Plantas tailandesas con altos niveles de antioxidantes, actividad de eliminación de radicales libres, actividad antitirosinasa y anticolagenasa

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Moragot Chatatikun1 y Anchalee Chiabchalard2

Resumen

Fondo:La radiación ultravioleta de la luz solar induce la sobreproducción de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que resulta en trastornos de fotoenvejecimiento e hiperpigmentación de la piel. Los nuevos compuestos blanqueadores y antiarrugas de productos naturales han adquirido recientemente un interés creciente. El propósito de este estudio fue encontrar productos que reduzcan ROS en 14 extractos de plantas tailandesas.

Métodos:Para determinar los fenoles totales yflavonoidecontenido,antioxidanteactividad,anti-tirosinasaactividad y actividad anti colagenasa, comparamos extractos de 14 plantas tailandesas preparadas con diferentes solventes (éter de petróleo, diclorometano y etanol).antioxidantelas actividades se determinaron mediante ensayos DPPH y ABTS.

Resultados:El contenido fenólico total de los 14 extractos de plantas tailandesas se encontró en los niveles más altos en etanol seguido por extractos de diclorometano y éter de petróleo, respectivamente, mientras queflavonoideel contenido se encontraba normalmente en la fracción de diclorometano. La actividad de eliminación osciló entre un 7 y un 99 por ciento de eliminación según lo evaluado por los ensayos DPPH y ABTS. El extracto de hoja de etanol de Ardisia elliptica Thunb. tuvo el mayor contenido fenólico, actividad antioxidante e inhibición de colagenasa, mientras que Cassia alata (L.) Roxb. extracto tenía el más ricoflavonoidecontenido. Curiosamente, tres extractos de plantas, que fueron las fracciones etanólicas de Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. y Senna alata (L.) Roxb. tenía altoantioxidantecontenido y actividad e inhibió significativamente tantotirosinasay colagenasa.

Conclusión:Nuestros hallazgos muestran que las fracciones de etanol de Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. y Senna alata(L.) Roxb. se muestra prometedor como ingredientes potenciales para productos cosméticos tales como agentes antiarrugas y productos para blanquear la piel.

Palabras clave:Ardisia elliptica Thunb.,antioxidantecontenido, actividad de barrido,Anti-tirosinasaactividad, actividad anti-colagenasa

El flavonoide es uno de los elementos decistanche

Fondo

La radiación ultravioleta (RUV) de la luz solar es el factor de riesgo más significativo para los cánceres de piel no melanoma y melanoma [1]. La sobreexposición a la luz solar, en particular UVA y UVB, induce la sobreexpresión de especies reactivas de oxígeno (ROS) que dañan los lípidos, las proteínas y los ácidos desoxirribonucleicos. El colágeno es la base principal de la matriz extracelular en la capa de la dermis de la piel. El exceso de ROS aumenta la expresión de colagenasa, una proteasa que degrada el colágeno, lo que puede provocar el fotoenvejecimiento y las arrugas de la piel [2]. Además, la exposición a los rayos UV induce la producción de melanina, lo que resulta en hiperpigmentación.tirosinasaes la enzima clave que inicia la pigmentación de la piel. En primer lugar, la tirosinasa hidroxila la L-tirosina para formar 3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA). Posteriormente, la tirosinasa oxida la L-DOPA a DOPA quinona. La DOPA quinona se convierte además en DOPAcromo que se puede convertir en 5,6-dihidroxiindol (DHI) o 5,6-dihidroxiindol-2-ácido carboxílico (DHICA)[3]. Los tratamientos actuales para el envejecimiento de la piel incluyen hidroxiácidos para pelar la capa epidérmica, retinoides para reducir la aspereza de la piel y rellenos cutáneos administrados inyectando colágeno en la piel. Sin embargo, estos tratamientos tienen efectos adversos, como hiperpigmentación, inflamación, citotoxicidad, irritación e infección bacteriana [4]. El agente blanqueador de la piel más popular es la hidroquinona, que inhibetirosinasa, pero sus efectos secundarios incluyen dermatitis, edema, reacciones alérgicas y ocronosis [5]. Recientemente, los investigadores se han centrado en productos naturales que inhiben las ROS inducidas por UV, suprimen las enzimas y reducen la formación de melanina como alternativas a los tratamientos actuales. Por ejemplo, fitocompuestos activos, como arbutina, aloesina, ácido gentísico,flavonoides, hesperidina, regaliz, niacinamida, derivados de levadura y polifenoles, inhiben la melanogénesis sin citotoxicidad para los melanocitos [6]. Por lo tanto, las plantas pueden reducir la formación de arrugas y la hiperpigmentación causada por la exposición a la luz solar.

