El efecto protector de los glucósidos totales de Cistanche sobre la toxicidad miocárdica de ratones inducida por adriamicina
Mar 06, 2022
Para más información:ali.ma@wecistanche.com
Yulia Yiming'
[Proyecto apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de la Comisión de Ciencia y Tecnología de la Región Autónoma Uygur de Xinjiang (96814)]
[Perfil de la autora, Eliya Yiming (1964-), mujer (uigur), maestra. Profesor, Dirección de investigación: Farmacología cardiovascular. ],
Wang Xiaowen', Wang Xuefei', Heiliman Yilahong 2, Xie Yaoyun 2, Du Niansheng 3
(Universidad Médica de Xinjiang|Departamento de Farmacología, Facultad de Farmacia, Departamento de Microscopía Electrónica, Facultad de Ciencias Médicas Básicas, Departamento de Química de Medicamentos Naturales, Facultad de Farmacia, Urumqi 830054, Xinjiang)
Resumen:Explorar el efecto protector y el mecanismo deGlucósidos de Cistanche(GC) sobre el daño miocárdico inducido por doxorrubicina (Dox) en ratones. Fang Xie: se utilizó un modelo de lesión miocárdica aguda causada por la inyección intraperitoneal de Dox (17,5 mg/kg) en ratones NIH para determinar la actividad de la superóxido dismutasa miocárdica (SOD); actividad de selenio-glutatión peroxidasa (Se-GSH-Px); El malondialdehído (MDA) contiene actividad de creatina fosfoquinasa sérica (CPK). La microscopía electrónica examina los cambios ultraestructurales de los cardiomiocitos. Resultados: 48 horas después de la inyección intraperitoneal de Dox puede causar un daño significativo en el miocardio de los ratones. La actividad miocárdica de SOD y Se-GSH-Px disminuyó, el contenido de MDA aumentó, la actividad de CPK sérica aumentó y se produjo daño en la ultraestructura del tejido miocárdico. Glucósidos de Cistanche(62,5, 125.0, 250,0 mg/kg)puede aumentar la SOD miocárdica, la actividad de Se-GSH-Px. Reduzca el contenido de MDA y reduzca la liberación de CPK. Reducir el daño de la ultraestructura miocárdica.Jie Long: Cistanche glucósidos totalestienen un cierto efecto protector sobre el daño miocárdico causado por la doxorrubicina. Su mecanismo puede estar relacionado con la protección de la SOD miocárdica y la actividad Se-GSH-Px, la eliminación de radicales libres y la prevención de la peroxidación lipídica.
Palabras clave: doxorrubicina; glucósido total de cistanche; cardiotoxicidad; Peroxidación lipídica; creatina quinasa; ultraestructura
La doxorrubicina (Dox) es un tipo de antibiótico de cebolla, que tiene un buen efecto en una variedad de tumores malignos, pero debido a su toxicidad miocárdica aguda y crónica, limita la amplia aplicación de Dox en la práctica clínica. Se sabe que el efecto antitumoral de Dox es afectar la replicación del ADN y la síntesis del ARN, y su cardiotoxicidad está relacionada con el daño por peroxidación lipídica inducido por la semiadriamicina. Por lo tanto, es importante encontrar eliminadores de radicales libres y antioxidantes para antagonizar la cardiotoxicidad de Dox mientras conserva su actividad antitumoral. El totalextractos de Cistancheson los ingredientes activos extraídos deCistanche. Estudios relevantes han encontrado que Glucósidos de Cistanche tienen efectos antioxidantes en los tejidos del ratón, Glucósidos de Cistanchepuede reducir significativamente el contenido de lipofuscina (3), Glucósidos de Cistanchetienen efectos protectores sobre la isquemia miocárdica en ratas(3), y Glucósidos de Cistanchetienen efectos anti-peroxidación lipídica y anti-radiación. Explorar el efecto protector y el mecanismo de Glucósidos de Cistanchesobre la lesión miocárdica inducida por Dox en ratones.
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1 Material y métodos
1.1 Fármacos y Reactivos
Glucósidos de Cistanchese extraen dehierba cistancheen el norte de Xinjiang, y los ingredientes principales son equinácea, etoxilatos de cornezuelo de centeno, etc. (proporcionados por el Departamento de Química de Medicina Natural, Facultad de Farmacia, Universidad Médica de Xinjiang); tetrametoxipropano (TMP Sigma Company); adriamicina (Dox, Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.); Vitamina E (Vit E, Fábrica Farmacéutica Shanghai Yan'an); otros reactivos se producen en el país.
1.2 Equipo experimental
Espectrofotómetro tipo 721 (Fábrica de Instrumentos Analíticos No. 3 de Shanghai); microscopio OLYMPUS (fabricado en Japón); JEM-100Microscopio electrónico de transmisión CXII (fabricado en Japón)? Medidor de acidez tipo PHS-250 (Shanghai Lei Magnetic Instrument Factory).
