Factores que afectan el escape del arbovirus del intestino medio en los mosquitos

Abstracto: Las enfermedades arbovirales transmitidas por mosquitos causan una morbilidad y mortalidad significativas en gran parte del mundo. El tratamiento y la prevención de estas enfermedades mediante medicación y vacunación suelen ser limitados, lo que hace ideal el control de los arbovirus a nivel del vector. Una forma de prevenir la propagación de un arbovirus sería impedir que su vector desarrolle una infección diseminada, necesaria para que el virus llegue a la saliva del mosquito y pueda transmitirse potencialmente a un nuevo huésped. El intestino medio del mosquito brinda una de esas oportunidades para detener un arbovirus en seco. Se sabe desde hace muchos años que en ciertas combinaciones de arbovirus y vectores, o bajo ciertas circunstancias, un arbovirus puede infectar y replicarse en el intestino medio, pero no puede escapar del tejido para causar una infección diseminada. Esta situación se conoce como barrera de escape del intestino medio. Si entendemos mejor por qué ocurre esta barrera, podría ayudar en el desarrollo de estrategias de control más informadas. En esta revisión, analizamos cómo la barrera de escape del intestino medio contribuye a la especificidad virus-vector y los posibles mecanismos que pueden permitir superar esta barrera en combinaciones exitosas de virus-vector. También analizamos varios de los factores conocidos que aumentan o disminuyen la probabilidad de escape del intestino medio.

Beneficios del suplemento cistanche: aumentar la inmunidad.

Palabras clave: arbovirus; mosquito; intestino medio; ARNi; apoptosis; lámina basal; inmunidad antiviral

1. Introducción

Las enfermedades arbovirales transmitidas por mosquitos siguen amenazando la salud y la seguridad de una parte importante de la población humana. En las últimas décadas se ha visto el resurgimiento de una serie de arbovirus destructivos, incluidos el Zika, la fiebre amarilla, el dengue y el chikungunya [1–4]. La amenaza de estas enfermedades está aumentando, y varios modelos predicen que el cambio climático permitirá la propagación de especies vectoras de enfermedades a regiones que antes eran inadecuadas para su supervivencia [5,6]. A pesar de esta amenaza urgente, todavía se desconoce mucho sobre cómo interactúan los arbovirus con sus vectores artrópodos. Un misterio particularmente desconcertante es por qué los virus suelen ser específicos de ciertos vectores. Es probable que esto se deba a numerosos factores genéticos y ambientales, que pueden ser únicos para cada combinación de arbovirus y vector. No obstante, si pudiéramos comenzar a comprender por qué un vector puede transmitir eficientemente un virus de un huésped a otro y por qué otro no puede hacerlo, podríamos descubrir estrategias efectivas para detener la transmisión de enfermedades arbovirales al nivel del vector. Para ilustrar la especificidad de las interacciones virus-vector, consideremos que en Estados Unidos hay más de 200 especies de mosquitos, pero sólo unas 12 de ellas son importantes en la transmisión de enfermedades [7]. En entornos naturales, la razón por la cual algunos arbovirus no son transmitidos por ciertas especies de mosquitos puede deberse, en parte, a incompatibilidades en el rango geográfico o a las preferencias de alimentación del huésped. Sin embargo, esto no explica completamente la especificidad virus-vector, ya que incluso cuando el rango y el comportamiento se alinean, esto no garantiza la capacidad de transmitir un arbovirus. Por el contrario, algunas especies de mosquitos pueden infectarse experimentalmente con arbovirus de los que no se sabe que sean vectores naturales, como lo demuestran las infecciones de laboratorio exitosas de Aedes aegypti con el virus Sindbis (SINV) [8]. Se ha demostrado que la capacidad de un mosquito para transmitir un virus particular o su competencia como vector está determinada por interacciones complejas entre los genotipos tanto del mosquito como del virus [9]. La competencia vectorial no es estática; por ejemplo, se encontró que una sola mutación en el genoma del virus chikungunya (CHIKV) mejora la competencia de Aedes albopictus para este virus [10,11]. Esta adaptación ha impulsado un aumento de los brotes y la propagación geográfica del CHIKV [12].

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

Haga clic aquí para ver los productos Cistanche Enhance Immunity

【Pregunte por más】 Correo electrónico:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Se ha demostrado que numerosos factores influyen en la capacidad de un vector para transmitir ciertos arbovirus (en esta revisión, nos centraremos en la transmisión horizontal a través de la hematofagia e ignoraremos la transmisión vertical, que también puede ser importante para ciertos arbovirus). Uno de los factores mejor estudiados es la presencia de barreras tisulares dentro del vector que el virus debe superar para transmitirse a un nuevo huésped (revisado en [13]). Estas barreras incluyen la barrera contra la infección del intestino medio, la barrera de escape del intestino medio, la barrera contra la infección de las glándulas salivales y la barrera de escape de las glándulas salivales (Figura 1). Un virus exitoso debe superar la barrera de la infección del intestino medio al tener los medios para ingresar y replicarse en las células del epitelio del intestino medio del mosquito después de ser ingerido con sangre. Luego debe superar la barrera de escape del intestino medio saliendo del intestino medio e infectando otros tejidos del mosquito. De manera similar, el virus debe superar las barreras de las glándulas salivales infectando y escapando de las células epiteliales de las glándulas salivales para transmitirse en la saliva la próxima vez que el mosquito ingiera sangre de un nuevo huésped. Si un virus no puede superar todas estas barreras tisulares, entonces no se producirá la transmisión.

Figura 1. Barreras tisulares contra la infección por arbovirus. Una barrera contra la infección del intestino medio (abajo a la izquierda) ocurre cuando los virus no pueden ingresar o no pueden replicarse en las células epiteliales del intestino medio. Por el contrario, una barrera de escape del intestino medio (abajo a la derecha) se produce cuando los virus pueden infectar y replicarse en las células del intestino medio pero no se diseminan desde este tejido. Una barrera contra la infección de las glándulas salivales (arriba a la izquierda) ocurre cuando el virus no logra infectar las células de la glándula salival, mientras que una barrera de escape de las glándulas salivales (arriba a la derecha) ocurre cuando el virus no puede pasar a la saliva. Figura creada con Biorender.com

Un creciente conjunto de evidencia sugiere que las interacciones de un arbovirus con el intestino medio de un mosquito tienen un efecto significativo sobre si ese virus finalmente podrá transmitirse. Si bien una barrera contra la infección del intestino medio a menudo puede atribuirse a incompatibilidades entre virus y receptores o respuestas inmunes en el intestino medio, la barrera de escape del intestino medio es más desconcertante. Un virus que encuentra una barrera de escape del intestino medio puede infectar y replicarse con éxito en las células epiteliales del intestino medio, pero no logra llegar a ningún otro tejido y no puede transmitirse. Esto hace que la explotación de esta barrera sea un medio prometedor de control de arbovirus. Sin embargo, nuestra comprensión básica de lo que constituye la barrera de escape del intestino medio y cómo se supera es lamentablemente incompleta. La evidencia disponible sugiere que no existe un solo factor que permita el escape del intestino medio, sino más bien una constelación de factores que se alinean en combinaciones exitosas de virus-v-vector. En esta revisión, nuestro objetivo es discutir varios de los factores conocidos que afectan el escape del intestino medio. Primero discutimos los obstáculos importantes que presenta el intestino medio a un virus y consideramos algunas hipótesis alternativas sobre cómo se produce la diseminación. Luego intentamos desentrañar los numerosos factores externos, virales y vectoriales que parecen afectar si se produce el escape del intestino medio.

