La isoastilbina inhibe la apoptosis neuronal y el estrés oxidativo en el modelo Arat de lesión por isquemia-reperfusión en el cerebro: participación de SIRT1/3/6

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Resumen

Fondo.Se ha demostrado que la isoastilbina (IAB) tieneantioxidantey funciones antiapoptóticas. Un estudio reciente encontró que IAB puede reduciroxidativoestrés en la enfermedad de Alzheimer. Sin embargo, aún se desconoce si la función antioxidante de IAB también es protectora en otras enfermedades cerebrales.
Objetivos.Investigar las funciones y los mecanismos subyacentes del IAB en la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO/R) en ratas.
Materiales y métodos.Ratas Wistar macho se dividieron aleatoriamente en 5 grupos: grupo simulado, grupo MCAO/R y 3 grupos MCAO/R a los que se les administró IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg o 80 mg/kg) una vez al día durante 3 días. Tamaño del infarto, puntuación de gravedad neurológica modificada (mNSS),oxidativoestrésmarcadores y marcadores de apoptosis neuronal se utilizaron para ensayar la función de IAB.
Resultados.En comparación con el grupo MCAO/R, la administración de IAB redujo el tamaño del infarto y las puntuaciones de mNSS en ratas MCAO/R. La isoastilbina también disminuyó el nivel de malondialdehído (MDA) y mejoró la actividad de la catalasa (CAT), la superóxido dismutasa (SOD) y la glutatión peroxidasa (GSH-PX). El tratamiento con isoastilbina atenuó la estimulación neuronal inducida por MCAO/Rapoptosisen comparación con el grupo MCAO/R, según lo indicado por los resultados de los ensayos de extremo de muesca X-dUTP mediado por desoxinucleótido transferasa terminal (TUNEL) y transferencia Western. La isoastilbina también revirtió la regulación negativa inducida por MCAO/R de la expresión de la proteína SIRT1/3/6.
Conclusiones.Estas observaciones sugieren que IAB protege contraoxidativoestrés y apoptosis neuronal en ratas después de una lesión por isquemia-reperfusión (I/R) cerebral a través de la regulación positiva de SIRT1/3/6, lo que indica que el IAB podría ser un agente terapéutico prometedor para la lesión por I/R cerebral.
Palabras clave:apoptosis, estrés oxidativo, isoastilbina, lesión por isquemia-reperfusión cerebral focal

Fondo

Los accidentes cerebrovasculares isquémicos y hemorrágicos se encuentran entre las principales causas de discapacidad y muerte en todo el mundo.1,2El accidente cerebrovascular isquémico es causado por obstrucciones en los vasos sanguíneos, lo que pone a los órganos diana en riesgo de muerte celular.3Aunque el tratamiento más efectivo para la isquemia cerebral es restablecer el suministro de sangre, la terapia trombolítica puede aumentar el tamaño del infarto y agravar la lesión por isquemia-reperfusión (I/R) dentro del cerebro.1,4 Por lo tanto, existe una necesidad urgente de desarrollar nuevos fármacos para el tratamiento de la lesión por I/R cerebral.

La lesión por isquemia-reperfusión en el cerebro implica una fisiopatología compleja, incluida la aparición deoxidativoestrés, apoptosis y agotamiento de trifosfato de adenosina (ATP), todo lo cual puede conducir a lesión neuronal.5 Las especies reactivas de oxígeno (ROS) se producen durante la isquemia, lo que lleva aapoptosisy disfunción neurológica.6 Específicamente, las NADPH oxidasas generan ROS durante la lesión por I/R, lo que provocaoxidativoestrés. Este estrés se caracteriza por un aumento de la peroxidación lipídica, una disminución de la actividad de la catalasa (CAT) y la superóxido dismutasa (SOD), y una disminución del nivel de glutatión (GSH).7–11 Los altos niveles de ROS yoxidativoestrésa su vez, desencadenará la muerte celular a través de la vía apoptótica mitocondrial después de una lesión cerebral por I/R.12 Los poros de transición de permeabilidad mitocondrial pueden abrirse como consecuencia de la acumulación superflua de ROS, lo que resulta en un potencial transmembrana mitocondrial más bajo y una mayor producción de activadores de caspasa como como citocromo c, iniciando finalmente la cascada de caspasas y dando como resultado la muerte celular.12 Geng et al. propusieron que la apoptosis de las células neuronales está mediada, al menos parcialmente, por la vía de la apoptosis mitocondrial en la lesión por I/R cerebral.13 En consecuencia, la inhibición o reversión del estrés oxidativo y la apoptosis neuronal son nuevos métodos prometedores para atenuar la lesión por I/R cerebral.