1.3 Agrupamiento y administración de animales
Los ratones NIH son proporcionados por el Centro Experimental Animal del Instituto de Enfermedades Endémicas de Xinjiang. El número de certificado del animal de laboratorio médico es No. {{0}}. Se seleccionaron 138 ratones NIH, con un peso de (24 ± 2) g, mitad machos y mitad hembras. Divididos aleatoriamente en 6 grupos (23 en cada grupo): (1) grupo control: solución salina normal (NS) 20 ml/kg; (2) grupo de lesión Dox: NS 20 ml/kg; (3) grupo Vit E: Vit E 100 mg/kg; (4) grupo GC i: GC 62,5 mg/kg; (5) grupo GC i: GC 125,0 mg/kg; (6) Grupo GCS1: GC 25,0 mg/kg, cada uno de los grupos anteriores Todos se administraron por administración intragástrica, una vez al día. Grupo de lesiones Dox, grupo Vit E, GC|grupo, grupo GCs I, grupo GCs I fueron inyectados por vía intraperitoneal con Dox 17. 5 mg/kg en el 4to día después de que se inyectaron NS y GCs durante 48 horas, se tomaron los globos oculares y se extrajo sangre, se preparó suero e inmediatamente El los animales se sacrificaron para extraer el corazón, se enjuagaron con NS, se secaron con papel de filtro y se pesaron. En condiciones de baño bajo el agua, el homogeneizado de miocardio se preparó con NS, se centrifugó a 3 500 r/min, 30 min y el sobrenadante se tomó para medir indicadores bioquímicos. Había 3 ratones en cada grupo y se tomaron los corazones para hacer muestras de microscopio electrónico.
1.4 Determinación de indicadores bioquímicos
Se utilizó el método de autooxidación de pirogalol para determinar la actividad de la superóxido dismutasa miocárdica (SOD); se usó el método DTNB para determinar la actividad miocárdica de selenio-glutatión peroxidasa (Se-GSH-Px). Usar el método TBA para determinar el contenido de producto de peroxidación lipídica miocárdica malondialdehído (MDA); la cuantificación de proteínas utiliza el método CBB-SDS denominado método CPK para determinar la actividad de la creatina fosfoquinasa (CPK) sérica.
1.5 Microscopía electrónica de tejido miocárdico
El vértice del corazón se fijó con glutaraldehído al 4 % y ácido al 1 %, se deshidrató con acetona, se incrustó en Epon 812 y se observó al microscopio electrónico de transmisión con tinción electrónica de plomo-uranio JEM-100CX I.
1.6 Procesamiento estadístico
Todos los datos están representados por Wang Shi s. Una vez que se prueba la homogeneidad de la varianza de los datos experimentales, se utilizan la prueba F y la prueba q para el procesamiento estadístico. Nivel de inspección a=0.05.
2 resultados
2.1 El efecto deGlucósidos de Cistanchesobre los índices bioquímicos del miocardio lesionado por Dox se muestra en la Tabla 1.
2. 1- 1 El efecto deGlucósidos de Cistanchesobre la actividad SOD del miocardio lesionado por Dox.
En comparación con el grupo de control, el grupo de lesión por Dox redujo la actividad de SOD miocárdica en un 41,1 por ciento (PV0,01). En comparación con el grupo de lesiones Dox, aumentó en un 30,9 por ciento, 33,2 por ciento, 36,5 por ciento y 34,9 por ciento (todos P<0.01), the="" gcs1="" group="" was="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0.05), y los grupos restantes fueron todos más bajos que el grupo de control.
2.1.2 Efecto de los GC sobre la actividad del Se-GSH-Px del miocardio lesionado por Dox.
En comparación con el grupo de control, el grupo de lesión Dox tiene una reducción del 26,2 por ciento en la actividad miocárdica de Se-GSH-Px (P<0.01), gcs,="" gcs,="" compared="" with="" the="" dox="" injury="" group,="" the="" gcs,="" group,="" and="" vit="" e="" group="" increased="" by="" 19.2%,="" 21.1%,="" 25.0%,="" and="" 26.1%="" respectively=""><0.01), which="" were="" all="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0 . 05).
2.1.3 El efecto deGlucósidos de Cistanche on the MDA content of the Dox-injured myocardium was reduced by 16.7%, 17.3%, 18.6%, and 17.3% respectively compared with the Dox-injured group (Fall V0.01), which were all close to the Control group (P>0.05).
2.1.4 El efecto de los GC sobre la actividad de la CPK en suero en ratones lesionados por Dox.
La actividad de la CPK sérica en el grupo de lesiones Dox aumentó en un 87,3 por ciento (<0.01),>Glucósidos de Cistanche I, Glucósidos de Cistanchey Vit En comparación con el grupo de lesión Dox, el grupo E disminuyó en un 26,6 por ciento, 33,1 por ciento, 37,4 por ciento y 36,7 por ciento (todas F<0.01), which="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" control="">
2.2 Microscopía electrónica de miocardio de ratón
2.2.1 En el grupo de control, el sarcoma de fibras miocárdicas estaba intacto, las miofibrillas estaban ordenadas, las bandas de sarcómeros estaban claramente estructuradas, las mitocondrias estaban ordenadas, la estructura era normal y la estructura nuclear era normal.
