Determinación por HPLC de equinacósido en Cistanche Cistanche

Determinación por HPLC de equinacósido en Cistanche Cistanche

Para más información:ali.ma@wecistanche.com

Objetivo:HPLC determinó la cantidad deechinacósidoenCistanchemolido en condiciones de nitrógeno líquido, así como en condiciones de secado al aire natural, comparándolo encistanche salvajeyCistanche cultivada artificialmente.

Métodos:Se utilizó el sistema HPLC lc{{0}}a (Shimadzu, Japón). La columna era YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japón); Fase móvil: acetonitrilo-metanol-1 por ciento de ácido fórmico (10:15:75); Longitud de onda de detección 334 nm; Caudal 0,7 mg · ml-1. Temperatura de la columna 30 grados C.

Resultados:las diferentes condiciones de tratamiento tuvieron un efecto muy claro en el contenido de equinacósido, con niveles generalmente más altos de equinacósido en Cistanche molida bajo nitrógeno líquido que en aquellas molidas bajo condiciones naturales de secado al aire; El contenido de ingrediente activo de wildCistancheera mucho más alto que el de la cultura artificial.

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Cistanche es una especie en peligro de extinción, una planta parásita que habita en las raíces de Clostridium, Salix rubrum. En China, Cistanche se distribuye principalmente en Mongolia Interior, Ningxia, Gansu y Xinjiang, con una excelente reputación de "ginseng del desierto", que es de gran valor medicinal. Sus principales ingredientes medicinales son los glucósidos feniletanólicos, que se pueden dividir en equinacósido, cohosido de hoja, cistanche y otros dependiendo de sus sustituyentes. Entre ellos, el echinacósido ha mejorado la función sexual, los efectos antioxidantes y de eliminación de radicales libres, pero también tiene algunos efectos antiapoptóticos. Desde la década de 1980, la tecnología HPLC, que proporciona un método simple y rápido para la separación de glucósidos feniletanólicos, ha sido ampliamente utilizada en la separación de productos naturales. Se eligió un método de HPLC para analizar el contenido de Cistanche, el principal componente activo de Cistanche silvestre y cultivado artificialmente, en diferentes períodos de crecimiento, proporcionando una base científica para el desarrollo y la utilización racionales de Cistanche y para la evaluación efectiva de su calidad.

Instrumentos y reactivos

Shimadzu, Japón lc-20un aparato de HPLC, lc-20en una bomba de émbolo doble en tándem, cto-20un horno de columna, spda-20un detector de longitud de onda dual UV-Vis; Kunshan kq-100 limpiador ultrasónico; acetonitrilo (cromatográficamente puro, Instituto de Investigación Química de Tianjin Guangfu); Metanol (cromatográficamente puro, Instituto de Investigación Química de Tianjin Guangfu); ácido fórmico (cromatográficamente puro, Instituto de Investigación Química de Tianjin Guangfu); agua destilada

Control: equineósido, contenido mayor o igual al 98,43 por ciento (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Cinco muestras de Cistanche: plantadas artificialmente durante un año con la siguiente Cistanche, plantadas artificialmente para Cistanche, Cistanche secadas artificialmente, Cistanche silvestre y plantadas artificialmente durante más de tres años con Cistanche.

2 métodos y resultados

2.1 determinación de las condiciones cromatográficas

Con el fin de separar el pico del equinósido medido en el cromatograma LC de otras sustancias, así como controlar la presión de la bomba y la tabla de tiempo para estar dentro de un rango adecuado, se llevó a cabo la modificación experimental de las condiciones cromatográficas, y después experimentos de optimización con fase móvil, se concluyó que a mayor temperatura, menor tiempo de retención y menor concentración, menor presión de bomba y menor tiempo de retención, pero la altura del pico se hizo menor, lo que fue desfavorable para el medición. Finalmente se determinó que la fase móvil era acetonitrilo-metanol-1 por ciento de ácido fórmico (10:15:75), la longitud de onda de detección 334 nm, el caudal 0,7 mL/min y la temperatura de la columna 30 grados C, de acuerdo con las condiciones objetivas de temperatura ambiente y la presión máxima de carga de la bomba, lo que dio como resultado abundante información con formas de pico nítidas y buena separación de los constituyentes.

