Parte 2 Efectos preventivos de los glucósidos de feniletanol de Cistanche tubulosa en la fibrosis hepática inducida por albúmina de suero bovino en ratas
Mar 06, 2022
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Expresión de NF-κB p65 y colágeno I después de la intervención farmacológica en células HSC-T6 Para caracterizar las señales de fibrosis hepática, se determinaron dos genes reguladores clave en el hígado mediante un ensayo de RT-PCR. Los datos mostraron que las células tHSC-T6 del grupo de control tenían niveles más bajos de ARNm de NF-κB y colágeno tipo I. Por el contrario, TGF- 1 indujo a las células HSC-T6 a aumentar notablemente el ARNm de NF-κB (P < 0.01)="" y="" col-i="" (p="">< 0,01),="" con="" niveles="" superiores="" a="" los="" del="" grupo="" de="" control.="" en="" presencia="" de="" diferentes="" concentraciones="" de="">glucósido feniletanoide de cistanche), los resultados de NF-κB p65 [P NF-κB=0.001 para 100 ug/ml, P NF-κB=0.002 para 75 ug/ml, P NF-κB {{ 11}}.007 para 50 ug/ml, y P NF-κB=0.012 para 25 ug/ml, respectivamente] y Col-I [P Col-I=0.006, P Col -I=0.009, P Col-I=0.014, P Col-I=0.019, respectivamente] mostraron expresiones reducidas de estos ARNm (Fig. 7).
Análisis de transferencia Western del nivel de colágeno I después de la intervención del fármaco en células HSC-T6 La figura 8 muestra los niveles de expresión de la proteína colágeno I en células HSC-T6 de los diferentes grupos experimentales. El nivel de expresión de la proteína colágeno I disminuyó significativamente en los diversos grupos de dosis de CPhG.(glucósido feniletanoide de cistanche)(100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml y 25 ug/ml) en comparación con el grupo de TGF- 1
Discusión
CPhG(glucósido feniletanoide de cistanche)es un glucósido feniletanoide aislado y purificado del rizoma de Cistanche, que se utiliza como medicina herbal china tradicional. En los últimos años, se ha demostrado que las CPhG poseen una poderosa capacidad para prevenir lesiones hepáticas [20]. Por lo tanto, nuestro objetivo fue investigar si los CPhG tienen efectos inhibitorios sobre la fibrosis hepática por fibrosis hepática inducida por BSA en ratas. BJRG se usa comúnmente como medicamento terapéutico para la fibrosis hepática en China. Está hecho de caparazón de tortuga. Radix Paeonia rubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis, etc. tienen los efectos de reponer Qi y sangre, aliviar la fatiga y suavizar los nódulos. Además, estudios previos muestran que tiene la función obvia de bloquear la fibrosis hepática temprana, inhibir la proliferación de células que almacenan grasa y reducir la síntesis de colágeno [21]. Por lo tanto, BJRG se utilizó como fármaco positivo en este estudio.
Los cambios patológicos de la fibrosis hepática en ratas inducidas por inyecciones de BSA son similares a los de la cirrosis portal humana [22]. CPhG(glucósido feniletanoide de cistanche)dependiente de la dosis alivió el grado de fibrosis hepática e inhibió la transformación de HSC en células similares a miofibroblastos, redujo los niveles elevados de ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 séricos y el índice hepático, y suprimió notablemente la expresión de colágeno I, colágeno III y TGF- 1 en tejido hepático. Las etapas de la fibrosis hepática se correlacionan con los niveles séricos de HA, LN y IV-C, que como marcadores pueden desempeñar un papel en la detección del grado de fibrosis hepática [23]. Se ha informado que HA es el principal recurso de la matriz extracelular. IV-C como elemento esencial de la membrana basal se sintetizará en abundancia y se depositará en gran medida en las primeras fases de la cirrosis hepática. Los niveles séricos de LN y IV-C son los índices de la tasa de recambio de la membrana basal y muestran el grado de fibrosis en el área portal y los capilares sinusoidales [24]. PC III es un marcador en el diagnóstico de fibrosis hepática y cirrosis temprana, pero su sensibilidad y especificidad no son altas, y no hay una diferencia significativa entre las diversas etapas de fibrosis en muchas referencias [24, 25].
Este estudio obtuvo un resultado similar. Además, las observaciones de secciones teñidas con tricrómico de H&E y Masson muestran tejidos hepáticos normales con lóbulos hepáticos y sinusoides hepáticos distintos. La estructura del tejido hepático en el grupo modelo estaba desordenada, y el tejido hepático y el sinusoide hepático fueron reemplazados por una gran cantidad de tejido conectivo. Sin embargo, se observó una mejora significativa en los grupos de tratamiento en comparación con el grupo modelo. Es importante destacar que la expresión de colágeno tipo I y colágeno tipo III desempeña un papel esencial en el desarrollo de la fibrosis hepática, cuyo bloqueo puede prevenir y tratar la fibrosis hepática. Por lo tanto, la generación y depósito en el tejido hepático de colágeno tipo I y colágeno tipo III podría servir como un determinante importante de la eficacia contra la fibrosis hepática. El TGF- 1 también es una citoquina profibrogénica importante en la lesión hepática y es biológicamente activo con múltiples acciones farmacológicas [26]. Se requiere un equilibrio entre estas acciones para mantener la homeostasis tisular. La expresión aberrante de TGF- 1 está implicada en la patogenia de las enfermedades hepáticas [27, 28]. Se sabe que TGF- 1 es una citoquina crucial que está involucrada en las primeras etapas de la fibrosis hepática.
