El extracto rico en polifenoles de las hojas de Ocimum Gratissimum evitó los efectos tóxicos de la ciclofosfamida en la función renal de las ratas Wistar

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Resumen

Fondo:La ciclofosfamida (CP) es una de las quimioterapias potentes y de bajo costo utilizadas en entornos clínicos contra una variedad de tumores. Sin embargo, su asociación con nefrotoxicidad limita su uso terapéutico. La hoja de Ocimum gratis simum es una planta medicinal con numerosas eficacias farmacológicas y terapéuticas, como propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y antiapoptóticas.

Métodos: El presente estudio fue diseñado para evaluar el efecto protector de Ocimum gratissimum (OG) contra la disfunción renal inducida por CP en ratas. Las ratas se trataron previamente con 400 mg/kg de peso corporal de extracto de hojas de Ocimum gratissimum (Ocimum G.) durante 4 días y luego se coadministraron 50 mg/kg de peso corporal de CP desde el día 5 hasta el día 7 junto con Ocimum G. Marcadores de la función renal y se evaluó estrés oxidativo, consumo de alimentos y agua, electrolitos, aldosterona, infiltración de leucocitos, inflamación y alteración histopatológica.

Resultados:En los grupos tratados con CP se observaron inflamación renal y lesiones renales obvias. Sin embargo, la administración del extracto de hojas de Ocimum G. evitó el estrés oxidativo, las lesiones renales, atenuó la inflamación, aumentó la producción de aldosterona y redujo la pérdida de iones de sodio y agua en ratas. La concentración de creatinina plasmática, urea y albúmina en orina se normalizaron después de la administración de extracto de Ocimum G. en ratas tratadas con CP. Ocimum G. también disminuyó las concentraciones plasmáticas de interleucina-(IL)-6, proteína C reactiva y actividad de mieloperoxidasa y malondialdehído en ratas tratadas con CP.

Conclusión: Ocimum G. previno la lesión renal y mejoró la función renal mediante la inhibición de la inflamación y la toxicidad de la CP inducida por oxidantes. La eficacia de Ocimum G. está relacionada con la presencia de varios fitoquímicos en la planta.

Palabras clave:Antioxidante, Creatinina, Ciclofosfamida, Ocimum gratissimum leaf, Riñón, Sodio.

