Abstracto

Antecedentes: se ha informado que la jalea real reduciría la síntesis de melanina e inhibiría la expresión de proteínas y genes relacionados con la melanogénesis. En este estudio, evaluamos la actividad antimelanogénica y despigmentante del ácido 10-hidroxi-2-decanoico (10-HDA) de la jalea real de Apis mellifera.

Algunos estudios han sugerido quecistanchepuede ayudar a prevenir el envejecimiento de la piel alreducción del estrés oxidativoyinflamación, los cuales pueden contribuir aarrugas, manchas oscurasy otros signos de envejecimiento. Sin embargo, no está claro sicistanchepoderaclarar la pieloreducir la pigmentación. En resumen, si bien la cistanche puede tener algunos efectos beneficiosos sobre la piel, no está claro si se puede usar como un remedio confiable.blanqueamiento de la pielagente. Siempre es mejor consultar a un dermatólogo para que te aconseje sobre formas seguras y efectivas de cuidar tu piel.

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Métodos:En este estudio, evaluamos la actividad de blanqueamiento de {{0}}HDA en comparación con los cambios en la actividad de tirosinasa intracelular, el contenido de melanina y los niveles de proteína relacionados con la producción de melanina en células de melanoma B16F1 después del tratamiento con {{4 }}HDA. Además, se evaluó el efecto de blanqueamiento de la piel mediante la aplicación de un producto en crema que contenía 0,5 %, 1 % y 2 % de 10-HDA en la piel de ratones (C57BL/6 J) durante 3 semanas para observar el efecto de DL *-valores.

Resultados:Los resultados mostraron que 10-HDA inhibía la expresión de la proteína MITF (IC50 0.86 mM) en células de melanoma B16F1. El análisis de transferencia Western reveló que 10-HDA inhibió la actividad de la tirosinasa y la expresión de la proteína 1 relacionada con la tirosinasa (TRP-1), TRP-2 y el factor de transcripción asociado a la microftalmía (MITF) en células de melanoma B16F1. Además, el 10-HDA aplicado en la piel de los ratones muestra un índice promedio de blanqueamiento de la piel significativamente mayor (valor L).

Conclusiones:Los datos de validación indicaron el potencial de 10-HDA para suprimir la pigmentación de la piel. La 10-HDA se propone como candidata para inhibir la melanogénesis, por lo que podría desarrollarse como un producto cosmético para el cuidado de la piel.

Palabras clave:Jalea real, ácido 10-hidroxi-2-decanoico, Melanogénesis, Blanqueamiento de la piel, Inhibidor de la melanogénesis

Fondo

La jalea real (RJ) es una secreción de abeja obrera joven (Apis mellifera) producida por las glándulas hipofaríngeas y mandibulares, la abeja reina en desarrollo fue alimentada exclusivamente durante su vida [1]. RJ proporciona altos valores nutricionales debido a las abundantes cantidades de proteínas, aminoácidos libres, lípidos, vitaminas y azúcares [2, 3]. Las proteínas bioactivas de RJ son las principales proteínas de jalea real (MRJP), apisimina y royalizing, que han mostrado efectos inmunorreguladores y antibacterianos en varios estudios [4–6]. El ácido 10-hidroxi-2- decanoico (10-HDA) fue el principal ácido graso en RJ que posee varios efectos beneficiosos para la salud humana, que ha demostrado actividades antitumorales, antibacterianas e inmunomoduladoras [7 –9]. 10-HDA solo se encuentra en RJ, por lo que se ha utilizado como marcador de calidad de los productos de jalea real [10, 11]. Varias actividades farmacológicas de RJ ya han sido confirmadas por experimentos con animales, y las actividades farmacológicas incluyen anti-oxidación [12, 13], anti-inflamación [14], anti-tumoral [15, 16], anti-agenesia [17], efectos antibacterianos [18–20], vasodilatadores [21, 22], hipertensivos [21, 22], antihipercolesterolémicos [23], nefroprotectores [24] y blanqueadores de la piel [25]. En función de su valor nutricional y su beneficio para la salud humana, cada vez hay más productos comerciales de RJ disponibles en los mercados.

