Importancia de los diferentes límites de contenido para los componentes marcadores de Deserticola de Cistanche y C. tubulofloris en farmacopea china basada en componentes diferenciales ⅱ

Abstracto

Objetivo:Estudiar los componentes diferenciales y comparar su contenido entre Cistanche tubulosa y C. deserticola y analizar la importancia de los diferentes límites de contenido para los componentes del marcador entre las dos plantas en la farmacopea china (edición de 2020). Métodos: Los componentes diferenciales se identificaron mediante espectrometría de cromatografía líquida combinada con análisis estadístico multivariado, y el contenido de componentes diferenciales se determinó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento. Resultados: Los compuestos diferenciales fueron cistanosido A, isoacteósido, equinacósido y acteósido. El equinacósido tenía el contenido más alto en ambas plantas, seguido de aceósido. El contenido de equinacósido, aceósido e isoacteósido en C. tubulosa fue mayor que el de C. deserticola (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Palabras clave: Deserticola de Cistanche;Cistanche tubulosa; cistanoside A; isoacteósido;equinacósido; actúo

 

 

 

 

Desérticola de Cistanchees el tallo carnoso seco con hojas escamosas de Cistanche Deserticola yc ma o Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, una planta de la familia Oobanchaceae [1]. Es un alimento tónico y medicinal, conocido como el "desierto ginseng". Se distribuye principalmente en Mongolia Interior, Ningxia, Gansu, Xinjiang y otras regiones [2]. Cistanche Deserticola es de naturaleza cálida, dulce y salada, y entra en los meridianos de riñón e intestino abundante. Tiene los efectos de nutrir el hígado y el riñón, beneficiar la esencia y la sangre, y humedecer los intestinos y facilitar los movimientos intestinales. Se puede usar para tratar la deficiencia de yang renal, la impotencia y la infertilidad, el dolor de la cintura y las rodillas, la debilidad de los tendones y los huesos, y el estreñimiento causado por los intestinos secos [1]. La investigación moderna muestra que los tallos carnosos con hojas de escala de deserticola de Cistanche contienen principalmente una variedad de componentes químicos, como glucósidos feniletanoides, terpenos de éter iridoides y sus glucósidos, lignanos y azúcares [3]. Entre ellos, los glucósidos feniletanoides son los ingredientes activos más importantes, que tienen efectos farmacológicos como antienvejecimiento [4], antioxidante, anti-fatiga y laxante [5].
Hay alrededor de 20 especies de Cistanche en el mundo, y hay 5 especies en mi país: Cistanche Deserticola, Cistanche Tubulosa, C. Salsa (Comey.) G.Beck, C. sinensis G. Beck y C. Salsa Var. Albiflora pf tu et zclou. La edición 2020 de la Farmacopea de la República Popular de China (en adelante, conocida como la "Farmacopea China") estipula que las dos primeras especies son las especies originales de Cistanche Deserticola [6].

Desérticola de Cistanche

Antes de la edición de 2005 de la farmacopea china, el único origen derivado del deserticola de Cistanche fue el deserticola de Cistanche. Debido a la alta demanda en los mercados nacionales e internacionales y la escasez de recursos, Cistanche Tubulosa se agregó como el origen legal. Sin embargo, los precios de los dos orígenes de Cistanche Deserticola en el mercado son muy diferentes, con el precio de Cistanche tubulosa solo 1/4 a 1/6 del de Cistanche Deserticola [7]. Las diferencias en la composición y los efectos farmacológicos de estos dos orígenes valen la investigación y la utilización en profundidad a largo plazo. En términos de las diferencias en los tipos de ingredientes, Huang Xiongmei et al. [8] descubrió que Cistancheside A era el principal ingrediente diferenciador a través del estudio de espectro característico de los dos orígenes. En términos de la diferencia en el contenido de componentes, Gao Yan et al. [9] descubrieron que las relaciones de contenido de equinacósido a verbascosido, y verbascoside a isovalascoside en Deserticola y Cistanche tubulosa de Cistanche fueron bastante diferentes a través de la cromatografía líquida de ultra alto rendimiento; Zhu Nailiang et al. [10] se encontró a través del análisis de huellas digitales que el contenido de los glucósidos feniletanoides en la deserticola de Cistanche fue significativamente menor que el de Cistanche tubulosa, y el contenido de los glucósidos feniletanoides en Cistanche tubulosa fue significativamente mayor que el de los glucósidos de iridoides.
Nuestro grupo de investigación utilizó la espectrometría de cromatografía líquida-masa combinada con análisis estadístico multivariado para comparar las diferencias en los tipos de componentes químicos entre el deserticola de Cistanche y Cistanche tubulosa, identificar marcadores diferenciales y determinar sus contenidos, para proporcionar una referencia para identificar el origen de la deserticola de cistanche y el uso racional de los tubulos cistancos en la práctica clínica. Además, al comparar las diferencias en el contenido de los componentes del índice de farmacopeo (equinacósido y verbascoside) de los dos cistanches originales, se explicó la necesidad de establecer los límites combinados de los dos componentes de los cistanches y los cistanches tubulosa, respectivamente.