Fondo

La ciclofosfamida (CP) es un compuesto antineoplásico asociado a la mostaza nitrogenada. Se utiliza en el entorno clínico para tratar una amplia variedad de enfermedades cancerosas y en la terapia inmunosupresora después de trasplantes de órganos, el tratamiento de trastornos autoinmunes como la artritis reumatoide, la granulomatosis de Wegener y el síndrome nefrítico en niños [1]. Independientemente del amplio espectro de usos clínicos del fármaco, se sabe que la CP causa numerosas lesiones en órganos dependientes de la dosis, lo que, por lo tanto, restringe su uso terapéutico en el entorno clínico. Como se sabía que era beneficioso en el tratamiento del síndrome nefrótico en niños [1], en algunos estudios previos se informó, por el contrario, que inducía daño en la vejiga urinaria [2, 3] y causaba toxicidad renal cuando se usaba de manera inapropiada debido al uso de PC sobredosis [4–6]. El metabolito activo de la CP, 4-hidroxiciclofosfamida, se tautomeriza parcialmente en aldosfosfamida, que a su vez es descompuesta por la fosfatasa en la circulación y las células vivas y da lugar a dos metabolitos citotóxicos, la mostaza fosforamida y la acroleína [6]. Se ha informado previamente que la acción terapéutica de la mostaza fosforamida es responsable de los efectos antitumorales [6], mientras que la acroleína es responsable de los efectos citotóxicos de la CP, como la cistitis hemorrágica durante la administración del fármaco [2, 7]. El metabolito tóxico de CP daña los tejidos vivos al disminuir el sistema antioxidante endógeno del tejido a través de la generación de radicales libres de oxígeno reactivo que son mutagénicos para las células vivas. Se ha informado que la administración de una dosis alta de CP aumenta la peroxidación de lípidos y provoca una reducción de los antioxidantes enzimáticos y no enzimáticos endógenos [7, 8]. Estudios anteriores han descrito los usos beneficiosos de las sustancias antioxidantes junto con la quimioterapia para prevenir los efectos secundarios del fármaco en los tejidos corporales [7, 9, 10]. Los agentes antioxidantes como el kolaviron demostraron ser efectivos en la prevención de la cardiotoxicidad por parálisis cerebral en ratas [11]. Así, la combinación de losagente antioxidantejunto con los medicamentos de quimioterapia puede ser un enfoque terapéutico potencial para prevenir o detener el desarrollo citotóxico de la PC. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) es una familia de Lamiaceae que pertenece a las especies de plantas herbáceas. Se conoce como clavo o albahaca africana en muchos países de zonas tropicales (Asia, India, Brasil y África Occidental, etc.). Se encuentra ampliamente en Nigeria [12]. Muchos estados de este país (Nigeria) utilizaban Ocimum G. como salsa y sopa de verduras. Se ha encontrado que las hojas y flores de Ocimum G. poseen polifenoles y otros compuestos bioactivos [13, 14]. Las plantas de Ocimum gratissimum se usan para tratar diversas enfermedades como diarrea, colitis ulcerosa, fiebre y catarro [14-17]. La planta tiene muchas ventajas farmacológicas debido a sus capacidades antiinflamatorias, antioxidantes, antibacterianas, antidiabéticas y antipalúdicas [14, 18–20]. La actividad antimicrobiana del extracto de Ocimum G. ha sido probada in vitro contra varios patógenos humanos como Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis, etc. La actividad antifúngica del aceite esencial de Ocimum G. Se han observado extractos in vitro [19, 21, 22], y Ocimum G. se ha utilizado como apelante de mosquitos [23]. Un estudio reciente en animales sugirió la importancia del efecto protector de los extractos de Ocimum G. en la prevención de las irregularidades de la presión arterial frente a la toxicidad del cloruro de cobalto [24], así como en la atenuación de las anomalías cardíacas asociadas con la fibrosis hepática mediante la regulación a la baja de la interleucina-6 vía de señalización [25] o mediante la inducción de efectos antioxidantes [26]. El extracto acuoso de hojas de Ocimum G. mostró efectos antioxidantes contra la lesión cardiorrenal inducida por cloruro de cobalto [24] y previno las úlceras gástricas al reducir la secreción de ácido gástrico y la ulceración [27]. Además, el ácido ursólico de los extractos de Ocimum G. demostró actividad antidrepanocítica [28] y anticancerígena [29, 30]. Además, se ha demostrado que los aceites esenciales de Ocimum G. exhiben propiedades vasorrelajantes dependientes del endotelio en ratas [31]. Los estudios in vivo e in vitro han evaluado el eugenol, un componente medicinal de Ocimum G., para reducir los niveles de glucosa en sangre a través de la inhibición de la alfa-glucosidasa [32]. Más aún, un estudio clínico estableció la idoneidad farmacológica de Ocimum G. para exhibir una actividad similar a la de la clorhexidina contra la placa y la gingivitis [33]. Con todas estas características de Ocimum G., planteamos la hipótesis de que Ocimum G. podría ser un posible tratamiento terapéutico cuando se usa junto con CP para prevenir o detener los efectos adversos de CP. Por lo tanto, este estudio fue diseñado para examinar los efectos beneficiosos de un extracto rico en polifenoles de las hojas de Ocimum gratissimum sobre la nefrotoxicidad inducida por CP en ratas Wistar macho.

