Efectos de Xiaoyaosan en la vía de señalización CAMP en la corteza cerebral de ratas deprimidas
Nov 26, 2025
Abstracto
Objetivo:Evaluar los cambios en la prostaglandina E2 (PGE2) y la sustancia P (SP) séricas y la expresión del ARNm del monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) y la proteína de unión al elemento de respuesta 1 del AMPc (CREB1) en la corteza cerebral de ratas deprimidas, y explorar el mecanismo molecular por el cual Xiaoyaosan ejerce efectos antidepresivos.
Métodos: Cuarenta y ocho ratas SD macho fueron asignadas aleatoriamente a cuatro grupos (n=12 cada uno): normal, modelo, Xiaoyaosan y fluoxetina. Se estableció un modelo de depresión utilizando estrés de inmovilización crónica (CIS). Xiaoyaosan fue administrado por sonda 30 minutos antes del modelado diario durante 21 días. Los efectos similares a los de los antidepresivos se evaluaron mediante observación macroscópica del comportamiento, prueba de preferencia de sacarosa, prueba de campo abierto y prueba de natación forzada. Los niveles corticales de ARNm de AMPc y CREB1 se cuantificaron mediante qPCR de fluorescencia en tiempo real. La PGE2 y la SP séricas se midieron mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).
Resultados: En comparación con el grupo modelo, tanto Xiaoyaosan como fluoxetina atenuaron significativamente el comportamiento similar a la depresión; aumento del consumo de sacarosa, recuentos de crianza vertical, cruces horizontales y aseo en la prueba de campo abierto; y reducción del tiempo de inmovilidad acumulada en la prueba de nado forzado. Ambos tratamientos mejoraron la histopatología cortical, elevaron la expresión de ARNm de AMPc y CREB1 en la corteza cerebral y redujeron los niveles séricos de PGE2 y SP (P <0,01).
Conclusión:Xiaoyaosan ejerce claros efectos antidepresivos en ratas deprimidas, potencialmente mediante la regulación de la vía de señalización cortical del AMPc.
Palabras clave: Xiaoyaosan; Depresión; acampar; CREB1; Prostaglandina E2 (PGE2); Sustancia P (SP)
Introducción
La depresión es una de las principales causas de morbilidad y discapacidad en todo el mundo, lo que perjudica profundamente la calidad de vida. Xiaoyaosan, una fórmula clásica de medicina tradicional china (MTC) de múltiples hierbas, ha demostrado utilidad clínica en presentaciones depresivas comunes, lo que respalda su desarrollo continuo como terapia botánica.
Mecánicamente, la cascada de señalización AMPc-proteína quinasa A (PKA)-CREB es fundamental para la regulación del estado de ánimo y el comportamiento afectivo. La regulación negativa de esta vía puede precipitar fenotipos depresivos. CREB está implicado en la fisiopatología de la depresión y la activación por cAMP mejora la transcripción de genes posteriores; Los polimorfismos y las reducciones funcionales en este eje se han considerado factores de susceptibilidad a la depresión.
Los mediadores inflamatorios también contribuyen a la depresión. La prostaglandina E2 (PGE2) media las respuestas inflamatorias y la PGE2 elevada puede inducir conductas depresivas. La sustancia P (SP), un neuropéptido relacionado con el estrés y el afecto, suele estar elevada en el suero de los pacientes con depresión. Por lo tanto, la expresión alterada del ARNm de AMPc y CREB1 cortical junto con niveles elevados de PGE2 y SP en suero pueden representar un mecanismo molecular subyacente a la lesión cortical en la depresión.
Aunque se han investigado numerosas fórmulas de compuestos de MTC para determinar los mecanismos antidepresivos, la influencia de la mayoría de las fórmulas en la vía del AMPc aún no está clara. Utilizando un paradigma de estrés por inmovilización crónica (CIS) para inducir un comportamiento similar a la depresión en ratas, este estudio investiga más a fondo el mecanismo antidepresivo de Xiaoyaosan y lo compara con la fluoxetina, con el objetivo de informar el desarrollo futuro de terapias botánicas y proporcionar conocimientos prácticos para las personas que buscan ayuda para la depresión.
