¿Son útiles los extractos de Cistanche para tratar la EP (enfermedad de Parkinson)?

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Introducción: la mutación DJ-1 es un motivo causal deenfermedad de Parkinson(PD). Leucine166Proline (L166P) y C106S son dos mutaciones DJ-1 importantes. En este estudio, establecimos modelos celulares de PD (SH-SY5Y) transfectados con peróxido de hidrógeno (H, O) L166P y C106S DJ-1-enfermedad de Parkinson) e investigó los efectos deextractos de cistanchey compuestos bioactivos clave, incluidos el acteósido, el equinacósido, el ácido cafeico y los glucósidos totales de Cistanche en estos dos modelos. Métodos: después de expresar los plásmidos L166P y C106S DJ-1 marcados con FLAG en Escherichia coli, los plásmidos expresados ​​se recolectaron, se trataron con una enzima de restricción y se identificaron mediante electroforesis de ADN. Después de la purificación, los plásmidos L166P DJ-1 y C106S DJ-1 se transfectaron por separado en células SH-SY5Y usando liposomas. Las células SH-SY5Y transfectadas se detectaron mediante transferencia Western e inmunocitoquímica. La viabilidad celular se determinó usando un ensayo MTT.

Resultados: tanto la transferencia Western como la inmunocitoquímica mostraron que L166P y C106S DJ-1 se expresaron en gran medida en las células SH-SY5Y transfectadas. Los ensayos de MTT mostraron que la transfección con L166P o C106S DJ-1 redujo la viabilidad de las células SH-SY5Y expuestas a H, O, en comparación con las células SH-SY5Y no transfectadas. Además,extractos de cistanchey los compuestos bioactivos clave, incluidos el acteósido, el equinacósido, el ácido cafeico y los glucósidos totales de Cistanche, inhibieron significativamente la disminución de la viabilidad celular causada por las células SH-SY5Y transfectadas con H, O, inL166P y C106S DJ-1-. Conclusiones: estos hallazgos sugieren que establecimos con éxito modelos de células SH-SY5Y transfectadas de PD sensibles y estables con H, O, inducidas por L166P DJ-1-y C106S DJ-1-(enfermedad de Parkinson)yextractos de cistanchepor lo tanto, puede ser útil para tratar la EP(enfermedad de Parkinson).

Cistancheextracto tiene muchos beneficios

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DISCUSIÓN

Las mutaciones de DJ-1 tienen una estrecha asociación con la enfermedad de Parkinson autosómica recesiva de aparición temprana(enfermedad de Parkinson)(Bonifati et al., 2003; Park et al., 2015). En una familia italiana, la causa es una mutación sin sentido en DJ‐1 (L166P) (Bonifati et al., 2003). Leu-166 se localiza en el medio de la hélice C-terminal (Bonifati et al., 2003). La presencia de Pro, un rompedor de hélice fuerte, probablemente desestabiliza la hélice terminal en el mutante DJ-1 (Bonifati et al., 2003), lo que conduce al despliegue de la porción C-terminal de la proteína, lo que afectaría su homogeneización. oligomerización (Bonifati et al., 2003). En células transfectadas, L166P DJ-1 es inestable debido a una degradación excesiva (Bonifati et al., 2003; Gorner et al., 2004; Moore, Zhang, Dawson y Dawson, 2003). Bonifati et al. (2003) sugirieron que la mutación L166P afecta la homodimerización y la función normal de DJ-1 y, por lo tanto, conduce a la aparición temprana de EP(enfermedad de Parkinson).