2.2 determinación de columnas

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japón).

2.3 preparación de soluciones experimentales

2.3.1 preparación de soluciones patrón

Se pesó con precisión una cantidad adecuada de estándar de equinósido y se añadió a la fase móvil acetonitrilo-metanol-1 por ciento de ácido fórmico (10:15:75) para hacer 0.0 6 mg · ML - 1, 0.05 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1, y 0,005 mg · ML - 1 soluciones de estándar de equinacósido.

2.3.2 preparación de la solución de prueba

Cantidades apropiadas de Cistanche fresca plantada artificialmente (menos de un año), Cistanche artificialmente fresca y Cistanche fresca silvestre se molieron hasta convertirlas en polvo usando un mortero bajo nitrógeno líquido; Además, una cantidad adecuada de las 3 Cistanche anteriores se cortó en bloques, se secó al aire de forma natural en ventilación a la sombra y, después del secado, se pulverizó y se convirtió en polvo. La cistanche seca artificial y la cistanche seca silvestre durante tres años se molieron directamente en el polvo. 0.5 g de Cistanche en polvo preparado anteriormente se tomaron y se colocaron en un tubo de centrífuga, se agregaron 25 ml de fase móvil, se pesaron y se remojaron durante 30 min, se sonicaron durante 40 min, se enfriaron y luego se pesó nuevamente para compensar el peso faltante con fase móvil, se agitó y centrifugó, y el sobrenadante se tomó para filtración por membrana de filtro microporoso 0.45 μM.

2.4 gráficos de curvas de regresión para la muestra estándar de equinacósido

Las muestras estándar preparadas de equinósido se inyectaron en el aparato de LC por separado, y la concentración del control (mg · L{{0}}) se usó como abscisa, y las áreas de los picos correspondientes se ordenaron para trazar la curva estándar, dando como resultado la ecuación de regresión: y=66 867 100x-46 360.83, R2=0.98637, que mostró el equinósido en 0.1 ~ 1.2 ug dentro de una buena relación lineal.

3 Discusiones

El echinacósido es uno de los principales componentes activos de Cistanche, que bien puede representar la base química del efecto farmacológico de Cistanche, haciendo corresponder la evaluación de la calidad del material medicinal y su efecto farmacológico, y mejorando la pertinencia de la evaluación de la calidad de Cistanche.

Las diferentes condiciones de tratamiento tuvieron un efecto claro en el contenido de equinacósido, con niveles generalmente más altos de equinacósido en Cistanche molida bajo nitrógeno líquido que en aquellas molidas bajo condiciones naturales de secado al aire. El secado al aire común disminuyó la cantidad de equinósido, que podría haberse consumido durante el secado al aire o convertido. Para evitar la disminución del contenido de principio activo y garantizar la eficacia de Cistanche, se debe seleccionar un tratamiento adecuado.

De manera consistente, la mayoría creía que el ambiente de cultivo artificial de Cistanche, así como los hábitos de crecimiento, eran indistinguibles de los silvestres sin diferencias en la calidad, tendían a poner énfasis solo en el rendimiento y no analizaban la calidad. El presente estudio mostró que la cantidad de equinacósido Cistanche cultivado artificialmente fue menor que la de equinacósido Cistanche salvaje. El más alto fue {{0}}.3360 por ciento de cistanche silvestre y el más bajo fue 0.007 0 por ciento de Cistanche artificial. Por lo tanto, aún debe estudiarse en tecnología de cultivo para mejorar el contenido de ingredientes activos.

La calidad de Cistanche depende de la cantidad de su ingrediente activo, el echinacósido, que a su vez tiene una fuerte relación con la estación, el momento y el método de recolección, por lo que la recolección de Cistanche debe tener en cuenta el estado de acumulación del ingrediente activo y el etapa de crecimiento y desarrollo. Considere tanto la calidad como el rendimiento.

El método mencionado en este documento es simple, preciso, reproducible y exacto para determinar el equineósido. Útil para la determinación de Cistanche.