 

1 materiales

1.1 instrumentos

Ultimate 3 000 Ultra-High Rendimiento líquido Fase Electrostática Tandem Tandem Ion Spectrómetro de masas de alta resolución (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, EE. UU.); 2695 cromatógrafo líquido de alto rendimiento, 2489 detector ultravioleta (Waters, EE. UU.); BT125D 1/100,000 Balance electrónico (Sartorius Instrument Systems, Alemania); KQ -500 de CNC Ultrasonic Cleaner (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); PL2002 Balance electrónico [Instrumento Mettler-Toledo (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche tubulosa

1.2 Prueba de drogas

Las sustancias de referencia equinacósido, Cistancheside A, verbascoside e isoverbósida (pureza mayor al 98%, números por lotes PS000867, PS010950, PS000683 y PS001059, respectivamente) se compraron de Chengdu Pusi Biotechnology Co., Ltd.;; Metanol de grado de espectrometría de masas (Fisher); ácido fórmico de grado de espectrometría de masas (pureza: 99%, Sigma Aldrich); El agua era agua destilada de Watson.

 

1.3 muestras

Se identificaron 10 lotes de rodajas de deserticola de Cistanche y 10 lotes de cortes de Cistanche tubulosa identificados por el profesor Li Xiangri de la Universidad de Medicina China de Beijing como tallos carnosos secos con hojas de escala de Cistanche Deserticola ycma y Cilanche Tubulosa (Schenk) Wight, plantas de la familia Orobanchee. La información detallada se muestra en la Tabla 1.

 

2 métodos

2.1 Estudio sobre los diferentes componentes de Cistanche Deserticola de diferentes orígenes

2.1.1 Preparación de la solución de prueba

Take about 0.2 g of dry sample powder (passed through No. 4 sieve), accurately weigh and place in a 50 mL brown volumetric flask, add 25 mL of 50% methanol, weigh the mass, cold soak for 30 min, ultrasonically treat for 40 min (power 250 W, frequency 35kHz), and make up the weight loss with 50% methanol after cooling, shake and filter, and take the filtrate para obtener.

 

2.1.2 Condiciones cromatográficas

WATERS HISTITY UPLCTM BEH C18 COMULACIÓN CROMATOGRÁFICA (1 0 0 mm × 2.1 mm, 1.7 µm), temperatura de la columna de 35 grados, temperatura de la cámara de muestra de 1 0}, volumen de inyección de muestra de 3 μL, elección gradiente con metanol (a) (B) como fase móvil (0 min, 10%a; 0 ~ 4 min, 10%~ 26%a; 4 ~ 18 min, 26%~ 40%a; 18 ~ 24 min, 40%~ 100%a; 24 ~ 28 minutos, 100%a), longitud de onda de detección de 330 nm, tasa de flujo de 0.3 ml · min - 1.

 

2.1.3 Condiciones de espectrometría de masas

Se usó la fuente de iones de electrospray (ESI), el escaneo de modo iónico negativo, la temperatura capilar fue de 350 grados, la velocidad de flujo de volumen de gas de la vaina fue de 30 ARB, la velocidad de flujo de volumen de gas auxiliar fue de 10 ARB, el voltaje de pulverización de pulverización fue de 3 kV, el voltaje capilar fue de –35 V, el rango de barrido fue M/Z100 ~ 1000, y el sistema de adquisición de datos fue Xcalibur 2.1.