Para explorar el mecanismo a través del cual IAB atenúa los daños inducidos por I/R, nos enfocamos en la cascada de señalización SIRT. Estudios recientes han demostrado un papel protector de SIRT1/3/6 en varias enfermedades, incluida la degeneración neural en el cerebro, la inflamación de los vasos sanguíneos y la acumulación de grasa corporal. De hecho, encontramos que el tratamiento con BIA aumenta el nivel de expresión de SIRT durante la lesión por I/R, lo que indica que la BIA puede proteger contra las células.apoptosismediante la regulación al alza de la expresión de SIRT. Tomados en conjunto, nuestros resultados sugieren que el IAB es un tratamiento potencialmente útil para la lesión por I/R cerebral clínica.

Objetivos

Nuestro objetivo general fue examinar los efectos y los mecanismos subyacentes del BIA en la lesión por I/R utilizando el modelo animal MCAO/R.

materiales y métodos

animales

Se adquirieron ratas Wistar macho de Shanghai Laboratory Animal Company (Shanghai, China). Se alimentaron ratas de 60 a 90 días de edad con peso corporal normal (200 a 250 g) con alimentos y agua ad libitum y se las mantuvo en un ambiente constante (25 ± 2 grados, 40 ± 10 por ciento de humedad relativa y ciclo de luz/oscuridad de 12 h) . Los animales se manejaron de acuerdo con las pautas para el cuidado y uso de animales de laboratorio de Jiamusi College, Universidad de Medicina Tradicional China de Heilongjiang, China. El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Jiamusi College, Universidad de Medicina China de Heilongjiang, aprobó procedimientos con animales (aprobación No. 20190815).

Establecimiento de lesión MCAO/R y tratamiento IAB

La toxicidad de BIA se determinó como se describió previamente.15 Isoastilbina (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, China) se diluyó a concentraciones finales de 20 mg/kg, 40 mg/kg y 80 mg/kg en fosfato. -solución tamponada (PBS). Los animales se distribuyeron aleatoriamente en 5 grupos: 1. simulado; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R seguido de 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R seguido de 40 mg/kg de IAB; y 5. MCAO/R seguido de 80 mg/kg de IAB.

Las ratas se anestesiaron usando inyección intraperitoneal (ip.) de 50 mg/kg de pentobarbital sódico (Sinopharm Chemical Reagent, Beijing, China). Para introducir MCAO/R, expusimos las arterias carótidas, a saber, la arteria carótida externa (ECA), la arteria carótida común derecha (CCA) y la arteria carótida interna (ICA). La ECA y la CCA se ligaron proximalmente. La ICA se ligó utilizando una sutura de monofilamento de 0,285 mm, insertada en la luz de la ICA durante aproximadamente 18 mm a través del muñón de la ECA para obstruir la arteria cerebral media (MCA). un láserSe utilizó Doppler (USCN KIT INC., Wuhan, China) para confirmar que el flujo sanguíneo se redujo a menos del 20 por ciento del nivel normal. El grupo falso se sometió a la misma operación; sin embargo, las arterias no se ligaron. Después de 2 h de oclusión, las arterias ligadas se reperfundieron y luego las ratas se alimentaron con BIA (20 mg/kg, 40 mg/kg o 80 mg/kg) o PBS diariamente durante 3 días consecutivos. Por último, 72 h después de MCAO/R, se evaluó la capacidad neurológica de las ratas.

Evaluación del volumen de infarto cerebral de rata

Después del tratamiento con IAB, los cerebros se pesaron rápidamente para medir su peso húmedo. Posteriormente, los cerebros se deshidrataron a 100 grados durante 24 h para evaluar su peso seco. La concentración de agua en el cerebro se calculó como: ((peso húmedo ‒ peso seco)/peso húmedo) × 100 por ciento.