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materiales y métodos

La inyección de ciclofosfamida (200 mg/10 ml) se obtuvo de Celon Laboratory (Hyderabad, India); la inyección de clorhidrato de ketamina (50 mg/10 ml) se adquirió de Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladesh); Se obtuvieron kits de ensayo para parámetros bioquímicos de Randox Laboratories Limited, (Crumlin, Reino Unido), etc. Se compraron 1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH), metanol, carbonato de sodio, Trolox y reactivo de Folin-Ciocâlteu de Merck & Co., Kenilworth, NJ, EE. UU. Los instrumentos utilizados incluyen cromatografía de gases-espectrómetro de masas (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japón) y espectrofotómetro ultravioleta-visible (Beckman, DU 7400, EE. UU.), aparato Soxhlet, rotavapor, microscopio (Olympus CH; Olympus , Tokio, Japón); cámara (Leica DM 750).

Preparación de extracto de polifenoles de Ocimum gratissimumhojas

Las hojas de Ocimum gratissimum se recolectaron de un jardín en Usi, estado de Ekiti, Nigeria. Se obtuvieron los permisos institucionales pertinentes para recolectar Ocimum gratissimum. El presente estudio cumple con los lineamientos internacionales, nacionales y/o institucionales para el uso de las diferentes partes de la planta. Los especímenes de la planta fueron autenticados por el Sr. Omole, curador del herbario del Departamento de Botánica de la Universidad Obafemi Awolowo, Ile-Ife, donde se depositó un espécimen comprobante (1945) en el Herbario de la Universidad. El extracto rico en polifenoles se obtuvo de las hojas de Ocimum G. (900g) según nuestros métodos anteriores de extracción de la planta [14]. Se utilizó metanol para obtener el producto de extracción final, extracto rico en polifenoles de hojas de Ocimum gratissimum (PREOG) bajo presión reducida a 40 grados usando un evaporador rotatorio. El extracto concentrado resultante se liofilizó con la ayuda de un liofilizador. El residuo (8{{40}}.85 g) se mantuvo en cajas de Petri con tapa hermética y se almacenó a -20 grados hasta que se necesitó para el estudio. El extracto de OG obtenido se disolvió en agua (0,2 mL/administración) y se administró a ratas según la dosis diseñada. Análisis por cromatografía de gases-espectrometría de masas de extractos de OG (GC-MS) La composición química del extracto obtenido se comprobó mediante cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS). Chávez et al. [34] se adoptó el método con ligeras modificaciones. Se utilizó una columna capilar de sílice fundida (espesor de película de 30 × 0,25 HP-5Ms, 0,25 μm) que contenía helio como gas portador (tasa de flujo de 1/mL) para la determinación de los compuestos. Se fijó una temperatura del horno de 40 grados y se mantuvo durante 5 minutos, y luego se aumentó gradualmente en 3 grados/min hasta 270 grados. 60:1 se estableció como una relación de división. Se fijó una temperatura de 180 grados para las piezas de conexión y las fuentes de iones, y se fijó una temperatura de interfaz de 240 grados para el espectrómetro de masas. Para la cantidad de energía de ionización, se utilizó 70 eV, mientras que se eligió el modo de impacto de electrones (EI) para producir espectros de masas estables y reproducibles, y se utilizó un rango de valores de 50–650m/z para el procesamiento de muestras. El tiempo de retardo de MS antes de la exploración fue de 5 min. Los compuestos obtenidos se muestran en la Tabla 2. Determinación del contenido de fenoles totales El contenido de fenoles totales (TPC) de los extractos se evaluó mediante la técnica de Folin-Ciocâlteu descrita por Gulcin et al. [35], con algunas modificaciones. Brevemente, se colocaron 100 μl (0,5 mg/ml) de los extractos ricos en polifenoles de Ocimum G. en tubos sencillos separados. Se agregaron alrededor de 500 μL (1 por ciento v/v) del reactivo de fenol de Folin-Ciocâlteu a cada tubo que contenía el extracto de Ocimum G. y los tubos se dejaron reposar durante 5 min. y luego en vórtice. Después de dejar reposar durante 5 minutos, se agregaron aproximadamente 400 μL (20 por ciento p/p) de carbonato de sodio a las alícuotas, que luego se incubaron en la oscuridad a temperatura ambiente durante 90 minutos. Para el desarrollo del color. La absorbancia de cada mezcla se evaluó con un espectrofotómetro ultravioleta-visible (Beckman, DU 7400, USA) a 765nm. Se utilizó como blanco una solución de carbonato de sodio sin adición de reactivo fenol de Folin-Ciocâlteu. Para la curva de calibración se utilizaron estándares de ácido gálico. Los TPC de las muestras se determinaron a partir de la regresión lineal de los estándares de ácido gálico. Los resultados se representaron como el equivalente de ácido gálico (GAE) por gramo de peso seco de extracto de Ocimum gratissimum (mg GAE/g). El procedimiento se realizó por triplicado (n=3). Ensayo de eliminación de radicales libres de DPPH La actividad de eliminación de radicales libres del extracto se determinó de acuerdo con el método descrito por RakMai et al. [36], con ligeras modificaciones. Se agregaron aproximadamente 2 mL de solución de DPPH-metanol (180 μmol/L) y se mezcló con el extracto a 0,1 mg/mL. Las alícuotas se incubaron en la oscuridad a 25 grados. La absorbancia de la muestra se determinó utilizando un espectrofotómetro a 517nm en diferentes intervalos de tiempo entre 0 y 60min. Se usaron como blancos alícuotas de los extractos sin la adición de DPPH-solución de metanol. Trolox, un análogo sintético devitaminaE, se utilizó como control positivo. La siguiente ecuación se utilizó para evaluar las propiedades de eliminación de los extractos. El procedimiento se realizó por triplicado (n=3). Donde A muestra es un extracto más DPPH, Ablanco es solo el extracto, A control es la absorbancia de la solución de control (que contiene solo DPPH). Cuidado de los animales Para el estudio se utilizaron veintiocho (28) ratas Wistar macho que pesaban 120-180 g. Se obtuvo de Animal Holding of the College of Health Sciences, Obafemi Awolowo University, Ile-Ife. Todas las ratas se mantuvieron en jaulas convencionales durante 1 semana para aclimatarse a las condiciones ambientales a 28-32 grados y se les permitió tener acceso libre a la dieta y al agua potable limpia. El experimento fue aprobado por el Comité de Ética de Investigación en Salud (HREC) de la Universidad Obafemi Awolowo y el estudio se ha descrito de acuerdo con las pautas ARRIVE (animales en investigación: informes de experimentos in vivo) [37].