El color de la piel de los animales y los humanos está relacionado con el contenido de pigmento de melanina en la piel. El papel de la melanina es proteger la piel contra el daño de la luz ultravioleta, pero la acumulación excesiva de melanina provoca trastornos cutáneos graves, como decoloración y pigmentación y envejecimiento acelerado de la piel [26]. La melanina se sintetizó en los melanocitos ubicados en la capa más interna de la epidermis a través de mecanismos de melanogénesis [27]. La melanogénesis es una vía biosintética compleja controlada por la tirosinasa, las proteínas relacionadas con la tirosinasa 1 y 2 (TRP-1 y TRP-2) y el factor de transcripción asociado a la microftalmía (MITF) [28, 29]. La tirosinasa es una enzima limitante de la velocidad para controlar la síntesis de melanina. El primer paso de la producción de melanina es la hidroxilación de L-tirosina a L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA) y la conversión de L-DOPA a dopaquinona [30]. TRP-2 cataliza la producción de ácido 5,6- dihidroxi indol-carboxílico convertido a partir de dopacromo, y el producto de TRP-2, 5,6- ácido dihidroxi indol carboxílico como un sustrato para TRP-1 convertido en indol-5,6-ácido carboxílico de quinona, lo que finalmente da como resultado la síntesis de melanina [31, 32]. La inhibición de la síntesis de melanina a través de la interrupción de la melanogénesis sería la principal forma de prevenir o mejorar los trastornos hiperpigmentados, como el melasma y las manchas de la edad. Por lo tanto, la búsqueda de un compuesto potencial, seguro y efectivo para regular a la baja esos factores en la melanogénesis sería notable en la industria médica y cosmética [25, 33, 34].

Se ha demostrado que la jalea real podría reducir la síntesis de melanina [22], pero aún se desconoce el principal compuesto activo o el mecanismo subyacente a estas actividades de la JR. En nuestro estudio anterior, encontramos que 10-HDA podría inhibir la actividad de la tirosinasa (datos no publicados). En este estudio, se evaluó más el efecto inhibitorio sobre la tirosinasa por 10-HDA. Se realizaron modelos in vitro de biosíntesis de melanina usando cultivos de células de melanoma B16F10 y un modelo animal de un ratón con aplicación en la piel para investigar el efecto inhibidor de la melanogénesis de 10-HDA.

Métodos

Preparación de 10-HDA a partir de jalea real

La jalea real fue preparada por Fu-Chang Beekeeping en Hualien, Taiwán. Se transfirieron larvas de 3-días de edad a copas de celdas de reina en los marcos, y cada marco contenía 30 copas de reina. Los marcos se transfirieron a colmenas de abejas y la JR se recolectó 72 h después de transferir las larvas. Cada colmena contiene aproximadamente 25,000 abejas [35]. Las muestras de RJ recolectadas se mantuvieron a -20 grados hasta su posterior análisis. La jalea real (40 g) se calentó a reflujo con metanol (400 ml × 4 × 30 min) y el sobrenadante se recogió mediante centrifugación a 4500 xg durante 30 min. El sobrenadante se concentró a presión reducida para obtener el extracto crudo (10,76 g) denominado RJM. El RJM suspendido en metanol se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (SiO2 CC) y luego se eluyó con gradientes de cloroformo y metanol (300:1 a 1:1) para obtener diez fracciones analizadas por TLC. Las fracciones 4 y 5 mostraron manchas significativas y, por lo tanto, se sometieron a más purificación y análisis. Las fracciones 4 y 5 se purificaron repetidamente con SiO2 CC (eluido con cloroformo/metanol, 300:1 a 1:1) y luego se cristalizaron con acetona para obtener ácido 10-hidroxi-2-decanoico ({{32} } HDA). La estructura química del producto purificado se confirmó mediante análisis de espectros de masas por RMN y GC. El análisis cuantitativo 10-HDA se determinó mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con un sistema de bombeo Waters 1525 equipado con un detector Water 2489, una columna RP-8 GP250 (4,6 mm) y un Waters Automuestreador 717plus. La fase móvil fue solución de metanol (60:40 v/v con agua ultrapura y desionizada) ajustada con ácido fosfórico a pH 2,5, filtrada a través de una membrana (0,45 μm) y desgasificada durante 5 min. El caudal de la fase móvil se ajustó a 1,0 ml/min y la detección se realizó a 225 nm. El contenido de 10HDA en la muestra purificada final es del 90 por ciento, que se utiliza para análisis posteriores.