Puntuación de gravedad neurológica modificada (mNSS)

Las funciones neurológicas sensoriales, motoras, del equilibrio y reflejas se evaluaron 72 h después de la cirugía de MCAO utilizando mNSS. sistema nervioso.

Medición de superóxido dismutasa (SOD), malondialdehído (MDA), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-PX)

Después del tratamiento con IAB, se determinó el contenido de proteínas a partir de tejidos cerebrales. La concentración de proteína de los homogeneizados corticales se determinó utilizando kits BCA (Beyotime, Shanghai, China). SOD, MDA, CAT y GSH-PX se detectaron utilizando los kits correspondientes (n.º de catálogo A003-1, A001-3, A007 y A005; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China). Brevemente, se recogió el sobrenadante del homogeneizado cortical. Para SOD, las muestras se incubaron con WST-8/solución de trabajo enzimática a 37 grados durante 30 min. La absorción se midió a una longitud de onda de 450 nm. Una unidad de actividad enzimática (U) de SOD se definió como la cantidad de muestra necesaria para lograr una tasa de inhibición del 50 por ciento del colorante WST-8 formazán. Para MDA, las muestras se mezclaron con una solución de trabajo y luego se calentaron a 100 grados durante 15 min. La absorción del sobrenadante se midió a una longitud de onda de 532 nm. Para CAT, las muestras se mezclaron con tampón de detección de CAT y solución de peróxido de hidrógeno y luego se incubaron a 25 grados durante 5 min. La absorción se detectó a una longitud de onda de 520 nm. Para GSH-PX, las muestras se mezclaron con GSH a 37 grados durante 5 min. La absorción del sobrenadante se midió a una longitud de onda de 412 nm. Una unidad (U) de actividad enzimática se definió como la cantidad de GSH-PX en 1 mg de proteína que catalizaba el consumo de 1 μmol/L de GSH descontando el efecto de la reacción no enzimática.

Tinción terminal de desoxinucleotidil transferasa dUTP nick end labeling (TUNEL)

Se aislaron tejidos cerebrales del hemisferio ipsilateral, se fijaron en paraformaldehído al 4 por ciento y se incluyeron en parafina. A continuación, los tejidos se cortaron en rodajas de 5-μm y el antígeno se expuso después de 10 minutos de calentamiento por microondas en tampón de citrato. La apoptosis neuronal se evaluó utilizando el ensayo TUNEL (Kit de detección de muerte celular in situ; Roche, Penzberg, Alemania), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En resumen, los cortes de cerebro se colocaron en paraformaldehído al 4 % enfriado con hielo durante 30 minutos y luego se incubaron en la oscuridad con la mezcla de reacción TUNEL a 37 grados durante 1 hora. Posteriormente, los núcleos se tiñeron con 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma-Aldrich). Se tomaron imágenes de las muestras y se calculó el índice de apoptosis como el número de células positivas para TUNEL dividido por el número total de células.

mancha occidental

Los tejidos de cerebro de rata se lisaron utilizando tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) (Beyotime, Dalian, China). Las proteínas se sometieron a electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio al 12-15 por ciento (SDS-PAGE) y luego se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno (PVDF) (Millipore, Billerica, EE. UU.). Las membranas se bloquearon usando leche descremada al 5 por ciento y se incubaron con anticuerpos primarios a 4 grados durante la noche. Los anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa de rábano picante (HRP) se incubaron posteriormente a temperatura ambiente durante 2 h. Se detectaron señales específicas de proteínas marcadas usando un sistema de quimioluminiscencia. La -actina se utilizó para normalizar los niveles de expresión de proteínas de Bcl-2, Bax y Sirtuin (SIRT1/3/6). Las imágenes se analizaron utilizando el software ImageJ.