2. Rutas de escape del intestino medio

Para que un virus escape del intestino medio, no solo necesita superar el epitelio del intestino medio, sino que también necesita atravesar la densa matriz extracelular fibrosa que se encuentra debajo del intestino medio, llamada lámina basal (Figura 1). Se ha determinado que los poros de la lámina basal del intestino medio son más pequeños que la mayoría de los arbovirus [14]. Por esta razón, ha habido varias propuestas sobre cómo exactamente un virus puede superar este obstáculo que involucra la ubicación dentro del intestino o el mecanismo de diseminación. En la primera categoría hay dos ideas principales: (1) la diseminación se produce desde el cardias/intestino anterior intususceptado; y (2) la diseminación se produce desde el intestino medio posterior. Además, existen hipótesis sobre cómo el virus puede cruzar la matriz extracelular/lámina basal: (1) los viriones pueden atravesar espacios que son lo suficientemente grandes como para permitirlo directamente; o (2) otro tejido, como las tráqueas, penetra esta capa, permitiendo que los viriones escapen del intestino medio sin necesidad de atravesar la lámina basal [13]. Es importante señalar que estas ideas no son necesariamente excluyentes entre sí, y también es posible que existan diferentes mecanismos de diseminación en diferentes combinaciones de virus-v-vector. Como el intestino medio posterior es el sitio de digestión de la sangre en los mosquitos y la mayoría de los arbovirus infectan este tejido, generalmente se piensa que es el sitio principal de diseminación [15-18]. La idea de que pueden existir espacios o poros en la lámina basal que sean lo suficientemente grandes para que los virus pasen a través de ella fue una de las primeras hipótesis sobre el escape del intestino medio [14]. La distensión del intestino medio del mosquito después de la ingestión de sangre lleva a preguntas obvias sobre qué efecto tiene este estiramiento en la estructura de la lámina basal. A pesar de esto, no se han identificado definitivamente espacios claros en la lámina basal asociados con el escape de viriones. Sin embargo, cada vez hay más pruebas que sugieren que los cambios estructurales en la lámina basal pueden dar lugar a una posible ruta de escape. Por ejemplo, se ha informado de lámina basal modificada que parece más porosa o distorsionada y está asociada con los músculos viscerales después de la ingestión de alimentos con sangre que contienen virus [19,20]. Aun así, el escape de los arbovirus del intestino medio suele tardar días (dependiendo del tipo de virus), por lo que los cambios estructurales deberían persistir el tiempo suficiente para permitir que esto suceda. Apoyando esta idea, en un estudio que utilizó nanopartículas de oro administradas en una ingesta de sangre, se encontró que el ancho de la malla de la lámina basal permaneció expandido incluso después de que la sangre se había digerido [21]. Alguna alteración de la lámina basal puede estar asociada con la degeneración celular, como lo describen Weaver et al., quienes descubrieron que se produjeron cambios patológicos en el intestino medio en Culiseta melanura infectada por el virus de la encefalitis equina del este (EEEV), incluida cierta degeneración celular que se asoció con alteración de la lámina basal [22]. El paso a través de la lámina basal puede hacer que el virus escape directamente al hemocele, lo que le permitiría acceder a tejidos adicionales, o es posible que el virus necesite infectar otro tejido, como la tráquea, antes de que se produzca una mayor propagación. Si bien los espacios en la lámina basal siguen siendo una hipótesis viable y respaldada del escape del intestino medio, se necesitarán más estudios para generar evidencia concluyente.

También se han implicado regiones más anteriores del sistema digestivo como sitios de diseminación. En esta hipótesis, el cardias o el intestino anterior intususceptado se infecta y luego el virus puede cruzar al hemocele o a otro tejido, como las tráqueas. El cardias es un órgano que existe en la unión del intestino medio y el intestino anterior, contiene células de ambos tipos de tejido y está estrechamente asociado con las tráqueas y los músculos. Está rodeado por una lámina basal modificada que parece más porosa y, por tanto, puede ser más permisiva para el escape viral [23]. La idea de que esta región podría ser importante para la infección diseminada se derivó de la observación de que cuando los mosquitos Culex pipiens fueron alimentados con el virus de la fiebre del Valle del Rift (RVFV), a la mayoría de los mosquitos que no desarrollaron una infección diseminada se les detectó el virus en el intestino medio y no no tenían infección en el intestino anterior intususceptado, mientras que la mayoría de los mosquitos con infección diseminada tenían células infectadas en esta región [24]. Estudios adicionales pudieron capturar imágenes de viriones brotando de células epiteliales cardinales y viriones en el laberinto basal y la matriz de estas células [23]. Al estudiar los patrones de infección en mosquitos infectados por vía oral y torácica, los autores de este estudio sugirieron que la infección de las células cardíacas conduciría a la propagación del virus al intestino anterior intususceptado, y posiblemente a regiones más anteriores del intestino, antes de su diseminación a el hemocele utilizando los espacios más grandes en la matriz [23]. Sin embargo, esta no es una ruta probable en todas las combinaciones de virus y vectores. Por ejemplo, no se observó sistemáticamente que el virus del dengue-2 (DENV-2) infectara el cardias en Ae. aegypti [18] y, si bien se detectó el antígeno del virus del Nilo Occidental (VNO) en el cardias y el intestino anterior intususceptado de los mosquitos Culex pipiens quinquefasciatus, esta aparición se produjo aproximadamente al mismo tiempo que la aparición en las glándulas salivales [16]. Por lo tanto, esta ubicación anatómica puede desempeñar un papel fundamental en la diseminación de algunos virus, mientras que desempeña poco o ningún papel en otros. Otro medio de escape viral del intestino medio puede ser a través del sistema traqueal, que se extiende por todo el cuerpo del mosquito y proporciona el intercambio de gases. Todos los tejidos de los insectos deben estar en estrecha asociación con las ramas traqueales para sobrevivir, incluido el intestino medio. La evidencia ha demostrado que las tráqueas pueden ser una ruta de escape del intestino medio para otros tipos de virus de insectos en otros insectos; En particular, se ha demostrado que los baculovirus utilizan esta ruta en larvas de lepidópteros [25,26]. La evidencia de que los arbovirus utilizan esta ruta en los mosquitos no es tan concluyente; no obstante, algunos estudios como los que se analizan a continuación han indicado que esta puede ser una hipótesis viable. Es importante destacar que los estudios han demostrado que las tráqueas pueden penetrar en la lámina basal del intestino medio de los mosquitos, proporcionando la proximidad necesaria para ayudar a escapar del intestino medio [19,27]. La infección de las células traqueales también parece ocurrir en una variedad de arbovirus como el DENV, el virus de la encefalitis equina venezolana (VEEV) y el RVFV [18,19,27]. Algunas de las pruebas más directas de esta hipótesis provinieron de un estudio que concluyó que, cuando se inyectaba en el hemocele, el VEEV necesitaba infectar la tráquea y los músculos antes de que pudiera producirse la infección del intestino medio [19]. Una advertencia importante de este estudio es que examinó el movimiento del virus en la dirección inversa, lo que puede reflejar o no lo que sucede naturalmente. Por el contrario, otro estudio que utilizó CHIKV concluyó que la infección traqueal no era un paso necesario en la diseminación viral [20]. Existe la posibilidad de que la participación de la tráquea en el escape del intestino medio sea más relevante en ciertas combinaciones de virus y vectores como las mencionadas anteriormente, y su importancia puede comprenderse mejor con investigaciones adicionales.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

3. Factores que afectan el escape del intestino medio

Cada barrera tisular constituye un obstáculo para la transmisión del virus, y aprender más sobre estas barreras puede proporcionar información necesaria para combatir las enfermedades arbovirales. Independientemente del mecanismo exacto de escape del intestino medio, el fenómeno de las barreras de escape del intestino medio se ha observado durante décadas en una amplia gama de arbovirus y especies de mosquitos (Tabla 1) [28-32]. Estudiar una barrera de escape del intestino medio no es sencillo, ya que su presencia o ausencia casi nunca es absoluta dentro de una población determinada, y el porcentaje de mosquitos que exhiben una barrera de escape del intestino medio puede variar ampliamente en diferentes poblaciones de una especie en la que se sabe que algunos miembros están presentes. capaz de transmitir un virus determinado. Por ejemplo, un estudio que analizó la susceptibilidad de diferentes Ae. aeg ypti en los Estados Unidos y México frente al DENV encontraron que el porcentaje de mosquitos con una barrera de escape en el intestino medio variaba entre el 4% y el 43% [30]. Los atributos genéticos y físicos de una determinada especie de arbovirus y mosquito, así como los factores ambientales, se encuentran entre los muchos componentes que influyen en el escape del intestino medio. En los siguientes párrafos se analizan algunos de los factores conocidos más importantes.

Tabla 1. Ejemplos de combinaciones de virus y vectores que muestran una barrera de escape del intestino medio.

3.1. Factores externos

Está bien establecido que los factores ambientales pueden influir en la capacidad de un virus de escapar del intestino medio de un mosquito. Uno de los factores mejor estudiados es la temperatura, pero los estudios también han demostrado que otros componentes ambientales, como la exposición a insecticidas y la densidad de larvas, también pueden desempeñar papeles importantes.

