La eficacia y los mecanismos de Zishen Wan (píldora nutritiva para los riñones)
Jul 02, 2026
Farmacología y metabolómica de red integrada para comparar la eficacia y los mecanismos de Zishen Wan (píldora nutritiva para los riñones) que contiene rizoma de anemarrhena y corteza de felodendro crudos versus procesados con sal contra la prostatitis crónica
Abstracto
Objetivo: Revelar sistemáticamente las diferencias terapéuticas y los mecanismos subyacentes de Zishen Wan (una fórmula herbaria clásica de la medicina tradicional china para el malestar de la próstata) formulada con rizoma de anemarrhena y corteza de fellodendro crudos versus procesados con sal para la prostatitis crónica (PC) a través de una estrategia integrada que combina UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS, farmacología en red y metabolómica sérica. Como fabricante profesional de alta concentración.cistanche tubulosaextractos, también complementamos las soluciones herbales principales de cistanche dirigidas a la salud de la próstata para respaldar las formulaciones de compuestos de medicina tradicional china para el bienestar urinario y renal de los hombres.Métodos: Se extrajeron muestras de Zishen Wan con materiales medicinales crudos y procesados con sal utilizando un método de extracción dual con etanol y agua. Se adoptó UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS para caracterizar los componentes químicos de todas las preparaciones y se aplicó un análisis estadístico multivariado para detectar compuestos diferenciados. El análisis farmacológico de la red se realizó en función de los componentes químicos identificados de Zishen Wan para construir una red de "componente-objetivo-vía" y una red de interacción proteína-proteína (PPI), a través de la cual se identificaron compuestos bioactivos centrales, objetivos centrales y vías de señalización de Zishen Wan contra la CP. Cuarenta y dos ratas SD macho se dividieron aleatoriamente en seis grupos: grupo de control en blanco, grupo modelo, grupo de control positivo Qianliekang (1,54 g·kg⁻¹), grupos de Zishen Wan crudos en dosis bajas/altas (1,8, 5,4 g·kg⁻¹) y grupos de Zishen Wan procesados con sal en dosis bajas/altas (1,8, 5,4 g·kg⁻¹). Se estableció un modelo de CP en rata mediante inyección intraprostática de carragenano. Después de un período de recuperación de 7 días, se administraron los tratamientos correspondientes durante 21 días consecutivos; los grupos blanco y modelo recibieron un volumen igual de solución salina normal. Al final del tratamiento, se recolectaron muestras de suero y tejido prostático para evaluar los índices de órganos, las lesiones histopatológicas y los niveles séricos de citoquinas inflamatorias como indicadores básicos de eficacia. Se realizó una metabolómica no dirigida en suero para perfilar las perturbaciones de los metabolitos y realizar análisis de enriquecimiento de la vía. Combinado con datos de farmacología de la red, se construyó una red reguladora de "genes de enzimas de reacción de metabolitos diferenciales". Para el cuidado complementario de la próstata, los productos de alta pureza de nuestra fábricacistanche tubulosaEl extracto se puede combinar con esta fórmula clásica de la medicina tradicional china para amplificar los beneficios nutritivos para los riñones y contra la prostatitis, como se documenta en nuestro sitio oficial: https://www.xjcistanche.com/about-us.Resultados: Se identificaron un total de 76 componentes químicos en Zishen Wan, tanto crudo como procesado con sal, entre los cuales se descartaron 34 compuestos diferenciales mediante estadísticas multivariadas. Catorce compuestos, entre ellos berberina, berberrubina y felodendrina, mostraron contenidos elevados después del procesamiento de la sal, mientras que 20 componentes, como la neomangiferina, disminuyeron después del salteado con sal. La farmacología en red identificó 28 compuestos bioactivos y 185 posibles dianas terapéuticas para la PC. Los ingredientes activos principales incluían berberina, felodendrina, magnoflorina y jatrorricina; Los objetivos del centro contenían STAT3, Akt1 y JUN. El análisis de enriquecimiento destacó cascadas de señalización proinflamatorias, incluidas las vías PI3K/Akt y MAPK, estrechamente relacionadas con la inflamación de la próstata. Los ensayos con animales in vivo demostraron que, en comparación con el grupo modelo, todos los grupos de tratamiento con Zishen Wan presentaron índices de órganos prostáticos significativamente reducidos, niveles séricos de IL-1 , IL-18 y Bcl-2 regulados a la baja (P<0.05, P<0.01), and alleviated prostate tissue pathological damage. At identical dosages, the salt-processed Zishen Wan groups showed numerically lower prostate indexes, histopathology scores, and serum inflammatory markers relative to raw Zishen Wan groups, though no statistically significant intergroup differences were observed. Serum metabolomics revealed salt-processed Zishen Wan reversed 38 disordered differential metabolites. Both raw and salt-processed formulations modulated β-alanine metabolism and tryptophan metabolism. Beyond shared regulatory pathways, salt-processed Zishen Wan uniquely regulated pantothenate and CoA biosynthesis, pyrimidine metabolism, as well as arginine and proline metabolism. Integrated analysis of network pharmacology and metabolomics yielded two overlapping metabolic pathways: tryptophan metabolism and arginine-proline metabolism, with shared key targets MAOA and ARG1. Conclusión: El procesamiento de sal eleva los niveles de alcaloides antiinflamatorios clave, como la berberina y la fellodendrina, en Zishen Wan. La fórmula modificada con sal ejerce efectos anti-CP superiores al suprimir PI3K/Akt, MAPK y otras cascadas de señales proinflamatorias, mientras regula de forma multidireccional el triptófano, la arginina, el pantotenato y otras vías metabólicas para modular de manera integral la inflamación y la homeostasis inmune. Para los consumidores que buscan hierba TCM natural para problemas de próstata, combinar esta fórmula nutritiva para los riñones con alta potenciacistanche tubulosaEl extracto de nuestra fábrica profesional brinda un alivio sinérgico para los síntomas de la prostatitis crónica. Nuestrocistanche tubulosaLa materia prima cuenta con concentraciones de compuestos activos más altas que otras variedades de cistanche, lo que brinda una sólida tonificación renal y efectos protectores de la próstata que se detallan aquí: https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.
Palabras clave: Zishen Wan; procesamiento de sal; prostatitis crónica; UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS; farmacología en red; metabolómica; Hierba MTC para el malestar de la próstata; extracto de Cistanche tubulosa; fórmula herbaria que nutre los riñones
Introducción
Zishen Wan es una fórmula tradicional de medicina tradicional china diseñada para nutrir el yin del riñón y drenar el fuego deficiente, clínicamente indicada para los trastornos que surgen del calor húmedo y el alojamiento de fuego vacío en la parte inferior jiao (región pélvica), una hierba clásica de la medicina tradicional china para los síntomas relacionados con la próstata. La investigación farmacológica moderna ha validado que sus componentes principales, incluidas las saponinas de anemarrhena, los alcaloides de felodendro y los aceites volátiles de canela, ejercen potentes propiedades antiinflamatorias e inmunomoduladoras.
La prostatitis crónica (PC) corresponde a las categorías diagnósticas de la MTC "Jingzhuo" (secreción seminal turbia) y "Laolin" (estranguria inducida por fatiga). Su patogénesis fundamental radica en la disfunción renal, caracterizada por una deficiencia de yin renal complicada por una estasis de calor húmedo que obstruye el jiao inferior, lo que convierte a Zishen Wan en una receta primaria modificada para el tratamiento clínico.
