Glucósidos Feniletanoideos: Método Para Separar Los Glucósidos Totales Del Alcohol Fenetílico Y Su Efecto Inhibidor Sobre La Monoamino Oxidasa-A

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Aislamiento e identificación de glucósidos feniletanoides de Aloysia Polystachya y su actividad como inhibidores de la monoaminooxidasa-A

Autores

Ana Maria S. Pereira1, Camila C. Guimarães1, Sarazete IV Pereira1, Eduardo J. Crevelin2, Gustavo HT Pinto1, Lucas JF Morel1, Bianca W. Bertoni1, Suzelei C. França1, Silvia H. Taleb-Contini1

afiliaciones

1 Departamento de Biotecnología en Plantas Medicinais, Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Ribeirão Preto, SP, Brasil

2 Departamento de Química, Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de

São Paulo (USP), Monte Alegre, Ribeirão Preto, SP, Brasil

Palabras clave:aloysia polystachya, verbenaceae, actividad antidepresiva, feniletanoides, inhibidores de la monoaminooxidasa, Acteoside

Resumen

Aloysia polystachya es utilizada como sedante y antidepresivo por las poblaciones indígenas de Argentina y Paraguay, pero no se han determinado los compuestos asociados con estas actividades. Hemos separado e identificado los principales constituyentes del extracto hidroetanólico de A. polystachya mediante cromatografía líquida de ultrarresistencia-espectrometría de masas y confirmado la presencia de acteósido, isoactósido, 6'-acetilactósido y 4',4''',5, 5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O–C7'']-biflavona por espectroscopía de RMN. Actividades inhibidoras del extracto hidroetanólico y purificadoglucósidos de feniletanoidefrente a la monoaminooxidasa-A se evaluaron utilizando un ensayo fluorométrico estándar. El extracto hidroetanólico inhibió la actividad de la monoaminooxidasa-A de forma dependiente de la dosis con un IC50 de 9,2 µg/mL, mientras que el inhibidor selectivo de la monoaminooxidasa clorgilina presentó un IC50 de 0,06 µg/mL ( 0,22 µM).Acteósidofue el inhibidor más fuerte de la monoaminooxidasa-A (valor IC50 de 5 µM), mientras que el isoactósido y el 6'-acetilactósido mostraron valores IC50 de alrededor de 10 µM. Los resultados mostraron que se ha encontrado que los feniletanoides de un extracto hidroetanólico de A. polystachya tienen actividad inhibidora contra la monoaminooxidasa-A. Es probable que el modo de acción de los acteósidos tenga múltiples objetivos, lo que implica la regulación a la baja de las moléculas inflamatorias y la neutralización de las reacciones de oxidación, así como la inhibición de la monoaminooxidasa-A.

Introducción

Según un informe reciente de la Organización Mundial de la Salud [1], más de 320 millones de personas (4,4 por ciento de la población mundial) padecen depresión y trastornos de ansiedad, cometiéndose alrededor de 800 mil suicidios al año como consecuencia de estos problemas mentales. . Aunque el tratamiento con antidepresivos sintéticos

está disponible, muchos pacientes sufren efectos secundarios como boca seca, estreñimiento, mareos, visión borrosa, aumento del apetito, aumento de peso, insomnio y problemas renales [2]. Por esta razón, los enfoques que utilizan la medicina alternativa y complementaria, incluida la fitoterapia, se han utilizado en el tratamiento de varios tipos de trastornos mentales [3].

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Varios estudios preclínicos y clínicos han aportado pruebas que respaldan los beneficios de los medicamentos a base de plantas en el tratamiento de los trastornos de ansiedad generales y específicos [4, 5]. De particular interés son las investigaciones sobre las propiedades ansiolíticas de Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae), una especie aromática que se encuentra principalmente en Argentina y Paraguay. Según estudios etnofarmacológicos, las poblaciones locales utilizan la planta, comúnmente conocida como burrito, como tónico digestivo, sedante y antidepresivo [6, 7]. Aunque las propiedades ansiolíticas y antidepresivas de los extractos hidroetanólicos de A. polystachya han sido confirmadas por estudios preclínicos [8–10], no se han realizado investigaciones fitoquímicas con el objetivo de identificar los compuestos asociados con estas actividades.

