abstracto

Fondo: Panax ginseng es un maravilloso remedio herbal para todas las dolencias del cuerpo. Puede que por eso se llame Panax, que significa "cura para todos". La melanina es un pigmento que da color a nuestra piel; sin embargo, el aumento de la producción de melanina puede conducir a la formación de tumores. La exposición humana a la radiación ultravioleta B ha aumentado considerablemente debido al aumento de la luz solar debido al calentamiento global. En consecuencia, se ha observado un fenómeno llamado fotoenvejecimiento para todos los colores y tipos de piel. Como resultado de este fenómeno, aumenta un conjunto de enzimas denominadas metaloproteinasas de la matriz, que sirven como enzimas de degradación para las proteínas de la matriz extracelular, principalmente el colágeno, lo que provoca el agotamiento del colágeno y la formación temprana de arrugas.

Según estudios relevantes, la cistanche es una hierba común conocida como "la hierba milagrosa que prolonga la vida". Su principal componente es el cistanosido, que tiene diversos efectos como antioxidante, antiinflamatorio y promotor de la función inmunológica. El mecanismo entre la cistanche y el blanqueamiento de la piel radica en el efecto antioxidante de los glucósidos de cistanche. La melanina en la piel humana se produce por la oxidación de la tirosina catalizada por la tirosinasa, y la reacción de oxidación requiere la participación de oxígeno, por lo que los radicales libres de oxígeno en el cuerpo se convierten en un factor importante que afecta la producción de melanina. Cistanche contiene cistanosido, que es un antioxidante y puede reducir la generación de radicales libres en el cuerpo, inhibiendo así la producción de melanina.

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Métodos: Por lo tanto, en nuestro estudio, utilizamos la línea celular de melanoma murino B16/F10 para estudiar la inhibición de la melanogénesis por extracto de ginseng rojo coreano (KRG) in vitro y ratones sin pelo HRM-2 expuestos a ultravioleta B artificial para examinar la eficacia de KRG in vivo. Preparamos una crema con extracto de ginseng rojo al 3 por ciento y evaluamos sus efectos en la piel humana.

Conclusión: Por lo tanto, concluimos que KRG es un excelente producto para blanquear la piel y combatir el envejecimiento.

·2019 La Sociedad Coreana de Ginseng. Servicios de publicación de Elsevier BV Este es un artículo de acceso abierto

1. Introducción

La melanina es un compuesto responsable de la pigmentación de la piel, y la variedad de colores de piel en la raza humana se atribuye a la cantidad de células productoras de melanina presentes en la piel [1]. El proceso responsable de la formación de melanina se denomina melanogénesis. En este proceso, la hormona estimulante de melanocitos a (a-MSH) se une a su receptor (es decir, el receptor de melanocortina 1) y provoca niveles elevados de AMPc, que a su vez activa el factor asociado a la microftalmía (MITF) a través de varias vías, como la cíclica El elemento de respuesta del monofosfato de adenosina (cAMP) se une a la proteína, la quinasa regulada extracelularmente y la proteína quinasa B (AKT), lo que provoca su degradación. Debido a esta degradación, el paso limitante de la velocidad en el proceso de melanogénesis (es decir, la acción de la enzima tirosinasa, TYR) se ve afectado y se activa. TYR es responsable de la conversión de tirosina en L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA), que forma melanina. La proteína 1 relacionada con la tirosinasa (TRP-1) y la proteína 2 relacionada con la tirosinasa (TRP-2) son otros factores aguas abajo de TYR y MITF que se activan y están involucrados en la formación de melanina. En consecuencia, durante todo el proceso, TYR es el componente más importante de la regulación de la producción de melanina en las células de la piel [2-4].

Panax ginseng es una hierba maravillosa que se ha consumido ampliamente en el este de Asia durante más de 1000 años, ya que tiene muchos efectos beneficiosos para la salud. Está disponible en una variedad de formas, incluidas bebidas, cápsulas y tabletas [5,6]. Estudios anteriores han revelado los notables efectos del ginseng cuando se usa para reducir la incidencia de varios tipos de tumores, muchas anomalías mentales, diabetes, hipertensión, hiperlipidemia e inflamación [7-13]. En particular, en la península de Corea, los suplementos de ginseng forman parte de una dieta normal. Comercialmente, el ginseng está disponible en forma de extracto de raíz de ginseng entero, extractos de ginsenósido individuales o cápsulas. Los ginsenósidos son los compuestos activos constituyentes presentes en toda la raíz de ginseng que son responsables de las eficaces propiedades del ginseng para mejorar la salud [14].