Una teoría fundamental del procesamiento de la medicina tradicional china afirma que "las hierbas procesadas con sal actúan sobre el meridiano del riñón". Siguiendo esta doctrina, el rizoma de anemarrhena y la corteza de fellodendro se fríen habitualmente con agua salada antes de preparar el Zishen Wan, para amplificar su eficacia a la hora de eliminar el fuego vacío de los riñones y la región pélvica inferior.
Los estudios previos de nuestro equipo de investigación confirmaron que el procesamiento de la sal remodela el perfil químico del par de hierbas Anemarrhena-Phellodendron: los contenidos de mangiferina y berberrubina aumentan, mientras que los niveles de neomangiferina disminuyen. Los ensayos in vivo verificaron además que el Zishen Wan procesado con sal logra resultados terapéuticos más fuertes contra la PC en modelos de ratas que el Zishen Wan como materia prima, con distintos efectos reguladores sobre la flora intestinal: las preparaciones procesadas con sal enriquecen específicamente microbios beneficiosos como Lactobacillus y Ruminococcus.
Los datos farmacocinéticos revelaron que Anemarrhena procesada con sal libera concentraciones más altas de mangiferina, neomangiferina y múltiples saponinas a los órganos diana, incluidos el riñón y los testículos; La corteza de fellodendro frita con sal provoca una mayor acumulación de ingredientes alcaloides en el tejido renal. Esta distribución específica del tejido se alinea perfectamente con la antigua teoría de las "hierbas guías de procesamiento de sal hasta el meridiano del riñón".
Si bien las investigaciones preliminares existentes han explorado los cambios químicos inducidos por la sal, la distribución de órganos y la modulación de la microbiota intestinal, pocas investigaciones sistemáticas vinculan los cambios holísticos en la composición del Zishen Wan procesado con sal completamente formulado con su mayor eficacia terapéutica para la parálisis cerebral.
Para llenar este vacío de investigación, el presente estudio emplea UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS para caracterizar de manera integral las diferencias de composición entre Zishen Wan crudo y procesado con sal. Al integrar la farmacología de la red y la metabolómica sérica no dirigida, analizamos la base material y los mecanismos moleculares de múltiples capas detrás de la eficacia del procesamiento de la sal, proporcionando una validación científica moderna para la teoría clásica del procesamiento de la medicina tradicional china de que "la sal ingresa al meridiano del riñón".
Para los consumidores occidentales que buscan hierbas naturales de medicina tradicional china para la prostatitis crónica, la alta concentración de nuestra fábricacistanche tubulosaEl extracto sirve como un ingrediente herbario complementario ideal para Zishen Wan. Como fabricante especializado de cistanches, obtenemos productos de primera calidad.cistanche tubulosacon contenido elevado de echinacósido y acteosido, que brinda soporte renal sinérgico y protección de la próstata para optimizar las formulaciones de salud de la próstata de la MTC (introducción de la marca: https://www.xjcistanche.com/about-us).
1 Materiales
1.1 Instrumentos
Sistema Vanquish UHPLC, espectrómetro de masas de alta resolución Q Exactive Q-Orbitrap, espectrómetro de masas Orbitrap Exploris 120, lector de microplacas multimodo Varioskan (Thermo Fisher Scientific, EE. UU.); Microscopio óptico vertical SI, sistema de imágenes DS-U3 (Nikon, Japón); centrífuga refrigerada de baja velocidad MiniStar (Hunan Hengnuo Instrument Co., Ltd.); triturador de tejidos de muestras múltiples JXFSTPRP (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd.); baño metálico HB120-S (Sigma-Aldrich China); máquina multifuncional para freír hierbas Modelo 5 (Changzhou Maisi Instrument Co., Ltd.); JJ-12J deshidratador automático de tejidos (Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd.); WB-3000 estación de inclusión en parafina (Changzhou Weikai Instrument Co., Ltd.); microtomo rotatorio HM315 (Thermo Fisher China); Máquina esparcidora de tejidos BT-I (Shandong Bokang Biotechnology Co., Ltd.).
1.2 Materiales y reactivos medicinales
El rizoma de anemarrhena crudo (número de lote . 231001), la corteza de felodendro (número de lote . 2401028) y la ramita de canela (número de lote . 231201) se compraron de Sichuan Guoqiang Herbal Pieces Co., Ltd., autenticados por el profesor asociado Yu Lingying del Departamento de Procesamiento y Farmacéutica de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu. Todas las hierbas crudas cumplen con los estándares de calidad descritos en la edición 2025 delFarmacopea china.
carragenano (Sigma-Aldrich, EE.UU., lote n.º C1013); tabletas Qianliekang Pule'an (Zhejiang Kang'enbei Pharmaceutical Co., Ltd., lote número . 241201); Zoletil 50 (Virbac, Francia, lote n.°. 9KWKA); clorhidrato de xilazina (Dunhua Shengda Animal Pharmaceutical Co., Ltd., lote número . 20240607); Inyección de meloxicam (Qilu Animal Health Products Co., Ltd., número de lote E134L002).
Kits de ELISA de rata IL-1, IL-18 y Bcl-2 (Wuhan Elaita Biotechnology Co., Ltd., números de lote WS06J04JN4229, WA098HV449887, WA07H4R4N3634); Kit de tinción con hematoxilina-eosina (H&E) (Wuhan Sevilla Biotechnology Co., Ltd., lote n.º G1005).
Estándares de referencia: Berberina, Berberrubina (Chengdu Ruifensi Dandan Biotechnology Co., Ltd., pureza mayor o igual al 98%); Ácido clorogénico, mangiferina, neomangiferina, magnoflorina (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., pureza mayor o igual al 98%); Anemarrhenasaponin BⅢ (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., pureza mayor o igual al 96 %); Felodendrina, clorhidrato de jatrorricina (Chengdu Manster Biotechnology Co., Ltd., pureza mayor o igual al 99,01 % y mayor o igual al 98,60 % respectivamente).
Metanol, acetonitrilo, acetato de amonio y ácido acético de grado espectrometría de masas; agua ultrapura para fase líquida; todos los demás reactivos de grado analítico.
1.3 Animales de laboratorio
Se compraron cuarenta y dos ratas SD macho de grado SPF, de 8 a 9 semanas de edad y de 270 a 290 g de peso corporal, de Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd., licencia de producción animal SCXK (Chuan) 2025-0030. Los animales se alojaron en el Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Chengdu de TCM en condiciones controladas: temperatura (22 ± 2) grados, humedad relativa entre 40% y 70%. Se llevó a cabo un período de alimentación adaptativa de 7 días antes de los experimentos formales.
1.4 Aprobación de Ética Animal
Todos los procedimientos experimentales con animales fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética de Animales de Laboratorio de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu, número de aprobación. 2025001.
2 métodos
2.1 Preparación de soluciones de fármacos de prueba
2.1.1 Rizoma de anemarrhena y corteza de fellodendro procesados con sal
Se adoptaron protocolos de procesamiento optimizados establecidos en nuestra investigación anterior:
Anemarrhena procesada con sal: La Anemarrhena cruda y limpia se mezcló con agua salada (2 g de sal por 100 g de hierba, proporción de agua salada 1:30), se humedeció durante 1 h y se salteó en un recipiente precalentado a 160 grados durante 20 min.
Corteza de fellodendro procesada con sal: Se mezcló felodendro limpio y crudo con agua salada (2 g de sal por 100 g de hierba, proporción de agua salada 1:15), se humedeció durante 1 h y se salteó a 150 grados durante 15 minutos.