Anteriormente se ha demostrado que las actividades antidepresivas de algunas plantas medicinales, por ejemplo, Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) y Peganum harmala L. (Nitrariaceae), están asociadas con la inhibición de la monoaminooxidasa-A (MAO-A) [11 –13]. La familia MAO se distribuye por los sistemas nerviosos central y periférico y la sobreexpresión de estas enzimas promueve la desaminación oxidativa de las monoaminas con reducciones en los niveles de los neurotransmisores serotonina, norepinefrina y dopamina, lo que resulta en la aparición de trastornos psiquiátricos. Tales procesos de desaminación también generan sustancias como peróxido de hidrógeno, radicales libres de oxígeno y aldehídos que son responsables del estrés oxidativo de las células. Los MAO existen en dos isoformas principales que difieren con respecto a la distribución, la especificidad del sustrato y la sensibilidad a los inhibidores. La isoforma MAO-A juega un papel importante en la depresión y los trastornos de ansiedad, mientras que la MAO-B está implicada en enfermedades neurodegenerativas [13-17].

A la luz de lo anterior, planteamos la hipótesis de que las propiedades ansiolíticas y antidepresivas de A. polystachya derivan, al menos en parte, de la presencia de inhibidores de la MAO-A. Para probar esta hipótesis, identificamos los principios activos presentes en el extracto hidroetanólico de hojas de A. polystachya y evaluamos los efectos del extracto crudo y los principales constituyentes aislados del mismo sobre la actividad MAO-A.

Resultados y discusión

El extracto hidroetanólico de hojas de A. polystachya se sometió a cromatografía líquida de ultrarresistencia-espectrometría de masas (UPLC-MS), y el cromatograma así obtenido se presiente en la ▶Fig. 1a. Los componentes principales del extracto se purificaron mediante cromatografía en columna y cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa (RP-HPLC), y se identificaron comoacteósido(verbascósido sin), isoactósido, 6'-acetilactósido y 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3''-trimetoxi-[C7–O– C7'']-biflavona en comparación con sus datos de 1H- y 13C-NMR, HSQC, HMBC (▶Tabla 1S, 2S, Información de apoyo) y MS (▶Fig. 1b-e) con valores informados en la literatura [18 –20]. la concentracion deacteósidoen el extracto hidroetanólico, determinado por HPLC, fue de 108,65 ± 1,3 µg/mg de extracto seco. Esto representa el primer registro de los constituyentes de extractos de hojas de A. polystachya, aunque el aceite esencial de la planta ha sido analizado previamente y se encontró que contiene los monoterpenos carvona y limoneno como componentes principales [21].

El extracto hidroetanólico crudo de hojas de A. polystachya inhibió la actividad de MAO-A de manera dependiente de la dosis (▶Fig. 2a) con un IC50 de 9,2 µg/mL, mientras que el inhibidor selectivo de la MAO clorgilina exhibió un IC5 0 de 0,06 µg/mL (0,22 µM). el purificadoacteosidostambién mostró actividades inhibitorias contra MAO-A (▶Fig. 2b), presentando el acteósido el valor más bajo de IC50 de 5 µM (3,1 µg/mL) seguido por el isoactósido con un IC50 de 10,1 µM (6,3 µg/mL) y 6'- acetilactósido con una IC50 de 9,5 µM (6,3 µg/mL). La inhibición de la MAO-A conduce al restablecimiento de los niveles de serotonina, norepinefrina, dopamina y tiramina, que son neurotransmisores clave en el control de la ansiedad y la depresión [16]. Por lo tanto, la presencia de diversos inhibidores de la MAO-A en las hojas de A. polystachya explica, al menos en parte, la actividad antidepresiva y ansiolítica de la especie informada anteriormente [8-10].

El uso de mezclas de plantas de múltiples componentes puede ser ventajoso en el tratamiento de enfermedades de etiología compleja como la ansiedad, la depresión y otras afecciones neurológicas. Actualmente, el uso de fitomedicamentos en el tratamiento de enfermedades que afectan el sistema nervioso se basa en el paradigma de los ligandos dirigidos a múltiples dianas,

es decir, productos farmacéuticos que tienen actividades multiobjetivo resultantes de la presencia de sustancias como polifenoles con propiedades antiinflamatorias, antioxidantes e inhibidoras de la MAO que son capaces de conferir neuroprotección [20, 22–25].

