Diferencias en la composición y eficacia medicinal de los productos crudos y los productos de vino procesados al vapor de Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Detección de peso y temperatura corporal
Las ratas se alimentaron de forma adaptativa durante 1 semana, registrada como 0 día, y se registraron el peso corporal y la temperatura rectal; después de que se administró continuamente la inyección de succinato sódico de hidrocortisona durante 14 días, se registró el día 14 y se registraron el peso corporal y la temperatura rectal; después del modelado exitoso, el tratamiento farmacológico se llevó a cabo de acuerdo con el esquema de dosificación durante 30 días, registrado como 44 días, y se registraron el peso corporal y la temperatura rectal.
2.3.4 Detección de frecuencia de actividad espontánea
El número de actividades de las ratas en 5 minutos se registró utilizando un registrador multifuncional de actividad espontánea de ratas. Las ratas se colocaron en el instrumento de actividad espontánea, los primeros 3 minutos fueron el período de adaptación y el registrador contó el número de actividades espontáneas de las ratas en los últimos 5 minutos. La habitación debe estar en silencio, la temperatura ambiente debe mantenerse a 18-22 grados y la humedad debe mantenerse a 45%-65%. Se registró el número de actividades espontáneas a los 0, 14 y 44 días, respectivamente.
2.3.5 Detección del índice sérico
Después de anestesiar a las ratas, se recogió sangre de la aorta abdominal, se colocó en un tubo de coagulación y se centrifugó a 2,000 r/min durante 15 minutos para detectar el contenido de T, E2, CREA y BUN en el suero.
CISTANCHE DE ALTA CALIDAD PARA ENFERMEDADES RENALES
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2.3.6 Cálculo del índice de órganos
Después de anestesiar a las ratas y extraer sangre, se extrajeron los riñones, los testículos, el epidídimo, las vesículas seminales y la próstata, se secaron con papel de filtro y se pesó la masa inmediatamente. El índice de órganos se calculó basándose en la masa de la rata.
Índice de órganos=masa de órganos/masa corporal
2.3.7 Detección de tejido
Después de extraer los testículos de las ratas, se pesó la masa y se colocó inmediatamente en un refrigerador de -80 grados para congelarla. Antes de la medición, se sacaron, se descongelaron y se añadió solución salina fisiológica preenfriada para preparar un homogeneizado de tejido en condiciones de baño de hielo, y se preparó un homogeneizado de tejido al 10%. El homogeneizado se centrifugó inmediatamente a 5,{4}} r/min durante 10 min y el sobrenadante se recogió para su uso. De acuerdo con los requisitos del kit, se utilizó el método de hidroxilamina para determinar el contenido de SOD en el tejido testicular y el método TBA para determinar el contenido de MDA en el tejido testicular.
Fig. 2 Diagrama de corriente de iones totales de Cistanches Herba y Cistanches Herba guisado con vino en modo de iones negativos
3 resultados
3.1 Diferencias en la composición de Cistanche deserticola antes y después del procesamiento
3.1.1 Diagrama de flujo de iones totales
En este estudio, el detector de espectrómetro de masas utilizó el modo de iones negativos de fuente de ionización por electropulverización (ESI-). La Figura 2 muestra el diagrama de flujo de iones total de Cistanche deserticola cruda y productos guisados con vino en modo de iones negativos. Se puede observar que la composición de las muestras de Cistanche deserticola es muy compleja y existen diferencias obvias entre Cistanche deserticola cruda y los productos guisados en vino. Además, al buscar en la base de datos existente y consultar la literatura relevante para la composición elemental y la coincidencia de compuestos, se identificó un total de 45 compuestos, como se muestra en la Tabla 3.
Tabla 3 Compuestos identificados en muestras de Cistanches Herba
3.1.2 Resultados de la PCA
Los diagramas PCA de Cistanche deserticola cruda y productos guisados con vino se muestran en la Figura 3, que se pueden agrupar por separado. Se puede determinar que debe haber diferencias en la composición de Cistanche deserticola antes y después del procesamiento.