Ha habido muchos estudios sobre los efectos del ginsenósido solo en la producción de melanina y el melasma [15]. Sin embargo, en la actualidad, ningún estudio ha informado sobre los efectos antimelanogénicos del extracto de ginseng rojo coreano (KRG) en la producción de melanina y ha examinado sus efectos blanqueadores y antienvejecimiento de la piel, particularmente en humanos. Por lo tanto, investigamos la inhibición de TYR y la inhibición de la producción de melanina por KRG in vitro en la línea celular de melanoma B16/F10 a través de un estudio mecánico de las vías involucradas en este proceso. Nuestros resultados indicaron que KRG inhibió notablemente la actividad de TYR y disminuyó el contenido de melanina a través de la vía de degradación de MITF. Además, nuestro estudio in vivo utilizando un modelo de ratón sin pelo (HRM-2) irradiado con luz ultravioleta B (UVB) de fotoenvejecimiento e hiperpigmentación reveló que la producción de melanina en ratones HRM-2 se redujo de manera sustancial y marcada por la aplicación de KRG (150 y 300 mg/kg). Además, la crema de extracto de ginseng rojo al 3 por ciento mostró excelentes cualidades antiarrugas y para blanquear la piel en humanos. Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que las formulaciones de KRG y KRG como crema deberían ser útiles en la industria cosmética como agentes blanqueadores y antienvejecimiento de la piel.

2. Materiales y métodos

2.1. Sustancias químicas y reactivos

medio de Eagle modificado por Dulbecco (WelGene Co, Corea); suero bovino fetal (WelGene Co., Corea); estreptomicina y penicilina (Lonza, MD, EE. UU.); reactivo TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE. UU.); Los cebadores oligodT, MITF, TYR, TRP-1, TRP-2 y b-actina se obtuvieron de (Bioneer, Daejeon, Corea). El bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio se adquirió de Sigma-Aldrich. Se obtuvieron anticuerpos para MITF, TYR, TRP-1 y TRP-2 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, Inc., TX, EE. UU.). Mushroom TYR y L-DOPA se adquirieron de Sigma (St. Louis, MO, EE. UU.). Todos los demás reactivos eran de grado analítico local.

2.2. preparación de la muestra

2.3. Evaluación de la estabilidad de la crema de ginseng rojo

(1) prueba de pH

El pH de la crema de ginseng rojo se midió los días 1, 7, 15 y 30 del experimento de 30-días. El pH de la crema de ginseng rojo fue ligeramente ácido y casi no mostró cambios durante los 30 días (Tabla 2).

(2) Prueba de decoloración

El grado de decoloración de la crema de ginseng rojo se midió los días 1, 7, 15 y 30. No se observó ningún cambio de color durante el período experimental de 30- días (Figura 1 complementaria).

(3) prueba de parche

Para verificar una respuesta alérgica a la crema de ginseng, se aplicó 1 ml de crema de ginseng rojo en el área dorsal central de la espalda (1 cm × 1 cm) de los voluntarios y se evaluó la reacción de la piel después de 24 h. Se evaluaron varios tipos de reacciones cutáneas, como se muestra en la Tabla complementaria. 3A-B, y no se observó eritema, edema o reacción adversa. Por lo tanto, esta crema se probó más a fondo para otros parámetros en la piel. Además, se evaluó el grado de irritación de la piel, como se muestra en la Tabla complementaria. 4, para producir el índice primario de irritación de la piel.

2.4. Régimen de tratamiento con crema de ginseng rojo y evaluación de los efectos sobre el contenido de aceite y humedad, la elasticidad y el blanqueamiento de la piel

Para evaluar los efectos de la crema de ginseng rojo sobre el contenido de aceite, el contenido de humedad, la elasticidad y el blanqueamiento de la piel, 10 mujeres (aproximadamente 40 años de edad, no fumadoras, sin antecedentes de enfermedad de la piel o tratamiento facial) se dividieron en dos grupos cada uno de cinco individuos: el grupo de control, en el que se aplicó crema sin extracto de ginseng rojo (no KRG), y el grupo experimental, en el que se aplicó crema con extracto de ginseng rojo (grupo tratado con KRG). El número de individuos se calculó mediante el software estadístico G*Power 3.1 omicX; el coeficiente de significación fue 0,05, la potencia fue 80, el número de grupos fue 2 y el número de mediciones repetidas fue 6.

La crema se aplicó en el área de la zona T (1) de la cara, que se encuentra 1 cm por encima de la parte superior del medio de la T en la frente entre las cejas y en los lados derecho e izquierdo durante 3e5 segundos. La zona U (2) se dibujó horizontalmente desde la nariz y verticalmente hacia abajo desde la cola del ojo, como se muestra en la Fig. 2 complementaria. Para estandarizar las condiciones de medición, la investigación se realizó a 24 C ±1 C y 55 por ciento ± 10 por ciento de humedad relativa.

