Investigación de los polisacáridos de Cistanche que eliminan los radicales libres
Mar 06, 2022
Para más información:ali.ma@wecistanche.com
Wang Guowei Zhao Colmillo
(Escuela de Química e Ingeniería Química, Universidad de Shihezi, Beisi Road, Ciudad de Shihezi, Xinjiang 832000)
Palabras llave: Cistanche; polisacárido de cistanche,polisacáridode cistanche; radicales libres
El cuerpo produce continuamente varios radicales de oxígeno reactivo (ROS) en el proceso del metabolismo oxidativo de las actividades de la vida, que son productos intermedios producidos por la reacción redox del metabolismo aeróbico del cuerpo humano. Los estudios han encontrado que el excesoradicales libresatacará las sustancias macromoleculares de la vida y varios orgánulos, causando varios daños al cuerpo a nivel molecular, celular y de órganos tisulares, acelerando el proceso de envejecimiento del cuerpo e induciendo coágulos de sangre, diabetes y aterosclerosis. , Tumores y otras enfermedades [1]. Como los antioxidantes sintetizados químicamente son tóxicos para el cuerpo humano, la búsqueda de antioxidantes naturales con alta eficiencia y baja toxicidad que puedan eliminar los radicales libres de oxígeno se ha convertido en los últimos años en un punto candente en los campos de la medicina, los alimentos y la ingeniería química.
Cistanche [Cistanche deserticola (YC Ma.)]sobre todo parasita las raíces de Tamarisk, Nitraria y Haloxylon ammodendron. Es una medicina china rara en mi país y se conoce como"ginseng del desierto"[2]. Cistanche El polisacárido de cistanche es uno de los principales componentes biológicos funcionales activos decistanche, pero no se ha informado si lapolisacárido de cistanche tiene el efecto de eliminar los radicales libres. En este trabajo se utilizó el método de análisis espectral para determinarel efecto depurador del polisacárido Cistanche sobre los radicales libres del anión superóxido, los radicales libres hidroxilo, los radicales D PPH y los radicales libres de oxígeno singulete, así comopara evaluar su actividad antioxidante. Hacer pleno uso de este recurso natural para proporcionar una base científica.
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Esta investigación estudiapolisacárido de cistanchein vitroantioxidanteactividad. Tomando el ácido ascórbico como control, la reacción tipo Fenton produce radicales libres hidroxilo, la autooxidación de la dopamina produce anión superóxidoradicales libres, la reacción del hipoclorito de sodio y el peróxido de hidrógeno para producir oxígeno singulete, radicales de hidrazina amarga de difenilo como modelo experimental, utilizando espectrofotometría ultravioleta 2Visible y método de análisis de quimioluminiscencia, por primera vez para determinar el efecto de barrido deCistanche polisacáridoe sobre los radicales libres del anión superóxido, radicales libres hidroxilo, D PPH ·radicales libres(radicales difenil hidrazino) y oxígeno singlete.Los resultados mostraron que los polisacáridos de Cistanche tenían efectos depuradores evidentes sobre los radicales libres mencionados anteriormente, y los efectos depuradores se correlacionaron positivamente con la concentración de polisacáridos.
Aparatos y reactivos: espectrofotómetro ultravioleta-visible UV 22401 (Shimadzu Corporation, Japón); Lum en el luminómetro de tubo ultrasensible LB9507 (Berthold Technologies, Alemania); R E252CS evaporador rotatorio (Shanghai Yarong Biochemical Co., Ltd.) Instrument Factory); HW 2SY olla de baño de agua de temperatura constante electrónica (Fábrica de instrumentos Jintan Xinhang); medidor de acidez pH S23C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); D Horno de secado al vacío ZF26020 (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.).
extracto de cistanchese adquiere de Kuitun Medicinal Materials Corporation. Luminol (Luminol, Sigma, USA), Dopamina (Instituto Nacional para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos de China), FeSO 4, ED TA, Vitamina C, H 2O 2, NaClO, Na2CO 3, NaHCO 3, etc. Es un reactivo analítico doméstico. El agua experimental es agua destilada de intercambio iónico.
losemétodo de extracción dePolisacáridos de Cistanche: Tomar 30g depolvo de cistanchey colóquelo en un matraz Erlenmeyer de 500mL y sumérjalo en éter de petróleo (60-90 grados), éter y una fracción de volumen de solución caliente de etanol al 80 por ciento (30 grados) durante 6 h, y el residuo se evaporará a sequedad. . El residuo del filtro se sumergió en agua en una relación sólido-líquido de 1:10 durante 24 horas y se calentó a 30 grados para extraer durante 100 min. Una vez completada la extracción, se obtuvo el sobrenadante por centrifugación. El sobrenadante se concentró a presión reducida y luego se precipitó añadiendo 3 veces el volumen de etanol al 95 por ciento, reposando durante 24 horas a 4 grados, recogiendo el precipitado después de centrifugar y secando al vacío para obtener el polisacárido de cistanche crudo. Pesar 1,00 g de polisacárido crudo, disolverlo en agua y diluir en un matraz volumétrico de 50 ml y reservar para la prueba.