El estrés oxidativo desencadena TGF- 1, lo que hace que este último estimule la producción y el depósito de ECM [29]. Por lo tanto, una de las estrategias efectivas para producir fármacos contra la fibrosis hepática es identificar agentes anti-TGF- 1. El análisis inmunohistoquímico mostró que las expresiones de colágeno tipo I, colágeno tipo III y TGF- 1 podían detectar el proceso patológico de fibrosis hepática. Las expresiones de colágeno tipo I, colágeno tipo III y TGF- 1 en los grupos de tratamiento están disminuidas, las cuales fueron significativamente más bajas en los CPhG de dosis alta(glucósido feniletanoide de cistanche)grupo de tratamiento en particular, y sugirió que CPhGs es un inhibidor efectivo de colágeno tipo I, colágeno tipo III y TGF- 1. Presumiblemente, las CPhG pueden mejorar la actividad de la colagenasa, manteniendo el equilibrio dinámico de la síntesis y degradación de la MEC, retrasando y previniendo así la formación de fibrosis hepática. CPhG(glucósido feniletanoide de cistanche)no solo podría mejorar la fibrosis hepática inducida por BSA en ratas, sino que también podría estar asociado con la inhibición de la activación de HSC in vitro. Se cree que la activación de HSC representa el paso crucial de la fibrogénesis. En este estudio, los resultados ilustraron que la administración de CPhG de 25 a 100 ug/ml atenuó notablemente la disminución de NF-κB p65, la expresión de ARNm de colágeno I y la expresión de proteína de colágeno I en HSC. NF-κB juega un papel importante en la modulación de la respuesta inmune a infecciones o estímulos [30]. La acumulación de NF-κB en las células hepáticas puede resultar en el reclutamiento de citoquinas/mediadores inflamatorios, induciendo así el desarrollo de fibrosis [31, 32]. Además, el colágeno también es un índice sensible que refleja el nivel de fibrosis y representa aproximadamente el 50 por ciento de la proteína total en el hígado fibroso [33].
Como resultado, postulamos que el mecanismo molecular contra la hepatofibrosis está relacionado con las CPhG.(glucósido feniletanoide de cistanche)-inactivación mediada por la expresión de NF-κB, en la que el beneficio contribuye a las funciones sinérgicas de atenuar la inmunotoxicidad y el estrés inflamatorio en el tejido hepático lesionado por BSA, corrigiendo aún más el dismetabolismo para mejorar las funciones hepáticas.
Conclusiones
En conclusión, nuestros estudios indican que las CPhG(glucósido feniletanoide de cistanche)atenuar significativamente la extensión de la fibrosis hepática inducida por BSA en ratas. Su mecanismo puede deberse al menos parcialmente al efecto inhibitorio de las CPhG sobre la composición de la MEC y la estimulación de la degradación de la MEC, y/o por inhibición directa de la síntesis de colágeno tipo I, colágeno tipo III y la expresión de TGF{ {0}}. Por lo tanto, esperábamos que las CPhG se pudieran usar en productos para el cuidado de la salud o en medicamentos clínicos para la prevención de la fibrosis hepática humana. Se requieren estudios futuros para establecer la eficacia de las CPhG como un potente fármaco contra la fibrosis hepática.
abreviaturas
CPhG:Glicósidos de feniletanol de cistanche; BSA: albúmina de suero bovino; HSC-T6: células estrelladas hepáticas; Hip: Hidroxiprolina; BJRG: tabletas compuestas de Biejiarangan; TGF- 1: factor de crecimiento transformante 1; ALT: alanina aminotransferasa; AST: aspartato aminotransferasa; HA: ácido hialurónico; LN: laminina; PC III: procolágeno tipo III; IV-C: colágeno tipo IV; NF-κB: potenciador de la cadena ligera kappa del factor nuclear de las células B activadas; RT-PCR: reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa; SDS-PAGE: Electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida.
Conflicto de intereses Los autores declaran que no tienen conflictos de intereses. Contribuciones de los autores TL, JZ, SPY, LM, MT y SLZ concebido y diseñado los experimentos. SPY, TL y JZ analizaron los datos. SPY y JZ escribieron el manuscrito. TL, LM y JZ revisaron el manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final. Reconocimiento Esta investigación fue apoyada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81260624). Los autores desean expresar su más sincero agradecimiento al profesor Tao Liu por las mejoras sugeridas para la redacción de este documento. Detalles del autor 1 Departamento de Toxicología, Escuela de Salud Pública, Universidad Médica de Xinjiang, No. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Uyghur Autonomous de Xinjiang
Región, China. 2 Laboratorio clave para la medicina uigur, Instituto de Materia Médica de Xinjiang, Urumqi 830004, China. 3 No. 140 Xinhua South Road, distrito de Tianshan, Urumqi 830000 Región Autónoma Uigur de Xinjiang, China. Recibido: 6 agosto 2015 Aceptado: 24 noviembre 2015
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