Sin embargo, cabe señalar que el carácter polar de las sustancias polifenólicas podría dificultar las interacciones con sus dianas moleculares. Sin embargo, estudios clínicos han demostrado que el contacto entre polifenoles y metabolitos secundarios no polares presentes en los extractos puede modificar la permeabilidad de las membranas celulares y facilitar la captación de compuestos polares [23]. Por lo tanto, los extractos complejos de plantas que contienen agentes multiobjetivo que interactúan con sus receptores de manera pleiotrópica generan un sinergismo farmacológico que afecta numerosos procesos, incluido el movimiento de metabolitos polares a través de las membranas celulares. En este contexto, Li et al. [26] empleó un modelo de pez cebra para demostrar queacteósidopodría penetrar la barrera hematoencefálica y propuso que el glucósido feniletanoide podría tener un efecto terapéutico potencial en la enfermedad de Parkinson.

Los neurotransmisores monoaminérgicos son los principales objetivos de los antidepresivos modernos, ya que sus deficiencias son responsables de los síntomas debilitantes de la depresión. Un reciente estudio in vivo demostró que los extractos etanólico y acuoso de Lippia citriodora (Verbenaceae) y su principal componenteacteósidoexhibió efectos ansiolíticos, hipnóticos y relajantes musculares y estas propiedades se atribuyeron, en parte, a una interacción con el receptor de ácido gamma-aminobutírico tipo A (GABAA) [27].

Los estudios clínicos han revelado que los fármacos con capacidad para bloquear las citocinas inflamatorias, como el TNF-, u otros componentes de la vía de señalización inflamatoria, como la ciclooxigenasa-2 (COX-2), son eficaces para reducir síntomas depresivos en pacientes con artritis reumatoide, psoriasis y cáncer, así como en aquellos que padecen trastornos psiquiátricos importantes [28]. En este contexto, se ha informado queacteósidopuede atenuar la producción y liberación de moléculas inflamatorias, como el óxido nítrico (NO), el TNF- y la interleucina 12 (IL-12) en macrófagos estimulados por lipopolisacárido/interferón-gamma (LPS/IFN-) [29] , así como histamina y ácido araquidónico en mastocitos RBL-2H3 [30]. Además,acteósidoes capaz de reducir los niveles de TNF- , IL-1 , IL-8, IL-6 y NO, y de activar la caspasa-1, factor nuclear kappa-B

(NF-κB), NO sintasa y proteína activadora-1 [31] inducida por IL-32 y/o LPS en células TH-1 y macrófagos [32].

Algunos de estos mediadores inflamatorios, como IFN, IL-6, IL-8 e IL-1, se han encontrado en niveles anormales tanto en muestras de tejido periférico como post-mortem de personas deprimidas. , y se han relacionado con los síntomas de la depresión [33]. La activación de estas moléculas por factores estresantes psicosociales puede promover cambios funcionales significativos en el cerebro, lo que lleva al desarrollo de conductas depresivas y otros trastornos psiquiátricos. Los IFN, IL-1 y TNF-, por ejemplo, pueden aumentar la expresión y función de las bombas receptoras de serotonina, noradrenalina y dopamina, reduciendo así la disponibilidad de estos neurotransmisores en la hendidura sináptica [28]. Además, IFN-, IL-6, TNF- y el estrés oxidativo pueden activar la indoleamina 2,3 dioxigenasa (IDO), una enzima responsable de la degradación del triptófano y, por lo tanto, reducir la concentración del precursor primario de síntesis de serotonina [34].

Acteósido, isoactósido y 6'-acetilactósido contienen restos de hidroxifeniletilo y cafeoílo que se sabe que están asociados con propiedades antioxidantes [35, 36], y el propio actósido muestra una actividad antioxidante considerable [37]. Los estudios han demostrado queacteósidoinhibe la agregación del péptido -amiloide (A) de manera dependiente de la dosis, funciona como un agente neuroprotector y mejora la memoria, y estas propiedades se han atribuido a la actividad antioxidante del agente [38, 39]. Teniendo en cuenta que numerosas especies ricas en fenoles con propiedades antioxidantes se utilizan en el tratamiento de trastornos neurológicos [15], se ha sugerido que los efectos antidepresivos y ansiolíticos de laglucósidos de feniletanoideaislados de A. polystachya también pueden resultar de sus actividades antioxidantes. Esta suposición fue apoyada por Xu et al. [40], quienes presentaron evidencia sobre la relación entre el aumento del estrés oxidativo y la depresión/ansiedad.