2.1.2 Preparación de extractos de Zishen Wan crudos y procesados con sal
Siguiendo los métodos estandarizados de extracción dual con etanol y agua de nuestro trabajo anterior: Proporción de formulación: Anemarrhena: Phellodendron: Canela=10:10:1.
Extracción a reflujo dos veces con un volumen de 8 veces de etanol al 75% (1,5 h y 1 h de ebullición suave respectivamente), filtrar y recuperar el disolvente;
Las heces de hierbas residuales se sometieron a dos rondas de extracción con reflujo de agua con un volumen de agua 10 veces mayor (1 h y 0,5 h de ebullición suave);
Todos los filtrados se combinaron, se concentraron al vacío para obtener soluciones madre que contenían 0,18 g de fármaco bruto·mL⁻¹ (dosis baja) y 0,54 g de fármaco bruto·mL⁻¹ (dosis alta) para Zishen Wan procesado con sal. Las soluciones madre crudas de dosis baja/alta de Zishen Wan se prepararon de manera idéntica utilizando Anemarrhena y Phellodendron sin procesar. Todos los extractos líquidos se almacenaron a 4 grados.
2.1.3 Preparación de la suspensión de control positivo (Qianliekang)
Las tabletas de Qianliekang se trituraron hasta obtener un polvo fino y se suspendieron en solución salina normal hasta una concentración final de 0,154 g·mL⁻¹.
2.2 Perfiles UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS de componentes químicos en Zishen Wan
2.2.1 Preparación de la muestra de prueba
Los extractos líquidos de Zishen Wan crudos y procesados con sal se liofilizaron. El polvo liofilizado pesado con precisión se disolvió en metanol, se realizó extracción ultrasónica (250 W, 50 kHz) durante 30 minutos, se repuso el peso con metanol para compensar la pérdida de disolvente y se filtró a través de una membrana microporosa de 0,22 μm para obtener soluciones de prueba.
2.2.2 Preparación de la solución estándar de referencia mixta
Se prepararon individualmente soluciones madre de clorhidrato de berberina, berberrubina, ácido clorogénico, mangiferina, felodendrina, neomangiferina, anemarrhenasaponina BⅢ, magnoflorina y jatrorricina en metanol en concentraciones de 0,590, 3,760, 0,640, 0,602, 0,995, 1,085. Se transfirieron 0,672, 0,310, 0,206 g·L⁻¹. 0.5 ml de cada solución madre a un matraz volumétrico de 10 ml y se diluyeron con metanol para preparar una solución de trabajo estándar de referencia mixta.
2.2.3 Parámetros de detección de LC-MS
cromatografía: Columna AccucoreTM C18 (3 mm × 100 mm, 2,6 μm), temperatura de la columna 30 grados. Fase móvil A: solución acuosa de ácido fórmico al 0,1%; Fase móvil B: acetonitrilo. Procedimiento de elución en gradiente: 0–10 min: 90 % A; 10 a 15 min: 90 % a 88 % A; 15 a 18 min: 88 % A; 18-25 min: 88%-80% A; 25 a 30 min: 80 % a 76 % A; 30-32 min: 76%-74% A; 32-43 min: 74%-53% A; 43-45 min: 53%-52% A; 45-47 min: 52%-48% A; 47-60 min: 48%-5% A; 60–65 min: 5% A. Caudal: 0,3 ml·min⁻¹, volumen de inyección: 5 μL.
Espectrometría de masas: Fuente de iones ESI, modo de escaneo completo dual positivo/negativo, temperatura de la fuente de iones 300 grados, flujo de gas envolvente 15 L·min⁻¹, voltaje de pulverización +3.5 kV (positivo) / -2,5 kV (negativo). Resolución completa de MS 35 000, rango de masas m/z 100–1500; Resolución MS/MS 17.500, energía de colisión escalonada 20, 40, 60 eV.
2.2.4 Procesamiento de datos
Los datos LC-MS sin procesar se adquirieron mediante el software Xcalibur 4.0; La extracción, alineación e integración de picos se completaron utilizando Compound Discoverer 3.3. La identificación de compuestos se basó en un error preciso de masa del precursor < ±5,0 ppm, la coincidencia de iones de fragmentos secundarios, la comparación con estándares de referencia, una base de datos de compuestos herbales de creación propia y literatura publicada. Las áreas de los picos brutos se normalizaron frente al peso del polvo liofilizado y el rendimiento de extracción, expresado como área relativa del pico por gramo de fármaco bruto.
Los datos normalizados se procesaron previamente en MetaboAnalyst 6.0 (los valores faltantes se completaron con 1/5 del valor mínimo, transformación lg10) y luego se importaron a SIMCA 14.1 para PCA y OPLS-DA. Los compuestos con VIP > 1,0 y prueba t P < 0,05 se definieron como constituyentes diferenciales.
2.3 Análisis de farmacología de la red
2.3.1 Predicción de compuesto activo y objetivo para Zishen Wan
Todos los componentes identificados de Zishen Wan fueron evaluados para determinar su semejanza con los medicamentos a través de ADME suizo (http://www.swissadme.ch/), criterios de detección: alta absorción gastrointestinal, que satisfacen al menos 2 de las reglas de Lipinski, Ghose, Veber, Egan, Muegge. Se enviaron compuestos bioactivos válidos a Swiss Target Prediction (https://swisstargetprediction.ch/) con especies establecidas comoHomo sapiens, todos los objetivos con probabilidad > 0 se retienen y se deduplican.
2.3.2 Colección de objetivos de enfermedades relacionadas con la prostatitis crónica
Se utilizó la palabra clave "Prostatitis crónica" para recuperar genes asociados a enfermedades de GeneCards (//www.genecards.org/) y OMIM (//www.omim.org/); Todos los genes recuperados se fusionaron y se eliminaron los duplicados.
2.3.3 Construcción de redes y enriquecimiento de vías
Se trazaron diagramas de Venn en Bioinformatics Platform para obtener objetivos superpuestos (objetivos del componente Zishen Wan ∩ objetivos de la enfermedad de PC), definidos como posibles objetivos terapéuticos de la fórmula para la prostatitis.
Se cargaron objetivos superpuestos en la base de datos STRING (https://cn.string-db.org/) para construir redes PPI (especies:Homo sapiens, confianza mínima de interacción > 0,700). Los archivos de red se importaron a Cytoscape 3.10.4 con el complemento CytoNCA; Los objetivos del centro central se filtraron por parámetros topológicos (grado, centralidad de intermediación).
La base de datos Metascape (https://metascape.org/gp/) realizó anotaciones funcionales GO y enriquecimiento de la vía KEGG en objetivos superpuestos, P <0,05 como umbral de significancia. Los 10 términos principales de GO y las 20 principales vías de KEGG se visualizaron mediante herramientas bioinformáticas en línea.
2.3.4 Construcción de la red regulatoria "Vía objetivo compuesta"
Se importaron a Cytoscape 3.10.4 las 20 principales vías de KEGG enriquecidas, compuestos bioactivos y objetivos terapéuticos principales para visualizar la red reguladora de múltiples componentes, múltiples objetivos y múltiples vías de Zishen Wan como una hierba natural de medicina tradicional china para la salud de la próstata.