2.5. Cultivo de células

2.6. Ensayo de inhibición de TYR libre de células

El ensayo se realizó usando un protocolo ligeramente modificado como se describió previamente [3]. Brevemente, 10 mL de KRG se colocó por triplicado en una placa de 96-pocillos y se mezcló con 60 mL de 50 mmol/L de tampón de fosfato en hielo (pH 6,8). Posteriormente, se añadieron a cada pocillo 20 mL de L-DOPA 0,9 mg/mL. Finalmente, se agregaron 10 ml de TYR de hongo a cada pocillo y la placa se incubó a 27 °C durante 10 min. Después de la incubación, la producción de dopacromo se midió espectrofotométricamente a 450 nm utilizando un lector de microplacas (Versamax; Molecular Devices, LLC, CA, EE. UU.); en este experimento, se utilizó ácido kójico como control positivo [16].

2.7. Ensayo de inhibición de melanina

2.8. Experimentación con animales y agrupación.

2.9. Irradiación UVB e inducción de fotoenvejecimiento

2.10. Efecto sobre la producción de melanina en ratones HRM-2

2.11. Medición de arrugas en la piel 

El grado de envejecimiento de la piel inducido por UVB se midió mediante la observación de la formación de arrugas. Para evaluar la formación de arrugas, los ratones HRM{{0}} se anestesiaron mediante la inyección intraperitoneal de hidrato de cloral (0,1 ml de hidrato de cloral al 7 %/25 g de ratón) en la semana 5 La exposición a UVB y el tratamiento de la muestra se describieron en la sección anterior. Las arrugas de la piel se evaluaron en las semanas 3, 4 y 5 usando DETAX System II (MIXPAC) y Double-Stick Disc (3M Healthcare, Alemania) después de la irradiación UVB. El disco Double-Stick (rociado con DETAX System II) se adhirió a la piel del ratón y se retiró después de 2-3 minutos. Las arrugas discales se evaluaron mediante el sistema de puntuación de Bissett [17]: grado 0, ausencia de arrugas; grado 1, varias arrugas superficiales; grado 2, algunas arrugas; y grado 3, algunas arrugas profundas. Después de retirar el disco y limpiar la piel con etanol al 70 por ciento, se fotografió la piel con un microscopio digital USB (× 400; CE FOROHS, China) y se realizó un análisis visual de las arrugas de la piel.

2.12. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas

2.13. Observación histológica de la piel.

Los tejidos de la piel extraídos de cada grupo experimental se fijaron en una solución de formalina al 10 por ciento durante 48 h y luego se tiñeron con hematoxilina y eosina por el método de Cardiff [18] para determinar el espesor epidérmico. Para la visualización de colágeno, la tinción de tricomas de Masson se realizó mediante protocolos establecidos [19].

2.14. Extracción de ARN y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real

El ARN total se extrajo de las células B16/F10 y de la piel de ratón dilatada con UVB-ira después de tratarlas con KRG y estimularlas con a-MSH usando TRIzol según las instrucciones del fabricante. El ARN (2 mg) se hibridó con oligodT (Bioneer Co, Daejeon) durante 10 min a 70 grados C y se enfrió durante 5 min en hielo, se transcribió inversamente utilizando una premezcla de transcriptasa inversa (Bioneer Co., Daejeon) en 20 ml de la mezcla de reacción. , y se ejecuta durante 90 min a 42,5 grados en un termociclador. La reacción se terminó a 95 grados durante 5 min para inactivar la transcriptasa inversa. La reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (PCR) se realizó en alícuotas de ADNc obtenidas de la reacción de transcriptasa inversa (RT) en una premezcla de PCR (Bioneer Co, Daejeon). Luego, los productos de PCR se sometieron a electroforesis en un gel de agarosa al 1 por ciento, se tiñeron con bromuro de etidio y se visualizaron utilizando ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Sciences, Seúl, Corea del Sur). La intensidad de las densidades de las bandas se normalizó a la de la gliceraldehído 3- fosfato deshidrogenasa (GAPDH), y las secuencias de los cebadores se proporcionan en la Tabla complementaria. 1. La expresión de MMP-2, MMP-9 e interleucina (IL)-1b se analizó mediante PCR cuantitativa en tiempo real con un sistema de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 ( Applied Biosystems, EE.UU.).

2.15. Análisis de Western Blot

2.16. análisis estadístico

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