Cistanche para antifatiga

Estudios histopatológicos

Los tejidos se cortaron en secciones de {{0}}μm de espesor con un micrótomo, se fijaron en los portaobjetos y se tiñeron con PAS. Los portaobjetos se observaron con un microscopio óptico (Olym pus CH; Olympus, Tokio, Japón) y se tomaron microfotografías con una cámara Leica DM 750 con notificaciones de aumento de ×400. La sección de tejidos renales fue evaluada por un patólogo certificado que desconocía el protocolo experimental. El daño glomerular se calificó entre los grados 0 y 4 mediante la evaluación de la proliferación mesangial, el grosor de la membrana basal y los cambios fibrinoideos. El daño tubular se puntuó entre los grados 0 y 4 mediante la evaluación de la degeneración vacuolar, descamación, degeneración tubular, necrosis tubular proximal y formación de cilindros. Los infiltrados inflamatorios tubulointersticiales se puntuaron entre los grados 0 y 2 mediante la evaluación de la diversidad de células inflamatorias en el medio y la presencia de infiltrados dentro del epitelio de los túbulos (Tabla 1) [44]. Una puntuación de daño renal total de 0 a 2 representaba nefrotoxicidad leve o nula, nefrotoxicidad moderada de 3 a 6 y nefrotoxicidad grave de 7 a 10 [44].