Cultivos celulares y 10-tratamientos HDA

Se cultivaron células de melanoma B16F10 (número BCRC: 60 031) en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con suero bovino fetal al 10 % (v/v) a 37 °C en una incubadora humidificada con control de CO2-(5 %) . Las células se sembraron a una densidad celular adecuada en un 24-pocillo o en una 6-placa de pocillos. Después de 1 día de incubación, las células se trataron con varias concentraciones de 10-HDA. El medio se utilizó en el grupo de control en lugar de 10-HDA. Posteriormente, las células se recogieron y se usaron para varios ensayos.

Medición de la viabilidad celular.

La viabilidad celular se midió mediante el ensayo de bromuro de {{0}}(4,5-dimetiltiazol-2- yl)-2,5 -difeniltetrazolio (MTT) según el método informado por Carmichael et al. [36]. Se cultivaron células de melanoma B16F10 en DMEM que contenía 10 por ciento de FBS y 1 por ciento de L-glutamina (4 mM) en una incubadora con 5 por ciento de CO2 a 37 grados. Las células cultivadas (1 × 104 células/pocillo) se sembraron en una placa de 96-pocillos, 10-HDA (disuelto en dimetilsulfóxido (DMSO)) diluido por el medio a una concentración de 1, 0,5, 0,1 Se añadieron mM y ácido kójico 1 mM a los pocillos. El medio se utilizó como blanco. Después de 24- h de incubación a 37 grados bajo un 5 por ciento de CO2, se retiró el medio de cada pocillo y luego se lavaron los pocillos con PBS (solución salina tamponada con fosfato 1 M) dos veces. Se añadieron 200 ul de solución de MTT (2 mg/ml) a cada pocillo. La reacción se terminó agregando 100 μL de DMSO después de 4- h de incubación. La absorbancia de cada pocillo se midió a 540 nm usando un lector de inmunoensayo (BIO-TEK, Winooski, VT) [20–23]. La viabilidad celular se determinó mediante la siguiente ecuación: Viabilidad celular (porcentaje)=[(AB)/ C] × 100 por ciento, A: volumen de absorbancia de la muestra, B: volumen de absorbancia del blanco, C: volumen de absorbancia de control.

Medición del contenido de melanina celular

El contenido de melanina intracelular de las células de melanoma B16F10 se midió utilizando el método modificado descrito por Bilodeau et al., [37]. Al final del cultivo de células de melanoma B16F10, se recogieron las células y se lavaron con PBS. Las células recolectadas se lisaron en tampón de lisis frío (fosfato de sodio 20 mM (pH 6,8), Triton X-100 al 1 por ciento, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) 1 mM, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 1 mM). Después de la centrifugación a 15,000xg durante 30 minutos, los sedimentos se disolvieron en NaOH 1 N que contenía DMSO al 20 por ciento durante 1 hora a 60 grados. El contenido de proteína en el sobrenadante se determinó utilizando el ensayo de Bradford. Se midió la absorbancia a 405 nm y se calculó el contenido de melanina frente a un estándar conocido de melanina sintética. Nivel de melanina (porcentaje)=[(AB)/ C] × 100 por ciento; A: volumen de absorbancia de la muestra; B: volumen de absorbancia en blanco; C: volumen de absorbancia de control.

Medición de la actividad tirosinasa celular

Se realizó un ensayo de actividad de tirosinasa según el método descrito previamente por Martinez-Esparza et al., [38], con ligeras modificaciones. Las células de melanoma B16F10 se lisaron en fosfato de sodio 20 mM (pH 6,8), Triton X-100 al 1 por ciento y fluoruro de fenilmetanosulfonilo o PMSF 1 mM, y se centrifugaron a 14000 rpm durante 15 min. El contenido de proteína de cada sobrenadante se determinó utilizando el ensayo de Bradford con albúmina de suero bovino (BSA) como estándar de proteína. La actividad de tirosinasa se determinó en una mezcla de reacción (1 ml) que contenía tampón de fosfato 50 mM (pH 6,8), L DOPA 2 mM y 300 ug de proteínas sobrenadantes. Después de incubar a 37 grados durante 15 min, se midió la absorbancia a 475 nm utilizando un lector de microplacas. Actividad tirosinasa (porcentaje)=[(AB)/ C] × 100 por ciento; A: volumen de absorbancia de la muestra; B: volumen de absorbancia en blanco; C: volumen de absorbancia de control.