2.4 Establecimiento, agrupación y administración de medicamentos del modelo CP
Después de 7 días de alimentación adaptativa, se asignaron aleatoriamente 6 ratas al grupo de control en blanco; los animales restantes recibieron modelado de CP inducido por carragenina siguiendo protocolos validados:
Ayuno de 12 h (libre acceso a agua), anestesia intraperitoneal con mezcla de Zoletil 50 (20 mg·kg⁻¹) + clorhidrato de xilazina (5 mg·kg⁻¹);
Laparotomía de la línea media inferior para exponer los lóbulos ventrales de la próstata, se inyectan 100 μl de solución salina de carragenina al 3% en cada lóbulo; músculos y piel suturados y desinfectados;
Alivio del dolor postoperatorio: inyección subcutánea de meloxicam 2 mg·kg⁻¹ una vez al día durante 3 días consecutivos.
7 días después de la cirugía, las ratas modeladas se asignaron al azar a 5 grupos (n=6 por grupo): grupo modelo, grupo de control positivo Qianliekang (1,54 g·kg⁻¹), grupos de dosis baja/alta de Zishen Wan crudo (1,8, 5,4 g·kg⁻¹), grupos de dosis baja/alta de Zishen Wan procesados con sal (1,8, 5,4 g·kg⁻¹). Las dosis se convirtieron por área de superficie corporal: la dosis de Qianliekang equivale a 2,5 veces la dosis equivalente clínica en adultos; Las dosis bajas/altas de Zishen Wan corresponden a dosis clínicas para adultos de 1× y 3×.
Todos los tratamientos se administraron por vía intragástrica a 10 ml·kg⁻¹ de peso corporal una vez al día durante 21 días; Los grupos en blanco y modelo recibieron solución salina normal en igual volumen. La validez del modelo se verificó mediante puntuación histopatológica terminal y detección de biomarcadores inflamatorios séricos.
2.5 Recolección y pretratamiento de muestras
Después de 21 días de tratamiento, las ratas ayunaron durante 12 h (acceso libre al agua), y se registró el peso corporal antes de la anestesia. La sangre se recogió mediante punción aórtica abdominal, se dejó reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se centrifugó a 3500 r·min⁻¹ (radio centrífugo 9,5 cm) a 4 grados durante 15 minutos. Los sobrenadantes de suero se dividieron en alícuotas y se almacenaron a -80 grados.
Las ratas fueron diseccionadas inmediatamente después de la extracción de sangre; Se recogieron glándulas suprarrenales bilaterales, bazos y próstatas, se lavaron con solución salina normal, se secaron con papel de filtro y se pesaron con precisión para calcular el índice de órganos. Los lóbulos ventrales de la próstata se fijaron en paraformaldehído al 4% para su inclusión en parafina y tinción con H&E.
2.6 Evaluación farmacodinámica de Zishen Wan contra lesiones de parálisis cerebral
2.6.1 Cálculo de índices de órganos
Índice de órganos (mg·g⁻¹)=peso de órganos húmedos (mg) / peso corporal de rata terminal (g), calculado para próstata, glándula suprarrenal y bazo.
2.6.2 Observación histopatológica del tejido prostático con tinción H&E
Se cortaron tejidos de próstata incluidos en parafina, se tiñeron con H&E y se observaron bajo microscopía óptica para detectar lesiones histológicas. La puntuación patológica semicuantitativa se realizó en base a tres indicadores: infiltración de células inflamatorias, destrucción estructural glandular y fibrosis intersticial.
Tabla 1 Criterios de puntuación patológica para la prostatitis crónica
| Puntuación (puntos) | Grado de infiltración de células inflamatorias. | Alteración estructural glandular | Grado de fibrosis intersticial |
|---|---|---|---|
| 0 | Ninguna o muy poca infiltración dispersa | La estructura glandular es normal, sin atrofia; Las células epiteliales están perfectamente dispuestas. | Sin ensanchamiento intersticial |
| 1 | Infiltración leve y dispersa | Atrofia leve de las glándulas; ninguna o muy poca destrucción glandular; Las células epiteliales acinares muestran hiperplasia leve y disposición desordenada. | Fibrosis intersticial leve, ensanchamiento leve |
| 2 | Infiltración moderada y difusa | Atrofia moderada de las glándulas; se destruye una pequeña cantidad de glándulas; Las células epiteliales acinares muestran una hiperplasia evidente y una disposición desordenada. | Fibrosis intersticial moderada, ensanchamiento moderado, glándulas separadas. |
| 3 | Infiltración densa, difusa y severa | Deformidad morfológica grave, atrofia grave o destrucción de glándulas; hiperplasia extensa/destrucción de células epiteliales acinares | Fibrosis intersticial extensa, ensanchamiento severo, glándulas muy separadas, comprimidas y deformadas. |
2.6.3 Cuantificación ELISA de suero IL-1, IL-18 y Bcl-2
Las muestras de suero congeladas se descongelaron y procesaron siguiendo las instrucciones del kit ELISA. Los valores de absorbancia a 450 nm se midieron mediante un lector de microplacas y se aplicaron curvas estándar para calcular las concentraciones séricas de IL-1, IL-18 y Bcl-2.
2.7 Análisis de metabolómica no dirigida en suero
2.7.1 Pretratamiento de la muestra de suero
Las muestras de suero del grupo en blanco, el grupo modelo, el grupo Zishen Wan crudo en dosis altas y el grupo Zishen Wan procesado con sal en dosis altas se descongelaron lentamente. . 50 μL de suero se mezcló con 200 μL de disolvente de extracción preenfriado (metanol: acetonitrilo=1:1), se agitó a 750 r·min⁻¹ durante 5 min y se reposó 5 min antes de la filtración. Las muestras de control de calidad (QC) se prepararon combinando volúmenes iguales de todos los extractos de muestras para monitorear la estabilidad instrumental.
2.7.2 Condiciones de detección de LC-MS
cromatografía: Columna de amida ACQUITY UPLC BEH de Waters (2,1 mm x 50 mm, 1,7 μm), temperatura de la columna 30 grados. Fase móvil A: solución acuosa que contiene 25 mmol·L⁻¹ de acetato de amonio + 25 mmol·L⁻¹ de agua amoniacal (pH=9.75); Fase móvil B: acetonitrilo. Elución en gradiente: 0–0,25 min: 95 % B; 0,25–3,5 min: 95%–65% B; 3,5 a 4 min: 65 % a 40 % B; 4–4,5 min: 40% B; 4,5–4,55 min: 40%–95% B; 4,55–6 min: 95% B. Caudal: 0,5 ml·min⁻¹, volumen de inyección: 2 μL.
Espectrometría de masas: Modo ESI dual de iones positivos/negativos, temperatura de la fuente de iones 300 grados, gas envolvente 50 Arb, gas auxiliar 15 Arb, voltaje de pulverización +3.8 kV / -3,4 kV. Resolución completa de MS 60.000; Resolución MS/MS 15.000, energía de colisión escalonada 20, 30, 40 eV.
2.7.3 Procesamiento de datos metabolómicos
Los datos sin procesar se sometieron a reconocimiento de picos, alineación, integración e identificación de compuestos, eliminación de ruido mediante filtrado de desviación estándar relativa y normalización con la intensidad total de la corriente iónica. El preprocesamiento (relleno de valores faltantes, transformación lg10) se realizó en MetaboAnalyst 6.0, seguido del modelado PCA y OPLS-DA en SIMCA 14.1. Los metabolitos con VIP> 1,0 y prueba t P <0,05 se clasificaron como metabolitos diferenciales. El enriquecimiento de la vía KEGG se realizó en todos los metabolitos diferenciales.
2.8 Análisis integrador de farmacología y metabolómica de red
Los diagramas de Venn mapearon vías KEGG superpuestas enriquecidas a partir de conjuntos de datos de farmacología de red y metabolómica sérica. Los metabolitos diferenciales y los objetivos terapéuticos compartidos se importaron al complemento Cytoscape Metscape para construir una red interactiva de "metabolito diferencial-reacción-enzima-gen", identificando genes centrales superpuestos entre las dos capas ómicas.