Análisis estadístico

Los datos se presentan como la media ± desviación estándar (DE) de 3 experimentos independientes. Se confirmó que los datos de cada grupo seguían una distribución normal utilizando la prueba de Shapiro-Wilk. Las diferencias entre los grupos se analizaron mediante el análisis de varianza de una vía (ANOVA), seguido de la prueba post hoc de Tukey utilizando el software Prism v. 8 (GraphPad Software, San Diego, EE. UU.). Un valor de p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Resultados

La isoastilbina protege las neuronas de la lesión inducida por MCAO/R

Para explorar si el IAB protegía a las neuronas sometidas a I/R cerebral, se analizó la concentración de agua en el cerebro y el volumen del infarto. En los animales de control, no hubo infarto y la concentración de agua fue relativamente baja (Fig. 1B, C; grupo simulado). Después de la cirugía MCAO/R, observamos aumentos significativos en el tamaño del infarto y la concentración de agua (Fig. 1B, C). El infarto y el edema isquémico indican que nuestro enfoque generó con éxito el modelo I/R en ratas. Curiosamente, cuando aplicamos diferentes concentraciones de BIA (20 mg/kg, 40 mg/kg y 80 mg/kg) inmediatamente después de la lesión, observamos una recuperación del infarto y del edema cerebral isquémico dependiente de la dosis (Fig. 1B,C). Este resultado sugiere que IAB protege contra el daño cerebral inducido por isquemia. A continuación, examinamos la célulaapoptosisutilizando el ensayo mNSS. Como se muestra en la Fig. 1D, las ratas operadas de forma simulada no exhibieron déficits neurológicos obvios, mientras que las ratas MCAO/R mostraron puntajes mNSS significativamente mayores. De acuerdo con los cambios morfológicos que se muestran en la Fig. 1B y la Fig. 1C, el tratamiento con BIA disminuyó significativamente la puntuación mNSS de las ratas MCAO/R (Fig. 1D). En conjunto, estos resultados proporcionan evidencia de que IAB tiene una función neuroprotectora en un modelo de roedor Vivo de lesión cerebral por I/R. Dado que una concentración más alta de IAB tenía mejores efectos protectores sin efectos secundarios obvios, usamos 80 mg/kg para los siguientes experimentos.

La isoastilbina atenúa el estrés oxidativo en ratas MCAO/R

Evaluar la influencia del BIA enestrés oxidativo, los niveles de GHS-PX, MDA, SOD y CAT se evaluaron después del tratamiento con BIA. Debido al aumento del estrés oxidativo, las ratas sometidas a MCAO/R tenían niveles más altos de MDA en comparación con las ratas simuladas. Este efecto fue atenuado por el tratamiento con BIA (fig. 2A). Además, los niveles de CAT, SOD y GHS-PX disminuyeron en las ratas MCAO/R en comparación con las ratas simuladas (Fig. 2B, D). El tratamiento con IAB elevó los niveles de CAT, SOD y GHS-PX en ratas MCAO/R (Fig. 2B, D), lo que sugiere que IAB protegió contra la lesión cerebral por I/R al atenuar el estrés oxidativo.

La isoastilbina inhibe la apoptosis neuronal en ratas MCAO/R

A continuación, utilizamos el ensayo TUNEL para evaluar las neuronasapoptosisdespués de una lesión cerebral I/R. Como se muestra en la Fig. 3A, hubo un aumento en el número de células positivas para TUNEL en ratas MCAO/R, que se redujo con el tratamiento con IAB (Fig. 3A). Para explorar los mecanismos subyacentes de la protección de IAB, examinamos la expresión de las proteínas de apoptosis Bax y Bcl-2 mediante transferencia Western. En ratas sometidas a MCAO/R, la expresión de Bax (marcador proapoptótico) aumentó, mientras que la de Bcl-2 (marcador antiapoptótico) disminuyó, en comparación con el grupo simulado (Fig. 3B, C ). Sin embargo, el tratamiento con BIA evitó los cambios inducidos por MCAO/R (Fig. 3B, C). Estos resultados sugieren que IAB inhibió la apoptosis neuronal en ratas MCAO/R.