Con base en lo anterior, concluimos que las propiedades antidepresivas del extracto hidroetanólico de las hojas de A. polystachya y de los feniletanoides purificados aislados del mismo pueden explicarse por modos de acción multiobjetivo que implican la inhibición de la MAO-A, la regulación a la baja de moléculas inflamatorias y neutralización de reacciones de oxidación. Por lo tanto, los resultados presentados aquí respaldan nuestra hipótesis original de que las actividades ansiolíticas y antidepresivas del extracto hidroetanólico de A. polystachya resultan, al menos en parte, de la inhibición de la MAO-A. Sin embargo, la relación estructura-actividad delglucósidos de feniletanoideidentificado en este estudio requiere más atención para que se puedan diseñar nuevas moléculas para el tratamiento de trastornos neurológicos específicos.

Materiales y métodos

Material vegetal

Las hojas de A. polystachya fueron cosechadas en la Farmácia da Natureza da Terra de Ismael (Jardinópolis, SP, Brasil) en enero de 2016. El material vegetal fue identificado por la Dra. Lúcia Rossi (Instituto Botânico, São Paulo, SP, Brasil), y se depositó un espécimen comprobante en el Herbario de Plantas Medicinales de la UNAERP con número de comprobante

HPM-1213.

HPM-1213. El Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis ​​(nº 02001.005074/ 2011-19) otorgó permiso para evaluar las bioactividades de los extractos de plantas brasileñas.

Preparación del extracto hidroetanólico de Aloysia polystachya

Las hojas (1000 g) se secaron durante 72 h en un horno de aire circulante a 45 grados, se pulverizaron y se pasaron a través de un tamiz de malla 40-. El material en polvo se remojó en agua: etanol (20:80; v/v) durante 7 días y posteriormente se filtró a través de papel de filtro Whatman No. 41. El filtrado se redujo a sequedad en un evaporador rotatorio y se liofilizó para producir

130,2 g de extracto crudo seco, lo que da como resultado una proporción de extracto de fármaco de 7,6:1.

Separación e identificación de constituyentes por cromatografía líquida de ultra rendimiento-espectrometría de masas

Los análisis cromatográficos se realizaron utilizando un sistema Waters Acquity UPLC H-Class equipado con un detector de matriz de diodos (DAD) y un espectrómetro de masas de cuadrupolo en tándem Waters Xevo TQ-S con una fuente de pulverización Z que funciona en el modo de iones negativos. Soluciones madre que contienen 1.0 mg/mL de extracto o los estándaresacteósido, isoactósido, 6'-acetilactósido y 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O–C7''] -flavonas en metanol de grado LC se prepararon por separado, con sonicación durante 30 min cada una cuando fue necesario, y se filtraron a través de 0filtros Millipore de 0,45 μm (Merck Millipore). las soluciones se diluyeron a 10 µg/mL con metanol y se inyectaron alícuotas (5 µL) en una columna Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 (100 × 4,6 mm id; tamaño de partícula de 2,7 µm). La fase móvil consistió en agua con 0,1 por ciento de ácido fórmico (disolvente A) y metanol con 0,1 por ciento de ácido fórmico (disolvente B) suministrada a un caudal de 0,5 mL/min según el perfil de elución: isocrático con 3 por ciento de B entre 0 y 4 min, seguido de gradientes lineales de 3 a 60 por ciento B entre 4 y 19 min y de 60 a 90 por ciento B entre 19 y 23 min, y finalmente regresó a 3 por ciento B entre 23 y 28 min. El efluente fue monitoreado por DAD en el rango de 210 a 720 nm y por MS con la fuente optimizada y los parámetros operativos de la siguiente manera: voltaje capilar.

edad 2,50 kV, temperatura de la fuente de pulverización Z 150 grados, temperatura de desolvatación (N2) 350 grados, flujo de gas de desolvatación 600 L/h y rango de masas de m/z 150 a 600 en el modo de escaneo completo.