Análisis de Western Blot

Las células se lavaron 3 veces en PBS helado y se lisaron en tampón RIPA (pH 7,4, 50 mM tris, 0,1 % SDS, 50 mM NaCl, 1 % NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/mL de aprotinina y 10 ug/mL de leupeptina). Se usó una alícuota del lisado para determinar el contenido de proteína por el método de ensayo de Bradford usando albúmina de suero bovino como estándar. Las proteínas (40 ug) se separaron en electroforesis en gel de poliacrilamida SDS al 10 por ciento y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa Hybond-C Extra (Amersham Bioscience, Reino Unido). Las membranas se bloquearon con leche desnatada al 5 por ciento en solución salina tamponada con Tris (TBS) que contenía Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 y NaCl 150 mM durante 30 min. MITF, tirosinasa, dopacromo tautomerasa 2 (TRP-2), TRP-1 y -actina (como control interno) se detectaron utilizando anticuerpos policlonales de conejo, respectivamente. Las membranas se incubaron adicionalmente con anticuerpo secundario policlonal de cabra contra IgG-H&L de conejo (HRP). A continuación, todos los anticuerpos unidos se detectaron utilizando el sustrato quimioluminiscente (ECL) Super Signal® West Pico (Thermo Scientific). La intensidad de la señal de cada banda se cuantificó con un sistema densitómetro Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) equipado con un integrador y normalizado con el del control interno.

Determinación de la actividad despigmentante en ratones

La actividad despigmentante se ensayó a través del sistema de modelo de ratón mediante el protocolo modificado de Tai et al. [39]. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Nacional de Formosa (número de aprobación: 10,401). Se compraron ratones negros hembra de cinco semanas de edad (C57BL/6 J), con un peso de 20 a 25 g, del Centro Nacional de Laboratorio Animal, Taipei. A lo largo de todos los experimentos, los animales se alojaron en una habitación con aire acondicionado a temperatura constante (25 grados ± 2 grados) y se mantuvieron en un ciclo de luz:oscuridad de 12 h. Los animales fueron aclimatados durante 7 días antes del experimento. Después de afeitarse el pelo, se les dio a los animales 1-días de descanso. Se prepararon muestras de gel que contenían 10-HDA dispersando los fármacos en vaselina. Un total de cuarenta ratones se dividieron por igual en cinco grupos y cada grupo se untó dos veces al día con 0,1 g de vaselina (control), 1 % de ácido kójico en vaselina, 0,5 %, 1 % o 2 % de 10-HDA en vaselina . Las aplicaciones continuaron durante 3 semanas y el índice de blanqueamiento de la piel (valor L) se midió en la misma área de la piel todos los días con un DermaLab® Combo (Cotex Technology, Dinamarca), que es un instrumento colorimétrico que utiliza un blanco de alta intensidad. LED como fuente de luz. El instrumento colorimétrico está conectado a una computadora [40]. Consideramos solo el parámetro L, y el valor L fue el brillo relativo, que va desde el negro total (L=0) hasta el blanco total (L=100). El valor L del índice de blanqueamiento de la piel inicial se analizó a partir de la piel de cada ratón antes de aplicar las sustancias ensayadas.

análisis estadístico

Todos los resultados de este estudio se analizaron utilizando el procedimiento de modelo lineal general disponible en el paquete de software Statistical Analysis System versión 9.1 (Statistical Analysis System Institute, 2002). Se utilizó la prueba de rangos múltiples de Duncan [41] para detectar diferencias entre las medias de los tratamientos. Cada experimento se realizó por triplicado.