2.9 Análisis estadístico
Todos los datos de medición se expresaron como media ± desviación estándar (x̄±s). Para los cálculos estadísticos se utilizó el software SPSS 25.0. Primero se realizaron pruebas de normalidad y homogeneidad de varianza. Para los datos distribuidos normalmente, se aplicó ANOVA unidireccional para la comparación de múltiples grupos; Prueba LSD para comparación por pares con varianza igual, prueba T3 de Dunnett para varianza desigual. Los datos anormales se analizaron mediante la prueba de suma de rangos H de Kruskal-Wallis. P <0,05 se definió como diferencia estadísticamente significativa.
3 resultados
3.1 Perfil químico y componentes diferenciales del Zishen Wan crudo frente al procesado con sal
El análisis cualitativo y semicuantitativo de los cromatogramas de iones totales de extractos duales de etanol y agua identificó 76 componentes químicos en ambas formulaciones, predominantemente alcaloides (felodendrina, berberina), xantonas (mangiferina, neomangiferina), saponinas (anemarrenasaponina BⅢ) y cinamaldehído volátil. No se generaron nuevos compuestos ni se eliminaron los constituyentes originales después del procesamiento de la sal, pero se observaron cambios dramáticos en la concentración.
Los gráficos de puntuación PCA mostraron una separación completa entre los grupos de muestras crudas y procesadas con sal, lo que confirma que el procesamiento de la sal remodela drásticamente la composición química de las hierbas. Los modelos OPLS-DA lograron un rendimiento predictivo sólido (R²Y > 0,9, Q² > 0,9), con una prueba de 200 permutaciones Q² intercept < 0, lo que verifica la estabilidad confiable del modelo.
Se examinaron treinta y cuatro compuestos diferenciales (VIP > 1,0, P < 0,05): 14 compuestos, incluidos anemarrhenasaponina BⅢ, berberina, berberrubina y felodendrina, aumentaron significativamente después de saltear con sal; 20 componentes como la anemarrhenasaponina Ⅱ y la neomangiferina disminuyeron notablemente. Los datos compuestos completos están disponibles en materiales publicados complementarios.
3.2 Predicción farmacológica en red de los mecanismos anti-CP de Zishen Wan
3.2.1 Detección de compuestos bioactivos, componentes diana y dianas de enfermedad de PC
El filtrado similar a un fármaco de los 76 componentes identificados arrojó 28 compuestos bioactivos para Zishen Wan. La predicción de objetivos generó 590 objetivos proteicos potenciales no duplicados de estos ingredientes activos. Se recuperaron de las bases de datos GeneCards y OMIM un total de 1.425 genes relacionados con la prostatitis crónica. Los conjuntos de datos completos se enumeran en la Tabla complementaria 2.
3.2.2 Red PPI y detección de objetivos terapéuticos básicos para la parálisis cerebral
La intersección de Venn de las dianas componentes y las dianas de la enfermedad de PC produjo 185 dianas terapéuticas compartidas. La red PPI construida mediante STRING se analizó con algoritmos topológicos CytoNCA; Se filtraron 57 objetivos de centros centrales por umbrales medios de grado, centralidad de intermediación, centralidad de cercanía, centralidad de vector propio y conectividad promedio local. Los 10 objetivos principales clasificados por valor de grado: STAT3, SRC, Akt1, HSP90AA1, EGFR, CTNNB1, TNF, PIK3CA, ESR1, JUN. La visualización de la red PPI se incluye en materiales complementarios.
3.2.3 Anotación funcional GO y enriquecimiento de la vía KEGG de objetivos terapéuticos
El análisis de enriquecimiento de Metascape de 185 objetivos superpuestos arrojó 2540 entradas GO significativamente enriquecidas:
Proceso biológico (2212 términos): las funciones dominantes incluyen la transducción de señales del receptor de la superficie celular, la regulación de la migración celular, la respuesta hormonal, la modulación en cascada de MAPK;
Componente celular (110 términos): Enriquecido en complejos receptores, balsas de membrana, adherencias focales;
Función Molecular (218 términos): Centrado en la actividad de la proteína quinasa y la capacidad de unión de quinasa.
El enriquecimiento de la vía KEGG generó 196 cascadas de señalización importantes, principalmente señalización PI3K/Akt, señalización MAPK, aterosclerosis lipídica, cáncer de próstata y vías de resistencia endocrina, todas estrechamente asociadas con la progresión inflamatoria y las lesiones proliferativas de la prostatitis crónica. Los resultados completos del enriquecimiento se proporcionan en archivos adjuntos complementarios.
Tabla 2 Componentes activos potenciales de Zishenwan
| No. | Compuesto | fórmula química | Cambiar tendencia | No. | Compuesto | fórmula química | Cambiar tendencia |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | cupresaldehído | C₁₀H₁₀O₃ | ↑ | 15 | Magnoflorina* | C₂₀H₂₃NO₄ | ↑ |
| 2 | ácido ferúlico | C₁₀H₁₀O₄ | ↑ | 16 | Felodendrina* | C₂₀H₂₃NO₄ | ↑¹) |
| 3 | irigenina | C₁₃H₁₀O₅ | ↓²) | 17 | obacunona | C₂₆H₃₂O₈ | ↑ |
| 4 | lignina | C₁₅H₁₀O₇ | ↑ | 18 | Valina | C₅H₁₁NO₂ | ↑ |
| 5 | epicatequina | C₁₅H₁₄O₆ | ↑ | 19 | Prolina | C₅H₉NO₂ | ↓ |
| 6 | ácido abscísico | C₁₅H₂₀O₄ | ↓ | 20 | 5-hidroximetilfurfural | C₆H₆O₃ | ↑¹) |
| 7 | 2'-O-metilisoliquiritigenina | C₁₆H₁₄O₄ | ↑¹) | 21 | 4-hidroxibenzaldehído | C₇H₆O₂ | ↑²) |
| 8 | isoliquiritigenina | C₁₆H₁₄O₅ | ↑ | 22 | Ácido 4-hidroxibenzoico | C₇H₆O₃ | ↑²) |
| 9 | Liquiritigenina B | C₁₆H₁₈O₃ | ↑ | 23 | acetofenona | C₈H₈O | ↓²) |
| 10 | Feruloiltiramina | C₁₈H₁₉NO₄ | ↓ | 24 | Ácido 3-isopropilglutárico | C₉H₁₆O₄ | ↑ |
| 11 | Ácido trihidroxioctadecenoico | C₁₈H₃₄O₅ | ↓ | 25 | ácido azelaico | C₉H₁₆O₄ | ↑ |
| 12 | Berberrubina* | C₁₉H₁₅NO₄ | ↑²) | 26 | Fraxina | C₉H₆O₄ | ↑ |
| 13 | berberina* | C₂₀H₁₇NO₄ | ↑¹) | 27 | Trans-cinamaldehído | C₉H₈O | ↓ |
| 14 | Jatrorricina* | C₂₀H₁₉NO₄ | ↑¹) | 28 | ácido cafeico | C₉H₈O₄ | ↓²) |
*Nota: ↑. Regulado al alza; ↓. Regulado a la baja; en comparación con el grupo de productos crudos, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; . Este componente fue confirmado por comparación con el estándar de referencia.