Purificación de constituyentes identificados

El extracto hidroetanólico bruto (10 g) se disolvió en agua:etanol (50:50; v/v) y se repartió consecutivamente frente a hexano, acetato de etilo y n-butanol. La fracción de butanol se concentró en un evaporador rotatorio y se aplicó una muestra de 3 g del extracto fraccionado a una columna de vidrio (10 × 3 cm d.e.) rellena con gel de sílice C-18 RP (malla 230-400; Sigma -Aldrich) y eluido con agua, seguido de sucesivas mezclas de agua: metanol (90:10, 50:50 y 10:90; v/v). La subfracción obtenida por elución con agua: metanol (90:10; v/v) se purificó adicionalmente mediante RP-HPLC utilizando un sistema Shimadzu LC-20AP acoplado a un detector SPD-20A UV/Vis y equipado con una columna Phenomenex Luna® C-18 (250 × 10 mm de d.i.; tamaño de partícula de 5 μm). La fase móvil fue agua: metanol comenzando en 90:10 (v/v) y cambiando a 30:70 (v/v) en 100 min para producir los cuatro compuestos conocidosacteósido(750 mg), isoactósido (430 mg), 6'-acetilactósido (42 mg) y 4',4''',5,5''-tetradroxi-6,6'',3''' -trimetoxi-[C7–O–C7'']-flavona (13 mg). La velocidad de flujo de la fase móvil fue de 1 mL/min, el volumen de inyección fue de 500 μL, el cromatograma se registró a 340 nm y los espectros UV se obtuvieron en el rango de 240 a 400 nm. Las identidades de los constituyentes purificados se confirmaron a partir de sus espectros de 1H- (500 MHz) y 13C-NMR (125 MHz) registrados en un espectrómetro Bruker modelo DPX 500, y la comparación de los datos con los disponibles en la literatura [18, 19, 41]. Las purezas de los compuestos aislados se confirmaron mediante UPLC-DAD-MS (▶Fig. 1b–d) y NMR (▶Fig. S1–S12, Información de apoyo).

Cuantificación de acteósido por una matriz de diodos HPLCdetector

esta solución se analizó en un sistema Shimadzu LC{{{{10}}}}APvp acoplado a un SPD-M10Avp DAD y equipado con una columna Phenomenex Luna C18 (250 × 4,6 mm id, 5 µm) protegida por una precolumna Phenomenex C18 (4,0 × 3,0 mm id, 5 µm). Las separaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente (22 ± 1 grado) utilizando una fase móvil que comprendía ácido acético al 0,1 por ciento en agua (disolvente A) y metanol (disolvente B;

JT Baker HPLC grade) suministrado a un caudal constante de 1,0 mL/ min según el programa: gradiente lineal de 10 a 70 por ciento B entre 0 y 32 min, de 70 a 10 por ciento B entre 32 y 35 min, y una elución isocrática final con 10 por ciento B entre 35 y 40 min. La longitud de onda de detección se fijó en 330 nm.

El contenido de acteósido en el extracto se estimó utilizandoacteósido(Sigma-Aldrich; CAS no. 61276-17-3) como estándar externo. Se prepararon soluciones que contenían 500, 250, 125, 62,5, 31,2 y 15,6 ug/ml del estándar de referencia y se construyeron curvas de calibración sometiendo cada solución a análisis HPLC por triplicado [42 ]. La relación entre el área del pico del acteósido estándar y la concentración correspondiente del analito se estableció a través de la regresión lineal de las curvas estándar (▶Fig. S13, Información de apoyo). Los datos analíticos fueron validados con respecto a la linealidad, precisión y exactitud de acuerdo con las directrices emitidas por la Agência Nacional de Vigilância Sanitária [42]. Los límites de detección (LoD) y cuantificación (LoQ) del acteósido fueron 0,30 y 0,92 µg/mL, respectivamente.

Ensayos de inhibición de la monoaminooxidasa-A

La MAO-A humana recombinante, la tiramina, la clorgilina, el ácido vainílico, la 4-amino antipirina y la peroxidasa de rábano picante se adquirieron de Sigma-Aldrich. Los ensayos de inhibición de MAO-A se realizaron utilizando 96-placas de pocillos siguiendo una versión modificada del método descrito por López et al. [43]. Cada pocillo se cargó con 50 μL de solución cromogénica (ácido vanílico 0,8 mM, 4-amino antipirina 2,5 mM y 4 U/mL de peroxidasa de rábano picante en tampón fosfato a pH 7,6), 100 μL de 3 tiramina mM, y una alícuota de 50-μL del extracto hidroetanólico crudo o uno de los feniletanoides purificados disueltos en metanol. Finalmente, se agregaron alícuotas de 50 μL de 8 U/mL de MAO-A a cada uno de los pozos y la placa se incubó a 37 grados durante 30 min, tiempo durante el cual se registraron las absorbancias cada 5 min usando un lector de microplacas. Se incluyeron clorgilina (mayor que o igual al 97 por ciento de GC; Sigma-Aldrich) y metanol como controles positivo y negativo, respectivamente, en cada placa de ensayo.

