Exploración preliminar del efecto promotor y el mecanismo de los polisacáridos de Cistanche Deserticola sobre la proliferación de linfocitos
Dec 04, 2025
Métodos
Se utilizó el ensayo MTT para detectar la proliferación de linfocitos esplénicos en ratones. Se utilizó ciclofosfamida (Cy) para replicar modelos animales de animales inmunodeprimidos, y se midieron los índices de bazo y timo de animales normales e inmunodeprimidos. La actividad de la interleucina-2 (IL-2) se midió mediante el ensayo de proliferación de timocitos. Resultados: El polisacárido de Cistanche deserticola promovió significativamente la proliferación de linfocitos activados por mitógenos (ConA y LPS) y células normales no activadas, y promovió la secreción de IL-2 en los linfocitos. La administración intraperitoneal mostró que el polisacárido de Cistanche deserticola aumentó significativamente el índice del bazo en ratones normales e inmunocomprometidos, y también tuvo un efecto antagonista significativo sobre la reducción del índice del timo causada por Cy. Conclusión: El polisacárido de Cistanche deserticola puede promover significativamente la proliferación de linfocitos esplénicos en ratones, lo que puede estar relacionado con su promoción de la secreción IL-2.
Cistanche que vive en el desierto
[Palabras clave]Polisacárido de Cistanche deserticola; índice de bazo; índice de timo; Proliferación de linfocitos; Interleucina-2
Los polisacáridos vegetales han atraído una amplia atención debido a sus efectos inmunomoduladores generalizados y su toxicidad relativamente baja [1]. Cistanche deserticola ma, conocida como "Ginseng del desierto", es el tallo escamoso, seco y carnoso de Cistanche deserticola, una planta de las Orobaceae, que tiene amplios efectos farmacológicos. Su decocción en agua puede aumentar significativamente el porcentaje fagocítico y el índice fagocítico de los macrófagos. Otros estudios han demostrado que su base material es el polisacárido total de Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] han descubierto que un solo componente del polisacárido de Cistanche deserticola tiene un efecto proliferativo significativo sobre los linfocitos tímicos de ratón in vitro. El efecto del polisacárido de Cistanche deserticola sobre la proliferación de linfocitos se observó in vivo e in vitro.
Fórmula molecular de Cistanche deserticola
1Materiales y métodos
1.1 Fármacos y reactivos
El polisacárido de Cistanche deserticola lo proporciona el Departamento de Plantas y Química del Instituto de Medicina y Plantación de la Facultad de Medicina. Se extrae del polvo de extracto de Cistanche y el contenido de polisacáridos es del 87%.
Extracto de cistanche en polvo
Antes de usar experimentos in vivo, disolver y diluir con solución salina fisiológica a la concentración requerida y hervir para esterilización. Antes del uso de experimentos in vitro, el medio de cultivo RPMI-1640 se disolvió y diluyó y se realizó una esterilización a alta presión. El lipopolisacárido (LPS), la concanavalina (ConA), la dexametasona (DEX) y el MTT son todos productos de Sigma Corporation. La ciclofosfamida, una empresa conjunta chino-estadounidense de Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., el suero fetal bovino, el medio de cultivo RPMI1640 y la tripsina son todos productos de Gibco. Otros reactivos son reactivos analíticos domésticos.
1.2 animales
Los ratones jóvenes BALB c (nivel SPF) son proporcionados por Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Los animales con protección SPF se crían en una habitación y se les da de comer y beber libremente.
1.3 Aparato
Marcador enzimático Multikan Ascent, un producto de Thermo Electron Company, EE. UU. Medidor de pH de precisión Leici PHS-3B, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., incubadora de dióxido de carbono NAPCOo 5410, NAPCO, EE. UU. BCN-1360 Banco de trabajo ultralimpio, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Microscopio invertido, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.
1.4 Método
1.4.1 Efecto sobre la proliferación de linfocitos [5]:
Preparación de rutina de linfocitos del bazo de ratones BALB/c, usando RPMI-1640 para ajustar la concentración celular a 1 × 107 ml, inoculados en una placa de cultivo de 96 pocillos, con 100 suspensiones de células agregadas a cada pocillo μL-50. Se cocultivó con diferentes concentraciones de polisacárido de Cistanche deserticola (la concentración final de polisacárido de Cistanche deserticola para la proliferación de linfocitos no activados fue 6,25, 12,5, 25, 50 y 100 mg/L en orden; la concentración final de polisacárido de Cistanche deserticola para la proliferación de linfocitos T activados por ConA fue 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 y 62,5 mg/L en orden; y la concentración final de polisacárido de Cistanche deserticola para la proliferación de linfocitos B activados por LPS fue 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 y 25 mg/L en orden) y se utilizó medio ConA o LPS, RPMI-1640 como control. El volumen total de cada agujero es de 200 l. Al agregar mitógeno ConA y LPS (el control es RPMI-1640 que contiene las concentraciones correspondientes de ConA o LPS), las concentraciones finales de ambos son 2,5 mg/L y 10 mg/L, respectivamente. Se realizaron tres agujeros paralelos para diversos tratamientos. Coloque la placa de cultivo en una incubadora de humedad saturada de CO2 al 5% y 37 grados durante 68 horas, agregue MTT y continúe cultivando durante 4 horas. Mida el valor de A540 nm con un marcador enzimático utilizando el método MTT para detectar la proliferación. Al comparar cada grupo, convierta el valor de A540nm en tasa de proliferación de linfocitos según la siguiente fórmula:tasa de proliferación de linfocitos=AA muestra A control × 100 %.