la prueba de polisacárido de cistanche en el radical libre superóxido (O) habilidad de carroñero: el uso de la auto-oxidación de dopamina para producir prueba de radicales libres de superóxidopolisacárido de cistanche en la eliminación de radicales libres de superóxidohabilidad [3]. Agregue 0.1mm olöL pH=10.12 al tubo de ensayo seco y graduado en secuencia, 3.0mL de tampón de carbonato, 3.0mL de agua, y 0.5mL de solución de muestra de polisacárido de diferentes concentraciones, y colóquelo en un baño de agua a 30 grados para precalentarlo durante 5 minutos. Añadir 1.0mL de 2.0mm olöL de dopamina precalentada al baño maría a 30 grados, mezclar inmediatamente, mantener la reacción a 30 grados durante 5 minutos, e inmediatamente detener la reacción con 2 gotas de 10 molöL de HCl. Utilice el tampón como referencia, mida la absorbancia a 221 nm (muestra A), el grupo en blanco reemplaza la muestra con 0,5 ml de agua (blanco A) y el grupo de control reemplaza la muestra con 0,5 ml de ácido ascórbico. Cada muestra se prueba en paralelo 3 veces y toma su valor promedio. O Tasa de barrido de radicales superóxido (porcentaje)=(Un blanco-A muestra) öUn blanco × 100 por ciento.
Experimento sobre la capacidad de eliminación del polisacárido de cistanche en radicales libres ·OH
El sistema EDTA 2Fe (Ê) 2 azul de metileno 2H 2O 2 se utilizó para probar la capacidad depolisacárido de cistanchepara eliminar los radicales libres de hidroxilo. El principio es que la reacción similar a Feton entre ED TA 2Fe(Ê) y peróxido de hidrógeno produce radicales ·OH, lo que reduce el pico de absorción característico de la solución de azul de metileno a 660nm. En una serie de tubos de ensayo de 10mL con tapones, agregue 5 mm oLöL de solución de FeSO 4 1.{{20}}mL, 5 mm oLöL de solución de EDTA de 1,2 ml, 0.{ {29}}3mol N aH 2 PO 4 2N a2H PO 4 (pH=7.4) solución tampón 2 .0mL, 20mm olöL solución de peróxido de hidrógeno 1.3mL, después de agitar, agregue 0.2mm olöL de metileno solución azul 0,7 ml y luego agregue diferentes concentraciones de la solución de prueba, vitamina C 1,0 ml y diluya con agua a 10. 00 ml, después de mezclar, incube a 37 grados durante 30 minutos, mida la absorbancia de cada solución a 660 nm, y reemplace la solución de muestra con agua en el grupo en blanco. Cada muestra se probó 3 veces en paralelo y se tomó el valor promedio. Tasa de captación de radicales OH de la muestra (porcentaje)=[(A 2-A 1) ö(A 0-A 1) × 100 por ciento. En la fórmula: A 0 - valor de absorbancia del tubo no dañado; Un 1 - valor de absorbancia del tubo dañado; Un valor de absorbancia de 2 - después de agregar la muestra.
Experimento sobre la capacidad de eliminación del polisacárido Cistanche en el radical libre D PPH
Tome {{0}}.1 mL de solución de polisacárido de Cistanche deserticola y agréguelo a 5.0 mL de solución de D PPH ·, mezcle rápidamente y después de reposar durante 10 min a temperatura ambiente, el se mide el cambio de absorbancia a una longitud de onda de 517 nm [4]. Cada muestra se probó 3 veces en paralelo y se tomó el valor promedio. La tasa de eliminación de la muestra de D PPH · (porcentaje)=1- [(AB) öA 0] × 100 por ciento.
En la fórmula: A 0 - valor de absorbancia de D PPH sin adición de muestra (1,9 ml de D PPH más 0,1 ml de etanol al 50 por ciento); A - valor de absorbancia después de la reacción entre la muestra y D PPH; B - blanco El valor de absorbancia de la muestra (muestra 0.1mL más 1.9mL de etanol al 50 por ciento).