La isoastilbina aumenta la expresión de SIRT

A continuación, buscamos examinar cómo IAB protege a las neuronas deestrés oxidativo. Se ha encontrado que SIRT, una desacetilasa dependiente de NAD plus localizada principalmente en las mitocondrias, está asociada con la supervivencia celular y la apoptosis, el metabolismo celular y la respuesta al estrés. El SIRT puede activar señales y vías mitocondriales para promover la proliferación mitocondrial y la generación de ATP. También participa en la inflamación, de manera que la reducción de SIRT conduce a aumentos en los factores de inflamación crónica, como NFκB y la actividad de RelA/p65.18–20 Curiosamente, varios estudios han encontrado que SIRT ejerce un efecto protector neural y atenúa la actividad oxidativa. estrés en la fisiopatología de la lesión cerebral I/R.21 Aquí, investigamos la expresión cerebral de SIRT1/3/6 en ratas sometidas a MCAO/R. Encontramos que la lesión de MCAO/R disminuyó los niveles de proteína de SIRT1/3/6, mientras que el tratamiento con BIA atenuó estos efectos (Fig. 4A-D). Estos datos sugieren que IAB podría ser protector en ratas MCAO/R al aumentar la expresión de SIRT1/3/6 en la protección contra el estrés oxidativo.

Discusión

La concentración de ROS aumenta hasta un pico, lo que puede inducir potencialmente la apoptosis o la necrosis celular.25–28 Hay varios marcadores bien establecidos de estrés oxidativo. Por ejemplo, la MDA, un compuesto citotóxico producido por la peroxidación de lípidos,29 aumenta en los cardiomiocitos de rata después del daño por I/R.30 Las enzimas antioxidantes SOD, CAT y GHS-PX desempeñan un papel importante en la eliminación de superóxidos y la prevención del daño oxidativo.31, 32 Además, los cambios en la actividad de estas enzimas también están relacionados con el estrés oxidativo. La atenuación del estrés oxidativo es una forma potencial de proteger los tejidos de las lesiones por I/R.

Un estudio reciente demostró que el efecto neuroprotector del BIA podría deberse a la modulación del estrés oxidativo. Específicamente, el estudio encontró que IAB inhibió la generación de ROS e indujo SOD y GSH-PX para mejorar el daño oxidativo en un modelo de AD en ratones. En el presente estudio, demostramos que IAB atenúa con éxito la lesión por I/R cerebral al reducir el volumen del infarto y los déficits neurológicos después de la lesión por MCAO/R. Para probar si los efectos de IAB se deben a la atenuación de las especies de ROS, medimos varios marcadores de estrés oxidativo. Se encontró que el tratamiento con isoastilbina después de MCAO/R disminuyó los niveles de MDA, pero aumentó la actividad de CAT, SOD y GSH-PX. Estos resultados sugieren que el mecanismo subyacente de la neuroprotección mediada por IAB contra la lesión por I/R es a través de la reducción del estrés oxidativo.

De hecho, la I/R cerebral es capaz de inducir la apoptosis de las neuronas.33,34 La activación de proteínas proapoptóticas (Bax y Bak) y la inactivación paralela de proteínas antiapoptóticas (como Bcl-2) ocurrieron durante Lesión I/R. Tanto Bcl-2 como Bax se encuentran en la parte exterior de la membrana mitocondrial y participan en la modulación de la apoptosis celular.35–37 Estudios previos han demostrado que la sobreexpresión de Bcl-2 bloquea la muerte neuronal in vitro y in vivo.38Erfani et al. encontraron que la relación Bax/Bcl-2 aumentaba durante la lesión cerebral por I/R, lo que contribuía a la apoptosis neuronal.39 Además, se encontró una regulación al alza de Bax y una regulación a la baja de Bcl-2 en cerebros de ratones sometidos a MCAO/R. 40 Además, se ha encontrado que IAB modula los niveles de expresión de proteínas tanto de Bcl-2 como de Bax para mejorar el sistema redox en ratones con AD, lo que indica el papel antiapoptótico de IAB en esta condición.15 En el presente estudio, demostramos que la administración de IAB redujo la apoptosis neuronal inducida por I/R in vivo mediante la regulación negativa de Bax y la regulación positiva de Bcl-2. Estos hallazgos implican que la capacidad neuroprotectora de IAB depende de su actividad antiapoptótica en ratas. Sin embargo, la I/R también puede provocar necrosis, que no está mediada por el estrés oxidativo.25–28 Es de gran interés examinar si el BIA también puede funcionar al inhibir la necrosis para atenuar la lesión por I/R.

