Efecto de pigmentación anti-skin sinérgico de los glucósidos feniletanoides cistancos y glabridina

Resumen para investigar la sinérgicaEfecto de CistancheLado de fenil etanol (PHG) y glabridina (GLA) contra la pigmentación de la piel, la relación de masa de PHGS y GLA se proyectó mediante un experimento de inhibición de tirosinasa in vitro, 1, 1- Difenil -2- trinitrofenilhidrazina (DPPH) y 2, 2- diazo-bis (3- etil-benzotiazol -6- catión ácido sulfónico de diamonio (abts+) experimentos de eliminación de radicales libres. El modelo de hipopigmentación inducida como índices.

ElinflamatorioSe estableció el modelo de células HACAT inducidas por lipopolisacárido (LPS), y el efecto antiinflamatorio del fármaco se evaluó inhibiendo la liberación de interleucina -6 (il -6) y el factor de necrosis tumoral (TNF-). Se estableció aún más el modelo de estrés oxidativo de las células HACAT inducidas por clorhidrato de azodiisobuamidina (AAPH), y la actividad mejorada de la superóxido dismutasa (SOD) y la catalasa (CAT) se usó como índices para evaluar el efecto antioxidante del fármaco. La relación de masa óptima de PHG y GLA se determinó por los tres modelos de células anteriores. Los resultados mostraron que las soluciones acuosas de PHG/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) y PHGS/GLA (10∶1) se prepararon con M (PHGS) ∶M (GLA) =1 }1, 5∶1, 10∶1 exhibieron buenos efectos inhibidores y nerosas sobre la actividad de la tirosinasa y la actividad antioxidante. Las tasas de inhibición de PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) y PHGS/GLA (1 0} ∶1) Las soluciones acuosas con una concentración de masa de 0.4 g/L fueron 94.37%, 92.93%y 88.06%, respectivamente. Las tasas de eliminación de los radicales libres DPPH fueron 89.44%, 88.72,%y 88.10%, respectivamente.
Las tasas de eliminación de ABTS+ radicales libres fueron 1 0 0.13%, 100.0,1%y 99.87%, respectivamente. Cuando la concentración de masa de PHGS/GLA fue de 25 ug/ml, PHG/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) y PHGS/GLA (10∶1) Las soluciones acuosas no mostraron citotoxicidad a las células B16F10 y HACAT. La inhibición de la actividad de tirosinasa en la solución acuosa PHG/GLA (1 ∶1) fue más fuerte (actividad de tirosinasa 23.80%), y el contenido de melanina (30.90%) disminuyó significativamente. La solución acuosa PHGS/GLA (1∶1) mostró el mejor efecto de inhibición en IL -6 y la liberación de TNF, y la capacidad de mejorar la actividad de SOD y CAT. La combinación de PHG y GLA mostró un buen rendimiento sinérgico, una sola solución acuosa A a un solo fármaco y más alto que PHG/ GLA (5∶1) y PHG/ GLA (10∶1). La combinación de PHG y GLA desempeñó un papel sinérgico en la mejora de la pigmentación de la piel al inhibir la producción de melanina y los efectos antiinflamatorios y antioxidantes.

 

Palabras clave Glicosidos feniletanoides Cistanche; glabridina; efectos sinérgicos; pigmentación antiferra; antioxidación; antiinflamatorio; materiales drogas

 

 

 

Cistanche fenil etanol lado para blanqueamiento

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La pigmentación de la piel es una enfermedad de la piel causada por factores como lesiones, inflamación de la piel y radiación ultravioleta [1-2]. Estos factores pueden conducir a un aumento anormal de la melanina, lo que a su vez causa problemas como el chloasma, las pecas y la hiperpigmentación postinflamatoria (PIH) [3-4], que afecta el estado mental y la calidad de la vida de las personas. En la actualidad, el tratamiento de la pigmentación de la piel se enfoca principalmente en inhibir la tirosinasa, una enzima clave en la formación de melanina [5-6].
La última investigación [7-8] muestra que la pigmentación de la piel depende de la estrecha conexión entre los queratinocitos y los melanocitos en la epidermis. Una vez que los radicales libres y los factores inflamatorios liberados por los queratinocitos entran en contacto con los melanocitos, inducirán un aumento en la actividad de la tirosinasa, lo que llevará a un aumento en el contenido de melanina. También acelerarán el transporte de melanina y harán que la melanina se deposite en la superficie de la piel. Por lo tanto, el tratamiento de la pigmentación de la piel requiere una variedad de medidas, como inhibir la producción de melanina, antiinflamatorio y antioxidación.