El objetivo de este estudio fue analizar 14 plantas tailandesas extraídas con tres solventes diferentes por su potencial como ingredientes antiarrugas y blanqueadores de la piel. El número deantioxidantefenoles yflavonoidesfue evaluado para una correlación con actividades de eliminación de radicales libres, y anti-colagenasa yanti-tirosinasaactividades. Los extractos teníanantioxidantesque eliminó los radicales libres e inhibió las enzimas involucradas en la formación de arrugas y pigmentos. Identificamos a Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. y Senna alata (L.) Roxb como un candidato muy prometedor para su uso en productos cosméticos.

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Métodos

Sustancias químicas y reactivos

Reactivo de fenol de Folin Ciocalteu, carbonato de sodio (Na2CO3), ácido gálico, quercetina, cloruro de aluminio al 10 por ciento, etanol, 2, 2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH), ácido ascórbico, 2,2′-Azino- bis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfónico)(ABTS), persulfato de potasio, ácido kójico, tirosinasa de hongos (EC 1.14.18.1), 3,4-dihidroxi-L-fenilalanina (L- DOPA), N-[3-(2-furil) acriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), colagenasa de Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), galato de epigalocatequina (EGCG) , cloruro de sodio, cloruro de calcio y sulfóxido de dimetilo (DMSO) se adquirieron de Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, EE. UU.). El éter de petróleo, el diclorometano, el etanol absoluto, el metanol, el fosfato ácido de disodio y el fosfato diácido de sodio se adquirieron de Merck (Darmstadt, Alemania). Todos los productos químicos y reactivos eran de grado analítico.

Materiales vegetales y extracción.

Se recolectaron trece especies de hojas tailandesas del jardín de hierbas HRH Princess Sirindhorn, provincia de Rayong, Tailandia. Los mangostanes se obtuvieron de la provincia de Chanthaburi, Tailandia. Estas plantas fueron autenticadas y depositadas en el Herbario, Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias, Universidad de Chulalongkorn, Tailandia. Los nombres científicos, los números de cupón y las partes de las plantas se muestran en la Tabla 1. Las plantas se extrajeron utilizando el aparato Soxhlet. En resumen, 10 g de la planta seca se extrajeron por separado con éter de petróleo, diclorometano y etanol. Los disolventes se eliminaron usando un evaporador rotatorio al vacío a presión reducida usando el concentrador MiVac Quattro. Las muestras concentradas se disolvieron en DMSO a 100 mg/ml y se almacenaron a -20 grados hasta su uso. Los rendimientos de los extractos secos se presentan en la Tabla 1 como porcentaje p/p de materiales vegetales secos.

Determinación del contenido fenólico total

El contenido fenólico total de los extractos vegetales se evaluó mediante el método de Folin-Ciocalteu [7]. Brevemente, se mezclaron 50 ul de extractos a 1 mg/ml en agua destilada con 50 ul de reactivo de Folin-Ciocalteu al 10 por ciento y 50 ul de Na2CO3 0,1 M. La mezcla de reacción se incubó durante 1 ha temperatura ambiente en la oscuridad. Se midió la absorbancia a 750 nm con un lector de microplacas (Biotek, EE. UU.). Se utilizó como patrón ácido gálico de 1,56 a 100 ug/ml. El contenido fenólico total de los extractos se expresa en mg de equivalentes de ácido gálico (GAE) por gramo de material vegetal seco. Todas las muestras se analizaron por triplicado.

Determinación del contenido de flavonoides

Totalflavonoide(TFC) se determinó utilizando el ensayo colorimétrico de cloruro de aluminio (AlCl3) [7]. Brevemente, se mezclaron 50 ul de los extractos a 1 mg/ml en etanol al 80 por ciento con 50 ul de solución de AlCl3 al 2 por ciento en el pocillo de una placa de pared 96. La placa se incubó durante 15 min a temperatura ambiente. La absorbancia a 435 nm se midió utilizando un lector de microplacas. La quercetina de 1,56 a 100 ug/ml sirvió como estándar. El contenido total de flavonoides se expresa como mg de equivalentes de quercetina (QE) por gramo de material vegetal seco. Las muestras se analizaron por triplicado.