Efectos de Cistanche-Mejora la inmunidad
1.4.2 Efecto sobre el peso de los órganos inmunes en ratones normales [6,7]:
Se dividieron aleatoriamente ratones BALB c jóvenes (machos, de 4 semanas de edad, con un peso corporal de 10 a 15 g) en un grupo de control en blanco (solución salina) y diferentes grupos de dosificación (125 mg (kg · pc) y 250 mg (kg · pc)), con 11 ratas en cada grupo. El fármaco se administró por vía intraperitoneal una vez al día durante 7 días consecutivos. Los ratones fueron sacrificados después de una dislocación cervical. Se tomaron el bazo y el timo, se extrajeron la grasa y el tejido fascial y el líquido superficial se secó con papel de filtro. Después de pesar, el índice del bazo=100 × Peso del bazo (mg) Peso corporal (mg); El hthymusindex=100 × Peso del timo (mg) Peso corporal (mg). Calcule el índice de bazo y el índice de timo por cada 100 mg de peso corporal, respectivamente.
1.4.3 Efecto sobre el peso de los órganos inmunitarios en ratones inmunocomprometidos [7,8]:
Se dividieron aleatoriamente ratas BALB c jóvenes (machos, 6 semanas de edad, peso corporal 15-20 g) en 12 grupos según el peso corporal. Excepto por el grupo de control normal (inyección intraperitoneal de un volumen equivalente de solución salina fisiológica), a los otros grupos se les inyectó Cy 50 mg (kg · pc) diariamente por vía intraperitoneal, y la solución del fármaco de prueba se administró por vía intraperitoneal [125 y 250 mg (kg · pc)], el grupo de control normal y el grupo modelo recibieron el mismo volumen de solución salina fisiológica durante 13 días consecutivos, una vez al día. Los cambios en el peso de los animales se observaron durante el experimento . 24 horas después de la última administración, los índices de bazo y timo se midieron y calcularon utilizando el mismo método que en 1.4.2.
1.4.4 Impacto en la actividad de IL-2:
① Inducción de IL-2 [9]: Agregue 50 a cada pocillo en una placa celular de 96 pocillos μ L Diferentes concentraciones de polisacárido de Cistanche deserticola (concentraciones finales en orden: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, agregue 50 mg/L en el pocillo de control μ L de medio de cultivo) y 50 μ L ConA (concentración final 5 mg/L), agregue 1 más por pocillo × 106 células del bazo. Incubar en una incubadora de humedad saturada de CO2 a 37 grados y 5% durante 24 horas, centrifugar durante 20 minutos a 2500 r min, tomar el sobrenadante celular y almacenarlo a - 20 grados para el modo de espera. ② IL-2 detección de actividad [9,10]: el método básico se basa en la literatura [9] y se realizan los ajustes apropiados de acuerdo con la literatura [10]. Preparación convencional de suspensión de timocitos de ratón BALB c, placa de cultivo celular de 96 pocillos, 1 inoculación por pocillo × 106 timocitos, mientras se agregan 50 células por pocillo μ L de ConA (concentración final 2,5 mg/L), y luego agregar el sobrenadante IL-2 preparado 50 μ L (agregar 50 al orificio de control en blanco μ L de solución de cultivo), incubar juntos durante 54 horas, agregar MTT, continuar incubando durante 4 horas, centrifugar durante 10 a 15 minutos a 1000 r min, descartar el sobrenadante y agregar DMSO 100 por pocillo μ L, agitar con un microoscilador durante 8 min y medir el valor de A540 nm con un marcador enzimático.
1.5 Análisis estadístico
Los datos se expresaron como media y desviación estándar (x ± s). Se utilizó el software Microsoft Excel para recopilar los datos y se realizó una prueba t. PAG<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.
2. Resultados
2.1 Efecto sobre la proliferación de linfocitos
Como puede verse en la Tabla 1, la adición de polisacárido de Cistanche deserticola al medio de cultivo de linfocitos de bazo de ratón cultivados in vitro en una concentración superior a 25 mg/l puede estimular significativamente la proliferación de linfocitos, lo que indica que el propio polisacárido de Cistanche deserticola tiene un efecto mitótico. Al mismo tiempo,Se puede ver en las Tablas 2 y 3 que CDPS tiene un efecto promotor significativo sobre la proliferación de linfocitos T inducidos por ConA o linfocitos B inducidos por LPS..