En la actualidad, aunque las preparaciones tradicionales de fármacos, como la hidroquinona y la hidroquinona, tienen ciertos efectos en el tratamiento de la pigmentación de la piel, sus modos de acción son relativamente simples y pueden producir reacciones adversas [9-10]. En comparación, los medicamentos naturales son naturales y leves en efecto y son cada vez más reconocidos y alabados por los consumidores [11-12]. En particular, la combinación de múltiples extractos de plantas [13-14] no solo puede inhibir la producción de melanina, sino que también tiene múltiples efectos como los efectos antiinflamatorios y antioxidantes, proporcionando nuevas ideas y métodos para el tratamiento de la pigmentación de la piel.
Cistanche Deserticola MA tiene un valor medicinal único y se conoce como el "desierto ginseng". Los estudios han encontrado que el glucósido feniletanoide ingrediente característico contenido en cistancos tiene una buena actividad antioxidante [15] y efectos antiinflamatorios [16], y también tiene un cierto efecto inhibitorio de tirosinasa [17]. La glicirrhizina es un componente flavonoide en Glycyrrhiza glabra L., que tiene un poderoso efecto blanqueador y se conoce como "oro blanqueador" [18]. El tratamiento tradicional de la medicina china de la pigmentación de la piel generalmente comienza a la febrero que se fortalece el bazo y el riñón, limpiando el calor y la desintoxicación, y reponiendo el Qi y la sangre [19].
Los glucósidos feniletanólicos de la desértica de Cistanche pueden reponer yang riñón y beneficiar la esencia y la sangre, mientras que Glycyrrhiza glabra puede reponer el bazo y el Qi, eliminar el calor y desintoxicar. Los dos pueden trabajar juntos para resistir la pigmentación. The combination ofphenylethanoidc glycosides of Cistanche deserticola and glabridin may resist skin pigmentation from multiple dimensions and targets, protect against ultraviolet rays in the whole band, synergistically inhibit tyrosinase activity and reduce melanin production, and can also reduce free radicals and inflammatory factors, reduce skin inflammation and oxidative stress, and regulate melanin production and transport. Sin embargo, hay pocos informes en la literatura sobre la inhibición sinérgica de la pigmentación de la piel por los glucósidos feniletanoides de la desertificación de Cistanche y la glabridina.
Este artículo tiene la intención de explorar si existe un efecto sinérgico entre Pphenilethanoidglucósidos de Deserticola (PHG) y glabridina (GLA) a través de experimentos bioquímicos in vitro y el establecimiento de 3 modelos de células, y obtienen la relación de masa compuesta óptima para un efecto nérgico. Se espera que proporcione apoyo teórico y orientación práctica para el desarrollo de productos de cuidado de la piel de plantas naturales y que ayude a promover que la industria del cuidado de la piel se desarrolle en una dirección más natural, saludable y eficiente.

 

 

Donde: una reacción es la absorbancia de la solución de muestra, la solución L-tirosina, PBS y la solución de tirosinasa; Un control de reacción es la absorbancia de la solución de muestra, la solución de L-tirosina, la solución N y PBS; Un en blanco es la absorbancia de la solución L-tirosina, la solución PBS y la solución de tirosinasa; Un control en blanco es la absorbancia de las soluciones L-tirosina y PBS.

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1.3.2 Determinación de la capacidad de eliminación de radicales libres DPPH

Primero, con precisión {{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) de dpph y disuelvelo en 25 0 ml de etanol anhidro para preparar una solución de trabajo dpph con una concentración de una concentración de {13}}. mmol/l. Luego, los PHG y GLA se prepararon en solución de etanol PHGS y solución de etanol GLA con concentraciones de masa de 0. 0 01, 0.01, 0.1, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0 mg/ml respectivamente usando el 50% de etanol por volumen, y la solución de etanol VC se preparó de la misma manera. Luego, la solución de etanol PHGS y la solución de etanol GLA se mezclaron uniformemente en M (solución PHGS) ∶ M (solución GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 para obtener 9 tipos de soluciones de ethanol de etanol diferentes con diferentes infracciones de masa, cuáles fueron los fogs/fogs, cuáles fueron los phgs/GLA. (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Soluciones de etanol. Finalmente, agregue 100 μl de diferentes soluciones de muestra y 100 μl de solución de trabajo DPPH a la placa de pozo 96-, mezcle bien y manténgase alejado de la luz a temperatura ambiente durante 30 minutos. Mida la absorbancia a 517 nm con un marcador enzimático. VC se usó como control positivo, y cada experimento se repitió 3 veces. Calcule la tasa de eliminación de radicales libres DPPH (%) de acuerdo con la fórmula (2).
Tasa de eliminación de radicales libres DPPH/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) donde: A1 es la absorbancia de la solución de muestra + solución de trabajo DPPH; A2 es la absorbancia de etanol al 50% por volumen + solución de trabajo DPPH; A3 es la absorbancia de la solución de muestra + 50% de etanol por volumen.