Actividad de eliminación de DPPH

El ensayo de actividad de eliminación de DPPH se realizó como se describe por Yamasaki et al. [8]. La solución de DPPH se preparó recientemente para cada ensayo. Brevemente, se mezclaron 100 ug/ml de extractos o 1,56 a 100 ug/ml de estándar de ácido ascórbico en metanol absoluto con 180 ul de reactivo DPPH en una placa de 96 pocillos. La mezcla de reacción se incubó durante 30 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Luego, se midió la absorbancia a 517 nm con un lector de microplacas. Los experimentos se realizaron por triplicado. La absorbancia a 517 nm de DPPH fue de 0,70 ± 0,02 y disminuyó la actividad depuradora medida por absorbancia. La capacidad de eliminación se calculó como actividad de eliminación (porcentaje)=100 porcentaje × [(훥A517 de control - 훥A517 de muestra)/ 훥A517 de control]. Los porcentajes de actividad depuradora de DPPH de los extractos se compararon con los del ácido ascórbico y se expresan como mg de vitamina C equivalente.antioxidante(VCEAC) por g de material vegetal seco. IC50 se determinó a partir de un gráfico de porcentaje de inhibición frente a la concentración (de 0,78 a 100 ug/ml de cada extracto).

Actividad de eliminación de ABTS

La actividad de eliminación de radicales libres de ABTS se realizó como se describió anteriormente [9]. El reactivo de trabajo ABTS• plus se preparó mezclando ABTS• 7 mM y persulfato de potasio 2,45 mM en una relación volumen/volumen de 8:12. La solución de trabajo se mantuvo durante 16 a 18 ha temperatura ambiente en la oscuridad. La solución ABTS• plus se diluyó con etanol absoluto para dar una absorbancia a 734 nm de0.70 ± 0.02. Luego, se añadieron 100 ug/ml de extractos o 1,56 a 100 ug/ml de estándar de ácido ascórbico en etanol absoluto a 180 ul de ABTS• más reactivo de trabajo en los pocillos de una placa de 96 pocillos. La placa se incubó durante 45 min a temperatura ambiente y se midió la absorbancia a 734 nm. Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. La capacidad de eliminación se calculó como actividad de eliminación (porcentaje)=100 × [(훥A734 de control - 훥A734 de muestra)/ 훥A734 de control]. Los porcentajes de actividad depuradora de ABTS de los extractos se compararon con los del ácido ascórbico y se presentan como mg de vitamina C equivalente.antioxidantecapacidad (VCEAC) por g de material vegetal seco. La IC50 se determinó a partir de un gráfico del porcentaje de inhibición frente a la concentración (de 15,62 a 1000 ug/ml de cada extracto).

Determinación de la inhibición de la tirosinasa de hongos

El método del dopacromo se realizó con ligeras modificaciones [10]. Brevemente, se preincubaron 20 ul de extractos de plantas o DMSO (como control), 20 ul de 203,3 unidades/ml de tirosinasa de hongo y 140 ul de tampón fosfato 20 mM a pH 6,8 durante 10 min a 25 grados. Después de la preincubación, se añadieron 20 ul de L-DOPA 2,5 mM y luego las muestras se incubaron durante 20 minutos más a 25 grados. La cantidad de dopacromo se midió a 492 nm con un lector de microplacas. El ácido kójico (KA) sirvió como control positivo para la inhibición. El porcentaje de inhibición de la actividad de tirosinasa ( por ciento ) se expresó como porcentajetirosinasainhibición {{0}} × [(훥A492 de control –훥A492 de muestra)/ 훥A492 de control]. Las concentraciones finales de los extractos y ácido kójico fueron de 1 y 0,1 mg/ml, respectivamente. IC50 se determinó a partir de un gráfico de porcentajetirosinasainhibición contra la concentración (de 15,62 a 1000 ug/ml de cada extracto).