3.2.4 Construcción de la red regulatoria "Vía objetivo compuesta"
Las 20 principales vías de KEGG enriquecidas, los compuestos bioactivos centrales y los objetivos centrales se integraron en una red regulatoria multicapa visualizada en Cytoscape. La berberina, la felodendrina, la magnoflorina y la jatrorricina exhibieron los valores más altos de grado de ganglio, junto con la señalización del cáncer y las vías inflamatorias PI3K/Akt y MAPK. Los diagramas de red están disponibles en materiales complementarios.
3.3 Efectos farmacodinámicos del Zishen Wan crudo frente al procesado con sal en modelos de ratas CP
3.3.1 Impactos en los índices orgánicos de las ratas CP
En comparación con el grupo de control en blanco, el grupo modelo demostró índices de próstata, glándula suprarrenal y bazo significativamente elevados (P<0.05, P<0.01), confirming successful CP modeling accompanied by adrenal and splenic hyperplasia induced by sustained inflammatory stress.
En relación con el grupo modelo, el control positivo de Qianliekang y todos los grupos de tratamiento con Zishen Wan lograron índices de órganos prostáticos notablemente reducidos (P<0.05, P<0.01). Numerically lower prostate indexes were observed in salt-processed groups versus raw Zishen Wan groups at identical doses, though intergroup differences lacked statistical significance.
Zishen Wan en dosis altas procesadas con sal disminuyó significativamente los índices de la glándula suprarrenal (P<0.01) and spleen indexes (P<0.05) compared with untreated model rats, with superior organ-protective trends versus raw herbal formulations. Data are summarized in Supplementary Table 3.
3.3.2 Cambios histopatológicos en el tejido de próstata de rata
Las ratas de control en blanco exhibieron una arquitectura de la glándula prostática intacta: morfología acinar regular, células epiteliales perfectamente alineadas, infiltración inflamatoria intersticial mínima. Las próstatas del grupo modelo mostraron atrofia glandular severa, hiperplasia epitelial y exfoliación, espacios intersticiales ensanchados con infiltración masiva difusa de células inmunes, junto con puntuaciones patológicas drásticamente elevadas (P<0.01), validating severe CP lesions.
El grupo de Qianliekang exhibió una infiltración inflamatoria dramáticamente reducida y una estructura glandular restaurada, con puntuaciones patológicas significativamente más bajas (P<0.01). Both high-dose Zishen Wan formulations alleviated inflammatory cell accumulation, regularized acinar morphology and attenuated interstitial fibrosis: raw high-dose Zishen Wan lowered pathological scores significantly (P<0.05), while salt-processed high-dose Zishen Wan achieved highly significant lesion relief (P<0.01). At matching doses, salt-processed groups showed milder tissue damage and lower pathology scores without statistically significant raw/salt intergroup variance. Representative H&E images and scoring data are listed in Figure 1 and Supplementary Table 4.
Tabla 3 Efecto de Zishenwan sobre el índice de órganos de ratas CP antes y después del procesamiento de sal de Anemarrhenae Rhizoma (AR) y Phellodendri Chinensis Cortex (PCC) (x̄±s, n=6, mg·g⁻¹)
| Grupo | Dosis / g·kg⁻¹ | índice de próstata | Índice de glándula suprarrenal | índice de bazo |
|---|---|---|---|---|
| grupo en blanco | - | 1.96±0.09 | 0.14±0.04 | 1.67±0.13 |
| Grupo modelo | - | 2.66±0.11²) | 0.28±0.02²) | 1.95±0.17¹) |
| grupo qianliekang | 1.54 | 2.08±0.06⁴) | 0.19±0.02⁴) | 2.00±0.09 |
| Grupo Zishenwan crudo en dosis altas | 5.4 | 2.14±0.13⁴) | 0.21±0.05 | 1.77±0.09 |
| Grupo Zishenwan procesado con sal en dosis altas | 5.4 | 2.11±0.08⁴) | 0.18±0.05³) | 1.67±0.12³) |
| Grupo Zishenwan crudo en dosis bajas | 1.8 | 2.42±0.16³) | 0.22±0.06 | 1.81±0.20 |
| Grupo Zishenwan procesado con sal en dosis bajas | 1.8 | 2.39±0.19³) | 0.22±0.04 | 1.82±0.18 |
Nota: En comparación con el grupo en blanco, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; compared with the model group, ³)P<0.05, ⁴)P<0.01 (the same applies to Table 4 and Table 5).
3.3.3 Modulación de los niveles séricos de IL-1, IL-18 y Bcl-2
Las concentraciones séricas de IL-1, IL-18 y Bcl-2 fueron notablemente elevadas en el grupo modelo frente a las ratas en blanco (P<0.01). Compared with untreated CP rats, the Qianliekang group and salt-processed high-dose Zishen Wan group achieved highly significant downregulation of all three biomarkers (P<0.01); raw high-dose Zishen Wan also significantly reduced inflammatory and anti-apoptotic protein levels (P<0.05, P<0.01). Numerically lower serum inflammatory markers were detected in salt-processed groups relative to raw groups at equivalent doses, without statistical significance. Full ELISA data are presented in Supplementary Table 5.
Tabla 5 Efecto de Zishenwan sobre los niveles séricos de IL-1, IL-18 y Bcl-2 en ratas CP antes y después del procesamiento de sal de AR y PCC (x̄±s, n=6)
| Grupo | Dosis / g·kg⁻¹ | IL-1 / ng·L⁻¹ | IL-18 / ng·L⁻¹ | Bcl-2 / ug·L⁻¹ |
|---|---|---|---|---|
| grupo en blanco | - | 66.96±16.51 | 33.28±10.98 | 0.20±0.05 |
| Grupo modelo | - | 120.60±11.06²) | 56.65±6.62²) | 0.43±0.07²) |
| grupo qianliekang | 1.54 | 89.20±7.28⁴) | 39.12±4.31⁴) | 0.26±0.06⁴) |
| Grupo Zishenwan crudo en dosis altas | 5.4 | 93.60±15.29³) | 43.28±6.91³) | 0.28±0.06⁴) |
| Grupo Zishenwan procesado con sal en dosis altas | 5.4 | 88.48±11.81⁴) | 37.22±5.21⁴) | 0.27±0.05⁴) |
| Grupo Zishenwan crudo en dosis bajas | 1.8 | 103.50±15.79 | 47.17±9.62 | 0.33±0.09 |
| Grupo Zishenwan procesado con sal en dosis bajas | 1.8 | 98.03±14.06 | 46.66±6.32 | 0.32±0.06 |
3.4 Elucidación de la metabolómica sérica del mecanismo de eficacia sinérgica del procesamiento de sal
3.4.1 Modelado estadístico multivariado
Los gráficos de PCA no revelaron muestras atípicas, con una agrupación estrecha de las muestras de control de calidad para validar el rendimiento estable de la detección por LC-MS. La clara separación entre los grupos en blanco y modelo confirmó una alteración grave de la homeostasis metabólica sérica provocada por las lesiones de la PC. Los grupos de Zishen Wan crudos y procesados con sal se superpusieron parcialmente pero permanecieron claramente segregados del grupo del modelo patológico. Los modelos OPLS-DA lograron un sólido poder explicativo y predictivo (R²Y > 0,6, Q² > 0,6), con prueba de permutación Q² intercepto < 0, lo que verifica un rendimiento de clasificación confiable. Los gráficos multivariados se adjuntan en materiales complementarios.