Para examinar el mecanismo a través del cual IAB atenúa el estrés oxidativo, nos enfocamos en las proteínas SIRT. Un informe anterior encontró que la sobreexpresión de SIRT3 inhibía la fisión mitocondrial para proteger contra el daño por I/R cerebral. Además, SIRT6 puede proteger el cerebro contra el daño por I/R a través de la supresión del estrés oxidativo.2 Aquí descubrimos que SIRT1/3/ 6 se reguló significativamente a la baja en ratas MCAO/R, mientras que la administración de IAB aumentó la expresión de SIRT1/3/6. Hasta donde sabemos, este estudio es el primero en demostrar que IAB puede aumentar la expresión de la proteína SIRT1/3/6 para atenuar el estrés oxidativo y la apoptosis neuronal inducida por la lesión por I/R cerebral.

Limitaciones

Hay muchas vías diferentes de protección contra el estrés oxidativo. Aquí, demostramos que el mecanismo de señalización de la protección IAB es a través de SIRT 1/3/6. Sin embargo, deben dilucidarse más otros mecanismos contra el estrés oxidativo o la lesión por I/R cerebral. Durante la lesión por I/R, están involucradas tanto la apoptosis como la necrosis; sin embargo, solo nos enfocamos en la apoptosis. Por lo tanto, será necesaria una mayor investigación sobre el papel de IAB en la necrosis para explicar completamente la función protectora de IAB durante la lesión por I/R.

Conclusiones

Aquí, demostramos que IAB puede aliviar el estrés oxidativo y la apoptosis de las neuronas en ratas sometidas a I/R cerebral. Además, el estrés antioxidante y las funciones antiapoptóticas de IAB podrían surgir a través de la regulación de la expresión SIRT1/3/6. En conjunto, nuestros datos sugieren que el IAB es un tratamiento candidato para la lesión por I/R cerebral.

ORCID iDs Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

vivir un1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Jiamusi College, Universidad de Medicina China de Heilongjiang, China

2 Escuela de Graduados, Universidad de Medicina China de Heilongjiang, Jiamusi, China

A – concepto y diseño de la investigación; B – recogida y/o montaje de datos; C – análisis e interpretación de datos;

D – redacción del artículo; E – revisión crítica del artículo; F – aprobación final del artículo