Temperatura

El efecto de la temperatura sobre el escape del intestino medio se ha demostrado en varias combinaciones diferentes de especies de mosquitos y arbovirus. Se ha descubierto que cuando los mosquitos Culex pipiens adultos se infectaban con el VNO y se mantenían a temperaturas más altas (que oscilaban entre 28 ◦C y 30 ◦C), el escape del intestino medio se producía más rápido y, en última instancia, más mosquitos desarrollaron una infección diseminada en comparación con los mosquitos mantenidos a temperaturas más bajas. temperaturas (que oscilan entre 18 ◦C y 26 ◦C) [35,36]. Se ha demostrado que este efecto se extiende a otras combinaciones de vectores y virus, incluido Ae. albopictus infectado con DENV [37], Ae. aegypti con CHIKV [38] y Culex con el virus de la encefalitis de San Luis (SLEV) [39]. Se han sugerido varias razones para estos resultados, incluido el hecho de que una temperatura más alta puede aumentar la replicación viral dentro del intestino medio o puede causar una mayor permeabilidad del intestino medio. El efecto de la temperatura se complica por las diferencias genéticas entre los mosquitos y los virus. Se ha demostrado que la temperatura tiene un efecto menor sobre el escape del intestino medio en algunas cepas de mosquitos y algunas cepas virales, mientras que tiene un efecto mayor en otras [38,40]. Además de la temperatura a la que se mantienen los mosquitos adultos, la temperatura durante el desarrollo de las larvas puede, en última instancia, afectar el escape viral del intestino medio. Un estudio que investigó Ae. albopictus y CHIKV encontraron que la cría de larvas a temperaturas más bajas se asociaba con mayores tasas de diseminación en adultos [41]. Por el contrario, otro estudio encontró que, en densidades larvarias bajas, el aumento de la temperatura aumentaba la tasa de diseminación de SINV en adultos de Ae. aegypti; sin embargo, no se observaron diferencias en la diseminación cuando la densidad larvaria era alta [42]. Los autores plantearon la hipótesis de que la temperatura de las larvas puede alterar la expresión del gen inmunológico de los mosquitos adultos, de modo que los mosquitos criados a bajas temperaturas fueran vectores menos competentes. Estos estudios muestran que es necesario realizar más investigaciones que examinen cómo la competencia del vector se ve afectada por diferentes combinaciones de factores ambientales larvarios.

Beneficios de la cistanche tubulosa-fortalecer el sistema inmunológico

Exposición a pesticidas

Otro factor ambiental que puede afectar el escape del intestino medio es la exposición a pesticidas químicos o biológicos. Un efecto secundario no deseado de los pesticidas puede ser una mayor tasa de diseminación en mosquitos que están expuestos a un nivel subletal, como se ha demostrado en varios estudios. Se ha demostrado que la bifentrina aumenta las tasas de diseminación del virus Zika (ZIKV) en Ae. albopictus, con un efecto particularmente fuerte observado en mosquitos más viejos [43]. Sin embargo, el mismo insecticida parece tener poco efecto sobre la diseminación del DENV [44]. La exposición a insecticidas subletales puede ser particularmente importante para la competencia del vector cuando las larvas están expuestas, ya que se ha demostrado que la exposición de las larvas al malatión aumenta las tasas de diseminación de SINV [45,46]. Una posible razón de esto puede ser que la exposición de las larvas a estos insecticidas produce deformidades en el intestino medio de los adultos, como se ha demostrado que ocurre cuando las larvas de mosquitos se exponen al insecticida spinosad [47]. También se ha demostrado que la exposición subletal de las larvas al insecticida bacteriano Bacillus thuringiensis subsp. israelensis provocó mayores tasas de diseminación del DENV, aunque esto fue específico de la cepa bacteriana [48]. Será cada vez más importante considerar este posible efecto secundario al tratar con insecticidas áreas infestadas de vectores de enfermedades.

Densidad/competencia larvaria

También se ha demostrado que otras condiciones ambientales de las larvas afectan el escape del intestino medio, y algunos estudios sugieren un vínculo entre la densidad de las larvas y las tasas de diseminación viral en adultos. En un estudio, cuando Ae. las larvas del mosquito albopictus se criaron en densidades más altas, los mosquitos adultos tuvieron tasas más altas de infección diseminada; sin embargo, este efecto no se observó en Ae. mosquitos aegypti. No está claro exactamente qué causa esta diferencia. Los autores del estudio encontraron que el tratamiento de densidad se correlacionaba negativamente con el tamaño del mosquito y, por lo tanto, razonaron que la tasa de diseminación podría estar relacionada con que los mosquitos más pequeños sean mejores vectores [49]. Sin embargo, otro estudio demostró que la competencia larval entre Ae. albopictus y Ochlerotatus triseriatus llevaron a la supervivencia de Oc. Los mosquitos triseriatus son más grandes y tienen más probabilidades de desarrollar una infección diseminada por el virus de La Crosse [50]. Esto muestra que tanto la competencia entre especies como dentro de ellas podría, en última instancia, afectar la competencia del vector y que este efecto podría no estar completamente relacionado con el tamaño.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

3.2. Factores de mosquitos

Durante muchos años ha sido evidente que es poco probable que algunas especies de mosquitos transmitan ciertos virus debido a una barrera de escape en el intestino medio que impide la diseminación [28,33,51]. Muchos estudios han investigado qué factores de los mosquitos contribuyen a la existencia de esta barrera, pero a menudo es difícil separar los factores de los mosquitos de los factores virales porque se ha demostrado que la interacción de los genotipos es importante [9]. No obstante, se ha implicado que varios aspectos de la fisiología del mosquito contribuyen a la creación de una barrera de escape en el intestino medio. Estas incluyen características físicas del mosquito, como la estructura de la lámina basal, así como el comportamiento del mosquito y la expresión de genes implicados en la inmunidad u otros procesos fisiológicos.

Características físicas: espesor y estructura de la lámina basal.

La lámina basal es una matriz extracelular densamente tejida secretada por células epiteliales que rodea el intestino medio del mosquito y representa un obstáculo importante para la infección diseminada. Durante años, los investigadores han quedado perplejos sobre cómo los virus logran atravesar esta matriz cuando los tamaños de poros medidos son más pequeños que el tamaño de la mayoría de los virus [14]. Se ha propuesto que las diferencias en la estructura y el grosor de la lámina basal contribuyen a las diferencias en las tasas de escape del intestino medio. Un estudio encontró que las diferencias nutricionales daban lugar a mosquitos de diferentes tamaños y diferentes espesores de la lámina basal [52]. Los autores encontraron mayores tasas de diseminación del virus de La Crosse en los mosquitos más pequeños que tenían láminas basales más delgadas y razonaron que esta diferencia puede, en parte, explicar por qué algunos mosquitos son mejores vectores. Sin embargo, otros estudios no han encontrado asociación entre el espesor de la lámina basal y el escape del intestino medio. Un estudio que analizó la diseminación del DENV en cepas de laboratorio de Ae. albopictus con diferencias en el grosor de la lámina basal no encontró impacto en el escape viral del intestino medio [53]. Otros estudios han encontrado que después de la alimentación con sangre, aparecen perforaciones en la lámina basal que pueden facilitar el escape del intestino medio [20,54]. Queda por ver si las diferencias en la susceptibilidad a estas perforaciones son un factor de variabilidad en el escape del intestino medio.

Expresión de genes inmunológicos

(i). vía de ARNi

La vía del ARNi se descubrió por primera vez en C. elegans, donde se descubrió inesperadamente que el ARN bicatenario podría conducir a la destrucción o represión traduccional del ARNm con complementariedad de secuencia [55]. Posteriormente se demostró que esto existe en los insectos y que contribuye de manera importante a la respuesta antiviral en los mosquitos, incluso en el intestino medio [56-58]. Los estudios han proporcionado pruebas convincentes de que esta vía puede desempeñar un papel importante en la posibilidad de que un mosquito desarrolle una infección diseminada. Por ejemplo, se ha demostrado que cuando se redujo la respuesta de ARNi en Ae. aegypti al eliminar la expresión de componentes importantes de la vía de ARNi específicamente en el intestino medio, hubo una mayor diseminación de SINV [59]. Por el contrario, cuando los mosquitos fueron modificados genéticamente para expresar ARN repetido invertido derivado de DENV-2 en el intestino medio, lo que desencadenó una mayor respuesta de ARNi del intestino medio, hubo una disminución de la infección diseminada [60]. Cabe señalar que este último estudio encontró una replicación del intestino medio menos detectable cuando se alteró la vía del ARNi, lo que podría considerarse una barrera contra la infección del intestino medio; sin embargo, dado que el experimento no fue diseñado para bloquear la entrada al intestino medio, sino más bien para suprimir la replicación viral a niveles que hacen improbable el escape del intestino medio, se está considerando en nuestra discusión aquí. Si bien estos estudios proporcionan evidencia convincente de la importancia de la ARNi, necesitamos saber si existe una variación natural en la expresión o funcionalidad de los componentes de la vía de la ARNi, y si esto puede explicar por qué algunos mosquitos desarrollan naturalmente una infección diseminada y otros no. La evidencia muestra que los componentes de RNAi como Dicer-2 pueden variar en su expresión entre diferentes cepas de especies de mosquitos y que esta expresión diferencial puede tener un impacto en el porcentaje de mosquitos que desarrollan una infección diseminada [61,62]. Exactamente cuánta variación en la vía del ARNi contribuye al escape del intestino medio y a la competencia del vector es un área que requiere más estudio.