3.4.2 Identificación de metabolitos séricos diferenciales
Los metabolitos diferenciales se examinaron mediante OPLS-DA VIP > 1,0 y prueba t P < 0,05:
Blanco vs Modelo: 215 metabolitos diferenciales
Zishen Wan procesado con sal vs modelo: 212 metabolitos diferenciales
Raw Zishen Wan vs Modelo: 158 metabolitos diferenciales
Zishen Wan procesado con sal versus Zishen Wan crudo: 117 metabolitos diferenciales
Zishen Wan procesado con sal revirtió los niveles anormales de 38 metabolitos perturbados centrales, incluidos 23 metabolitos compartidos normalizados por formulaciones crudas y procesadas con sal, además de 15 metabolitos regulados de manera única y exclusivos de Zishen Wan procesado con sal. Las listas completas de metabolitos se proporcionan en materiales complementarios.
3.4.3 Análisis de enriquecimiento de la vía metabólica de KEGG
El análisis de enriquecimiento de todos los metabolitos diferenciales identificó 14 cascadas metabólicas centrales restauradas por la intervención de Zishen Wan, centradas en el metabolismo de la alanina y el ácido indolacético.
Modelo en blanco versus modelo: las vías alteradas incluyen el metabolismo de la pirimidina, el metabolismo de la alanina, el pantotenato y la biosíntesis de CoA;
Raw Zishen Wan vs Modelo: Las vías restauradas incluyen el metabolismo de la histidina, el metabolismo de la -alanina, el metabolismo del triptófano, el metabolismo de la taurina y la hipotaurina, el metabolismo del ácido araquidónico;
Zishen Wan procesado con sal frente al modelo: Ocho vías reguladoras enriquecidas: metabolismo de pirimidina, biosíntesis de pantotenato y CoA, metabolismo de -alanina, metabolismo de histidina, metabolismo de taurina e hipotaurina, metabolismo de triptófano;
Zishen Wan procesado con sal versus Zishen Wan crudo: vías diferenciales centradas en el metabolismo del triptófano, -alanina, histidina y taurina.
Las rutas con un valor de impacto de ruta > 0,1 se integraron en gráficos de burbujas de matriz para una comparación intuitiva:
-metabolismo de alanina: vía central compartida regulada en todas las comparaciones intergrupales;
Biosíntesis de pantotenato y CoA, metabolismo de pirimidina: vías reguladoras únicas activadas únicamente por Zishen Wan procesado con sal;
Metabolismo de arginina y prolina: Cascada metabólica exclusiva modulada por formulaciones procesadas con sal;
Metabolismo de triptófano, histidina y taurina: regulado por Zishen Wan tanto crudo como procesado con sal, con una magnitud reguladora más fuerte en los grupos procesados con sal. Todos los datos de enriquecimiento de la vía se resumen en la Tabla complementaria 6 y en los materiales visuales complementarios.
Tabla 6 Metabolitos diferenciales séricos clave en ratas CP después de la intervención con diferentes formulaciones de Zishenwan
| No. | metabolito | fórmula química | ID de HMDB | B/A | C/B | D/B | D/C |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | -Alanina | C₃H₇NO₂ | HMDB0000056 | ↓ | ↑¹) | ↑²) | ↑¹) |
| 2 | ácido indolacético | C₁₀H₉NO₂ | HMDB0000197 | ↓ | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 3 | triptófano | C₁₁H₁₂N₂O₂ | HMDB0030396 | ↓ | ↑¹) | ↑²) | ↑¹) |
| 4 | ácido guaidinoacético | C₃H₇N₃O₂ | HMDB0000128 | ↓ | ↑ | ↑¹) | ↑ |
| 5 | uracilo | C₄H₄N₂O₂ | HMDB0000300 | ↓²) | ↑²) | ↑²) | ↑ |
| 6 | 5,6-Dihidrouracilo | C₄H₆N₂O₂ | HMDB0000076 | ↓¹) | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 7 | ácido aspártico | C₄H₇NO₄ | HMDB0000191 | ↓ | ↑¹) | ↑¹) | ↑¹) |
| 8 | arginina | C₆H₁₄N₄O₂ | HMDB0000517 | ↓ | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 9 | ácido pantoténico | C₉H₁₇NO₅ | HMDB0000210 | ↓ | ↑ | ↑¹) | ↑²) |
| 10 | ácido urocánico | C₁₀H₁₂N₂O₃ | HMDB0000684 | ↑ | ↓¹) | ↓¹) | ↓ |
| 11 | ácido uroquínico | C₁₀H₇NO₃ | HMDB0000715 | ↑¹) | ↓¹) | ↓¹) | ↓ |
| 12 | ácido palmítico | C₁₆H₃₂O₂ | HMDB0000220 | ↑¹) | ↓ | ↓²) | ↓ |
| 13 | ácido úrico | C₅H₄N₄O₃ | HMDB0000289 | ↑²) | ↓ | ↓ | ↓²) |
| 14 | Prolina | C₅H₉NO₂ | HMDB0000162 | ↑ | ↓ | ↓²) | ↓ |
Nota: ↑. Regulado al alza; ↓. Regulado a la baja; A. Grupo en blanco; B. Grupo modelo; C. Grupo Raw Zishenwan; D. Grupo Zishenwan procesado con sal; comparación intergrupal ¹)P<0.05, ²)P<0.01.
3.5 Análisis farmacológico y metabolómico de la red integradora
La comparación de Venn de 196 vías KEGG de la farmacología en red y 8 vías metabólicas específicas del procesamiento de sal identificó dos cascadas centrales superpuestas: el metabolismo del triptófano y el metabolismo de la arginina-prolina.
Los metabolitos diferenciales de los grupos Zishen Wan modelo versus procesado con sal y Zishen Wan crudo versus procesado con sal se importaron a Metscape para construir redes de "metabolito-reacción-enzima-gen", identificando genes centrales compartidos consistentes con objetivos terapéuticos de farmacología de red:
Red (modelo frente a Zishen Wan procesado con sal):
Metabolismo del triptófano: MAOA, COMT
Metabolismo de arginina y prolina: ARG1
Metabolismo de la tirosina: COMT
Síntesis de novo de ácidos grasos: FASN
Red (Zishen Wan crudo versus procesado con sal): reenriquecimiento de las vías de síntesis de triptófano, tirosina y ácidos grasos, además de nuevas cascadas: metabolismo de las purinas (MPO, XDH), ciclo de los ácidos tricarboxílicos (IDH1).
El metabolismo del triptófano surgió como la única vía compartida de alto impacto (Impacto > 0,1) en ambas redes ómicas integradas, lo que indica que su papel central en el procesamiento de sal mejoró la eficacia antiprostatitis. Una subred que mapea las interacciones reguladoras del metabolismo del triptófano reveló interferencias entre MAOA, COMT y múltiples isoformas de CYP450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2D6, CYP3A4, CYP19A1). Los diagramas de red interactivos completos se adjuntan en materiales complementarios.
4 Discusión
4.1 El procesamiento de sal altera los perfiles químicos de las hierbas para construir una base material protectora de la próstata
El perfil químico LC-MS confirmó que el procesamiento de sal induce cambios significativos en la concentración de compuestos bioactivos clave en Zishen Wan, con una elevación prominente de berberina, berberrubina y felodendrina. Las investigaciones existentes demuestran que la berberrubina regula positivamente la expresión del transportador OCT2 renal para mejorar la acumulación de alcaloides de felodendro dirigida al riñón, sirviendo como un compuesto marcador central que respalda la teoría de la MTC de la "guía de hierbas procesadas con sal para el meridiano del riñón".
