Glucósidos monoterpénicos iridoides y acíclicos, kancanosidos L, M, N, O y P de Cistanche Tubulosa

cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WDERECHA(Orobanchaceae) es una planta parásita perenne que crece en las raíces deSalvadoraocalotropisespecie, distribuida en el norte de África, Arabia y países asiáticos.1) Los tallos de esta planta (Kanka-nikujuyou en japonés) se han utilizado tradicionalmente para laTratamiento de la impotencia, esterilidad, lumbago y debilidad corporal.así como un agente promotor de la circulación sanguínea.1,2) Durante nuestros estudios sobre componentes bioactivos de tallos deC. tubulosa, 3-6) Anteriormente informamos veinticuatro aminoglucósidos feniletanoides, incluidos los kancanosidos H.1, H2, I, J1, J2, K1y k2, y dos oligoazúcares acilados de tallos frescos deC. tubulosa. 5,6) Además, principalGlucósidos feniletanoideos, echinacósidos, acteosidos e isoacteosidos., inhiben el aumento de los niveles séricos de aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (sal) en el hígado lesionado de los ratones inducido porD-galactosamina (D-GalN)/ lipopolisacárido a dosis de 25-100 mg/kgpor sistema operativo(p.o.). También se aclararon los requisitos estructurales de los glucósidos feniletanoides para la actividad hepatoprotectora.5) En este estudio continuo sobre los componentes de los tallos frescos deC. tubulosa, además aislamos once glucósidos iridoides, incluidos los kancanosidos L (1), M (2), y norte (3), siete glucósidos monoterpénicos acíclicos, incluidos los kancanosidos O (4) y P (5), tres fenilpropanoides y cuatro lignanos. Este artículo trata del aislamiento y elucidación de la estructura de cinco nuevos compuestos (1-5).

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA ALIVIAR LA DISFUNCIÓN SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Se extrajeron tallos frescos de C. tubulosa (cultivados en Urumqi, provincia de Xinjiang, China) con metanol a reflujo para producir un extracto metanólico (8,36 % de los tallos frescos). Del extracto metanólico, se obtuvieron fracciones eluidas con H2O y MeOH (5,63% y 2,73%, respectivamente) mediante cromatografía en columna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) como se describió anteriormente.5) La fracción eluida con MeOH se sometido a cromatografías en columna de SiO2 y ODS y finalmente a HPLC para proporcionar los kancanosidos L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%), y P (5, 0 .0002%), 6-desoxicatalpol3,7) (6, 0.197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), glurósido3,7) (8, 0.0443%), kancanoiside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), ácido musaenosídico3,7) ( 10, 0,0056%), ácido 8-epilogánico3,8) (11, 0,0023%), ácido 8-epideoxilogánico3,7) (12, 0,0004%), ácido geniposidico3,7) (13, 0,0040% ), kancanosido E3) (14, 0,0026%), ácido (2E,6Z)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,6-dimetil-2,6-octadienoico3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetil-8-hidroxioctadien-1-il-ObD-glucopiranósido10) (16, 0,0082%), 8-hidroxigeraniol 8-O-bD-glucopiranósido11) (17, 0,0044%), betulalbusida A12) (18, 0,0004%), coniferina13) (19, 0,0002%), siringina13) ( 20, 0,0015%), aldehído sinápico 4-ObD-glucopiranósido14) (21, 0,0001%), ( )-pinoresinol ObD-glucopiranósido4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A16) (23, 0,0002 %), isoeucommina A17) (24, 0,0010%) y ( )-siringaresinol ObD-glucopiranósido4,8,18) (25, 0,0044%).

Estructuras de kancanosidos L (1), M (2) y N (3)

El kancanosido L (1) se obtuvo como un polvo blanco con rotación óptica negativa ([a]D 26 - 45.7 en MeOH). Su espectro IR mostró una fuerte banda de absorción en 3433 y 1{{20}}80 cm- 1, lo que sugiere un resto glucósido. El bombardeo atómico rápido (FAB)-MS de 1 ejecución en los modos de iones positivos y negativos mostró picos de iones cuasimoleculares en m/z 371 [M Na] y 347 [M-H]-, respectivamente, y la fórmula molecular fue determinado como C15H24O9 mediante medición FABMS de alta resolución. La hidrólisis ácida de 1 con ácido clorhídrico (HCl) 1,0 M liberó D-glucosa, que se identificó mediante análisis HPLC utilizando un detector de rotación óptico.3-6) Los espectros de RMN de 1 H y 13 C de 1 (CD3OD, Tablas 1, 2), que fueron asignados mediante varios experimentos de RMN, 19) mostraron señales asignables a cuatro metilenos [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= ca 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= ca. 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2.4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

California. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H cada uno, ambos d, J= 13.1 Hz, 10-H2)], dos metinos [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8,9 Hz, 9-H) y 2,23 (1H, m, 5-H)], y un grupo acetal [d 4,81 (1H, d, J{{28 }}.9 Hz, 1-H)] junto con un resto b-glucopiranosilo [d 4,70 (d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Como se muestra en la Fig. 1, el experimento de espectroscopía de correlación 1 H – 1 H (1 H – 1 H COSY) en 1 indicó la presencia de estructuras parciales escritas en líneas en negrita. En el experimento de correlación heteronuclear de enlaces múltiples (HMBC) en 1, se observaron correlaciones de largo alcance entre los siguientes protones y carbonos (1-H y 3-C, 8-C; {{ 49}}H y 1-C; 7-H y 8-C, 10-C; 9-H y 8-C; }}H2 y 7-C, 8-C; 1 -H y 1-C) como se muestra en la Fig. 1. A continuación, la estereoestructura relativa de 1 se caracterizó por sensibilidad a la fase. Experimento de espectroscopía de mejora de Overhauser nuclear (NOESY sensible a fases), que mostró correlaciones NOE entre los siguientes pares de protones (1-H y 3aH; 3a-H y 4a-H; 3b-H y 4b-H; 4b-H y 5-H, 9-H; 5-H y 6b-H, 9-H y 7-H; y 10-H2), como se muestra en la Fig. 1. Los espectros de 1 H- y 13C-NMR de 1 fueron superponibles a los del constituyente principal iridoide 6-desoxicatalpol (6), excepto por las señales debidas al resto saturado de d-lactol. Finalmente, la hidrogenación de 6 dio 1, por lo que se determinó que la estereoestructura del kancanosido L era 3,4-dihidro-6-desoxicatalpol (1).

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA ALIVIAR EL TRASTORNO DE EXCITACIÓN DEL CORREO PHGS75% ECH 30% ACT 12%

El kancanosido M (2) se obtuvo como un polvo blanco con rotación óptica negativa ([a]D 26 - 18.7 en MeOH). El espectro IR de 2 mostró bandas de absorción en 3433, 1736, 1655 y 1076 cm- 1 atribuibles a restos hidroxilo, d-lactona, olefina y éter. El espectro de FAB-MS de iones positivos de 2 mostró un pico de ión cuasimolecular a m/z 353 [M Na], y la fórmula molecular se determinó como C15H22O8 mediante medición de FAB-MS de iones positivos de alta resolución. La hidrólisis ácida de 2 con HCl 1,0 M liberó D-glucosa. Los espectros de 1 H- y 13CNMR de 2 (CD3OD, Tablas 1, 2) mostraron señales asignables a cuatro metilenos [d 1,66, 2,11 (1H cada uno, ambos m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H cada uno, ambos m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2.8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H cada uno, ambos d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dos metinos [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], una olefina [d 5,94 (1H, m, 7-H)] y un grupo lactona saturado (d C 174.9) junto con un resto bD-glucopiranosilo [d 4.32 (1H, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Como se muestra en la Fig. 1, el experimento 1 H – 1 H COZY en 2 indicó la presencia de estructuras parciales escritas en líneas en negrita y, en el experimento HMBC, se observaron correlaciones de largo alcance entre los siguientes pares de protones y carbonos ({{ 103}}H y 1-C; 7-H y 9-C; 9-H y 1-C, 8-C; }}H2 y 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H y 10-C). La estereoestructura relativa de 2 se caracterizó mediante un experimento NOESY sensible a la fase, que mostró correlaciones NOE entre los siguientes pares de protones (3a-H y 4a-H; 3b-H y 4b-H; 4b-H y 5- H; 5-H y 6b-H, 9-H) como se muestra en la Fig. 1. Por tanto, la estereoestructura de 2 se dilucida como se muestra.

Se aisló el kancanosido N (3) como un polvo blanco con rotación óptica negativa ([a]D 25 - 24.6 en MeOH). En la FAB-MS de iones positivos de 3, se observó un pico de ión cuasimolecular a m/z 371 [M Na]. La fórmula molecular C16H28O8 se determinó mediante medición FAB-MS de alta resolución. La hidrólisis ácida de 3 con HCl 1,0 M liberó D-glucosa. Los datos de RMN de 1 H y 13 C (CD3OD, Tablas 1, 2) mostraron señales asignables a un metil [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], cuatro metilenos {d 1,37, 1,87 (1H cada uno, ambos m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H cada uno, ambos m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5.9, 9,8 Hz), 11-H2] y [3,70 (1H, dd, J= 3.3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, cuatro metinos [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] y un grupo hemiacetal [d 4,67 ( 1H, d, J= 7.4 Hz, 1-H)] junto con un resto bD-glucopiranosilo [d 4,26 (1H, d, J= 7.9 Hz, {{101 }}H)]. La estructura iridoide de 3 se aclaró mediante experimentos 1 H – 1 H COZY y HMBC y la estereoestructura relativa se caracterizó mediante un experimento NOESY sensible a la fase como se muestra en la Fig. 1. En consecuencia, la estereoestructura de 3 se dilucida como se muestra.