Resultados

Efecto de 10-HDA en la viabilidad de las células de melanoma B16F1

La dosis óptima del ensayo de viabilidad celular por MTT en células de melanoma B16F1 se muestra en la Fig. 1. Mostró claramente que 10-HDA no era citotóxico para las células de melanoma B16F1 en concentraciones de 0.1, { {8}}.5 y 1 mM, y el ácido kójico no fue citotóxico para las células de melanoma a una concentración de 1 mM. La viabilidad celular disminuyó significativamente (20 por ciento de reducción) en células de melanoma expuestas a 1,5 mM 10-HDA (P < 0.05) (datos no mostrados) y 5 ácido kójico mM. Por lo tanto, las concentraciones de 0,1, 0,5, 1 mM de 10-HDA y 1 mM de ácido kójico se aplicaron en experimentos posteriores.

Inhibición de la actividad de tirosinasa y la síntesis de melanina en células de melanoma B16F10 por 10-HDA

El ácido kójico es un agente antimelanogénesis eficaz y bien conocido y se utilizó como control positivo en este estudio. 10-HDA suprimió significativamente (p < 0.05) la síntesis de melanina y la actividad de tirosinasa en comparación con el control de las células de melanoma B16F1 no tratadas. A la dosis de 1 mM, 10- HDA indujo una reducción del 28 ± 2,4 por ciento en la actividad de la tirosinasa celular (P < 0.01) y 40.4 ± 3 .0 porcentaje de reducción en la síntesis de melanina celular (P < 0,001), mientras que el ácido kójico (1 mM) también redujo significativamente la actividad de tirosinasa y la síntesis de melanina en un 14,4 ± 3,7 por ciento (P < 0,05) y 19,3 ± 1,5 por ciento (P < 0,001), respectivamente (Figs. 2 y 3).

Supresión de la expresión de la proteína tirosinasa, TRP-1 y TRP-2 en células de melanoma B16F10 por 10-HDA

Para investigar si 10-HDA puede influir en la expresión de la proteína melanogénica, se llevó a cabo un análisis de transferencia Western utilizando el lisado de células de melanoma B16F10 tratadas con 10-HDA (Fig. 4). El 10-HDA inhibió drásticamente las expresiones de tirosinasa, TRP-1 y TRP-2 en células de melanoma B16F1 en comparación con las de las células no tratadas (Fig. 4b-d). La -actina, una proteína de limpieza que se usó como control interno, no mostró cambios. El 10-HDA inhibió los niveles de expresión de proteínas de enzimas melanogénicas similares al ácido kójico.

Efecto inhibitorio de la 10-HDA sobre el nivel de proteína relacionado con factores melanogénicos en las células B16F10

Durante el proceso de melanogénesis en células de mamíferos, MITF desempeña el papel principal de regulador en la síntesis de la vía TRP, incluidos TYR, TRP{{0}} y TRP-2 [25, 26]. El efecto de 10-HDA en la expresión de MITF se evaluó mediante transferencia Western. Se expusieron células de melanoma B16F1{{10}} a varias concentraciones de 10- HDA (0,1, 0,5 y 1 mM), lo que resultó en la regulación a la baja de la expresión de MITF por 10-HAD ( Figura 4e). El valor IC50 para la supresión de la expresión MITF de 10-HDA se estimó en 0,86 mM. Los presentes resultados sugieren que los niveles de proteína MITF se reducen por la 10-HDA. El efecto de hipopigmentación de la 10-HDA puede ser el resultado de una expresión génica de MITF regulada a la baja, que luego reprimiría las expresiones de proteínas y genes de tirosinasa, TRP-1 y TRP-2.

Evaluación de la actividad despigmentante de 10-HDA in vivo a través de ratones

Para especular sobre la dosis humana, usamos ratones como modelo animal para investigar la actividad despigmentante de {{0}}HDA. Después del afeitado, los ratones se trataron con ácido kójico al 1 por ciento en vaselina, 0, 5 por ciento, 1 por ciento o 2 por ciento de 10- HDA en vaselina, y se midió y registró el índice de aclaramiento de la piel. Para este estudio in vivo, usamos ácido kójico como control positivo. El ácido kójico se usa ampliamente como agente de terapia de despigmentación de la piel en todo el mundo. Después de la primera semana de tratamiento, el grado de blanqueamiento de la piel aumentó significativamente en los ratones tratados con 10- HDA, en comparación con el control, y este aumento continuó hasta el final del experimento. La actividad despigmentante de 0.5, 1 y 2 por ciento de 10-HDA fue comparable a la del 1 por ciento de ácido kójico. Nuestros resultados revelaron que 10-HDA fue capaz de promover significativamente el blanqueamiento de la piel en la piel de los ratones a una concentración tan baja como 0,5 por ciento (Fig. 5). Por lo tanto, 10-HDA parece ser un buen candidato como agente blanqueador de la piel para tratar la hiperpigmentación de la piel.