3.1.3 Resultados OPLS-DA
Después del procesamiento OPLS-DA, el diagrama S-Plot se muestra en la Figura 4. Los dos extremos de la curva en forma de S en la figura representan los marcadores característicos con la mayor contribución en cada grupo. Al analizar los datos de los iones de fragmentos con valores de VIP superiores a 1 en ambos extremos de la curva en forma de S y compararlos con el control, se identificaron cuatro componentes diferenciales: echinacósido (tR=8.39 min, m/z 785. 250 9), verbascósido (tR=11.51 min, m/z
623.198 1), isoverbascósido (tR=13.38 min, m/z623.198 1) y tubulosido B (tR=18.41 min, m/z 665. 208 7).
LICOR DE CISTANCHE DE ALTA CALIDAD PARA ENFERMEDADES RENALES
3.2 Resultados de experimentos con animales
3.2.1 Observación del estado general
Después del modelado, las ratas mostraron una serie de síntomas como gusto por el calor y miedo al frío, acurrucarse y arquear la espalda, apatía, cabello opaco y desordenado, extremidades frías, disminución del apetito, peso corporal reducido y orina clara. Después de la administración, los síntomas anteriores en cada grupo mejoraron significativamente.
3.2.2 Cambios en la dieta y actividad voluntaria de ratas después del modelado
Después de la inyección continua de succinato sódico de hidrocortisona durante 14 días, se midieron el peso corporal, el número de actividades voluntarias en 5 minutos y la ingesta de alimentos, la ingesta de agua y la producción de orina de las ratas de cada grupo para determinar si el modelo de deficiencia de yang renal de hidrocortisona se estableció exitosamente. Los resultados se muestran en la Tabla 4. Como se muestra en la Tabla 4, después de 14 días de administración de hidrocortisona, en comparación con el grupo normal, todos los grupos mostraron una disminución en el peso corporal, una disminución en la ingesta de alimentos, un aumento en la ingesta de agua, una aumento en la producción de orina y una disminución en la actividad voluntaria, y hubo diferencias significativas (P < 0.05). Según la descripción de algunos síndromes de deficiencia de yang renal en la terminología de diagnóstico clínico y tratamiento de la medicina tradicional china: "miedo al frío y a las extremidades frías, especialmente debajo de la cintura y las rodillas, tez pálida u oscura, orina clara y larga, micción frecuente en noche, lengua pálida con pelaje blanco, pulso débil, etc." Combinados con la observación del estado general después del modelado, los síntomas después del modelado fueron consistentes con la descripción de la deficiencia de yang del riñón, lo que indica que el modelado fue exitoso.
| No. | Compuesto | t/min | Modo de ionización | Fórmula molecular | Valor teórico (m/z) | Valor experimental (m/z) | Error (×10⁻⁶) | Información del fragmento (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Azúcar de uva | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Tanino de uva | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | Sorbitol | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Media Leche Azúcar | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Nutriente C de origen vegetal | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Azúcar de pino | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Ácido succínico | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Nutriente B de origen vegetal | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Flavonoides del té | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Extracto de pera de Beijing | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Extracto de baya de Goji | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Extracto de hoja de piña | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Extracto de flor de hibisco | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Hidroxilactona | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Rizoma Dioscoreae | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Extracto de flor de paja | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | polen de abeja | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | -Caroteno | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | batata morada | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Extracto de pera de Beijing | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Extracto de flor de melocotón | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Extracto de ginseng | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Extracto de té oolong | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Extracto de hoja de loto | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Extracto de flor peluda | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Extracto de brotes de bambú | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Extracto de crisantemo | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Acetilflavona | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Extracto de fruta de longan | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |
Fig. 3 Diagrama de análisis de componentes principales de CistanchesHerba (1) y Cistanches Herba guisado con vino (2)
Fig. 4 S-Parcela de Cistanches Herba y Cistanches Herba guisados en vino
Tabla 4 Cambios en la dieta y la actividad autónoma de ratas después del modelado (xs ±, n=10)
| Grupo | Peso corporal (g) | Ingesta de alimentos 24 h (g) | Ingesta de agua 24 h (mL) | Producción de orina de 24 h (mL) | Recuento de actividad espontánea de 5 minutos |
|---|---|---|---|---|---|
| Normal | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Modelo | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| relaciones públicas | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| VP | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Notas:
Comparación con el grupo normal: *P < 0.05.
