secciones de próstata congeladas conanticuerpo anti-GSDMD (1:100), seguido de anticuerpo secundario fluorescente y contratinción nuclear DAPI. La expresión de GSDMD se visualizó mediante microscopía de fluorescencia.
2.4.6 Western Blot para NLRP3, Caspasa-1, GSDMD
La proteína se extrajo de los tejidos de la próstata paraAnálisis de transferencia Western. niveles de expresión deNLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), yCaspasa-1 (1:2000)Se detectaron. -actina que sirvió como control interno. La cuantificación se realizó utilizandoImagenJsoftware.
2.5 Detección de índice celular
2.5.1 Citometría de flujo para la captación de PI
Las células se lavaron, se resuspendieron a 1 x 10⁶ células/ml y se tiñeron con yoduro de propidio (PI). Las tasas de absorción de PI se analizaron utilizandocitometría de flujoyflujojosoftware.
2.5.2 Ensayo de liberación de LDH
Después del tratamiento,LDHLos niveles en los sobrenadantes de cultivo se evaluaron como un marcador de daño a la membrana celular utilizando un ensayo colorimétrico en490 nm.
2.5.3 Citometría de flujo para caspasa-1
Las células fueron fijadas, permeabilizadas y teñidas conAnticuerpo caspasa-1 (1:1000). La expresión fue medida porcitometría de flujo.
2.5.4 ELISA para IL-1 y IL-18 en sobrenadante
Se recogieron medios de cultivo para detectarIL-1yIL-18niveles mediante ELISA. El contenido de proteínas en los lisados celulares se cuantificó utilizando el ensayo BCA para normalizar los niveles de citoquinas.
2.5.5 Western Blot para NLRP3, Caspasa-1, GSDMD
La transferencia Western se realizó en lisados celulares con anticuerpos contraNLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), yCaspasa-1 (1:2000). La detección se realizó mediante ECL y se utilizaron sistemas de imágenes. -actina como control de carga.
2.6 Análisis estadístico
Los datos fueron analizados usandoPrisma GraphPad 8.0. Los resultados se expresan comomedia ± DE. Las comparaciones de grupos se realizaron utilizandopruebas t para muestras independientesoANOVA unidireccional. A Valor p < 0,05se consideró estadísticamente significativo.