Discusión

La síntesis de melanina está controlada por la compleja cascada enzimática de tirosinasa, TRP1 y TRP2. El grado de inhibición de genes y proteínas relacionados con la melanogénesis juega un papel importante en la eficacia de un agente despigmentante, que generalmente se utiliza en el tratamiento de la hiperpigmentación o productos cosméticos [28]. Para dilucidar el verdadero efecto inhibidor de 10-HDA sobre la melanogénesis, se analizó el contenido de melanina y la actividad de tirosinasa intracelular de las células B16F10 en el mismo rango de concentración. Los resultados en las Figs. 2 y 3 indicaron que el 10-HDA exhibió una mayor actividad de inhibición en la síntesis de melanina en células B16F10 que el ácido kójico. Los datos revelaron que 10- HDA bloquea la melanogénesis en las células de melanoma B16F10.

La melanogénesis está dominada al menos por tres proteínas reguladoras, tirosinasa, TRP1 y TRP2 en melanocitos de mamíferos [29]. Las expresiones de TRP-1, TRP-2 y MITF se inhibieron todas en las células de melanoma B16F10, que se trataron con 10-HDA. MITF es un factor de transcripción importante para regular la expresión de enzimas melanogénicas, como tirosinasa, TRP-1 y TRP-2 [42, 43]. De acuerdo con nuestros datos de transferencia Western (Fig. 4), las células de mamíferos tratadas con 10-HDA reducirían la expresión de todas las enzimas limitantes de la velocidad, incluidas la tirosinasa, TRP-1 y TRP-2 , y prevenir la acumulación anormal de melanina durante el proceso de melanogénesis. Estos datos sugirieron que 10- HDA podría inhibir el proceso de melanogénesis al inhibir la expresión de MITF. En este estudio, hemos demostrado que 10-HDA inhibe la melanogénesis al regular a la baja la producción de proteína MITF, tirosinasa y melanina. La vía inhibidora de 10-HDA en la expresión de MITF fue diferente de la de otros inhibidores de la melanogénesis, como el ácido kójico, la arbutina y el ácido ascórbico, que no afectaron la expresión de MITF [44, 45]. Esto sugiere que 10-HDA tiene un excelente potencial para usarse como un agente blanqueador de la piel seguro y natural para cosméticos funcionales [46].

El melanoma, un cáncer de piel, surge de la transformación maligna de los melanocitos. Los melanomas que surgen en la piel crónicamente dañada por el sol, las superficies de las mucosas y la piel acral fueron causados ​​​​por sobreactivación de BRAF y NRAS [47], pérdida del locus CDKN2A [48], sobreexpresión de MITF [49], sobreactivación de Kit [50 ], sobreactivar mGluR1 [51, 52]... et al. En este estudio, 10-HDA podría inhibir la expresión de MITF en células de melanoma B16F10. Esto indicó que 10-HDA tiene el potencial de ser el ingrediente para medicamentos dérmicos o anticancerígenos contra el melanoma.

RJ se ha utilizado para muchas preparaciones dermatológicas que incluyen la restauración de la piel, la regeneración de la piel, el rejuvenecimiento, la cicatrización de quemaduras o la cicatrización de heridas [53, 54]. Además, se informó que algunos ácidos grasos insaturados en RJ podrían inhibir la síntesis de melanina y la actividad de tirosinasa, lo que lleva a la regulación negativa de la melanogénesis [55], y demostramos que el efecto despigmentante de RJ podría ser el resultado de la presencia de {{3 }} HDA. Debido a que la piel de los ratones es similar a la de los humanos, usamos ratones como modelo animal in vivo para examinar la actividad despigmentante de 10-HAD. Como se muestra en la Fig. 5, el índice de blanqueamiento de la piel del color de la piel aumentó significativamente en los ratones tratados con 10-HAD, en comparación con el control. Además, Koya-Miyata et al. evaluaron la actividad promotora de la producción de colágeno de 10-HDA en líneas celulares de fibroblastos que producen el factor de crecimiento transformante- 1 (TGF- 1), que es un factor importante para la producción de colágeno [55] . Por lo tanto, 10-HDA parece ser un compuesto natural muy prometedor para la regeneración de la piel y el tratamiento de la hiperpigmentación.