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4.2 Zishen Wan procesado con sal ejerce efectos farmacodinámicos antiinflamatorios y de reparación de tejidos superiores
IL-1 y IL-18 son citoquinas efectoras terminales liberadas por los inflamasomas NLRP3 activados, lo que provoca una infiltración inflamatoria persistente en la prostatitis crónica. La sobreexpresión de Bcl-2 inhibe la apoptosis de las células inmunitarias inflamatorias, perpetuando las lesiones inflamatorias pélvicas sostenidas.
Los datos farmacodinámicos in vivo verificados, tanto Zishen Wan crudo como procesado con sal, reducen eficazmente el agrandamiento de la próstata, revierten el daño del tejido glandular y suprimen los proinflamatorios séricos IL-1, IL-18 más el Bcl-2 antiapoptótico. Las formulaciones procesadas con sal mostraron consistentemente tendencias terapéuticas numéricamente superiores en todos los indicadores de eficacia, lo que confirma que la fritura con sal potencia la capacidad antiinflamatoria de la fórmula para los síntomas de parálisis cerebral.
4.3 El procesamiento de la sal mejora la restauración de la homeostasis metabólica a través de vías metabólicas inmunes y energéticas únicas
La metabolómica sérica demostró que Zishen Wan, tanto crudo como procesado con sal, restaura el metabolismo de la -alanina alterado, elevando los niveles séricos de -alanina y aspartato para estimular la defensa antioxidante y la síntesis de proteínas tisulares para la reparación de las lesiones de próstata, con efectos de normalización más fuertes observados en los grupos procesados con sal.
Excepcionalmente, Zishen Wan procesado con sal revierte las perturbaciones en la biosíntesis de pantotenato-CoA y el metabolismo de la pirimidina.. -La alanina y el ácido pantoténico actúan como precursores críticos para la síntesis de CoA, un proceso regulado positivamente por la señalización PI3K/Akt. La CoA funciona como un cofactor central para el metabolismo energético celular y las reacciones de acetilación antiinflamatorias; Los niveles elevados de pantotenato sérico, 5,6-dihidrouracilo y -alanina en los grupos de tratamiento procesados con sal indican que Zishen Wan modificado con sal activa PI3K/Akt para facilitar la producción de CoA, restaurando el equilibrio energético celular de la próstata y mitigando la lesión inflamatoria.
4.4 Las ómicas integradas revelan mecanismos inmunológico-metabólicos centrales de la sinergia del procesamiento de la sal
4.4.1 Metabolismo del triptófano: cascada reguladora inmunitaria central
El metabolismo del triptófano gobierna la homeostasis inmune y la respuesta inflamatoria. Su metabolito ácido indol acético actúa como un ligando AhR para ejercer una potente actividad antiinflamatoria. El análisis integrado identificó las enzimas CYP450 (CYP1A1, CYP1B1) como mediadores centrales que convierten el triptófano en agonistas de AhR para equilibrar las proporciones de células inmunes Th17/Treg y suprimir la inflamación.
Por el contrario, el exceso de quinurenina activa la señalización de AhR-STAT3 para inducir IL-6 proinflamatorio, al tiempo que estimula PI3K/Akt para desencadenar la activación del inflamasoma NLRP3 y la liberación de IL-1. Zishen Wan procesado con sal regula positivamente el triptófano sérico y el ácido indol acético al tiempo que reduce los niveles de quinurenina, modula CYP450, STAT3 y otros objetivos centrales para bloquear las cascadas proinflamatorias AhR/STAT3 y PI3K/Akt y reequilibrar la función inmune en las lesiones de parálisis cerebral.
4.4.2 Metabolismo de arginina-prolina: media en la reparación de tejidos y antifibrosis
El metabolismo de arginina-prolina coordina la resolución inflamatoria y la regeneración de tejidos. La arginina actúa como precursora de la síntesis de óxido nítrico, creatina y poliaminas; El guanidinoacetato sirve como intermediario esencial para la producción de creatina, que ejerce efectos protectores de los tejidos durante la lesión inflamatoria. El objetivo central compartido ARG1 cataliza la síntesis de poliaminas para acelerar la reparación del tejido prostático.
Zishen Wan procesado con sal eleva la arginina y el guanidinoacetato séricos al regular positivamente la actividad de ARG1 para estimular la síntesis de creatina y poliamina para la protección de las glándulas, al tiempo que reduce las concentraciones séricas de prolina para inhibir la deposición excesiva de colágeno y retardar la progresión de la fibrosis intersticial en la parálisis cerebral.
4.4.3 Cascadas metabólicas antiinflamatorias suplementarias exclusivas del Zishen Wan procesado con sal
La comparación diferencial de metabolitos entre los grupos crudos y procesados con sal descubrió vías reguladoras adicionales que incluyen la síntesis de novo de ácidos grasos y el metabolismo de las purinas:
Síntesis de ácidos grasos: el palmitato, el producto final de esta vía, activa la señalización MAPK de los macrófagos para desencadenar la liberación del inflamasoma NLRP3 de IL-1 mediadores del dolor. El objetivo central de farmacología de la red JUN (factor de transcripción descendente MAPK) y FASN (enzima limitante de la velocidad de la vía) controlan conjuntamente la biosíntesis de palmitato. Zishen Wan procesado con sal reduce los niveles séricos de palmitato al cosuprimir JUN y FASN, bloqueando la activación inflamatoria MAPK/NLRP3 para aliviar la inflamación y el dolor pélvicos.
Metabolismo de las purinas: el ácido úrico sérico elevado en la PC refleja daño oxidativo inflamatorio. Zishen Wan procesado con sal regula negativamente XDH y MPO para reducir el ácido úrico y la generación de especies reactivas de oxígeno, aliviando la lesión oxidativa del tejido mediada por neutrófilos en la próstata.
4.5 Limitaciones de la investigación y direcciones futuras
Si bien Zishen Wan procesado con sal superó consistentemente a las formulaciones crudas en todos los indicadores farmacodinámicos, las diferencias numéricas entre grupos no alcanzaron significación estadística, probablemente atribuible a la variación biológica individual y al tamaño limitado de la muestra. Sin embargo, la tendencia constante de superioridad terapéutica se alinea con concentraciones elevadas de alcaloides activos y una capacidad reguladora de la vía metabólica más amplia observada en muestras procesadas con sal.
En resumen, el procesamiento de sal regula positivamente los alcaloides antiinflamatorios clave en Zishen Wan, lo que permite la supresión sinérgica de múltiples componentes de las vías de señalización proinflamatoria PI3K/Akt y MAPK, junto con la modulación de múltiples objetivos de las cascadas del metabolismo de triptófano, arginina, pantotenato y ácidos grasos para mejorar sinérgicamente la eficacia antiinflamatoria, inmunoreguladora y de reparación de tejidos contra la prostatitis crónica.
Este estudio establece evidencia molecular preliminar para la teoría clásica de la MTC de que "el procesamiento de la sal guía las hierbas hasta el meridiano del riñón". Sin embargo, los objetivos centrales y las vías de señalización identificadas mediante predicción ómica requieren una validación directa de proteínas mediante ensayos de transferencia Western; Los cambios farmacocinéticos in vivo de los componentes de las hierbas antes y después del procesamiento de la sal siguen sin caracterizarse. La investigación de seguimiento llevará a cabo una verificación del nivel de proteínas de los objetivos principales previstos combinada con un análisis farmacocinético a base de hierbas para dilucidar aún más la connotación científica completa de la eficacia sinérgica del procesamiento de sal para la salud de los riñones y la próstata.
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Incompatibilidad
Los autores no declaran tener intereses financieros en competencia.
Referencias
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