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Determinación de la inhibición de la colagenasa

La inhibición de la colagenasa se determinó mediante un método descrito previamente [11]. Brevemente, 40 ul de colagenasa de Clostridium histolyticum a 0.25 unidades/ml en tampón Tricina 50 mM que contenía CaCl2 10 mM y NaCl 400 mM, y 10 ul de tampón Tricina 50 mM se mezclaron con 10 ul de los extractos o DMSO (como control). Se utilizó galato de epigalocatequina (EGCG) como control positivo. Después de una incubación de 15-min a temperatura ambiente, se añadieron 50 ul de N-[3-(2-furil)acriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). La absorbancia se midió a 340 nm de forma inmediata y continua durante 20 min. La actividad enzimática se evaluó mediante la disminución de la absorbancia durante el intervalo de tiempo. El porcentaje de inhibición de la actividad de colagenasa se calculó como 100 × [(Actividad de control - Actividad de la muestra)/Actividad de control]. Las concentraciones finales de los extractos y del galato de epigalocatequina fueron de 1 y 0,1 mg/ml, respectivamente. La IC50 se determinó a partir de un gráfico del porcentaje de inhibición de colagenasa frente a la concentración (de 15,62 a 1000 ug/ml de cada extracto).

Análisis estadístico

Todos los experimentos se realizaron por triplicado y los resultados se expresan como media ± error estándar. El coeficiente de correlación (R2) entreantioxidanteEl contenido y las actividades antioxidantes se determinaron utilizando el software SigmaPlot versión 12.2. La diferencia entre las dos medias se evaluó utilizando la prueba t de Student. Las diferencias se consideraron significativas cuando el valor de p fue inferior a 0,05.

Resultados

Rendimientos de extracción

La Tabla 1 muestra los nombres científicos, los números de cupón y las partes de las plantas de las 14 plantas tailandesas utilizadas en este estudio. Los rendimientos porcentuales de los extractos oscilaron entre 0,73 por ciento y 31,11 por ciento en peso (Tabla 1). Ardisia elliptica Thunb. tuvo el mayor rendimiento en los extractos de éter de petróleo (19,89 por ciento) y etanol (31,11 por ciento), mientras que Garcinia mangostanaL. tuvo el mayor porcentaje de rendimiento de la extracción con diclorometano (11,07 por ciento).

Contenido fenólico de 14 plantas tailandesas

Por tanto, el contenido de fenoles totales en las plantas se determinó por el método de Folin-Ciocalteu. Los extractos tenían un amplio rango en el número de fenoles como se muestra en la Tabla 2, y los valores variaron 33- veces entre los extractos. Ardisiaelliptica Thunb. tuvo el contenido de fenoles más alto en los tres tipos de extractos, mientras que el contenido de fenoles más bajo estuvo presente en Stemona curtissi Hook. F. extracto de éter de petróleo.

Contenido de flavonoides de 14 plantas tailandesas

Similar a fenoles, totalflavonoideel contenido varió sustancialmente entre las especies de plantas, variando de 2.04 ± 0.16 a 31.38 ± 0.81 mg QE por g de materia seca (Cuadro 2). En general, la extracción con diclorometano produjo la mayorflavonoidenivel comparado con los otros solventes. De todos los extractos, la mayor cantidad de flavonoides se encontró en el extracto etanólico de hojas de Senna alata (L.) Roxb (31,38 ± 0,81 mg QE por materia seca). Por otro lado, Ardisia elliptica Thunb. (23.14 ± 1.10 mg QE por g de materia seca). tenía el contenido más rico en flavonoides en la fracción de diclorometano. Además, Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. tuvo el mayor contenido de flavonoides entre los extractos de éter de petróleo (27,48 ± 2,59 mg QE por g de materia seca). El nivel más bajo detectable de flavonoides estaba en el extracto de etanol de Daturametel L. Por el contrario,flavonoidesno se encontraron en los extractos de éter de petróleo y diclorometano de Stemona curtisii Hook.f., y extractos de éter de petróleo de Streblus asper Lour. y Phyllanthus acidus (L.) Skeels. El contenido total de flavonoides no se correlacionó con el contenido total de fenoles (R2=0.0284, Fig. 1a).

Actividad de eliminación de radicales DPPH en diferentes extractos de 14 plantas tailandesas

La actividad de eliminación de radicales libres usando DPPH como indicador es unantioxidanteensayo [12]. Como se muestra en la Tabla 3, las actividades de eliminación de los extractos variaron mucho, desde 7,11 ± 0,59 por ciento hasta 96,17 ± 0,05 por ciento. El extracto de etanol de Ardisia elliptica Thunb tuvo la mayor actividad depuradora con un 96 por ciento. Además, el siguiente más fuerteantioxidante activities (>90 por ciento) se observaron en fracciones de etanol de Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus(L.) Skeels. y Garcinia mangostana Linn. En términos de los otros solventes, Ardisia elliptica Thunb también tuvo la actividad depuradora más rica entre las fracciones de éter de petróleo, y Garcinia mangostana L. tuvo la actividad antioxidante más alta en las fracciones de diclorometano. La capacidad de eliminación más baja se detectó en Croton sublyratus Kurz en la fracción de éter de petróleo. No se detectó actividad secuestrante en 7 extractos de éter de petróleo y 2 extractos de diclorometano.

