¿Cuánto sabes sobre la enfermedad renal crónica?
Mar 03, 2022
Contacto: emily.li@wecistanche.com
Evaluación de la albuminuria y su relación con la presión arterial en perros con enfermedad renal crónica
Ángela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
Palabras claveAlbuminuria canina,enfermedad renal cronica, ELISA, hipertensión,función renal
FondoLa microalbuminuria y la hipertensión se han asociado durante mucho tiempo con un pronóstico reservado en pacientes humanos con una variedad de enfermedades. En medicina veterinaria, las pruebas de microalbuminuria se han utilizado para la detección tempranaDaño en el riñón, pero hay poca información sobre su asociación con la presión arterial alta en perros conenfermedad renal cronica(ERC). Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar la albuminuria y su asociación con la hipertensión arterial en perros con ERC.
MétodosLa relación albúmina urinaria: creatinina (UAC), la relación proteína urinaria: creatinina (UPC) y la presión arterial sistólica se determinaron en 39 perros clínicamente sanos y 40 perros con ERC.
ResultadosUAC en perros con CKD (rango, {{0}}.002–7.99; mediana, {{10}}.38) fue estadísticamente diferente de la de los perros de control (rango, 0.0005–0.01; mediana, {{42} }.002). Se detectaron microalbuminuria (UAC 0.03–0.3) y microalbuminuria (UAC 4 0.3) en el 32.5 por ciento y el 50 por ciento de los perros con ERC, respectivamente. El sesenta por ciento (24/40) de los perros con ERC tenían una presión sistólica Z180 mmHg; en estos perros, la relación UAC (rango, 0,006-7,99; mediana, 1,72) fue significativamente mayor que en perros con ERC y presión sistólica de 180 mmHg (rango, 0,002-4,83; mediana, 0,10). De los perros hipertensos con ERC, aquellos con UPC 41.0 generalmente tenían macroalbuminuria, aquellos con UPC 0.5–1.0 usualmente tenían microalbuminuria y aquellos con UPC o 0.5 generalmente carecían de albuminuria.
ConclusionesLa relación UAC fue mayor en los perros hipertensos que en los normotensos con ERC. Las pruebas diseñadas para detectar microalbuminuria pueden ser útiles para perros hipertensos con ERC y un UPC 1.0 para detectar el inicio y la magnitud de la albuminuria. Una vez que se manifiesta la macroalbuminuria, la relación UPC en sí puede usarse para el mismo propósito.
Cistanche tratar la enfermedad renal
Introducción
La proteinuria ha sido implicada como un mediador independiente de la progresión deenfermedad renal.1,2En ratas con proteinuria inducida experimentalmente y en humanos con proteinuria naturalinsuficiencia renal, la magnitud de la proteinuria se correlaciona con la tasa de progresión deinsuficiencia renal.3,4 Recientemente, la mortalidad general y el número de crisis urémicas se asociaron con proteinuria en perros conenfermedad renal cronica(ERC).5
La microalbuminuria generalmente se define como albuminuria subclínica, es decir, una tasa de excreción de albúmina anormalmente elevada pero no detectable mediante procedimientos de laboratorio estándar, como el método de tira reactiva de rutina.6 Esto significa que la tasa de excreción de albúmina está por encima del nivel normal pero por debajo del nivel proteinúrico habitual. En humanos, la microalbuminuria ha sido reconocida durante mucho tiempo como un factor predictivo de proteinuria clínica de aparición tardía y enfermedad renal en etapa terminal.6así como del desarrollo de nefropatía diabética.7De manera similar, la microalbuminuria puede preceder a la proteinuria en perros con nefropatía hereditaria,8en perros infectados con Dirofilaria immitis,9y en Wheaten Terriers de pelo blando genéticamente predispuestos al desarrollo de enfermedad glomerular.10
La coexistencia de hipertensión y proteinuria ya ha sido reportada en perros con hiperadrenocorticismo11–13y diabetes mellitus,14,15pero no se han publicado informes sobre la asociación de la presión arterial sistémica con la gravedad de la proteinuria y/o albuminuria en perros con ERC. Whittemore et al.16mencionaron que en los gatos existe una asociación significativa entre la relación albúmina: creatinina (UAC) en la orina, la hipertensión y la azotemia, y se esperarían resultados similares en los perros, pero el estudio no apoyó esta conclusión.