1.3.3 Determinación de ABTS+ capacidad de eliminación de radicales libres

Primero, pese 1 g (1,82 mmol) de ABTS y disuelva en agua desionizada para preparar una solución de trabajo ABT con una concentración final de 7,4 mmol/L; Pesar 0. 5 g de persulfato de potasio y disuelva en agua desionizada para preparar una solución de trabajo de persulfato de potasio con una concentración final de 2.6 mmol/L; Mezcle la solución de trabajo ABTS y la solución de trabajo de persulfato de potasio en volúmenes iguales, y reaccione durante 12 h en la oscuridad para preparar la solución de trabajo ABTS+. Luego, de acuerdo con el método en la Sección 1.3.2, prepare la solución de etanol PHGS, solución de etanol GLA, solución de etanol N y VC, así como Solución de etanol PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40).
Finalmente, agregue 40 μl de diferentes soluciones de muestra y 160 μl de solución de trabajo ABTS+ a la placa de pozo 96-, mezcle bien, reaccione a temperatura ambiente en la oscuridad durante 6 minutos y mida la absorbancia de la solución a 734 nm usando un lector ELISA. Calcule la tasa de eliminación de radicales Radicales ABTS+ de acuerdo con la fórmula (3).

 

Donde: A1 es la absorbancia de la solución de muestra + solución de trabajo ABTS +; A2 es la absorbancia de la solución de trabajo de agua desionizada + ABTS +; A3 es la absorbancia de la solución de muestra + agua desionizada.

 

1.4 Experimento celular

1.4.1 Cultivo celular

Después de que se reviven las células B16F10 y HACAT, se inoculan en medio de alta glucosa DMEM (que contiene una mezcla de suero bovino fetal al 10% y estreptomicina de penicilina al 1% por una fracción de masa) y cultivada en una incubadora con 37 grados, fracción de volumen de CO2 al 5% y 70% de humedad durante 24 h. El estado de crecimiento celular se observa bajo un microscopio, y el medio se reemplaza o subculta de acuerdo con el estado de crecimiento celular.

 

1.4.2 Agrupación experimental

Las células B16F10 y HACAT en la fase de crecimiento logarítmica se inoculan en placas de pozos 96- con números de células apropiados y se cultivan durante 24 h para permitir que las células se adhieran a la pared. Las soluciones de muestra de diferentes concentraciones de masa se preparan utilizando un medio de cultivo DMEM. El grupo normal del grupo, el grupo modelo, el grupo de PHGS de dosis bajas (125 ug/ml), grupo de PHGS en dosis medianas (250 ug/ml), grupo de PHGS de dosis altas (500 ug/ml), grupo de dosis de dosis bajas (6.25 ug/ml), grupo de dosis medianas (12.5 ug/ml), grupo de dosis altas (25 ug/ml) grupo y phgs/pHGS/pHGS/GLA (1∶1) grupo (1∶1) pare Se establecieron grupo PHG/GLA (5∶1) y grupo de medio de cultivo PHG/GLA (10∶1).

En el modelo de pigmentación B16F10 inducido por UVB, las células del grupo modelo se agregaron con 30 μl de PBS (pH =7. 4) y se colocaron 3 cm directamente debajo del irradiador UVB durante 110 s; El grupo experimental se pretrató con 100 μl de soluciones de muestra de diferentes concentraciones de masa durante 1 h, luego se agregó con 30 μl de PBS y se colocó 3 cm directamente debajo del irradiador UVB durante 110 s; El grupo normal siempre usó medio de cultivo DMEM de alto glucosa; El grupo en blanco no se inoculó con células, sino con una cantidad igual de medio de cultivo.

En el modelo de inflamación de células HACAT inducida por LPS, el grupo modelo se cultivó con solución PBS de LPS a una concentración de 20 ug/ml durante 24 h; El grupo experimental se pretrató con 100 μl de soluciones de muestra de diferentes concentraciones de masa durante 24 h y luego se agregó con 20 ug/ml de solución LPS durante 24 h; El grupo normal siempre usó medio DMEM alto en glucosa; El grupo en blanco no se inoculó con células, sino con una cantidad igual de medio de cultivo.