Actividad de eliminación de radicales ABTS en diferentes extractos de 14 plantas tailandesas

antioxidanteLa actividad de las fases acuosa y lipídica en las plantas también ha sido evaluada mediante un ensayo de decoloración usando ABTS [13]. Una vez más, el ácido ascórbico sirvió como estándarantioxidante. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90 por ciento, y se detectó actividad eliminadora en todos los extractos de diclorometano y extractos de éter de petróleo de Annona squamosa L. e Ipomoea pes-caprae(L.) R.br. que no fue detectado por el ensayo DPPH.

Inhibición de la actividad tirosinasa por extractos de plantas.

La capacidad de los compuestos de las plantas tailandesas para inhibir el hongotirosinasala actividad se evaluó utilizando un ensayo in vitro con L-DOPA como sustrato. El ácido kójico sirvió como un inhibidor conocido y causó una inhibición máxima enzimática de 93,38 ± 1,63 por ciento. Como se muestra en la Tabla 5, solo los extractos de etanol inhibieron significativamente la actividad de tirosinasa, con Ardisia elliptica Thunb. los preparados son la excepción. Las fracciones de éter de petróleo y diclorometano de Ardisia elliptica Thunb. inhibió la actividad de la tirosinasa en aproximadamente un 20 por ciento. La fracción de etanol de Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (valor IC 50 de 271,50 ug/ml) fue el inhibidor de tirosinasa más potente, seguido por los extractos de etanol de Ardisia elliptica Thunb. y Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Otras fracciones de etanol redujeron significativamente la actividad enzimática en más del 20 por ciento (Tabla 5), ​​mientras que los extractos restantes no tenían actividad inhibidora detectable (datos no mostrados).

Inhibición de la actividad de colagenasa por 14 plantas

Se analizó la actividad anticolagenasa de los extractos usando colagenasa de Clostridium histolyticum y N-[3-(2-furil)acriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) como sustrato. El galato de epigalatocatequina es un conocido inhibidor de colagenasa y disminuyó la actividad enzimática en un 90,51 ± 2,79 por ciento. Como se muestra en la Tabla 5, sólo 4 extractos de etanol contenían actividad inhibidora de colagenasa detectable. De los que causan inhibición, Ardisia elliptica Thunb. (valor IC 50 de 157,78 ug/ml) exhibió el nivel más alto de inhibición de la colagenasa, seguida por Annona squamosa L. (valor IC 50 de 426,67 ug/ml), Senna alata (L.) Roxb. y Croton sublyratus Kurz en el rango ordenar. Otros extractos de plantas no inhibieron significativamente la actividad de la colagenasa bajo las condiciones de reacción utilizadas en este estudio (datos no mostrados).

Discusión

La radiación solar es un factor ambiental significativo en el daño de la piel y puede inducir cáncer de piel [14]. La radiación UV provoca una respuesta proinflamatoria, degradación de la matriz extracelular yantioxidanteagotamiento [15, 16]. Los rayos UV provocan la formación de especies reactivas de oxígeno (ROS) que inducen hiperpigmentación y expresión de colagenasa [17, 18]. Nuestro estudio investigó 14 plantas tailandesas extraídas con tres solventes diferentes por su potencial como ingredientes antiarrugas y blanqueadores de la piel. En este estudio, utilizamos éter de petróleo, diclorometano y etanol para la extracción de plantas utilizando el aparato Soxhlet. Ardisia elliptica Thunb. tuvo el rendimiento más alto en los extractos de éter de petróleo y etanol, mientras que Garcinia mangostana L. tuvo el rendimiento porcentual más alto de la extracción con diclorometano. Estos disolventes son una serie de disolventes orgánicos con polaridades crecientes. La variación entre los rendimientos porcentuales dependió de la especie de planta y probablemente reflejó diferencias en la composición química de las plantas.