(ii). Rutas Jak/STAT, Peaje e IMD

La actividad antiviral en el intestino medio de los mosquitos no se limita al ARNi, ya que también se ha demostrado que otras vías inmunitarias tienen efectos antivirales y podrían afectar potencialmente el escape del intestino medio. Estas incluyen las rutas Jak/Stat, Toll e IMD. Se ha demostrado que la vía Jak/Stat desempeña un papel en la inmunidad antiviral innata en Drosophila y en mosquitos [63,64]. Cuando se diseñaron mosquitos para aumentar la señalización de Jak/Stat mediante la sobreexpresión de Dome y Hop en el cuerpo graso y el intestino medio, se observó una menor prevalencia de infección diseminada por DENV2, pero la prevalencia de infección del intestino medio no se alteró [65]. Aún está por verse el papel de la expresión diferencial de los componentes de la vía Jak/Stat entre las poblaciones de mosquitos con variación en las tasas de escape del intestino medio. Sin embargo, se ha descubierto que la expresión de genes en esta vía aumenta en cepas de mosquitos que son a la vez susceptibles y refractarias al DENV, lo que puede sugerir que esta vía por sí sola no puede explicar la barrera de escape del intestino medio [66]. La vía Toll es otra cascada de señalización inmunitaria que se ha demostrado que es importante en la defensa inmune innata contra una variedad de patógenos, incluidas bacterias y hongos grampositivos [67]. Posteriormente se demostró que desempeña un papel en la defensa antiviral de los mosquitos [68-70]. Existe cierta evidencia que sugiere que el nivel basal de activación de esta vía puede variar entre cepas de Ae. aegypti, ya que se ha descubierto que la expresión relativa de REL1 es diferente en muestras de cuerpo entero de mosquitos obtenidos de campo versus mosquitos de laboratorio y que estas poblaciones de mosquitos difieren en sus tasas de infección diseminada con DENV [62]. Una vía inmune adicional que se ha demostrado que tiene un papel antiviral en Drosophila es la vía IMD [71]. También se ha demostrado que esta vía está alterada en el intestino medio de mosquitos infectados viralmente [70]. En el futuro se deberá considerar cómo las alteraciones en estas vías se relacionan específicamente con el escape del intestino medio.

(iii). Apoptosis y recambio celular.

La apoptosis es una forma de muerte celular programada que está altamente conservada en animales y ha sido ampliamente estudiada en organismos modelo como C. elegans, Drosophila y ratones [72]. La apoptosis es importante en el desarrollo y el mantenimiento de los tejidos, y las alteraciones en el proceso pueden provocar diversos estados patológicos [73,74]. Es importante destacar que esta vía también se sabe desde hace muchos años que tiene una función antiviral [75,76]. Los mecanismos centrales de la apoptosis parecen similares en muchos organismos. Una familia de actores importantes en la vía apoptótica son las caspasas, que son proteasas que contienen cisteína en su sitio activo y se generan en una forma inactiva llamada procaspasas. En respuesta a los estímulos activadores, las proteínas adaptadoras se unen a las procaspasas iniciadoras, lo que provoca agregación y escisión en los residuos de ácido aspártico, lo que da como resultado un aumento considerable de la actividad de la proteasa. Las caspasas iniciadoras escindidas, a su vez, activan las caspasas efectoras que escinden objetivos celulares y, en última instancia, provocan la muerte celular [77]. Este proceso está altamente regulado por diferentes proteínas, siendo una de las familias más importantes la IAP o familia de inhibidores de la apoptosis que se descubrió por primera vez en los baculovirus [78]; Posteriormente, se han encontrado homólogos de IAP en muchos organismos, incluidos mamíferos, C. elegans, insectos y otros [79-82]. Las proteínas IAP se unen a las procaspasas para prevenir la activación y/o se unen a las caspasas activadas para prevenir su acción. Muchas IAP también sirven como ubiquitina ligasas para caspasas y otros objetivos. Otro grupo de proteínas llamado antagonistas de IAP actúa para prevenir la acción de las IAP, lo que conduce a la activación de caspasas y la muerte celular. En Drosophila, los genes Reaper, Grim, Sickle y Hide codifican antagonistas de IAP. Si bien estas proteínas son diversas, todas codifican un motivo de unión N-N-terminal IBM o IAP que compite por la unión a caspasa [83]. Se realizaron esfuerzos para comprender mejor la vía apoptótica en Ae. aegypti han revelado que la vía central tiene un parecido general con la vía de Drosophila melanogaster. Anotación de la Ae. aegypti ha identificado muchos homólogos de genes conocidos relacionados con la apoptosis en Drosophila [82,84]. Las caspasas efectoras más importantes en la apoptosis en Ae. aegypti parecen ser CASPS7 y CASPS8, que son homólogos de DrICE y Dcp1 en Drosophila. Estas caspasas efectoras son activadas por la caspasa iniciadora AeDronc que, a su vez, es activada por la proteína adaptadora AeArk [85]. AeIAP1 previene la activación de caspasa y el silenciamiento de este gen conduce a la apoptosis espontánea en células de mosquitos y mosquitos [85,86]. La Ae. aegypti también codifica los antagonistas de IAP Michelob_x e IMP, que tienen funciones proapoptóticas [82,87,88]. Se sabe que la apoptosis es una vía antiviral que tiene implicaciones para la competencia vectorial en los mosquitos. Sin embargo, también se ha planteado la hipótesis de que el exceso de muerte celular en el intestino medio puede crear una abertura a través de la cual los virus pueden escapar. Alguna evidencia sugiere que la apoptosis del intestino medio varía entre los mosquitos con diferentes niveles de escape del intestino medio. Por ejemplo, el intestino medio de una cepa de C. pipiens pipiens refractaria al VNO mostró evidencia de apoptosis [89]. Además, se ha demostrado que la expresión de los genes caspasa y otros genes críticos para la apoptosis aumenta en Ae. aegypti que son refractarias al DENV o cepas de mosquito que muestran diferentes grados de barrera de escape en el intestino medio [90,91]. Los experimentos sobre la manipulación del proceso de apoptosis también han sugerido que esta vía puede afectar el escape del intestino medio. Por ejemplo, cuando se diseñó SINV para expresar la proteína Reaper antagonista de IAP, el virus perdió rápidamente el gen insertado después de la infección de Ae. aegypti, lo que sugiere que la expresión del gen proapoptótico fue gravemente perjudicial para la replicación del virus [92]. Además, en un estudio reciente, insertamos Reaper en el genoma SINV de una manera que fue diseñada para mejorar la estabilidad del inserto, lo que resultó en un número significativamente menor de mosquitos que desarrollaron infección diseminada y en el intestino medio cuando se alimentaron con este virus en comparación con los controles [93 ]. Sin embargo, no toda la evidencia sugiere que la apoptosis sea perjudicial para la diseminación viral. Un estudio que probó el efecto de reducir la apoptosis mediante el uso de ARNi para anular la expresión del gen Aedronc encontró que la diseminación de SINV en realidad se redujo [94]. Curiosamente, un grupo ha planteado la hipótesis de que estos resultados aparentemente contradictorios pueden explicarse por el papel que desempeña Aedronc en la autofagia, que puede respaldar la replicación viral [95]. Un área activa de investigación es cómo el equilibrio entre la apoptosis y la generación de células en el intestino medio afecta el escape del intestino medio. Un estudio reciente encontró que Ae. Los mosquitos aegypti tuvieron una generación más lenta de nuevas células en el intestino medio [96]. Sin embargo, este estudio solo analizó la infección en el intestino medio y no estudió la infección diseminada, por lo que sería necesario estudiarlo más a fondo para determinar un vínculo específico con el escape del intestino medio.

Comportamiento: comportamiento alimentario

Un factor que recién comienza a considerarse como una pieza del rompecabezas del escape del intestino medio es el papel del comportamiento de alimentación de los mosquitos. Si bien superficialmente puede parecer que los dos no están relacionados, la evidencia reciente sugiere lo contrario. En los estudios de laboratorio sobre la competencia de los vectores, los mosquitos suelen recibir una única ingesta de sangre infecciosa. Sin embargo, esto no refleja el comportamiento natural de los mosquitos, ya que los mosquitos a menudo ingieren sangre varias veces durante un solo ciclo gonotrófico. En un estudio, el 61% de Ae. aegypti en el laboratorio absorbieron una segunda ingesta de sangre, a menudo dentro de las 24 horas, y el 50% de los mosquitos capturados en el medio silvestre mostraron evidencia de ingesta múltiple de sangre [97]. Recientemente, los investigadores han presentado evidencia de que este comportamiento puede mejorar la diseminación viral desde el intestino medio. Armstrong y cols. encontró que cuando Ae. aegypti recibieron una alimentación de sangre infecciosa que contenía ZIKV y luego una alimentación posterior de sangre no infecciosa, el número de mosquitos que desarrollaron una infección diseminada aumentó [54]. El mismo estudio informó resultados similares para Ae. aegypti y DENV, Ae. aegypti y CHIKV, y Ae. albopictus y ZIKV. Utilizando un régimen de alimentación similar, Kantor et al. examinó el intestino medio después de una segunda alimentación no infecciosa y descubrió que después de esta ingesta de sangre, los viriones de CHIKV se podían encontrar fuera del intestino medio y podían verse en la lámina basal del lado del hemocele, mientras que en los mosquitos alimentados con una sola sustancia infecciosa harina de sangre, los viriones sólo se observaron en las hebras de la lámina basal [20]. Otro estudio mostró que DENV4 se encontró en mayores cantidades en la lámina basal del intestino medio de Ae. aegypti después de una segunda ingesta de sangre, lo que posiblemente afecte la probabilidad de diseminación viral [21]. En el futuro, se deben investigar otros aspectos del comportamiento de los mosquitos en relación con el escape del intestino medio, incluido el volumen de la sangre ingerida y el número de sangre ingerida.