Es fundamental no solo diagnosticar albuminuria y/o proteinuria, sino identificar y controlar otros factores que también la agravan.17–19Hipertensión sistémica, probablemente secundaria en perros conenfermedad renal,20puede resultar en glomeruloesclerosis, atrofia glomerular y glomerulitis proliferativa. Las lesiones arteriolares renales hipertensivas pueden causar degeneración tubular renal y fibrosis intersticial.21
Los ensayos semicuantitativos (p. ej., tiras reactivas) a menudo subestiman la proteinuria porque los perros con ERC suelen tener muestras de orina diluidas. Por otro lado, la relación UAC está altamente correlacionada con la concentración de albúmina urinaria medida por la recolección de orina cronometrada y corrige la variabilidad en la diuresis y la concentración de orina.22,23 En humanos, la microalbuminuria se define como 30–300 mg de albúmina/g de creatinina, con una relación UAC de 0,03–0,3 mg/mg.24,25Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia y magnitud de la albuminuria en perros con ERC e investigar si la hipertensión está asociada con el aumento de la excreción de albúmina. Para lograr este objetivo, se desarrolló un ELISA de captura cuantitativa para cuantificar la albúmina en muestras de orina de perros con ERC, y se determinó la relación UAC para evaluar la severidad de la albuminuria.
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Materiales y métodos
animales
Todos los procedimientos que involucran el uso de animales fueron aprobados por el Comité de Ética para el Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad de Sao Paulo (protocolo #378/2003). El grupo control estuvo compuesto por 39 perros normotensos clínicamente sanos de ambos sexos (23 machos y 16 hembras), de 1 a 5 años de edad y de diferentes razas. El grupo de ERC estuvo compuesto por 40 perros (20 machos y 20 hembras), de 2 a 18 años, también de diferentes razas, con diagnóstico clínico de ERC categorizados como estadios 3 o 4 según el sistema de clasificación por etapas propuesto por International Renal Interest Society.26 Los criterios para incluir perros en el grupo de ERC fueron: antecedentes y hallazgos de laboratorio complementarios compatibles con ERC, incluyendo anemia no regenerativa, isostenuria y azotemia renal crónica (concentración sérica de creatinina Z2.0mg/dL durante 4 2 meses en perros hidratados), así como la no administración previa de medicación antihipertensiva.
Presión arterial
La presión arterial sistólica se midió con el detector de flujo Doppler (Doppler Ultrasound Parks Medical Model 811B, Las Vegas, NV, EE. UU.). El ancho del manguito se eligió para que fuera del 30 al 40 por ciento de la circunferencia de la extremidad en el sitio de colocación. Para este estudio, se consideró que la hipertensión estaba presente cuando la media de al menos 5 mediciones diferentes realizadas en sucesión eraZ180 mm Hg.27 Los perros se colocaron y mantuvieron en un entorno tranquilo con el propietario antes del procedimiento. El mismo médico realizó las mediciones de la presión arterial en todos los perros del estudio.
análisis de orina
Las muestras de orina se recolectaron asépticamente mediante cistocentesis o cateterismo uretral y se enviaron para un análisis de orina completo, incluida la evaluación microscópica del sedimento de orina. Se excluyeron los animales cuyas muestras de orina tenían evidencia macroscópica de hematuria y/o evidencia microscópica de piuria y bacteriuria. Se congelaron alícuotas de sobrenadante de orina y se almacenaron a –201C durante un máximo de 1 año para la posterior determinación de la relación UAC.