Conclusión

10-HDA inhibió no solo la actividad de tirosinasa sino también las expresiones de enzimas melanogénicas, incluidas tirosinasa, TRP-1 y TRP-2, al suprimir MITF en las células de melanoma B16F10. En consecuencia, el pigmento de melanina se redujo en las células de melanoma B16F10. Además, el modelo animal in vivo mostró la actividad despigmentante de 10-HDA en aplicación tópica. Estos resultados sugirieron que 10-HDA tiene un candidato que podría ser un inhibidor de la melanogénesis seguro y natural para la industria cosmética, en la que la búsqueda de un compuesto natural y efectivo es uno de los objetivos más importantes para desarrollar un mejor producto para el cuidado de la piel. .

abreviaturas

10-HDA: ácido 10-hidroxi-2-decanoico; BSA: albúmina de suero bovino; DMEM: medio de Eagle modificado por Dulbecco; DMSO: Dimetilsulfóxido; EDTA: ácido etilendiaminotetraacético; L-DOPA: L-3,4- dihidroxifenilalanina; MITF: factor de transcripción asociado a microftalmía; MRJP: principales proteínas de la jalea real; MTT: bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio; PBS: solución salina tamponada con fosfato; PMSF: fluoruro de fenilmetanosulfonilo o fluoruro de fenilmetilsulfonilo; TLC: cromatografía en capa fina; TRP-1: proteína relacionada con tirosinasa 1; TRP- 2: proteína 2 relacionada con tirosinasa

Expresiones de gratitud

Agradecemos a la Sra. Li-Yu Lee de Fu-Chang Beekeeping por preparar jalea real

Fondos

Este trabajo fue apoyado por una subvención del Ministerio de Ciencia y Tecnología, Taiwán, ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 para CC Peng).

Disponibilidad de datos y materiales.

Todos los datos generados o analizados durante este estudio se incluyen en este artículo publicado y sus archivos de información complementaria.

Contribuciones de los autores

CCP concibió y diseñó los experimentos. HZS e IPL realizaron los experimentos. CCP y PCK analizaron los datos. CCP, PCK y JCL contribuyeron con reactivos/materiales/herramientas de análisis. CCP e IPL escribieron y revisaron el documento. Todos los autores aprobaron la versión final del manuscrito.

Información de los autores

CCP, Doctor en Biotecnología, profesor asociado del Departamento de Biotecnología, Universidad Nacional de Formosa. HZS, Magíster en Biotecnología, egresado del Departamento de Biotecnología, Universidad Nacional de Formosa. IPL, Doctor en Biotecnología, Gerente del Departamento de Investigación y Desarrollo, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK, Doctor en química, profesor asociado del Departamento de Biotecnología, Universidad Nacional de Formosa. JCL, gerente general de Honey Bee Town Co., Ltd.

Aprobación ética

Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética de la Universidad Nacional de Formosa (Número de aprobación: 10,401) y se ajustaron a las Pautas para el cuidado y uso de animales de laboratorio.

Consentimiento para publicación

No aplicable en este apartado. Este artículo no es un estudio clínico con participantes humanos y este manuscrito no contiene ningún dato clínico individual.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Nota del editor

Springer Nature se mantiene neutral sobre las reclamaciones jurisdiccionales en mapas publicados y afiliaciones institucionales.

Detalles del autor

1 Departamento de Biotecnología, Universidad Nacional de Formosa, Huwei, Yunlin, Taiwán. 2 Departamento de Investigación y Desarrollo, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taiwán. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., No.77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taiwán.

Recibido: 9 de marzo de 2017 Aceptado: 21 de julio de 2017

Publicado en línea: 09 de agosto de 2017

Referencias

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