Prueba de 1O 2 de oxígeno singlete depurador de polisacárido de Cistanche
El oxígeno singlete (1O 2) es producido por la reacción química entre NaClO y H 2O 2 a 37 grados [5]. La solución utilizada para la determinación de 1O 2 es 100L 2. 8mm olöL solución NaClO, 400L 5mm olöL solución NaOH, 300L 10mm olöL H 2O 2 soluciones, 50L 1mm olöL solución Luminol. Durante la reacción, la solución de reacción se agrega a la solución de muestra y el analizador de quimioluminiscencia registra automáticamente el proceso de reacción al mismo tiempo. Tome NaClO 2H 2O 2 2N NaOH 2 Luminol como control en blanco. Inicie la reacción y agregue la solución de reacción del depósito del instrumento de quimioluminiscencia al tubo de muestra de acuerdo con la cantidad establecida por el programa. Posteriormente, la intensidad de quimioluminiscencia de la mezcla de reacción se registró en el papel de registro cada 5 s, y cada muestra se midió en paralelo 3 veces, y se tomó el valor promedio. La tasa de autorización se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula: tasa de autorización (porcentaje)=(intensidad luminosa de control-intensidad luminosa de muestra) ö intensidad luminosa de control × 100 por ciento 3.
El efecto depurador de los polisacáridos de cistanche sobre los radicales libres de superóxido
La naturaleza química de los radicales libres de superóxido es activa, lo que puede causar que los ácidos grasos en la biopelícula produzcan peróxidos, que a su vez destruyen las células [6]. En este artículo, se utilizó el método de la dopamina para determinar la capacidad de eliminación de los radicales libres de superóxido. Vea la Figura 1 parala capacidad de eliminación de Cistanche en los radicales libres de superóxido.Los resultados mostraron que:Los polisacáridos de Cistanche pueden inhibir los radicales libres de superóxido producidospor la autooxidación de la dopamina, y dentro del rango de concentración medido (0-8m gömL), aumenta con el aumento de la concentración, pero la capacidad de eliminación es menor que la del ácido ascórbico.
Efecto depurador del radical libre de superóxido de polisacárido OH de cistanche
El radical superóxido OH es uno de los radicales libres de oxígeno más activos en el oxígeno activo. Puede reaccionar con casi cualquier macromolécula biológica en las células vivas, lo que puede provocar la peroxidación lipídica de los tejidos corporales, la polimerización y despolimerización de proteínas, la fragmentación de ácidos nucleicos, etc. El proceso bioquímico desencadena la patología de las células tisulares, lo que lleva a la aparición de diversas enfermedades y acelerando el envejecimiento del cuerpo [7]. La Figura 2 muestra la capacidad depuradora de los polisacáridos de cistanche sobre los radicales libres de superóxido OH. Los resultados experimentales muestran queel polisacárido de Cistanche tiene un buen efecto de eliminación de ·OHradicales libres,y aumenta con el aumento de la concentración.
La capacidad de eliminación del polisacárido de cistanche Cistanche en el radical libre D PPH
El radical D PPH (radical difenil-hidrazino amargo) es un radical libre estable, que es púrpura en solventes orgánicos y tiene una fuerte absorción cerca de 517 nm. Después de agregar antioxidantes, se eliminará una parte de los radicales libres y se debilitará la absorción, lo que puede usarse para evaluar la actividad antioxidante de la sustancia [8]. La capacidad de eliminación de los polisacáridos de Cistanche en los radicales libres de D PPH se muestra en la Figura 3. Los resultados experimentales muestran que la capacidad de eliminación del polisacárido de Cistanche deserticola en los radicales libres de D PPH se correlaciona positivamente con su concentración, y la capacidad de eliminación es mayor que la de ácido ascórbico.
La capacidad de eliminación de los polisacáridos de cistanche en los radicales libres 1O 2
El oxígeno singlete es oxígeno molecular excitado con propiedades químicas activas. Dado que los electrones no apareados tienden a aparearse, los radicales libres muestran propiedades químicas más activas [9]. La Figura 4 muestra la capacidad depuradora del polisacárido de Cistanche deserticola sobre radicales libres 1O2. Los resultados experimentales muestran que la capacidad dePolisacáridos de Cistanchepara eliminar el oxígeno singulete es más bajo que el del ácido ascórbico en el rango de {{0}}.0m gömL. Cuando la concentración es superior a 4,0 m gömL, la capacidad de eliminación de los polisacáridos de cistanche es mayor que la del ácido ascórbico.
En conclusión: A través de diferentes sistemas reactivos de radicales libres de oxígeno, se estudió en detalle la actividad antioxidante in vitro del polisacárido Cistanche. Se puede ver a partir de los resultados experimentales que dentro del rango de concentración de prueba, el extracto de polisacárido de Cistanche tiene efectos de eliminación de radicales libres de superóxido O, radicales libres de superóxido OH, radicales libres de D PPH y radicales libres de 1 O 2 . Los efectos no son los mismos. Los resultados mostraron que el polisacárido de Cistanche es un antioxidante natural exógeno eficaz, que es digno de mayor investigación, desarrollo y utilización integral.
referencias
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[4] Zhang Zhiqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Estudio sobre la actividad antioxidante de Radix Polysaccharides[J]. Materia médica china, 2008, 31(2): 268-271.
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