Resultados

El análisis de cromatografía de gases-espectrometría de masas, el contenido fenólico y la capacidad de eliminación de DPPH del extracto de hojas de Ocimum gratissimum El análisis GC-MS reveló algunos compuestos bioactivos del extracto de hojas de Ocimum gratissimum (Tabla 2). Los contenidos polifenólicos del extracto se reconocieron mediante el método de Folin-Ciocâlteu (Cuadro 2). El contenido fenólico total (TPC) (80.36±0.50mg GAE/100g) obtenido en el extracto de Ocimum G. reveló que el extracto de Ocimum gratissimum es rico en contenido fenólico. La capacidad de eliminación de DPPH del extracto también se evaluó calculando el valor IC50, que se relaciona con la cantidad de extracto que es capaz de eliminar el 50 por ciento de los radicales libres contenidos en la mezcla de reacción. El valor IC50 (22.12±0.43mg/ml) del extracto fue alto y esto denota la altaantioxidanteactividad de las hojas de Ocimum gratissimum. Así, la función del alto contenido fenólico de la planta se demostró en su capacidad para eliminar la actividad de los radicales libres (Tabla 2).

Efecto de PREOG y ciclofosfamida sobre el aclaramiento de creatinina

Se observó una disminución significativa en el aclaramiento de creatinina renal en el grupo de CP solo en comparación con el control (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Discusión

En el estudio actual, hay indicios de niveles elevados en los parámetros de estrés oxidativo, como la peroxidación lipídica, el peróxido de hidrógeno (H2O2) y el óxido nítrico (NO), lo que sugiere que los lípidos y las proteínas de la membrana del riñón de las ratas tratadas con CP solo fueron dañados. Además, las actividades de las enzimas antioxidantes como la superóxido dismutasa y la catalasa y el nivel de glutatión reducido antioxidante no enzimático se redujeron en el grupo tratado con CP solo. La disminución de antioxidantes en las células renales de las ratas tratadas con CP solo fue una indicación de desequilibrio redox-homeostasis. Se ha demostrado previamente que la CP induce daño oxidativo, inflamación y necrosis celular o apoptosis después de la activación y promoción de especies reactivas de oxígeno (ROS) a través de su metabolito, la acroleína [7, 11, 14], que posteriormente desencadenan la desactivación y disminución dedefensa antioxidantecapacidades de los organismos afectados [10, 11, 45]. En este estudio, la sobreproducción de ROS supera a la endógenacapacidad antioxidante, desencadena el estrés oxidativo y, posteriormente, daña las células renales de las ratas tratadas con CP, como se reflejó en el aumento de los niveles de marcadores de estrés oxidativo y la disminución de los niveles deparámetros antioxidantes. Además, la vista histológica de estas ratas mostró daño glomerular y necrosis tubular de las células renales. Además, el desequilibrio redox provoca una sobreproducción de citocinas proinflamatorias [3, 14]. La sobreproducción observada de ROS desencadenó la peroxidación de lípidos y la movilización de citoquinas proinflamatorias y al mismo tiempo ejerció daño inflamatorio de las células renales. La evaluación de IL-6 en este estudio fue significativamente elevada en ratas tratadas con CP, lo que indica un ataque de estrés oxidativo e inflamación de las células renales. Se ha encontrado que la elevación de IL-6 desencadena y/o estimula el hígado para iniciar una respuesta de fase aguda que da como resultado un aumento en la producción de proteína C reactiva (PCR) circulante y otros mediadores bioactivos [46]. La CRP aumentó significativamente en ratas tratadas con CP y el nivel elevado de este biomarcador fue una indicación de un sistema de defensa temprano contra infecciones, información y daño tisular [47, 48]. La elevación del nivel de CRP en este estudio confirmó aún más la inflamación en las ratas tratadas solo con CP. Se ha observado que la PC desencadena la reducción de los antioxidantes endógenos del riñón, como la sobreutilización de GSH por parte del riñón debido a la acumulación de productos de metabolitos de ciclofosfamida en las células tubulares renales [9]. Como resultado de este proceso, el riñón de las ratas tratadas solo con CP podría aumentar la respuesta inmune contra sus células, lo que posteriormente resultó en inflamación, como lo demuestra la elevación de la PCR plasmática. De acuerdo, CP tiene el potencial de inducir inflamación y probable daño inmunológico en el riñón de ratas tratadas con CP.