En este estudio, encontramos que L166P DJ-1 está presente dentro de un polímero/complejo con una masa molecular de 70 kDa en células SH-SY5Y transfectadas. Se supuso que la estructura de DJ-1 adoptaba la misma estructura sándwich a/ que la proteasa PH1704 (Bonifati et al., 2003). Debido a las estructuras similares de DJ-1 y PH1704, asumimos que, al igual que PH1704, DJ-1 forma agregados superiores (trimers de dimmers). Gorner et al. (2004) mostró que dentro de las células transfectadas y los linfocitos de la enfermedad de Parkinson(enfermedad de Parkinson)pacientes, el monomérico L166P DJ-1 está presente en las estructuras superiores de las células transfectadas y los linfocitos de la enfermedad de Parkinson(enfermedad de Parkinson)pacientes Esto puede ser un resultado directo del mal plegamiento de la proteína L166P DJ-1 o de la formación de complejos entre la L166P DJ-1 monomérica y otras proteínas. Además, además de la estructura de la proteína, la mutación L166P DJ-1 también cambió la función antioxidante de DJ-1 (Macedo et al., 2003; Taira et al, 2004). Esto es digno de mención, ya que el estrés oxidativo es un factor importante en la EP.(enfermedad de Parkinson), y las células SH-SY5Y transfectadas con L166P DJ-1 fueron más sensibles a H, O que las células no transfectadas. Combinado con la investigación anterior de que las células SH-SY5Y transfectadas con DJ-1 de tipo salvaje se establecieron con éxito en nuestro laboratorio (Zhang, Wang, & Pu, 2007), sugerimos que H, O, indujo L166P DJ{{10 }}Las células SH-SY5Y transfectadas son un nuevo modelo celular útil de EP(enfermedad de Parkinson).

Cistancheextracto puede prevenirenfermedad de Parkinson

Se ha informado que DJ-1 reduce el estrés oxidativo (Taira et al, 2004; Zhou & Freed, 2005). Uno de los mecanismos es la oxidación de la propia proteína (Taira et al., 2004). Entre los tres residuos Cys de DJ-1, Cys-106 es el más sensible al estrés oxidativo. Además, el

la función antioxidante de DJ-1se regula a través de la oxidación de Cys-106 (Freed & Zhou, 2006), y la mutación de Cys-106conduce a la pérdida de la función antioxidante de DJ-1 (Blackinton et al, 2009; Kinumi, Kimata, Taira, Ariga, & Niki, 2004). DJ-1 también actúa como chaperona molecular que inhibe la formación de agregados de -sinucleína (Shendelman et al., 2004) cuando Cys-106 se oxida a ácido sulfínico (Zhou & Freed, 2005). Estos hallazgos indican que Cys-106 es un contribuyente clave para la función adecuada de DJ-1. Como se muestra en la Tabla 1, las células SH-SY5Y transfectadas con C106S DJ-1 fueron más sensibles a H, O que las células no transfectadas. Según la investigación anterior (Zhang et al., 2007), esto también sugiere que las células SH-SY5Y transfectadas con C106S DJ-1-inducidas con H, O, también pueden ser un modelo celular útil de la enfermedad de Parkinson(enfermedad de Parkinson).

Utilizando células SH-SY5Y transfectadas con L166P DJ-1 o C106S DJ-1, detectamos laefecto de los extractos de Cistanchey los compuestos bioactivos clave, incluidos el acteósido, el equinacósido, el ácido cafeico y los glucósidos totales de Cistanche en HO, indujeron reducciones en la viabilidad celular. Los presentes resultados muestran que el acteósido, el equinacósido, el ácido cafeico y los glucósidos totales de Cistanche aumentaron la viabilidad celular de una manera dependiente de la concentración, lo que indica una relación estable y lineal entre los niveles de L166P DJ-1y C106S DJ-1 y viabilidad celular SH-SY5Y.

En resumen, establecimos con éxito modelos de células SH-SY5Y transfectadas con H, O2 sensibles y estables inducidas por H, O2-1-y C106S DJ-1-(enfermedad de Parkinson)y confirmó queextractos de cistanchemejoró la neurotoxicidad inducida por H, O, en estos dos modelos. Anticipamos que estos dos modelos celulares serán efectivamente utilizados para DP(enfermedad de Parkinson)investigación yextractos de cistanchepor lo tanto, puede ser útil para tratar la EP(enfermedad de Parkinson)en el futuro.

Beneficios de los extractos de Cistanche: anti-enfermedad de Parkinson

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Beneficios deCistancheextractos: tratamientoParkinsonenfermedad