análisis estadístico

Se realizaron tres evaluaciones independientes de las actividades inhibidoras de la MAO-A y los datos adquiridos se analizaron utilizando el software Graph-Pad Prism. Los valores IC50 del extracto hidroetanólico, los feniletanoides purificados y el control positivo se calcularon mediante regresión no lineal, simulando gráficas de logaritmo (concentración de inhibidor) versus porcentaje de inhibición normalizado.

Información de soporte

Espectros H- y 13C-NMR deacteósido, isoactósido, 6'-acetilactósido y 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O– C7''] -Los análisis de correlación de flavonas y HSQC/HMBC para los tres feniletanoides están disponibles como Información de apoyo.

recibido el 04.06.2018

revisado 19.10.2018

aceptado el 24.10.2018

Bibliografía

DOI https://doi.org/10.1055/a-0787-1665

Planta Med Int Open 2019; 6: e1–e6

© Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · Nueva York ISSN 2509-9264

Correspondencia

Ana María S. Pereira

Departamento de Biotecnología en Plantas Medicinales

Av. Universidade de Ribeirão Preto. Costábile Romano 2201 14096-900 Ribeirânia

Ribeirão Preto, SP

Brasil

Referencias

[1] Organización Mundial de la Salud. Depresión y otros trastornos mentales comunes: estimaciones de salud global. Ginebra: OMS; 2017

[2] FergusonJM. Medicamentos antidepresivos ISRS: efectos adversos y tolerabilidad. Prim Care Companion J Clin Psiquiatría 2001; 3: 22–27

[3] van der Watt G, Laugharne J, Janca A. Medicina complementaria y alternativa en el tratamiento de la ansiedad y la depresión. Curr Opin Psiquiatría 2008; 21: 37–42

[4] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Medicamentos a base de plantas para los trastornos de ansiedad, parte 1: una revisión de los estudios preclínicos. Fármacos del SNC 2013; 27: 207–219

[5] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Medicamentos a base de plantas para los trastornos de ansiedad, parte 2: una revisión de estudios clínicos con evidencia preclínica de respaldo. Fármacos del SNC 2013; 27: 301–319

[6] Del Vitto LA, Petenatti EM, Petenatti ME. Recursos herbolarios de San Luis (República Argentina). Primera parte: Plantas Nativas. Multequina 1997; 6: 49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito", Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben-aceae), cultivada en Paraguay. Rojasiana 2014; 13: 31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellión-Ibarrola MC. Efectos ansiolíticos y antidepresivos del extracto hidroalcohólico de Aloysia polystachya en ratas. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. The anxiolytic-likeeffects of Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) en ratones. J Ethnopharmacol 2006; 105: 400–408

[10] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J, De Lima TCM, Mora S. The antidepressant-like effects of Aloysia polystachya (Griseb. ) Moldenke (Verbenaceae) en ratones. Fitomedicina 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H. -Alcaloides de carbolina en Peganum harmala e inhibición de la monoaminooxidasa humana (MAO). Alimentos Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Identificación, ocurrencia y actividad de alcaloides de quinazolina en Peganum harmala. Alimentos Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Inhibición de la monoamino oxidasa-A y actividad antioxidante asociada en extractos de plantas con acciones antidepresivas potenciales. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. Inhibidores selectivos de la MAO-B: una lección de productos naturales. Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. Tratamiento de la ansiedad y la depresión: plantas medicinales en retrospectiva. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. Las drogas están relacionadas con la actividad de la monoaminooxidasa. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. La monoaminooxidasa tipo A y la serotonina están coordinadamente involucradas en los trastornos depresivos: desde el desequilibrio de los neurotransmisores hasta el deterioro de la neurogénesis. J Neural Transm 2017; 125: 53–66