3.3. Factores virales

Replicación del intestino medio

Se ha debatido el papel exacto de la replicación del virus en el escape del intestino medio y aún no está claro si la replicación del intestino medio es necesaria en todos los casos, o si en algunas situaciones existe una ruta de diseminación extracelular (que no requiere la replicación del virus en las células del intestino medio). Varios estudios iniciales documentaron la aparición de virus en la hemolinfa en momentos antes de que pudieran haber tenido tiempo de replicarse [98,99]. Esto llevó a la hipótesis de que los virus podrían moverse entre las células del intestino medio. Más evidencia de esto provino de un estudio en el que se encontraron glóbulos rojos provenientes de una ingesta de sangre en el hemocele de algunos mosquitos después de alimentarse [100]. También respaldan esta idea experimentos en los que se alimentaron mosquitos con nanopartículas de tamaños similares a los arbovirus y luego se descubrió que habían salido del intestino medio [21,101]. Estas líneas de evidencia sugieren que la replicación del intestino medio puede no ser necesaria para la diseminación en todos los casos. Sin embargo, varios otros estudios han concluido que la replicación es necesaria para un escape eficiente del intestino medio. Los estudios en los que se manipuló la vía del ARNi en el intestino medio para mejorar o reducir la replicación del virus mostraron que hubo una disminución o aumento correspondiente en la infección diseminada, lo que indica que el grado de replicación del virus influyó en el escape del intestino medio [59,60]. Además, cuando se utilizaron partículas de replicón VEEV que expresaban GFP y que solo eran capaces de una única ronda de infección para infectar mosquitos por vía oral, se descubrió que la expresión de GFP se limitaba a las células del intestino medio [19]. Nuestro estudio reciente, en el que utilizamos una construcción SINV que específicamente tenía una capacidad reducida de replicarse en el intestino medio, mostró una reducción significativa en el porcentaje de Ae. aegypti que desarrollaron una infección diseminada en comparación con los virus de control [102]. Curiosamente, hubo un pequeño porcentaje de mosquitos que desarrollaron una infección diseminada con esta construcción, pero será necesario realizar más investigaciones para determinar si puede existir una ruta intercelular poco utilizada. Algunos investigadores han planteado la hipótesis de que es posible que un virus necesite alcanzar un nivel umbral para escapar del intestino medio y varios estudios (descritos a continuación) han proporcionado evidencia que respalda esto. Estudios realizados con el virus de la encefalitis equina occidental (WEEV) en mosquitos Culex y ZIKV en Ae. Los mosquitos albopictus concluyeron que se debe alcanzar un cierto nivel del intestino medio para que se produzca el escape [34,103]. Sin embargo, otros estudios han refutado esta idea, incluido uno que utilizó DENV en Ae. aegypti [104,105]. Nuestro estudio reciente tampoco encontró evidencia de una correlación entre un título alto en el intestino medio y un título alto en la canal, ni encontramos que un título en el intestino medio fuera un predictor particularmente bueno de infección diseminada [102]. En general, las investigaciones han demostrado que el nivel de replicación del virus en el intestino medio puede ser un componente importante del escape del intestino medio en algunas situaciones, pero puede desempeñar un papel menor o ningún papel en otros casos.

Diversidad viral y tasa de error de replicación.

Está bien documentado que el intestino medio representa un obstáculo importante para la diversidad genética de los arbovirus [106-108]. Un estudio estimó que en mosquitos alimentados con una dosis alta de VEEV, la cantidad de virus que infectaban el intestino medio era en promedio alrededor de 1200, mientras que la cantidad de virus que escapaban del intestino medio era solo alrededor de 50 [107]. Estos estudios plantean una pregunta importante: ¿tener una alta diversidad viral es una ventaja para superar el cuello de botella para escapar del intestino medio? Casi todos los arbovirus son virus de ARN con altas tasas de mutación [109]. Los investigadores han estado interesados ​​en determinar si la disminución de la tasa de mutación conduce a una menor diversidad y, por tanto, a una menor capacidad para superar los desafíos del escape del intestino medio y, a la inversa, si existe una ventaja, a un aumento de la tasa de mutación. Un estudio demostró que una mutación de la polimerasa que aumentaba la fidelidad de la replicación del CHIKV provocaba una disminución de los títulos en los tejidos diseminados, pero un número similar de mosquitos desarrolló una infección diseminada en comparación con la infección de tipo salvaje [110]. Una posible conclusión que se puede extraer de este estudio es que la disminución de la diversidad puede haber llevado a una disminución en la cantidad de viriones capaces de diseminarse desde el intestino medio. Otro estudio que utilizó mutantes de replicación de alta fidelidad de VEEV encontró tasas de diseminación significativamente menores [111]. Curiosamente, el mismo estudio encontró que las mutaciones de baja fidelidad, que aumentaron la tasa de mutación y la diversidad viral, también disminuyeron la tasa de diseminación [111]. Esto posiblemente pueda atribuirse a la mayor acumulación de mutaciones perjudiciales. La conclusión de estos estudios es que la tasa de error de la ARN polimerasa viral probablemente ya se haya optimizado a través de la evolución para maximizar el éxito del virus. Los estudios realizados sin el uso de variantes mutadoras también han implicado la importancia de la diversidad genética viral en la diseminación. Por ejemplo, un estudio encontró que el SLEV que había sido pasado en serie en células C6/36 mostraba una diversidad genética reducida en comparación con el virus no pasado, y cuando el virus pasado se alimentó a los mosquitos, hubo una reducción en la infección diseminada [112]. En conjunto, estos estudios sugieren que los cambios que afectan la diversidad viral dentro del intestino medio pueden alterar la cantidad o la capacidad de los viriones que escapan del intestino medio.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

Coinfección

En la naturaleza, algunas especies de mosquitos suelen habitar áreas donde también circulan varios o muchos arbovirus, parásitos y bacterias diferentes que causan enfermedades. En los mosquitos coinfectados con una combinación de patógenos, es necesario saber cómo estas complejas interacciones afectan la diseminación en el intestino medio. Las filarias pueden causar enfermedades graves en humanos y animales y, al igual que los arbovirus, requieren un insecto vector para completar su ciclo de vida. Estos nematodos circulan en partes de Asia, África y América del Sur [113] que también pueden albergar arbovirus endémicos. La investigación con varios virus ha demostrado que la ingestión de microfilarias por mosquitos puede mejorar la diseminación de arbovirus desde el intestino medio [114-116]. Se cree que la razón de esto es que las microfilarias perforan agujeros en el intestino medio del mosquito, lo que permite un escape más rápido y mejorado hacia el hemocele. Esto está respaldado por un estudio que encontró que las tasas de diseminación de CHIKV aumentaron en mosquitos que estaban coinfectados con microfilarias de Dinofilaria immitis, y esto se correlacionaba con agujeros en el epitelio del intestino medio producidos por las microfilarias [115]. Recientemente, se ha descubierto que la diseminación viral puede no mejorar simplemente escapando a través de estos orificios, sino que las microfilarias pueden transportar los virus a través del epitelio del intestino medio. Cuando las microfilarias de Brugi malayi se incubaron con EEEV o VEEV y luego se lavaron extensamente y se usaron para infectar mosquitos, muchos mosquitos aún se infectaron con los virus [117]. Esto sugiere que los virus pueden adherirse a las microfilarias o ser transportados de alguna otra manera por ellas. La preocupación es que esto pueda dar lugar a que más huéspedes sufran infecciones complicadas tanto por parásitos como por virus y que ignorar el problema de los parásitos pueda comprometer los esfuerzos para eliminar las enfermedades arbovirales. Si bien la coinfección con filarias aumentó la diseminación de arbovirus, la coinfección con otros arbovirus parece tener un efecto neutral o negativo sobre la diseminación. La exposición simultánea de Ae. aegypti a diversas combinaciones de CHIKV, ZIKV y DENV-2 dieron como resultado poca diferencia en la diseminación en comparación con mosquitos infectados individualmente [118,119]. De manera similar, la exposición secuencial a CHIKV y ZIKV no afectó las tasas de diseminación, aunque las tasas de transmisión aumentaron [120]. Parece haber casos de coinfecciones por arbovirus que tienen un impacto negativo en la diseminación, ya que se descubrió que SINV reduce las tasas de infección y diseminación de DENV-4 en Ae. albopictus [121]. Curiosamente, la infección por mosquitos con flavivirus específicos de insectos también puede tener un efecto negativo en la diseminación del virus. Se descubrió que el virus del agente de fusión celular (CFAV) reduce la tasa de diseminación y el título de diseminación de DENV-1 y el título de diseminación de ZIKV en Ae. aegypti [122]. Además, también se descubrió que el flavivirus Culex (CxFV) afecta la diseminación del VNO 7 días después de la infección; sin embargo, esta diferencia se disipó a los 14 días [123]. En el futuro será importante comprender mejor la coinfección viral, particularmente con virus específicos de insectos.