Tab.1 La influencia del polisacárido de Cistanche deserticola en la proliferación de linfocitos no activados (x ±s, n =3)
No: en comparación con el grupo de control, ＊P<0.05.
Tab.2 Influencia del polisacárido de Cistanche deserticola en la proliferación de linfocitos T inducida por ConA (x ±s, n =3)
Nota: en comparación con el grupo ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
Tab.3 Influencia del polisacárido de Cistanche deserticola sobre la proliferación de linfocitos B inducida por LPS (x ±s, n =3)
Nota: en comparación con el grupo LPS, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
2.2 Efecto sobre el peso de los órganos inmunes en ratones normales.
Como se puede ver en la Tabla 4,El polisacárido de Cistanche deserticola puede aumentar significativamente el índice del bazo de ratas jóvenes normales BALB/cc, pero no afecta la glándula del timo.
2.3 Efecto sobre el peso de los órganos inmunitarios en ratones inmunocomprometidos
De la Tabla 5,Se puede observar que los índices de órganos del bazo y el timo de los ratones en el grupo inmunosupresor Cy son más bajos que los del grupo de control, y el polisacárido de Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) puede mejorar significativamente los índices del bazo y el timo.
2.4 Efecto sobre la actividad de IL-2
Como se puede ver en la Tabla 6,cuando la dosis de polisacárido de Cistanche deserticola alcanza los 7,82 mg/l, puede aumentar significativamente la liberación de IL-2 de las células del bazo de ratón.
Tab.4 El efecto del polisacárido de Cistanche deserticola sobre el peso de los órganos inmunes en ratones normales (x ±s, n =11)
Nota: en comparación con el grupo de control, ＊＊P<0.01.
Tab.5 El efecto del polisacárido de Cistanche deserticola sobre el peso de los órganos inmunes en ratones inmunodeprimidos ( x ±s, n =12)
Nota: en comparación con el grupo de control, ## P < 0,01; en comparación con el grupo modelo, ＊＊P<0.01.
Tab.6 Influencia del polisacárido de Cistanche deserticola en la producción de IL-2 por linfocitos esplénicos en ratones (x ±s, n =3)
Nota: en comparación con el grupo de control, ＊＊P<0.01.
3. Discusión
La proliferación de linfocitos esplénicos inducida por ConA y LPS en ratones es un experimento in vitro para detectar la función de los linfocitos T y B y es un indicador importante de la capacidad inmune específica. Los estudios han demostrado que cuando la concentración final del polisacárido de Cistanche deserticola es superior a 25 mg/L, puede promover significativamente la proliferación de linfocitos, lo que indica que tiene un cierto efecto mitótico. En presencia de mitógeno (ConA o LPS), una dosis más pequeña de polisacárido de Cistanche deserticola puede mejorar si el cuerpo muestra una actividad proliferativa significativa. Sabemos que ConA y LPS inducen principalmente la proliferación de linfocitos T o linfocitos B, respectivamente. Los estudios han demostradoBeneficios para la salud del polvo de cistanche: El polisacárido de Cistanche deserticola puede promover tanto la proliferación de linfocitos T como la proliferación de linfocitos B, pero su efecto proliferativo sobre los linfocitos B es significativamente más fuerte que el de los linfocitos T.
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El timo y el bazo son los principales órganos inmunitarios de los animales. Las células inmunitarias del bazo son principalmente linfocitos B maduros, mientras que las del timo son principalmente linfocitos T inmaduros. Los índices del timo y del bazo pueden reflejar el desarrollo de los órganos inmunitarios y el estado funcional de las células inmunitarias. La inyección intraperitoneal de polisacárido de Cistanche deserticola puede aumentar significativamente el índice del bazo de ratones normales e inmunodeprimidos y tiene un efecto antagonista significativo sobre la atrofia tímica inducida por Cy en ratones.
El polisacárido de Cistanche deserticola no tiene un efecto significativo sobre el índice tímico en animales normales, lo que concuerda con los resultados de experimentos in vitro en los que el polisacárido de Cistanche deserticola promueve la proliferación de linfocitos B en lugar de linfocitos T.
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IL-2 es una citocina producida por los linfocitos T desde la fase G1 del ciclo celular hasta la fase S. Es un importante factor de crecimiento de células T que actúa como factor de crecimiento autocrino. Además, IL-2 puede promover la proliferación de células B y la síntesis de anticuerpos [11,12]. El polisacárido de Cistanche deserticola promueve la liberación de IL-2 de los linfocitos, lo que obviamente está relacionado con el polisacárido de Cistanche deserticola que promueve la proliferación de linfocitos esplénicos.
La investigación médica muestra que Cistanche contiene polisacáridos, equinacósidos y acteosidos, que pueden activar los linfocitos y mejorar el cuerpo; Los componentes funcionales de los glucósidos feniletanoides de cistanche tienen un efecto significativo en la recuperación celular después del daño de los rayos gamma 60 Co y también pueden mejorar la función inmune contra el daño por radiación. La toma diaria de suplementos de Cistanche deserticola puede lograr el efecto de mejorar la inmunidad.