Purificación de albúmina canina e inmunización de conejos
En primer lugar, la albúmina canina liofilizada (Fracción V, #A9263, Sigma, St Louis, MO, EE. UU.) se purificó adicionalmente mediante cromatografía de afinidad en columnas Blue Sepharose y Q-Sepharose (GE Biotech, Piscataway, NJ, EE. UU.). Posteriormente, se inmunizaron 2 conejos por vía intramuscular con
la albúmina purificada en adyuvante de Freund a intervalos de quince días y la IgG se aisló del suero.28
Electroforesis y transferencia Western de albúmina canina purificada
La transferencia de Western se logró mediante la modificación de un protocolo descrito previamente.29 Brevemente, se sometieron a electroforesis muestras de orina no reducidas de un perro sano y un perro con ERC, una muestra de suero de un perro sano y albúmina canina purificada en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio al 11 por ciento.30Las proteínas se transfirieron a láminas de membrana de nitrocelulosa (tamaño de poro {{0}}, 22 mm, Sigma) a 15 V durante 2 h, utilizando un sistema de transferencia semiseco (BioRad, Hercules, CA, EE. UU.). Las membranas se enjuagaron con tampón de lavado (Tris 10 mM, NaCl 150 mM, Tween 20 al 0,1 por ciento [v/v], pH 7,5), y luego se incubaron con solución de bloqueo (5 por ciento [v /v] gelatina de piel de pescado de agua fría [Sigma G7765] disuelta en tampón de lavado) durante 18 ha 41ºC. Las membranas se incubaron con anticuerpos disueltos en tampón de lavado que contenía gelatina de pescado al 0,5 por ciento (v/v) durante 2 ha temperatura ambiente con agitación. Para evaluar la especificidad de los anticuerpos contra la albúmina canina purificada, se incubaron membranas con albúmina canina IgG total de conejo. Después del lavado, las tiras se incubaron con conjugado de peroxidasa IgG anti-conejo de cabra (Sigma A6154) durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación. Todos los anticuerpos y conjugados se diluyeron en un tampón de lavado que contenía gelatina de pescado al 0,5 por ciento (v/v). La reacción se desarrolló como se ha descrito anteriormente.31
ELISA para albúmina canina en muestras de orina
Para medir la albúmina en las muestras de orina, se cubrieron placas de microtitulación (Maxisorp-Nunc Immunoplate, Montreal, Canadá) durante la noche a 41 °C con una solución de 100 mg/ml de albúmina anticanina IgG de conejo disuelta en 0. Tampón de carbonato 1 M (pH 9.6), y luego se bloqueó con caseína al 3 por ciento disuelta en tampón de carbonato. Se construyeron curvas estándar de seis puntos para la albúmina usando albúmina canina purificada, diluida en serie (a concentraciones de 250.0, 83,3, 27,8, 9,3, 3,1 y 1,0 ng/mL) en incubación tampón (Tween 20 al 0,05 por ciento y gelatina de pescado al 0,6 por ciento en solución salina tamponada con fosfato, pH 7,4). Las muestras de orina también se diluyeron adecuadamente (1:100, 1:300, 1:500, 1:1000, 1:10,000 y 1:50 000) en tampón de incubación para que las reacciones ocurren dentro del rango lineal de la curva estándar (1.03–250 ng/mL). Las muestras y los patrones se analizaron por triplicado. Se usó el mismo anticuerpo como anticuerpo secundario, pero se conjugó con biotina29,32 y se usó a una concentración de 3,15 ng/mL, disuelto en tampón de incubación. Luego, las placas se incubaron con 100 ng/mL de conjugado de avidina-peroxidasa (Sigma A3151) y, posteriormente, con un reactivo revelador de color nuevo, como se describe en otro lugar.33 La concentración de albúmina en orina para cada muestra se extrapoló de la curva estándar y los resultados se corrigieron para la dilución inicial de la muestra.
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Proporciones UAC y proteína urinaria: creatinina (UPC)
La concentración total de proteína en orina (mg/dL) se midió utilizando un ensayo Coomassie G{{0}}34; cada muestra se analizó por triplicado y los valores se obtuvieron a partir de una curva estándar de 8-puntos (0.025, 0.075, {{16 }}.10, 0,50, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 y 3,0 mg/ml). La concentración de creatinina en orina (mg/dl) se determinó mediante un ensayo de ácido pícrico35 en un analizador de química clínica automatizado (Liasys, AMS, Roma, Italia) y se realizó con controles de calidad (Precinorm Uplus y Precipath Uplus, Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania). La UAC se determinó utilizando la concentración de albúmina (mg/dL) obtenida por ELISA. Debido a que todos los análisis se informaron como mg/dL, UAC y UPC se expresaron sin unidades.
análisis estadístico
La distribución gaussiana se investigó utilizando la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Las proporciones de UPC y UAC no se distribuyeron normalmente, por lo que se utilizó la prueba de Mann-Whitney en las comparaciones. Se utilizó el paquete de software SigmaStat 3.1 (Chicago, IL, EE. UU.) para el análisis estadístico. Las diferencias con p 0,05 se consideraron estadísticamente significativas.
Resultados
La albúmina anticanina IgG de conejo fue específica para la albúmina canina purificada según la transferencia de Western (Figura 1), porque solo se encontró 1 banda de proteína de masa molecular relativa similar a la de la albúmina canina en todos los carriles. El protocolo ELISA utilizado para medir la concentración de albúmina en las muestras de orina fue extremadamente sensible, con un límite de detección de aproximadamente 0,5 ng/mL.