Dosis de virus

La evidencia disponible sugiere que las barreras de escape del intestino medio a veces pueden verse afectadas por dosis virales. Una barrera dependiente de la dosis se puede superar aumentando la dosis del virus a un nivel que puede o no ser posible alcanzar en entornos naturales. En lugar de una incompatibilidad fundamental entre el virus y el vector, una barrera dependiente de la dosis puede deberse a un factor como la respuesta inmune del mosquito, que puede verse superada por una dosis mayor de virus. Khoo et al. apoyó esta idea en un estudio que implicaba que la vía RNAi contribuía a una barrera de escape del intestino medio dependiente de la dosis de SINV en Ae. aegypti [59]. La capacidad de superar una barrera de escape del intestino medio simplemente aumentando la dosis del virus también se ha demostrado en WEEV y Culex tarsalis [34,124], ZIKV y Ae. aegypti [125] y CHIKV en Ae. aegypti [126]. Comprender si una barrera depende de la dosis y el rango de títulos virales que un vector puede encontrar en una ingesta de sangre natural es importante para comprender la competencia del vector.

4. Conclusiones

Está claro que el escape del intestino medio no puede atribuirse a un solo factor, pero eso no debería desanimarnos a la hora de intentar comprender todo lo que podamos sobre este enigmático proceso. Una mejor comprensión del escape del intestino medio puede conducir a posibles nuevos medios para prevenir la infección por vectores; por ejemplo, mediante ingeniería genética destinada a mejorar las vías inmunes en tejidos críticos de mosquitos o incluso potencialmente mediante el tratamiento de mosquitos con virus específicos de insectos. Esta comprensión también podría conducir a mejores predicciones de futuros brotes de arbovirus. Si sabemos cómo el medio ambiente, los mosquitos y los virus se unen para promover el escape del intestino medio, podríamos comprender mejor cuándo es probable que ocurra el próximo brote significativo y mejorar nuestra preparación.

Referencias

1. QUIÉN. Chikungunya y dengue en el suroeste del Océano Índico. OMS: Preparación y respuesta ante emergencias: noticias sobre brotes de enfermedades. Disponible en línea: https://www.who.int/emergencies/disease-outbreak-news/item/2006_03_17-en (consultado el 24 de enero de 2023).

2. Bhatt, S.; Gething, PW; Brady, DO; Mesina, JP; Farlow, AW; Moyes, CL; Drake, JM; Brownstein, JS; Hoen, AG; Sankoh, O.; et al. La distribución global y la carga del dengue. Naturaleza 2013, 496, 504–507. [Referencia cruzada] [PubMed]

3. Organización Panamericana de la Salud/Organización Mundial de la Salud. Actualización Epidemiológica Resumen de la situación de la fiebre amarilla en las Américas; Organización Panamericana de la Salud/Organización Mundial de la Salud: Washington, DC, EE. UU., 2018.

4. Fauci, AS; Morens, DM El virus Zika en las Américas: otra amenaza más de arbovirus. N. inglés. J. Med. 2016, 374, 601–604. [Referencia cruzada] [PubMed]

5. Liu-Helmersson, J.; Quam, M.; Wilder-Smith, A.; Stenlund, H.; Ebi, K.; Massad, E.; Rocklöv, J. Cambio climático y vectores del Aedes: proyecciones del siglo XXI para la transmisión del dengue en Europa. EBioMedicine 2016, 7, 267–277. [Referencia cruzada] [PubMed]

6. Ryan, SJ; Carlson, CJ; Mardoqueo, EA; Johnson, LR Expansión global y redistribución del riesgo de transmisión del virus transmitido por el Aedes con el cambio climático. PLoS Negl. tropo. Dis. 2019, 13, e0007213. [Referencia cruzada]

7. Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades. Mosquitos en Estados Unidos|Mosquitos|CDC. Disponible en línea: https://www. cdc.gov/mosquitoes/about/mosquitoes-in-the-us.html (consultado el 30 de marzo de 2022).

8. Myles, KM; Pierro, DJ; Olson, KE Comparación del potencial de transmisión de dos virus Sindbis genéticamente distintos después de la infección oral de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 2004, 41, 95-106. [Referencia cruzada]

9. Lambrechts, L.; Chevillón, C.; Albright, RG; Thaisomboonsuk, B.; Richardson, JH; Jarman, RG; Scott, TW Especificidad genética y potencial de adaptación local entre los virus del dengue y los mosquitos vectores. BMC evolución. Biol. 2009, 9, 160. [Referencia cruzada]

10. Tsetsarkin, KA; Vanlandingham, DL; McGee, CE; Higgs, S. Una mutación única en el virus Chikungunya afecta la especificidad del vector y el potencial epidémico. Patógeno PLoS. 2007, 3, 1895–1906. [Referencia cruzada]

11. Tsetsarkin, KA; McGee, CE; Higgs, S. La adaptación del virus chikungunya a los mosquitos Aedes albopictus no se correlaciona con la adquisición de dependencia del colesterol o la disminución del umbral de pH para la reacción de fusión. Virol. J. 2011, 8, 376. [Referencia cruzada]

12. Thiberville, SD; Moyen, N.; Dupuis-Maguiraga, L.; Nougairede, A.; Gould, EA; Roques, P.; de Lamballerie, X. Fiebre chikungunya: epidemiología, síndrome clínico, patogénesis y terapia. Antivirus. Res. 2013, 99, 345–370. [Referencia cruzada]

13. Franz, AWE; Kantor, AM; Passarelli, AL; Clem, RJ Barreras tisulares contra la infección por arbovirus en mosquitos. Virus 2015, 7, 3741–3767. [Referencia cruzada]

14. Houk, EJ; Hardy, JL; Chiles, Permeabilidad del RE de la lámina basal del intestino medio en el mosquito Culex tarsalis Coquillett (Insecta, Diptera). Acta Trop. 1981, 38, 163-171. [PubMed]

15. Bowers, DF; Abell, Licenciatura en Letras; Brown, DT Replicación y tropismo tisular del alfavirus Sindbis en el mosquito Aedes albopictus. Virología 1995, 212, 1–12. [Referencia cruzada] [PubMed]

16. Girard, YA; Klingler, KA; Higgs, S. Difusión del virus del Nilo Occidental y tropismos tisulares en Culex pipiens quinquefasciatus infectados por vía oral. Enfermedades zoonóticas transmitidas por vectores. 2004, 4, 109–122. [Referencia cruzada]

17. Miller, BR; Mitchell, CJ; Ballinger, ME Replicación, tropismos tisulares y transmisión del virus de la fiebre amarilla en Aedes albopictus. Trans. R. Soc. tropo. Medicina. Hig. 1989, 83, 252–255. [Referencia cruzada] [PubMed]

18. Salazar, MI; Richardson, JH; Sánchez-Vargas, I.; Olson, KE; Beaty, BJ Virus del dengue tipo 2: replicación y tropismos en mosquitos Aedes aegypti infectados por vía oral. BMC Microbiol. 2007, 7, 9. [CrossRef] [PubMed]

19. Romoser, WS; Wasieloski, LP; Pushko, P.; Kondig, JP; Lerdthusnee, K.; Neira, M.; Ludwig, GV Evidencia de conductos de diseminación de arbovirus desde el intestino medio del mosquito (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 2004, 41, 467–475. [Referencia cruzada]

20. Kantor, AM; Grant, director general; Balaraman, V.; Blanco, TA; Franz, Análisis ultraestructural AWE de la diseminación del virus chikungunya desde el intestino medio del mosquito de la fiebre amarilla, Aedes aegypti. Virus 2018, 10, 571. [CrossRef]