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA SOLUCIONAR PROBLEMA SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Estructuras de kancanosidos O (4) y P (5)

Los kancanosidos O (4) y P (5), C16H26O8, también se obtuvieron como polvos blancos con rotaciones ópticas negativas (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 ambos en MeOH). Los espectros IR de 4 y 5 mostraron bandas de absorción en 3433, 1696, 1647 y 1076 cm- 1 para 4, y 3434, 1701, 1647 y 1{. {95}}76 cm- 1 para 5, atribuible a funciones glicosídicas, carboxilo y olefinas. Sus espectros UV mostraron un máximo de absorción común a 217 nm, lo que indica la presencia de un resto de ácido carboxílico a,b-insaturado en ambos. La hidrólisis ácida de 4 y 5 liberó D-glucosa, mientras que mediante la hidrólisis enzimática con glucosidasa, 4 y 5 dieron (2E,6E)-8-hidroxi-2,6-dimetil{{37} },6-ácido octadienoico20) (4a) y (2E,6E)-8-hidroxi-3,7-dimetil-2,{{ 47}}ácido octadienoico21) (5a), respectivamente. Los datos de RMN de 1H y 13C de 4 (CD3OD, Tablas 2, 3) mostraron señales asignables a dos metilos [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}}.0 Hz, 9-H3)], tres metilenos {d 2,19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7.6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6.2, 12,0 Hz), { {96}}H2]}, y dos olefinas trisustituidas [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] junto con una parte de b-Dglucopiranosilo [d 4,34 (d, J= 7}.8 Hz, 1 -H)]. Mediante la comparación de señales de carbono en el espectro de 13C-NMR de 4

con los de 4a, se observó un cambio de glicosilación en la posición 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). La posición del enlace glucósido también se confirmó mediante experimentos de HMBC como se muestra en la Fig. 2. En consecuencia, se aclaró que la estereoestructura de 4 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,{{ Ácido 16}}dimetil-2,6-octadienoico. Por otro lado, los datos de RMN de 1 H y 13 C de 5 (CD3OD, Tablas 2, 3) indicaron la presencia de un (2E,6E)-8-hidroxi{{30}} ,7-dimetil-2,6-resto de ácido octadienoico [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H cada uno, ambos br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] junto con una parte de bD-glucopiranosilo [d 4,23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. La conectividad del resto bD-glucopiranosilo en 5 se aclaró basándose en experimentos de HMBC como se muestra en la Fig. 2. Además, se observó un cambio de glicosilación típico para las señales en la posición 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). Según la evidencia mencionada anteriormente, se determinó que la estereoestructura de 5 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-3,7-dimetil-2,{{103 }}ácido octadienoico.

Efectos de los componentes sobre la citotoxicidad inducida por el factor de necrosis tumoral a (TNF-a) en células L929

Se sabe que el TNF-a media en una variedad de lesiones orgánicas mediante la inducción de la apoptosis celular. En el caso del hígado, los efectos biológicos del TNF-a se han implicado en la lesión hepática inducida por toxinas hepáticas, isquemia/reperfusión, hepatitis viral y alcohol.22-24) Por lo tanto, se considera que el TNF-a un objetivo importante para descubrir agentes antiinflamatorios y hepatoprotectores. Basándonos en el concepto mencionado anteriormente, investigamos componentes protectores de productos naturales sobre la muerte celular inducida por TNF-a en células L929, una línea celular sensible a TNF-a.25) Anteriormente, hemos informado

que se encontró que varios componentes de Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) y Sapindus rarak, 36-38) mostraban efectos inhibidores de citotoxicidad inducida por TNF-a en células L929. Dado que los componentes feniletanoides de C. tubulosa (p. ej.equinacósido, acteósido e isoactósido, etc.) 5) también inhibió esta citotoxicidad, examinamos más a fondo los constituyentes iridoide, fenilpropanoide y lignano como se muestra en la Tabla 4. Como resultado, el kancanosido A (9, inhibición: 16,3 ± 2,0% en 1 00 mM), ácido musaenosídico (10, 44,7± 8,7%), 8-ácido epigámico (11, 10,7± 0,4%), 8-hidroxigeraniol 8-ObD- Se encontró que el glucopiranósido (17, 21,3 ± 2,4%) y el ( )-pinoresinol ObD-glucopiranósido (22, 22,3 ± 1,6%) mostraban una actividad significativa. Aunque sus actividades fueron más débiles que las del echinacósido (IC50= 31.1 mM), el acteósido (17,8 mM) y el isoaceteósido (22,7 mM), los principales constituyentes de los feniletanoides.5)

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA MEJORAR LA FUNCIÓN SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%