El índice UPC en perros normotensos clínicamente sanos (n {{0}}; rango, 0.04–0.29; mediana, 0 .10) fue significativamente menor (P o.0{{30}}01) que en perros con ERC (n=40; rango, 0.13–25.08 ; mediana, 1.86). El sesenta y cinco por ciento (26/40) de los perros con ERC tenían UPC 4 1.0, el 20 por ciento (8/40) tenían un UPC entre 0,5 y 1,0, y el 15 por ciento (6/40) tenían un UPC o 0,5 (Tabla 1). La mayoría (38/40, 95 por ciento) de los perros con ERC tenían una relación UPC Z0.2.
La relación UAC en perros clínicamente sanos (rango, {{0}}.0005–0.01; mediana, 0,002) también fue significativamente menor (P < 0,0001)="" que="" en="" perros="" con="" erc="" (rango,="" 0,002–7,99;="" mediana,="" 0,38)="" (figura="" 2).="" la="" relación="" uac="" varió="" de="" 0,03="" a="" 0,3="" (microalbuminuria)="" en="" el="" 32,5="" %="" (13/40)="" de="" los="" perros="" con="" erc="" y="" fue="" 4="" 0,3="" (macroalbuminuria)="" en="" el="" 50="" %="" (20/40)="" de="" los="" perros="" con="" erc="" (tabla="" 1="">
Se detectó hipertensión en 24/40 (60 por ciento) perros con ERC. Los perros con hipertensión tenían entre 2 y 18 años (media más -DE, 9,1 más - 3,7 años), mientras que los perros normotensos tenían entre 2 y 12 años (7,9 más - 3,3 años ).
Considerando la microalbuminuria como el rango UAC definido para humanos ({{0}}.03–0.3), la microalbuminuria se detectó con mayor frecuencia en normotensos (7/16, 43.7 por ciento) que en hipertensos (6 /24, 25 por ciento) perros con ERC. Por el contrario, la macroalbuminuria se observó con mayor frecuencia en perros hipertensos (15/24, 62,5 %) que en normotensos (5/16, 31,3 %) con ERC. No se observó albuminuria en 3/24 (12,5 por ciento) de perros hipertensos y en 4/16 (25,0 por ciento) de perros normotensos con ERC (Tabla 1).
La relación UAC en perros hipertensos con ERC (n {{0}}; rango, {{10}}.006–7.99; mediana, 1.72 ) fue significativamente mayor (P =.0183) que en perros normotensos con ERC (n=16; rango, 0.002–4.83; mediana, 0.10) (Figura 3). Se observó hipertensión en 6/13 (46,1 por ciento) de perros microalbuminúricos y en 15/20 (75 por ciento) de perros macroalbuminúricos con ERC. No se observaron diferencias significativas (P =.062) en la relación UPC entre hipertensos (n=24; rango, 0.20–25.08; mediana, 3.07) y normotensos (n=16; rango, 0,13–4,70; mediana, 1,10) perros con ERC.
Discusión
Las proporciones de UAC obtenidas en perros clínicamente sanos usando nuestra técnica ELISA de captura cuantitativa fueron similares a las reportadas para personas sanas36,37y gatos38La magnitud de la albuminuria en perros con ERC, evaluada por la UAC, fue estadísticamente mayor que la de los perros control sanos. Teniendo en cuenta que los perros con ERC se clasificaron en estadios 3 y 4 de la enfermedad, la mayor magnitud de la albuminuria en este grupo podría estar correlacionada con la tasa de progresión de la enfermedad renal, como se demostró previamente en ratas y humanos.3,4
La mitad de los perros con CKD tenían concentraciones de albúmina en la orina en el rango macroalbuminúrico como era de esperar, pero el 32,5 % de los perros con CKD eran microalbuminúricos y el 17,5 % eran normoalbuminúricos. Por lo tanto, en este último grupo, el uso de métodos de rutina para detectar microalbuminuria podría ser de algún beneficio. Además, las pruebas para detectar la microalbuminuria podrían usarse para controlar el tratamiento y seguir la progresión de la enfermedad no solo en perros microalbuminúricos sino también normoalbuminúricos con ERC. El uso de esas pruebas en perros normoalbuminúricos podría ayudar a los médicos a reconocer la aparición temprana de albuminuria e introducir medidas terapéuticas adecuadas tan pronto como se detecte; en cambio, en perros microalbuminúricos, el objetivo sería añadir nuevos fármacos a la pauta de tratamiento y/o aumentar la dosis de los fármacos actuales para reducir la magnitud de la albuminuria y por tanto retrasar su progresión a macroalbuminuria.