21. Cui, Y.; Grant, director general; Lin, J.; Yu, X.; Franz, AWE La diseminación del virus del Zika desde el intestino medio de Aedes aegypti se ve facilitada por la modificación estructural de la lámina basal del intestino medio mediada por la harina de sangre. Virus 2019, 11, 1056. [CrossRef]

22. Tejedor, Carolina del Sur; Scott, TW; Lorenz, LH; Lerdthusnee, K.; Romoser, WS Cambios patológicos asociados al togavirus en el intestino medio de un mosquito vector natural. J. Virol. 1988, 62, 2083–2090. [Referencia cruzada]

23. Lerdthusnee, K.; Romoser, WS; Farán, YO; Dohm, DJ Virus de la fiebre del valle del Rift en el cardias de Culex pipiens: un estudio de inmunidad a sustancias químicas y ultraestructurales. Soy. J. Trop. Medicina. Hig. 1995, 53, 331–337. [Referencia cruzada]

24. Romoser, WS; Farán, YO; Bailey, CL Ruta recientemente reconocida de diseminación de arbovirus desde el intestino medio del mosquito (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 1987, 24, 431–432. [Referencia cruzada] [PubMed]

25. Engelhard, EK; Kam-Morgan, LNW; Washburn, JO; Volkman, LE El sistema traqueal de los insectos: un conducto para la propagación sistémica del virus de la poliedrosis nuclear Autographa Californica M. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. Estados Unidos 1994, 91, 3224–3227. [Referencia cruzada] [PubMed]

26. Medios, JC; Passarelli, AL factor de crecimiento de fibroblastos virales, metaloproteasas de matriz y caspasas se asocian con una mejora de la infección sistémica por baculovirus. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. EE.UU. 2010, 107, 9825–9830. [Referencia cruzada] [PubMed]

27. Romoser, WS; Turell, MJ; Lerdthusnee, K.; Neira, M.; Dohm, D.; Luis, G.; Wasieloski, L. Patogenia del virus de la fiebre del valle del Rift en mosquitos: conductos traqueales y lámina basal como barrera extracelular. Arco. Virol. Supl. 2005, 19, 89-100. [Referencia cruzada]

28. Paulson, SL; Grimstad, PR; Craig, GB Barreras del intestino medio y las glándulas salivales para la diseminación del virus de La Crosse en mosquitos del grupo Aedes triseriatus. Medicina. Veterinario. Entomol. 1989, 3, 113–123. [Referencia cruzada] [PubMed]

29. Hartman, fiscal del distrito; Bergren, NA; Kondash, T.; Schlatmann, W.; Webb, CT; Kading, RC Susceptibilidad y barreras a la infección de los mosquitos de Colorado con el virus de la fiebre del valle del Rift. PLoS Negl. tropo. Dis. 2021, 15, e0009837. [Referencia cruzada]

30. Bennett, KE; Olson, KE; Muñoz, MdL; Fernández-Salas, I.; Farfán-Ale, JA; Higgs, S.; Negro IV, WC; Beaty, BJ Variación en la competencia del vector para el virus del dengue 2 entre 24 colecciones de Aedes aegypti de México y Estados Unidos. Soy. J. Trop. Medicina. Hig. 2002, 67, 85–92. [Referencia cruzada]

31. Boromisa, RD; Grayson, MA Transmisión oral del virus del Cañón de Jamestown por mosquitos Aedes Provocans del noreste de Nueva York. Mermelada. Mezquita. Asociación de Control. 1991, 7, 42–47.

32. Khoo, CC; Doty, JB; Celebrada, Países Bajos; Olson, KE; Franz, AW Aislamiento de mutantes de escape del intestino medio de dos virus del dengue 2 de genotipo americano de Aedes aegypti. Virol. J. 2013, 10, 257. [Referencia cruzada]

33. Turell, MJ; Linthicum, KJ; Patricia, LA; Davies, FG; Kairo, A.; Bailey, CL Competencia vectorial de especies seleccionadas de mosquitos africanos (Diptera: Culicidae) para el virus de la fiebre del valle del Rift. J. Med. Entomol. 2008, 45, 102–108. [Referencia cruzada]

34. Kramer, LD; Hardy, JL; Prensador, SB; Houk, EJ Barreras de diseminación del virus de la encefalomielitis equina occidental en Culex tarsalis infectados después de la ingestión de dosis virales bajas. Soy. J. Trop. Medicina. Hig. 1981, 30, 190–197. [Referencia cruzada] [PubMed]

35. Dohm, DJ; O'Guinn, ML; Turell, MJ Efecto de la temperatura ambiental sobre la capacidad de Culex pipiens (Diptera: Culicidae) para transmitir el virus del Nilo Occidental. J. Med. Entomol. 2002, 39, 221–225. [Referencia cruzada] [PubMed]

36. Richards, SL; Mores, CN; Señor, CC; Tabachnick, WJ Impacto de la temperatura de incubación extrínseca y la exposición al virus en la competencia vectorial de Culex pipiens quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) para el virus del Nilo Occidental. Enfermedad zoonótica transmitida por vectores. 2007, 7, 629–636. [Referencia cruzada] [PubMed]

37. Alto, BW; Bettinardi, D. Temperatura e infección por el virus del dengue en mosquitos: efectos independientes en las etapas inmadura y adulta. Soy. J. Trop. Medicina. Hig. 2013, 88, 497–505. [Referencia cruzada] [PubMed]

38. Mbaika, S.; Lutomiah, J.; Chepkorir, E.; Mulwa, F.; Khayeka-Wandabwa, C.; Tigoi, C.; Oyoo-Okoth, E.; Mutisya, J.; Ng'Ang'A, Z.; Sang, R. Competencia vectorial del Aedes aegypti en la transmisión del virus chikungunya: efectos e implicaciones de la temperatura de incubación extrínseca en las tasas de diseminación y infección. Virol. J. 2016, 13, 114. [Referencia cruzada]

39. Richards, SL; Señor, CC; Pesko, K.; Tabachnick, WJ Factores ambientales y biológicos que influyen en la competencia vectorial de Culex pipiens Quinque fasciatus Say (Diptera: Culicidae) para el virus de la encefalitis de San Luis. Soy. J. Trop. Medicina. Hig. 2009, 81, 264–272. [Referencia cruzada] [PubMed]

40. Kilpatrick, AM; Meola, MA; Moudy, RM; Kramer, LD Temperatura, genética viral y transmisión del virus del Nilo Occidental por mosquitos Culex pipiens. Patógeno PLoS. 2008, 4, e1000092. [Referencia cruzada]

41. Westbrook, CJ; Reiskind, MH; Pesko, KN; Greene, KE; Lounibos, LP Temperatura ambiental de las larvas y susceptibilidad de Aedes albopictus Skuse (Diptera: Culicidae) al virus chikungunya. Enfermedad zoonótica transmitida por vectores. 2010, 10, 241–247. [Referencia cruzada]

42. Muturi, EJ; Blackshear, M.; Montgomery, A. Efectos dependientes de la temperatura y la densidad del entorno larval sobre la competencia del Aedes aegypti para un alfavirus. J. Ecología vectorial. 2012, 37, 154-161. [Referencia cruzada]

43. Knecht, H.; Richards, S.; Balanay, J.; White, A. Impacto de la edad de los mosquitos y la exposición a insecticidas en la susceptibilidad de Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) a la infección por el virus del Zika. Patógenos 2018, 7, 67. [CrossRef]

44. Richards, SL; Blanco, AV; Balanay, JAG El potencial de la exposición a insecticidas subletales afecta la competencia vectorial de Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) para los virus del dengue y el Zika. Res. Representante Trop. Medicina. 2017, 8, 53–57. [Referencia cruzada] [PubMed]

45. Muturi, EJ; Kim, CH-H.; Alto, BW; Berenbaum, señor; Schuler, MA El estrés ambiental de las larvas altera la competencia del Aedes aegypti para el virus Sindbis. tropo. Medicina. En t. Salud 2011, 16, 955–964. [Referencia cruzada] [PubMed]

46. ​​Muturi, EJ; Alto, BW La temperatura ambiental de las larvas y la exposición a insecticidas alteran la competencia del Aedes aegypti para los arbovirus. Enfermedad zoonótica transmitida por vectores. 2011, 11, 1157–1163. [Referencia cruzada] [PubMed]

47. Fernández, KM; Tomé, HVV; Miranda, FR; Gonçalves, WG; Pascini, TV; Serrao, JE; Martins, GF Las larvas de Aedes aegypti tratadas con Spinosad producen adultos con intestino medio dañado y fecundidad reducida. Quimiosfera 2019, 221, 464–470. [Referencia cruzada]

48. Moltini-Conclois, I.; Stalinski, R.; Tetreau, G.; Després, L.; Lambrechts, L. La exposición de las larvas al insecticida bacteriano Bti mejora la susceptibilidad al virus del dengue en los mosquitos adultos Aedes aegypti. Insectos 2018, 9, 193. [CrossRef]