CÓMO LOS SUPLEMENTOS DE HIERBAS MTC ALIVIAN LOS SÍNTOMAS DE PROSTATITIS
Materiales
animales
Se compraron cuarenta y ocho ratas Sprague-Dawley macho adultas sanas de grado SPF (8 semanas de edad, 200-220 g) de Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [N.º de licencia: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Las ratas se alojaron en las instalaciones de barrera para animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Guizhou a 22 ± 2 grados, humedad relativa del 35% al 55%, 12 h de luz/12 h de oscuridad (7:00 a 19:00), cuatro ratas por jaula, con 7 días de aclimatación. Aprobación ética: Universidad de MTC de Guizhou (No. 20210142).
CÓMO LOS SUPLEMENTOS DE HIERBAS MTC ALIVIAN LOS SÍNTOMAS DE PROSTATITIS
SUPLEMENTOS DE HIERBAS TCM A LA VENTA
Drogas
La fórmula Xiaoyaosan siguió las proporciones de Taiping Huimin Heji Ju Fang. Las hierbas crudas se compraron en Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), peonía blanca (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Atractylodes salteados (Baizhu), Poria (Fuling), regaliz frito con miel (Zhigancao), Mentha (Bohe) y jengibre fresco (Shengjiang), combinados en una proporción de 5:5:5:5:5:4:1:5. La decocción y la concentración se prepararon de acuerdo con la edición 2020 de la Farmacopea de la República Popular China por Hunan Jiuzhitang, sirviendo como intervención de MTC. Las dosis se convirtieron para ratas, se disolvieron en agua desionizada y se prepararon como una suspensión.
Se utilizaron cápsulas de clorhidrato de fluoxetina (Patheon France; envasadas por Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; lote nº. 6663B; 20 mg/cápsula) como antidepresivo de referencia.
reactivos
ExTaq (TAKARA, catálogo DRR100A); Mezcla maestra de qPCR verde SYBR/fluoresceína (2×) (Fermentas, n.º de catálogo K0242); cebadores (Qingke Bio); Kits de ELISA para PGE2 y SP para ratas (Centro de Biotecnología Yuanju de Shanghai, cat. CK-E30697 y CK-E30122).
Instrumentos
sistema qPCR de fluorescencia en tiempo real 7900 (Applied Biosystems, EE. UU.); micropipetas (Eppendorf); microtomo de parafina (HY1508, Jinhua Huiyou); Sistema de agua ultrapura Aquapro (AJY-0501, Aikepu).
Métodos
Agrupación y modelado
Las ratas fueron asignadas aleatoriamente a grupos normales, modelo, Xiaoyaosan y fluoxetina (n=12 cada uno). Excepto el grupo normal, todos los grupos se sometieron a CIS durante 3 h/día en momentos aleatorios durante 21 días. Las ratas normales no fueron inmovilizadas, pero se les privó de comida y agua durante los mismos períodos de tiempo para que coincidieran con el manejo.
administración de drogas
Según estudios previos, Xiaoyaosan se administró mediante sonda nasogástrica a 2,22 g de fármaco bruto·kg-1·día-1; fluoxetina a 2,0 mg·kg-1·día-1. Los fármacos se disolvieron en agua desionizada. Las dosis se calcularon mediante la conversión del área de superficie corporal; El volumen de la sonda fue de 10 ml/kg, administrado 30 minutos antes de cada sesión diaria de restricción. Los grupos normales y modelo recibieron volúmenes iguales de agua desionizada.
Medidas de resultado y procedimientos.
3.1 Observaciones macroscópicas
Las observaciones diarias registraron el estado mental, la locomoción y la apariencia general.
3.2 Prueba de preferencia de sacarosa
Las ratas fueron entrenadas durante 3 días. Día 1: dos botellas de sacarosa al 1% por jaula. Día 2: se reemplaza una botella con agua bidestilada de igual volumen. Después de 24 h de privación de comida y agua, cada rata recibió una botella de sacarosa al 1% y una de agua bidestilada durante 1 h. Se pesaron las botellas para calcular la preferencia de sacarosa (%): ingesta de sacarosa / (sacarosa + ingesta de agua) × 100%.
3.3 Prueba en campo abierto
Se utilizó un campo abierto de paredes negras (125 cm x 125 cm x 50 cm) en una habitación tranquila. Se colocaron ratas en el centro; Durante 5 minutos, se registraron recuentos de crianza vertical, cruces de rejillas horizontales y eventos de aseo. La arena se limpió con etanol al 75% y agua entre pruebas.
3.4 Prueba de nado forzado
Las ratas se colocaron individualmente en cilindros de vidrio con 35 cm de agua a 20 ± 2 grados. A partir de la inmersión se registró el comportamiento durante 5 min con una cámara de alta resolución. Se midió el tiempo de inmovilidad acumulado durante 5 minutos (inmovilidad definida como un movimiento mínimo para mantener la nariz fuera del agua, una ligera flexión del cuerpo para mantener el equilibrio). Se cambió el agua entre animales.