Referencias

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Metabolismo y señalización de astrocitos durante la isquemia cerebral. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR, et al. Relación entre la disfagia, la puntuación de la escala de accidentes cerebrovasculares de los Institutos Nacionales de Salud y los predictores de neumonía después de un accidente cerebrovascular isquémico. J Accidente cerebrovascular Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Enfermedad vascular cerebral y lesión neurovascular en el ictus isquémico. Circo Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/circresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. El alcohol perilílico mejora los resultados funcionales e histológicos contra la lesión por isquemia-reperfusión mediante la atenuación del estrés oxidativo y la represión de COX-2, NOS-2 y NF-κB en ratas con oclusión de la arteria cerebral media. Eur J Pharmacol. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Fisiopatología, tratamiento y modelos animales y celulares del ictus isquémico humano. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. La hipoxia fetal aumenta la vulnerabilidad de la lesión cerebral hipóxico-isquémica en ratas neonatales: papel de los receptores de glucocorticoides. Neurobiol Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R, Fernández-Gajardo R, Gutiérrez R, et al. Estrés oxidativo y fisiopatología del accidente cerebrovascular isquémico: nuevas oportunidades terapéuticas. CNS Neurol Disord Drug Targets.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L, et al. Entrega directa de fármacos macromoleculares al área de isquemia cerebral utilizando nanopartículas mediadas por neutrófilos. teranóstica. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. La NADPH oxidasa juega un papel central en el daño de la barrera hematoencefálica en el accidente cerebrovascular experimental. Carrera. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. La inhibición de la NADPH oxidasa es neuroprotectora después de la isquemia-reperfusión. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Efecto de la apocinina inhibidora de la NADPH oxidasa en la lesión del hipocampo por isquemia-reperfusión en cerebro de rata. Farmacéutico biomédico. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q, et al. Un componente activo de los polipéptidos de Achyranthes bidentata proporciona neuroprotección a través de la inhibición de la vía apoptótica dependiente de mitocondrias en neuronas cultivadas y en modelos animales de isquemia cerebral. Más uno. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG, et al. 14,15-EET suprime la apoptosis neuronal en la isquemia-reperfusión a través de la vía mitocondrial. Neurochem Res.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Purificación de astilbina e isoastilbina en el extracto de rizoma de smilax glabra mediante cromatografía a contracorriente de alta velocidad. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Funciones protectoras de la isoastilbina contra la enfermedad de Alzheimer a través de la antioxidación y la antiapoptosis mediadas por Nrf2-. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Revisión estructural de dos glucósidos de flavanonol de Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. doi:10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. La estimulación eléctrica mejora la capacidad migratoria de las células del estroma de la médula ósea trasplantadas en un modelo de accidente cerebrovascular isquémico en roedores. Cell Physiol Biochem. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. El silenciamiento SIRT3 sensibiliza las células de cáncer de mama a los tratamientos citotóxicos a través de un incremento en la producción de ROS. J Cell Biochem. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. La regulación de la proteína trifuncional mitocondrial modula la enfermedad del hígado graso no alcohólico en ratones. Res. de lípidos J. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Sirtuin 3 silenciamiento mejora la eficacia del oxaliplatino a través de la acetilación de MnSOD en el cáncer de colon. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. El regulador de información silencioso 1 protege el cerebro contra el daño isquémico cerebral. Carrera. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Inflamación estéril: detección y reacción al daño. Nat Rev Inmunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Isquemia y reperfusión: Del mecanismo a la traducción. Nat Med. 2011;17(11):1391–1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedzic T. La inflamación sistémica como diana terapéutica en el accidente cerebrovascular isquémico agudo. Experto Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. La contracción de pericitos inducida por el estrés oxidativo-nitrativo perjudica el reflujo capilar a pesar de la apertura exitosa de una arteria cerebral ocluida. Nat Med. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS, et al. Estrés oxidativo en el daño cerebral isquémico: mecanismos de muerte celular y posibles dianas moleculares para la neuroprotección. Señal antioxidante redox. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Especies reactivas de oxígeno y enfermedad cerebrovascular isquémica. Neuroquímica Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, et al. La sobreexpresión de Fibulin-5 atenúa la lesión por isquemia/reperfusión después de la oclusión de la arteria cerebral media en ratas. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y, et al. Autofluorescencia de proteínas modificadas con MDA como sonda in vitro e in vivo en análisis de estrés oxidativo. Célula de proteína. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP, et al. Efecto neuroprotector de los ácidos salvianólicos contra la lesión por isquemia/reperfusión cerebral. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Oxidación y peroxidación de lípidos en la salud y la enfermedad del SNC: desde los mecanismos moleculares hasta las oportunidades terapéuticas. Señal antioxidante redox. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Estrés oxidativo en eritrocitos de pacientes con artritis reumatoide. Reumatol Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Efectos neuroprotectores de la pregabalina sobre la isquemia cerebral y la reperfusión. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC, et al. Efectos protectores del propofol contra la lesión por isquemia/reperfusión cerebral total en ratas a través de la inhibición de la vía del factor inductor de la apoptosis. Brain Res.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitocondrias en apoptosis: miembros de la familia Bcl-2 y dinámica mitocondrial. Célula de desarrollo. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. El poro apoptótico en las mitocondrias: ¿estamos atravesando o todavía atascados? La muerte celular difiere. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. El misterio de la familia BCL2: proteínas Bcl-2 y apoptosis. Una actualización. Arco Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX a lo básico: cómo la familia de genes BCL2 controla la muerte de las células ganglionares de la retina. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin ejercen efectos neuroprotectores contra la lesión por isquemia/reperfusión mediante la modulación de la relación Bax/Bcl-2 y la prevención de la caspasa{ {2}} activación. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Chen L, Cao J, Cao D, et al. Efecto protector de la dexmedetomidina

contra la lesión por isquemia/reperfusión cerebral exacerbada por hiperglucemia diabética: un estudio in vivo e in vitro, Life Sdi, 2019: 235: 116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L, et al. Sirt3 inhibe la lesión por isquemia-reperfusión cerebral mediante la normalización de la vía Wnt/ -catenina y el bloqueo de la fisión mitocondrial. Acompañantes de estrés celular. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s12192-018-0917-y

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 protege el cerebro de la lesión por isquemia/reperfusión cerebral a través de la activación de NRF2. Neurociencia.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neurociencia.2017.09.035