*P < 0.05 frente al grupo normal.
Tabla 5 Cambios en el peso corporal de ratas durante el ciclo de dosificación (xs ±, n=10)
| Grupo | Peso corporal (g) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| Normal | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Modelo | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| relaciones públicas | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| VP | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Notas:
*P < 0.05 frente al grupo normal.
*P<{{0}}.05 frente al grupo normal; #P<0,05 frente al grupo modelo; △P<0,05 frente al grupo PR. Lo mismo que a continuación.
3.2.3 Cambios en el peso corporal de las ratas.
Con base en los cambios de peso corporal de tres veces en los días 0, 14 y 44, se analizó el efecto de la inyección de succinato sódico de hidrocortisona im sobre el peso corporal de las ratas y la recuperación del peso corporal de las ratas después del tratamiento de intervención farmacológica. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
Puede verse en la Tabla 5 que después de 1 semana de alimentación adaptativa, el peso corporal de las ratas aumentó y estaba relativamente equilibrado. Los pesos corporales de las ratas fueron todos (200 ± 20) g. No hubo diferencias significativas entre los grupos, lo que indica que el entorno de alimentación y las condiciones dietéticas son adecuadas para la supervivencia de las ratas. Después de 14 días de administración de hidrocortisona, en comparación con el grupo normal, el aumento de peso corporal de las ratas en el grupo modelo y de cada grupo de medicación se redujo, y hubo una diferencia significativa (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was
3.2.4 Cambios en la temperatura corporal de las ratas.
Con base en los cambios de temperatura corporal de tres veces en los días 0, 14 y 44, se analizó el efecto de la inyección intramuscular de succinato de sodio de hidrocortisona sobre la temperatura corporal de ratas y la recuperación de la temperatura corporal de ratas después de la intervención farmacológica. . Los resultados se muestran en la Tabla 6.
3.2.5 Cambios en las actividades espontáneas de las ratas.
Con base en los cambios en el número de actividades espontáneas en 3 días los días 0, 14 y 44, el efecto de la inyección im de succinato sódico de hidrocortisona sobre el número de actividades espontáneas en ratas y la recuperación del número de actividades espontáneas Se analizaron las actividades en ratas después del tratamiento de intervención farmacológica. Los resultados Ver Tabla 7.
Se puede ver en la Tabla 7 que 14 días después de la inyección de hidrocortisona, en comparación con el grupo normal, el número de actividades espontáneas dentro de los 5 minutos de cada otro grupo disminuyó significativamente y hubo una diferencia significativa (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Índice de órganos
Después de 30 días de administración continua, las ratas se dejaron en ayunas durante 12 horas y se sacrificaron. Se midió la calidad de los órganos. Se observaron a nivel de órganos los efectos del modelo de deficiencia de yang renal inducida por hidrocortisona en los órganos de ratas y la administración de diferentes extractos de Cistanche deserticola. Recuperación de órganos de rata después de tomar el fármaco. Después de la administración de hidrocortisona, el peso corporal de las ratas varió mucho y la masa de los órganos también cambió significativamente. Este experimento utilizó el índice de órganos como indicador para considerar
Los efectos sobre los órganos se observaron antes y después de la administración. Los resultados se muestran en la Tabla 8.
Se puede ver en la Tabla 8 que, en comparación con el grupo normal, después de la inyección intramuscular de succinato sódico de hidrocortisona en ratas, los índices de órganos de los riñones, testículos, epidídimo y próstata en el grupo modelo disminuyeron (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
En general, en comparación con el grupo modelo, los índices de órganos de cada grupo de administración mejoraron, lo que indica que la Cistanche deserticola cruda, la Cistanche deserticola en vino y las píldoras Jingui Shenqi podrían aliviar la disminución en el índice de órganos en el modelo de deficiencia de riñón-yang.