3.5 Histopatología
Las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico al 3% (0,15 ml/100 g). Seis ratas por grupo se sometieron a perfusión transcardial con paraformaldehído al 4% seguido de solución salina al 0,9% para fijación, decapitación y extracción de cerebro. Los cerebros se sumergieron en paraformaldehído al 4% (4 grados) durante 72 h, se incluyeron en parafina, se recortaron y se seccionaron a ~5 μm. Las secciones se hicieron flotar a 48 grados, se montaron, se hornearon a 60 grados durante 4 h, se desparafinaron y rehidrataron, se tiñeron con hematoxilina, se diferenciaron, se enjuagaron, se contratiñeron con eosina, se deshidrataron, se aclararon y se cubrieron con un cubreobjetos para su examen microscópico. Las seis ratas restantes por grupo fueron sacrificadas; La corteza cerebral se diseccionó rápidamente en hielo y se almacenó a -80 grados para la extracción de ARN.
3.6 cuantificación de ARNm
Las secuencias diana se recuperaron de NCBI y los cebadores se diseñaron con Primer 6.0.
AMPc: adelante 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Inverso 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 pb.
CREB1: Adelante 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Inversa 5′-GGATACCTGGGCTAAATGTGGCA-3′; 105 pb.
GAPDH: Adelante 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Inverso 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3 ′; 116 pb.
Condiciones de qPCR: predesnaturalización de 90 grados durante 30 s; 45 ciclos de 95 grados 10 s, 60 grados 30 s, 72 grados 30 s. Análisis de curva de fusión: 95 grados 1 min, 55 grados 1 min, 95 grados 1 min.
3.7 Factores inflamatorios séricos
Para ELISA: (i) establecer estándares y muestras; añadir estándares de 50 μL en concentraciones graduadas a los pocillos estándar; (ii) añadir 40 µl de diluyente de muestra a los pocillos de blanco y de muestra, luego 10 µl de muestra y mezclar; (iii) añadir 100 µl de conjugado enzimático a todos menos a los espacios en blanco; (iv) sellar e incubar a 37 grados durante 1 h; (v) tampón de lavado concentrado diluido 1:20; (vi) lavar 5 veces y secar; (vii) agregar 50 μL de sustrato A y luego 50 μL de sustrato B, incubar a 37 grados protegido de la luz durante 15 minutos; (viii) agregar solución de parada; (ix) leer la absorbancia a 450 nm con los blancos puestos a cero.
Análisis estadístico
Los datos se analizaron en SPSS 26.0 y se expresaron como media ± DE. Después de confirmar la normalidad y la homogeneidad de la varianza, se utilizó ANOVA unidireccional. P <0,05 se consideró estadísticamente significativo.
Nota del lector para profesionales y personas que buscan ayuda.
Para desarrolladores de antidepresivos botánicos/MTC: el estudio vincula una fórmula clásica con una vía neurobiológica específica (cAMP-CREB) y mediadores inflamatorios (PGE2, SP). Esta modulación dual (señalización de neuroplasticidad más inflamación) se alinea con la biología contemporánea de la depresión y puede guiar la optimización de fórmulas, la selección de biomarcadores y las estrategias de combinación con ISRS como la fluoxetina.
Para personas que buscan ayuda para la depresión: los resultados preclínicos no pueden reemplazar la atención médica, pero sugieren que Xiaoyaosan puede mejorar los comportamientos depresivos al normalizar las señales cerebrales y reducir las señales inflamatorias. Si considera opciones a base de hierbas, consulte a un médico calificado, especialmente si está tomando antidepresivos, para evitar interacciones y garantizar la dosificación y el control de calidad.
Comida para llevar de transición
Xiaoyaosan mejoró el comportamiento, la histología cerebral y los marcadores moleculares en ratas deprimidas inducidas por CIS, probablemente mediante la regulación positiva de la señalización de AMPc/CREB cortical al tiempo que reduce la PGE2 y la SP periféricas. Sobre la base de esto, el próximo estudio analizará los reguladores ascendentes del AMPc (p. ej., isoformas de adenilil ciclasa y fosfodiesterasas) y determinará si Xiaoyaosan modula directamente estos objetivos o actúa principalmente a través de vías antiinflamatorias que convergen en CREB.