Conclusión

En conclusión, los resultados de los presentes hallazgos mostraron que el extracto rico en polifenoles de Ocimum gratissimum previno los efectos secundarios adversos de la PC en la función renal al disminuir el estrés oxidativo, previno la sobreproducción de citocinas proinflamatorias y la infiltración de leucocitos, y mejoró la actividad enzimática antioxidante. actividad de los tejidos renales. Además, se confirmó que la CP inducía la reducción de la secreción de aldosterona y facilitaba la pérdida excesiva de sodio y agua a través de la orina en las ratas. Sin embargo, el extracto de Ocimum G. mejoró la función renal, aumentó la producción de aldosterona y evitó la pérdida excesiva de sodio y agua en ratas tratadas con CP. La presencia de polifenoles y antioxidantes en las hojas de Ocimum gratissimum lo convierten en un candidato perfecto para el tratamiento y/o prevención del efecto nefrotóxico de la ciclofosfamida.

Referencias

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Agentes antineoplásicos. En: Harnam JG, Libmirde LE, editores. Goodman y Gilman son la base farmacológica de la terapéutica. 10ª ed. Nueva York: McGrawHill; 2001. pág. 1389–459.

2. Chabner BA, et al. Agentes antineoplásicos. En: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, editores. Goodman y Gilman son la base farmacológica de la terapéutica. 11ª ed. Nueva York: McGrawHill; 2006. pág. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Efectos citoprotectores del liposoma de ácido glicirretínico contra la cistitis inducida por ciclofosfamida mediante la inhibición del estrés inflamatorio. Int Immunopharmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Los efectos protectores de la espirulina en la nefrotoxicidad y la urotoxicidad inducidas por ciclofosfamida en ratas. Transl básico Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin protege contra la hepatotoxicidad y la nefrotoxicidad inducidas por ciclofosfamida mediante la modulación del estrés oxidativo, la inflamación, la apoptosis, la autofagia y el daño del ADN. Environ Sci Contaminación Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W, et al. Metabolismo y transporte de oxazafosforinas e implicaciones clínicas. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. La regulación a la baja del desequilibrio redox y la señalización de iNOS/NF-ĸB/caspasa-3 con suplementos de zinc previene la urotoxicidad de la cistitis hemorrágica inducida por ciclofosfamida en ratas. Ciencias de la vida 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. El ácido gálico mejora la neurotoxicidad inducida por ciclofosfamida en ratas Wistar a través de la actividad de eliminación de radicales libres y la mejora en el sistema de defensa antioxidante. Suplemento de dieta J 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Los efectos de la glutamina oral sobre la nefrotoxicidad inducida por ciclofosfamida en ratas. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Sherif IO. mecanismo neuroprotector dequercetinacontra la urotoxicidad inducida por ciclofosfa-ratones: efecto sobre el estrés oxidativo y los marcadores inflamatorios. J Cell Biochem. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG, et al. Efecto protector de kolaviron sobre la toxicidad cardíaca inducida por ciclofosfamida en ratas. J Evid Basado en Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Estudios histopatológicos sobre la toxicidad del extracto de hojas de Ocimum gratissimum en algunos órganos de conejos. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Constituyente fitoquímico y actividad antioxidante del extracto de las hojas de Ocimum gratissimum. Ensayos de ciencia ficción. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. El extracto rico en polifenoles de las hojas de Ocimum gratissimum mejora la colitis a través de la atenuación de la lesión de la mucosa del colon y la regulación de la producción de citocinas proinflamatorias y el estrés oxidativo en ratas. Farmacéutico biomédico. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Efectos antidiarreicos del extracto de hoja de Ocimum gratissimum en animales de experimentación. J Etnofarmaco. 1999;68:327–30.