Cistanche tubulosa

2.1.4 Análisis de componentes principales (PCA)

Después de obtener la matriz bidimensional de pares de datos de tiempo de retención de masa precisos, el panel de instrumentos mostrará toda la información de tiempo de retención precisa importada automáticamente, y el método PCA del módulo de estadísticas extendidas se utilizará para el análisis.

 

2.1.5 Análisis ortogonal de mínimos cuadrados de mínimos cuadrados (OPLS-DA)

Al realizar un análisis de datos bidimensional con OPLS-DA, se obtuvo una gran cantidad de espectros ortogonalizados, lo que puede mostrar claramente las diferencias entre los dos grupos de muestras. En el formato S-Plot, los pares de datos de tiempo de retención de masa en ambos extremos de la curva en forma de S representan los iones característicos más confiables de cada grupo de muestra.

 

2.2 Determinación de componentes diferenciales

 

2.2.1 Preparación de solución de referencia mixta

 

Tome cantidades apropiadas de equinacósido, Cistancheside A, verbascoside e isoverascoside en un matraz volumétrico marrón de 1 0 ml marrón, disuelva y diluya a la marca con 5 0% metanol, y prepare soluciones de stock de referencia mixtas con concentraciones de masa de {}}. 0.384 y 0.312 mg · ml - 1, respectivamente.

 

2.2.2 Preparación de la solución de prueba

 

El método es el mismo que en 2.1.1.

 

2.2.3 Condiciones cromatográficas

Se usó la columna Agilent Eclipse XDB-C18 (25 0 mm × 4.6 mm, 5 μm), con metanol (a) -0. 1%de solución acuosa de ácido fórmico (b) como la fase móvil y elución de gradiente ({{1 {0}}} min, 15%a; 15 ~ 20 min, 21%~ 25%A;

 

2.2.4 Investigación metodológica

2.2.4.1 Investigación de relaciones lineales

Pipeta precisamente {{0}}. 1, 0. 5, 1. 0, 2. 0 y 5.0 ml de la solución de referencia mixta en diferentes 10 ml de frascos volumétricos, agregan 50% de metanol a la escala de referencia mixta de una serie de referencia mixtas de una serie de referencia mixta de una serie de concentraciones mixtas de una serie de concentraciones mixtas de una serie de concentraciones mixtas de una serie de concentraciones mixtas de una serie de concentraciones mixtas de una serie de concentraciones mixtas. Inyecte la muestra para la determinación, use el área máxima cromatográfica como la ordenada (y) y la concentración como abscisa (x), dibuje una gráfica de dispersión y realice un análisis de regresión para obtener las ecuaciones de regresión lineal de diferentes sustancias de referencia.

 

2.2.4.2 Experimento de precisión

Tome la solución de referencia mixta de equinacósido, Cistancheside A, verbascósido y isoverbacosido, inyectarla 6 veces continuamente, registrar el área máxima de equinacósido, el lado de cistancheside A, el verbascosido y la referencia de isoverbacosido, y calcule el valor de ERS de cada componente respectivamente.

 

2.2.4.3 Experimento de estabilidad

Tome la misma solución de prueba de Cistanche Deserticola (Número de lotes: 16 0 901), inyectarla a 0, 2, 4, 8, 12, 24 h, determinar el contenido de ecinacósido, Cistancheside A, verbascoside e Isoverbacoside en la solución de prueba y calcula el valor RSD de cada componente respectivamente.

 

2.2.4.4 Experimento de repetibilidad

Tome la misma muestra (número de lotes: 160901) en polvo, prepare 6 soluciones de prueba de acuerdo con el método bajo 2.1.1, inyecte y mida, calcule el contenido de equinacósido, Cistancheside A, verbascosido e isoverbascoside en cada solución de prueba, y calcule el valor RSD de cada componente.

 

2.2.4.5 Experimento de recuperación de muestras

Pese con precisión 6 muestras de deserticola de Cistanche (número de lotes: 160901) con contenido conocido, agregue una solución de referencia equivalente al contenido conocido de equinacósido, Cistancheside A, verbascosido e isoverbascoside, prepare soluciones de prueba según el método bajo 2.1.1, inyectar y medir, y calcule la recuperación promedio de la muestra.