The data reported herein that all dogs with CKD and macroalbuminuria also had a UPC>1.0 puede sugerir que cuando la macroalbuminuria ya se ha manifestado, los valores de UPC se pueden usar para los fines mencionados anteriormente, ya que los perros han progresado a una proteinuria manifiesta; sería innecesario utilizar pruebas tan sensibles como el ELISA. La mayoría de los perros con ERC con proporciones de UPC entre 0.5 y 1.0 presentaban microalbuminuria y la mayoría de ellos con UPC< 0.5="" were="" no="" albuminuria.="" these="" findings="" suggest="" that="" upc="" values="" between="" 0.5="" and="" 1.0="" reflect="" the="" presence="" of="" microalbuminuria.="" for="" upc=""><0.5, the="" specific measurement="" of="" albuminuria="" would="" be="" recommended to="" detect="" the="" initial="" development="" of="">
Se diagnosticó hipertensión en el 60 por ciento de los perros con ERC, un hallazgo que concuerda con estudios previos.20,39,40Un alto porcentaje (62,5 por ciento) de perros con hipertensión tenían ERC macroalbuminúrica. La presión arterial sistólica alta estuvo presente en el 46,1 por ciento de los perros con ERC microalbuminúrica. Debido a que la proteinuria se asocia con un mayor riesgo de desarrollar crisis urémica, progresión de la ERC y muerte,5 los tratamientos diseñados para disminuir la hipertensión podrían retardar la progresión de la insuficiencia renal y prolongar la supervivencia en perros hipertensos con ERC. La comparación entre los valores de UAC en perros normotensos vs hipertensos con ERC demostró ser estadísticamente significativa, demostrando tanto la probable relación entre estos parámetros como los efectos adversos que la presión arterial sistólica elevada podría tener en el desarrollo de albuminuria, similar a lo que se ha demostrado para humanos41–43
Podrían surgir preguntas sobre las diferencias en los valores de UAC entre perros hipertensos y normotensos con ERC en este estudio, ya que podrían atribuirse a una distribución desigual de los animales; sin embargo, todos los perros se encontraban en las etapas 3 y 4 de la enfermedad, y la gravedad de la anemia y la azotemia fueron similares para ambos grupos, en consonancia con las etapas avanzadas de la enfermedad.
En medicina humana, el hallazgo simultáneo de microalbuminuria e hipertensión generalmente impulsa la adopción de estrategias terapéuticas específicas. El uso de inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina en humanos con diabetes mellitus tipo 1, hipertensión y microalbuminuria puede disminuir el curso progresivo a proteinuria masiva.44Este mismo tratamiento también es beneficioso en diabéticos normotensos microalbuminúricos.45,46En ratas hipertensas con remanenteriñones,el tratamiento con enalapril mantuvo la presión arterial sistémica en niveles normales y limitó drásticamente el desarrollo de proteinuria y lesiones glomerulares.47Nuestros hallazgos indican que las pruebas de microalbuminuria pueden usarse como una herramienta de seguimiento para evaluar la progresión de la enfermedad y establecer enfoques terapéuticos y preventivos en pacientes caninos, especialmente cuando la microalbuminuria empeora gradualmente debido a la hipertensión.
En conclusión, las proporciones de UAC en perros hipertensos con ERC en nuestro estudio fueron más altas que en perros normotensos, lo que sugiere que la presión sistólica alta podría estar asociada con cambios en la estructura glomerular. Las pruebas diseñadas para detectar microalbuminuria pueden ser útiles en perros hipertensos con ERC y UPC 1.0 para detectar la aparición de albuminuria o para controlar la dosis de fármacos antihipertensivos. Una vez que se manifiesta la macroalbuminuria, la relación UPC en sí puede usarse para el mismo propósito.
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Expresiones de gratitud
Con el apoyo de una beca (#03/10,426-3) de la Fundaca˜o de Amparo a` Pesquisa do Estado de Sa˜o Paulo – FAPESP.
Divulgación: los autores han indicado que no tienen afiliaciones ni participación financiera con ninguna organización o entidad con un interés financiero o en competencia financiera con el tema o los materiales discutidos en este documento.
De: 'Evaluación de la albuminuria y su relación con la presión arterial en perros con enfermedad renal crónica' porÁngela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
-----Veterinario Clin Pathol39/2 (2010) 203–209 c 2010 Sociedad Americana de Patología Clínica Veterinaria DOI:10.1111/j.1939-165X.2009.00207.x
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