En el modelo de estrés oxidativo de células AAPH inducido por AAPH, el grupo modelo se cultivó con una solución AAPH de 100 ml (2.5 mmol) a una concentración de 25 mmol/L durante 24 h; El grupo experimental se pretrató con 100 μl de soluciones de muestra de diferentes concentraciones de masa durante 24 hy luego se agregó con solución AAPH a una concentración de 25 mmol/L durante 24 h; El grupo normal siempre usó medio DMEM alto en glucosa; El grupo en blanco no se inoculó con células, sino con una cantidad igual de medio de cultivo.

Cada grupo se estableció con 3 pozos replicados y se cultivó en una incubadora con 37 grados, 5% de fracción de volumen de CO2 y 70% de humedad.

1.4.3 Ensayo de citotoxicidad

El método CCK8 se usó para determinar la citotoxicidad. B16F1 0 y las células HACAT en la fase de crecimiento logarítmico se digirieron con tripsina al 0,25% durante 3 minutos. Después de terminar la digestión, el medio de cultivo se voló repetidamente para hacer una suspensión celular con una densidad de 1 × 104 células/ml. Las células se inocularon uniformemente en una placa de pozo 96-, 100 μl por pocillo, y se añadió PBS a los pocillos alrededor de las células. Después de que las células se adhirieron a la pared, se agregaron diferentes concentraciones de masa de solución de muestra, 3 pozos replicados por grupo, y se cultivaron en una incubadora a 37 grados, una fracción de volumen de CO2 al 5% y al 70% de humedad durante 24, 48 y 72 h, y luego la solución se descartó. Todos los grupos se agregaron con 100 μl de medio de cultivo completo que contenía una fracción de volumen CCK8 al 10% y se incubaron durante 60 minutos. La absorbancia de la solución a 450 nm se midió utilizando un lector ELISA. La viabilidad celular (%) se calculó de acuerdo con la fórmula (4).

 

 

Donde: un grupo experimental es la absorbancia de los pozos que contienen células y solución de muestra bajo irradiación UVB; Un grupo normal es la absorbancia de los pozos que contienen células y solución de muestra sin irradiación UVB; Un grupo en blanco es la absorbancia de los pozos que contienen medio de cultivo pero no células.

 

1.4.5 Determinación del contenido de melanina

El contenido de melanina fue determinado por el método de lisis de NaOH. Después de tratar las células durante 72 h de acuerdo con el método en la Sección 1.4.2, el sobrenadante se descartó y se lavó dos veces con PBS, y se añadió 100 μl de solución acuosa de NaOH que contenía DMSO al 10% en volumen (concentración de 1 mol/L). Después de colocarse en un horno de 90 grados durante 1 h, la absorbancia de la solución a 490 nm se determinó mediante un marcador enzimático. El experimento se repitió 3 veces. El contenido de melanina (%) se calculó de acuerdo con la fórmula (5).

 

1.5 Determinación del contenido del factor inflamatorio y el índice de estrés oxidativo

Después de tratar las células durante 48 h de acuerdo con el método en la Sección 1.4.2, las células HACAT en cada grupo se recogieron con un raspador de células, se centrifugaron y se recogió el sobrenadante. El contenido de IL -6 y TNF- se determinó de acuerdo con las instrucciones del kit ELISA.
Después de tratar las células durante 48 h de acuerdo con el método en la Sección 1.4.2, las células HACAT en cada grupo se recogieron con un raspador de células, y las células se rompieron mediante congelación y descongelación repetidas. Las células se centrifugaron a 12000 r/min a 4 grados durante 10 minutos, y se recogió el sobrenadante. La actividad SOD y el contenido de CAT se determinaron de acuerdo con las instrucciones del kit ELISA.

1.6 Determinación del índice combinado
El método de índice combinado (IC) [20] se usó para determinar si los PHG y el GLA en diferentes relaciones de masa tuvieron un efecto sinérgico en la inhibición de la actividad de la tirosinasa y la antioxidación. El índice de combinación se calculó de acuerdo con la fórmula (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 indica un efecto antagonista, CI =1 indica un efecto aditivo y CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 Análisis de datos

Todos los datos se expresan como "media aritmética ± desviación estándar (𝑥̅ ± 𝑠)". Graph Prism 9.5. Se usó el software 0 para el análisis estadístico. El análisis de varianza unidireccional se utilizó para la comparación entre múltiples grupos. PAG<0.05 was considered statistically significant.