49. Alto, BW; Lounibos, LP; Higgs, S.; Juliano, SA La competencia larvaria afecta de manera diferencial la infección por arbovirus en mosquitos Aedes. Ecología 2005, 86, 3279–3288. [Referencia cruzada] [PubMed]

50. Bevins, mosquitos invasores SN, competencia larvaria y efectos indirectos sobre la competencia vectorial de las especies nativas de mosquitos (Diptera: Culicidae). Biol. Invasiones 2008, 10, 1109-1117. [Referencia cruzada]

51. Bennett, KE; Beaty, BJ; Black, selección WC de D2S3, una cepa de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) con alta susceptibilidad oral al virus del dengue 2 y D2MEB, una cepa con una barrera en el intestino medio para escapar del dengue 2. J. Med. Entomol. 2005, 42, 110-119. [Referencia cruzada]

52. Grimstad, PR; Walker, ED Aedes triseriatus (Diptera: Culicidae) y Virus La Crosse. IV. La privación nutricional de las larvas afecta las barreras de los adultos a la infección y la transmisión. J. Med. Entomol. 1991, 28, 378–386. [Referencia cruzada]

53. Thomas, RE; Wu, WK; Verleye, D.; Rai, KS Grosor de la lámina basal del intestino medio y tasas de diseminación del virus del dengue-1 en cepas de laboratorio de Aedes albopictus (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 1993, 30, 326–331. [Referencia cruzada]

54. Armstrong, PM; Ehrlich, HY; Magalhaes, T.; Molinero, señor; Conway, PJ; Bransfield, A.; Misencik, MJ; Gloria-Soria, A.; Warren, JL; Andreadis, TG; et al. Las ingestiones sucesivas de sangre mejoran la diseminación del virus entre los mosquitos y aumentan el potencial de transmisión. Nat. Microbiol. 2020, 5, 239–247. [Referencia cruzada] [PubMed]

55. Fuego, A.; Xu, S.; Montgomery, MK; Kostas, SA; Conductor, SE; Mello, CC Interferencia genética potente y específica por ARN bicatenario en Caenorhabditis Elegans. Naturaleza 1998, 391, 806–811. [Referencia cruzada] [PubMed]

56. Blair, CD Mosquito RNAi es la principal vía inmune innata que controla la infección y transmisión de arbovirus. Microbiol del futuro. 2011, 6, 265–277. [Referencia cruzada] [PubMed]

57. Campbell, CL; Keene, KM; Brackney, DE; Olson, KE; Blair, CD; Wilusz, J.; Foy, BD Aedes aegypti utiliza interferencia de ARN en defensa contra la infección por el virus Sindbis. BMC Microbiol. 2008, 8, 47. [Referencia cruzada]

58. Sánchez-Vargas, I.; Scott, JC; Poole-Smith, BK; Franz, asombro; Rie Barbosa-Solomieu, V.; Wilusz, J.; Olson, KE; Blair, CD Las infecciones por el virus del dengue tipo 2 del Aedes aegypti están moduladas por la vía de interferencia del ARN del mosquito. Patógeno PLoS. 2009, 5, e1000299. [Referencia cruzada]

59. Khoo, CC; Piper, J.; Sánchez-Vargas, I.; Olson, KE; Franz, AW La vía de interferencia del ARN afecta la infección del intestino medio y las barreras de escape para el virus Sindbis en Aedes aegypti. BMC Microbiol. 2010, 10, 130. [Referencia cruzada]

60. Franz, AWE; Sánchez-Vargas, I.; Adelman, ZN; Blair, CD; Beaty, BJ; James, AA; Olson, KE Ingeniería de resistencia basada en interferencia de ARN al virus del dengue tipo 2 en Aedes aegypti genéticamente modificado. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. EE.UU. 2006, 103, 4198–4203. [Referencia cruzada]

61. Bonizzoni, M.; Dunn, Washington; Campbell, CL; Olson, KE; Marinotti, O.; James, Variación de la cepa AA en el transcriptoma del vector del dengue, Aedes aegypti. Genes G3|Genomas|Genet. 2012, 2, 103–114. [Referencia cruzada]

62. Carvalho-Leandro, D.; Ayres, CFJ; Guedes, DRD; Suesdek, L.; Melo-Santos, MAV; Oliveira, CF; Cordeiro, MT; Regis, LN; Marqués, ET; Gil, LH; et al. Variaciones de la transcripción inmune entre poblaciones de Aedes aegypti con distinta susceptibilidad al serotipo 2 del virus del dengue. Acta Trop. 2012, 124, 113-119. [Referencia cruzada]

63. Dostert, C.; Jouanguy, E.; Irving, P.; Troxler, L.; Galiana-Arnoux, D.; Hetru, C.; Hoffmann, JA; Imler, JL La vía de señalización Jak-STAT es necesaria pero no suficiente para la respuesta antiviral de Drosophila. Nat. Inmunol. 2005, 6, 946–953. [Referencia cruzada]

64. Souza-Neto, JA; Sim, S.; Dimopoulos, G. Una función evolutiva conservada de la vía JAK-STAT en la defensa contra el dengue. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. Estados Unidos 2009, 106, 17841–17846. [Referencia cruzada] [PubMed]

65. Jupatanakul, N.; Sim, S.; Angleró-Rodríguez, YI; Souza-Neto, J.; Das, S.; Poti, KE; Rossi, SL; Bergren, N.; Vasilakis, N.; Dimopoulos, G. Inmunidad mediada por vía JAK/STAT de Aedes aegypti contra el virus del dengue. PLoS Negl. tropo. Dis. 2017, 11, e0005187. [Referencia cruzada] [PubMed]

66. Behura, SK; Gómez-Machorro, C.; Debruyn, B.; Lovin, DD; Harker, BW; Romero-Severson, J.; Mori, A.; Severson, DW Influencia del genotipo del mosquito en la respuesta transcripcional a la infección por el virus del dengue. Función. Integral Genoma. 2014, 14, 581–589. [Referencia cruzada] 6

7. Hoffmann, JA La respuesta inmune de Drosophila. Naturaleza 2003, 426, 33–38. [Referencia cruzada] [PubMed]

68. Ramírez, JL; Dimopoulos, G. El control de la vía de señalización inmune de peaje conservó las defensas contra el dengue en diversos Ae. aegypti y contra múltiples serotipos del virus del dengue. Desarrollo. comp. Inmunol. 2010, 34, 625–629. [Referencia cruzada] [PubMed]

69. Xi, Z.; Ramírez, JL; Dimopoulos, G. La vía de peaje del Aedes aegypti controla la infección por el virus del dengue. Patógeno PLoS. 2008, 4, e1000098. [Referencia cruzada]

70. Sanders, recursos humanos; Foy, BD; Evans, AM; Ross, LS; Beaty, BJ; Olson, KE; Gill, SS El virus Sindbis induce procesos de transporte y altera la expresión de genes de la vía de inmunidad innata en el intestino medio del vector de la enfermedad, Aedes aegypti. Bioquímica de insectos. Mol. Biol. 2005, 35, 1293–1307. [Referencia cruzada]

71. Costa, A.; Enero, E.; Sarnow, P.; Schneider, D. La vía Imd está implicada en las respuestas inmunitarias antivirales en Drosophila. PLoS ONE 2009, 4, e7436. [Referencia cruzada]

72. Oberst, A.; Bender, C.; Green, DR Vivir con la muerte: la evolución de la vía mitocondrial de la apoptosis en animales. La muerte celular difiere. 2008, 15, 1139–1146. [Referencia cruzada]

73. Vaux, DL; Korsmeyer, SJ Muerte celular en desarrollo. Celda 1999, 96, 245–254. [Referencia cruzada]

74. Rudin, CM; Thompson, CB APOPTOSIS Y ENFERMEDAD: Regulación y relevancia clínica de la muerte celular programada. Año. Rev. Med. 1997, 48, 267–281. [Referencia cruzada] [PubMed]

75. Clouston, WM; Kerr, JFR Apoptosis, linfocitotoxicidad y contención de infecciones virales. Medicina. Hipótesis 1985, 18, 399–404. [Referencia cruzada] [PubMed]

76. Clem, RJ; Miller, LK La apoptosis reduce tanto la replicación in vitro como la infectividad in vivo de un baculovirus. J. Virol. 1993, 67, 3730–3738. [Referencia cruzada]

77. Alberts, B.; Johnson, A.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; Walter, P. Muerte celular programada (apoptosis). En Biología Molecular de la Célula, 4ª ed.; Garland Science: Nueva York, NY, EE. UU., 2002.

78. Crook, NE; Clem, RJ; Miller, LK Un gen de baculovirus inhibidor de la apoptosis con un motivo similar a un dedo de zinc. J. Virol. 1993, 67, 2168–2174. [Referencia cruzada]