Los fenólicos son el grupo más grande de fitoquímicos que se encuentran en las plantas y tienen diversas actividades biológicas en los animales, incluidos los humanos [19]. El contenido de fenoles totales en las plantas se determinó por el método de Folin Ciocalteu. En general, la fracción de etanol tuvo el contenido fenólico más rico, seguida por el diclorometano, mientras que el éter de petróleo con baja polaridad tuvo el contenido fenólico más bajo en comparación con los otros solventes. En este estudio, Ardisia elliptica Thunb. tuvo el contenido fenólico más alto en los tres tipos de extractos. En estudios previos, los extractos de hojas de diclorometano de Ardisia elliptica Thunb. tienen un contenido fenólico de 101 ± 1,3 mg GAE por gramo de material vegetal seco, que es más que el contenido en un extracto de ramitas [20]. Además, un extracto de metanol de la fruta madura de Ardisia contenía 5,64 ± 0,37 g de GAE por 100 g de extracto [21]. Por lo tanto, hojas y frutos de Ardisia ellipticaThunb. tienen un alto contenido fenólico que se puede extraer fácilmente con metanol, diclorometano y etanol.

Flavonoidesson pigmentos en flores, hojas, frutos y semillas. Estos compuestos son metabolitos secundarios de las plantas y están ampliamente distribuidos entre las especies de plantas [22]. A continuación, se evaluó el contenido de flavonoides en las plantas tailandesas mediante el ensayo colorimétrico de cloruro de aluminio. Nuestros resultados mostraron que la mayor cantidad de flavonoides se encontró en el extracto etanólico de Senna alata (L.) Roxbleaves. En un estudio anterior, se encontró un alto contenido de flavonoides en agua (4,25 mg QE por 100 g) y fracciones de metanol (3,97 mg QE por 100 g) de Senna alata (L.) Roxb.[23]. Por lo tanto, las preparaciones de Senna alata (L.) Roxb tienen un alto contenido de flavonoides cuando se extraen con solventes de alta polaridad que incluyen etanol, metanol y agua. Ardisiaelliptica Thunb. tenía el contenido de flavonoides más rico en la fracción de diclorometano. El fruto de esta planta también tiene un alto contenido de flavonoides de 36,91 ± 2,37 mg QE por g de extracto [24]. Por lo tanto, el fruto y las hojas de Ardisia elliptica Thunb. son ricos en flavonoides. El contenido total de flavonoides no se correlacionó con el contenido fenólico total. Sin embargo,flavonoidestienen muchas actividades biológicas como protección UVB [25], antiinflamatoria [26], anti-hepatotoxicidad [27] y anticancerígena [28].

Actividad de eliminación de radicales libres usando DPPH y ABTSassay. En el ensayo DPPH, DPPH recibe un átomo de hidrógeno de unantioxidante[29]. Descubrimos que el extracto de etanol de Ardisiaelliptica Thunb tenía la actividad de eliminación más alta. Otros investigadores también han informado fracciones de diclorometano de Ardisia elliptica Thunb. Las hojas y los tallos tienen altos niveles deantioxidanteactividad según lo determinado por el ensayo DPPH y, por lo tanto, esta planta es muy interesante para investigar más a fondo como un tratamiento a base de hierbas [20]. Los extractos de la fracción de etanol con alta polaridad mostraron claramente mejorantioxidanteactividad que las fracciones con polaridades más bajas que contienen diclorometano y éter de petróleo. Los extractos de etanol contenían los niveles más altos de actividad eliminadora de radicales libres en comparación con los otros extractos, y todos los extractos de etanol eran activos. En el ensayo ABTS, ABTS se convierte en su radical catión mediante la adición de persulfato de potasio. En presencia de un antioxidante, el catión ABTS reactivo (o ABTS• plus) se convierte en su forma natural incolora [9]. De acuerdo con el ensayo DPPH, los extractos de etanol contenían los niveles más altos de actividad eliminadora en comparación con los otros extractos. Nuevamente, las actividades de eliminación más altas en extractos de etanol, diclorometano y éter de petróleo fueron de las mismas plantas, como se muestra en el ensayo DPPH. Los resultados de los ensayos DPPH y ABTS estaban altamente correlacionados como se esperaba (Fig. 1f).