Desde la perspectiva de cada órgano, en comparación con el grupo modelo, el grupo de vino Cistanche deserticola puede aumentar significativamente el índice de órganos del riñón (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Detección de indicadores de función renal
BUN y CREA reflejan la función renal. CREA en suero es el producto final de la materia orgánica que contiene nitrógeno y BUN en suero es el principal producto final del metabolismo de las proteínas. Ambos se excretan principalmente por filtración glomerular [10-11]. Cuando la función renal se daña, la función de filtración glomerular disminuye y las concentraciones de ambos aumentan. Los niveles de BUN y CREA en sangre reflejan el estado de la función renal: cuanto más altos son sus niveles, más grave es el daño a la función renal. En este experimento, se detectaron los contenidos de BUN y CREA en suero de rata para evaluar los efectos de cada grupo de administración sobre la función renal en ratas con deficiencia de yang renal inducida por hidrocortisona.
Como se puede ver en la Tabla 9, en comparación con el grupo normal, los contenidos de BUN y CREA en el grupo modelo aumentaron y hubo una diferencia significativa (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.
3.2.8 Detección de indicadores de hormonas sexuales
Los riñones son la base del carácter innato y desempeñan un papel importante en el crecimiento, el desarrollo y los procesos vitales humanos. La medicina tradicional china cree que los riñones gobiernan la reproducción y la relación entre los riñones y el sistema reproductivo es muy estrecha. Cada vez más investigadores han descubierto que los pacientes con deficiencia de yang de riñón tienen cambios significativos en el eje hipotalámico-pituitario-gónadal, a menudo acompañados de síntomas de disminución de hormonas sexuales como T y E2 [12]. En este experimento, se midieron los contenidos de T y E2 en suero para determinar los efectos de cada grupo de administración sobre las hormonas sexuales en ratas con deficiencia de yang renal inducida por hidrocortisona.
Como se puede ver en la Tabla 10, en comparación con el grupo normal, los contenidos de T y E2 del grupo modelo disminuyeron (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Detección del índice de antioxidantes
La SOD es un antioxidante que refleja la capacidad del cuerpo para eliminar los radicales libres, mientras que la MDA es el producto final de la reacción del estrés oxidativo y puede reflejar el grado de daño oxidativo del cuerpo. En este experimento, se midieron los contenidos de SOD y MDA en los testículos para determinar la actividad antioxidante de cada grupo de administración contra el modelo de deficiencia de yang renal inducida por hidrocortisona.
Como se puede ver en la Tabla 11, en comparación con el grupo normal, el contenido de SOD en el grupo modelo disminuyó (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Agrupación: las ratas tuvieron libre acceso al agua y a la dieta. Después de 1 semana de alimentación adaptativa, se dividieron aleatoriamente en 5 grupos (Tabla 2), con 10 ratas en cada grupo, a saber, grupo normal, grupo modelo, grupo Cistanche deserticola cruda (PR), grupo Cistanche deserticola guisada con vino (PW). y control positivo del grupo de píldoras Jinkui Shenqi (JK). (2) Modelado: excepto el grupo normal, a los otros cuatro grupos se les inyectó succinato sódico de hidrocortisona por vía intramuscular, con una dosis de 20 mg/kg, durante 14 días consecutivos. Al grupo normal se le inyectó la misma dosis de solución salina normal. Se observó el estado general de las ratas de cada grupo para determinar si presentaban síntomas como miedo al frío, preferencia por el calor, extremidades frías, orina clara y larga, espalda enroscada y arqueada, cabello opaco y desordenado y depresión mental. Al mismo tiempo, se midieron el peso corporal, el número de actividades espontáneas, la ingesta de alimentos, la ingesta de agua, la diuresis y otros indicadores de las ratas de cada grupo.