Sin embargo, el totalflavonoideel contenido de los extractos de plantas no se correlacionó con la actividad eliminadora de radicales libres detectada por el ensayo DPPH (Fig. 1c) o por el ensayo ABTS (Fig. 1e). Nuestros hallazgos de ninguna relación significativa entreflavonoideel contenido y la actividad eliminadora usando el ensayo ABTS son consistentes con los resultados de otros investigadores [30]. Por el contrario, el contenido fenólico total de la preparación de la planta se correlacionó positivamente con la actividad depuradora medida por ambos ensayos (Fig. 1b y d), de acuerdo con un estudio previo [31]. Notablemente, la actividad depuradora dependía del contenido fenólico total y de los solventes con polaridades altas, como el etanol y el diclorometano. Estos resultados sugieren que el contenido fenólico es el componente principal conantioxidanteactividad en las 14 plantas tailandesas.

La melanina, el pigmento principal del color de la piel y el cabello, es sintetizada por los melanocitos dentro de los melanosomas. La sobreproducción y acumulación de melanina en la piel puede provocar trastornos topigmentarios y problemas estéticos. La hiperpigmentación se produce en las zonas de la piel expuestas al sol [32]. En la melanogénesis,tirosinasaes la enzima clave en el paso limitante de la velocidad en el que la L-tirosina se hidroxila a L-DOPA, que luego se oxida a DOPAquinona. Después de eso, se convierte en DOPAcromo que es un sustrato para la síntesis de melanina [3]. Regulación a la baja detirosinasaSe ha propuesto que la actividad es responsable de la disminución de la producción de melanina. El desarrollo de nuevos compuestos fitoquímicos blanqueadores a partir de productos naturales se ha convertido recientemente en una tendencia creciente. Nuestro hallazgo mostró que la fracción de etanol de Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz fue el inhibidor de tirosinasa más potente, seguido por los extractos de etanol de Ardisia elliptica Thunb. y Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Obviamente, 7 plantas de 14 plantas tuvieron un alto contenido fenólico, especialmente Ardisiaelliptica Thunb. y Annona squamosa L. Además, Senna alata (L.) Roxb. tenía el más ricoflavonoidecontenido que puede inhibir la actividad de la tirosinasa. Los compuestos activos de las plantas como arbutina, aloesina, ácido gentísico, flavonoides, hesperidina, regaliz, niacinamida, derivados de levadura y polifenoles pueden inhibir la melanogénesis sin citotoxicidad para los melanocitos [6].

La colagenasa es una peptidasa de zinc transmembrana que corta el enlace X-Gly del colágeno. El colágeno es una proteína estructural abundante y un componente de la matriz extracelular [33]. La disminución de las fibras de colágeno y elastina aumenta con la edad y el daño causado por la radiación UV que induce la piel arrugada [34]. Se ha propuesto la inhibición de la colagenasa para prevenir el envejecimiento de la piel. De los que causan inhibición en nuestro estudio, Ardisiaelliptica Thunb. exhibió el nivel más alto de inhibición de la colagenasa, seguida por Annona squamosa L., Senna alata(L.) Roxb. y Croton sublyratus Kurz en orden de clasificación. En un estudio anterior, el extracto de vaina de cacao tenía ácido fenólico yflavonoidesque inhibió la actividad de elastasa y colagenasa [35]. En particular, tres extractos de etanol (Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. y Senna alata (L.) Roxb. inhibieron ambostirosinasay colagenasa. Estas plantas también tenían altos niveles de fenólicos y flavonoides, yantioxidanteactividad. Curiosamente, estos extractos tienen posibles usos como ingredientes para productos cosméticos.

Conclusión

Nuestros resultados demuestran que los extractos de 14 plantas tailandesas tenían diversos grados de contenido fenólico total yflavonoidecontenido, así como actividades de eliminación de radicales libres, dependiendo de los solventes de extracción. Hubo una alta correlación entre el contenido fenólico total y la actividad de eliminación de radicales libres evaluada por los ensayos DPPH y ABTS. La fracción de etanol de Ardisia ellipticaThunb. tuvo el contenido fenólico más alto, seguido por Annona squamosa L. Ambas plantas inhibieron significativamente las actividades de tirosinasa y colagenasa, mientras que Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz mostró la inhibición de tirosinasa más alta. Además, Senna alata (L.) Roxb. fue el más rico en contenido de flavonoides, y también exhibiótirosinasay el comportamiento inhibitorio de la colagenasa. La fracción de etanol de tres plantas, a saber, Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb y Senna alata (L.) Roxb., tienen el potencial de ser ingredientes en productos cosméticos para combatir las arrugas y blanquear la piel. Son necesarios más estudios para investigar los componentes activos y la seguridad de estos extractos.

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