2.2.2 Grupo de lesiones Dox
Se puede ver que hay cambios obvios en la ultraestructura de las fibras miocárdicas, las células miocárdicas se hinchan, el sarcómero intracitoplasmático crece, la banda brillante se ensancha, aparecen bandas de contracción anormales en algunas áreas y el material de la línea Z aumenta. Las mitocondrias estaban difusamente hinchadas, hiperplásicas, escasamente dispuestas, rotas y vacuoladas. El retículo sarcoplásmico se expande, aumentan los lisosomas secundarios y se puede observar una degeneración focal. El volumen del núcleo aumenta y el espacio perinuclear se ensancha.
2. 2.3 La hinchazón de las fibras miocárdicas en el Glucósidos de CistancheI grupo fue reducido.
La estructura del sarcómero es básicamente normal, pero el sarcómero sigue siendo más ancho que el grupo de control. Se redujo la hinchazón de las mitocondrias, se incrementó la densidad de la matriz, se incrementó la densidad de las mitocondrias y las mitocondrias individuales todavía han cambiado. Aumento de lisosomas secundarios en el citoplasma.
2.2.4 La estructura de fibras miocárdicas del Glucósidos de CistancheYo, mi grupo básicamente se recuperó a la normalidad.
Las miofibrillas están ordenadas, la estructura del sarcómero es normal y la estructura de las mitocondrias vuelve a la normalidad.
3 Discusión
Dox es un tipo de antibiótico de cebolla, que tiene las características de un amplio espectro antitumoral y un fuerte efecto. Sin embargo, Dox puede causar toxicidad miocárdica severa, como varias arritmias en la etapa temprana de la medicación, insuficiencia cardíaca congestiva dependiente de la dosis en la etapa tardía, lo que limita su aplicación clínica. El mecanismo principal de Dox que causa toxicidad miocárdica es la producción excesiva de radicales libres de oxígeno reactivo que causan daño miocárdico. La afinidad de Dox con el tejido miocárdico es significativamente mayor que la de otros tejidos. Tras entrar en las células del miocardio, la Dox se transforma en semi-dox, que actúa sobre las moléculas de oxígeno para transformarlas en radicales libres anión superóxido (Oxid), acompañado de la producción de peróxido de hidrógeno (H2O2). El contenido de MDA de Ol y H2O2 en el grupo de lesiones de Haber-Weiss Dox aumentó en un 25,8 por ciento en comparación con el grupo de control (P<0.01), and="" the="">Glucósidos de Cistanche |, Glucósidos de Cistanche 1, Glucósidos de Cistanche group, and Vit E group were reduced by 16.7% compared with the Dox injury group. , 17. 3%, 18. 6% and 17. 3% (Fall V0.01), which are all close to the control group (P>{{0}}.05). La reacción o reacción de Fenton produce radicales hidroxilo (OH • ). 0$ y OH • Una gran cantidad de acumulación puede causar peroxidación de lípidos en tejidos y membranas celulares y causar daño a macromoléculas biológicas.
En el experimento se observó que después de 48 horas de inyección intraperitoneal de Dox (17,5 mg/kg) a ratones, las actividades de SOD y Se-GSH-Px en el miocardio de ratón se redujeron significativamente, y el contenido de producto de peroxidación lipídica MDA se incrementó significativamente. Alta, aumenta la actividad de la CPK sérica. Bajo el microscopio electrónico, se dañó la ultraestructura del músculo cardíaco, que se manifestó como una inflamación obvia de las mitocondrias, ruptura de las mitocondrias, degeneración de las vacuolas, reducción de la densidad de la matriz y expansión del retículo sarcoplásmico.
Todos los grupos de dosis de GC pueden aumentar significativamente las actividades de las enzimas SOD y Se-GSH-Px que eliminan los radicales libres en el músculo cardíaco de los ratones lesionados por Dox, reducir el contenido de MDA y reducir la liberación de CPK. Se sugiere queGlucósidos de Cistanche puede reducir el daño por peroxidación de lípidos inducido por Dox al aumentar la actividad de las enzimas depuradoras de radicales libres en el cuerpo. Los glucósidos de Cistanche, grupos protegen significativamente la ultraestructura de las fibras miocárdicas del daño Dox.Detectado in vitro con tecnología moderna de análisis de quimioluminiscencia y encontrado queGlucósidos de Cistanchepuede eliminarse efectivamente. Solo los radicales de oxígeno activo como OH • y H2O2 son correctos. El efecto depurador de un ganglio es particularmente significativo "⑵. Se sugiere que los glucósidos de Cistanche pueden eliminar el OR inducido por semi-dox en el miocardio, interrumpiendo así la reacción en cadena de los radicales libres y actuando como un bloqueador de la cadena de peroxidación lipídica.
En este experimento, se utilizó Vit E como control positivo. Los resultados mostraron que la Vit E tiene cierto efecto protector sobre el daño miocárdico agudo inducido por Dox en ratones. Puede reducir el contenido de MDA del miocardio y aumentar las actividades de SOD y Se-GSH-Px. Según la literatura [13], los informes son consistentes.
El componente principal de Glucósidos de Cistanchees fenetilamina, y su estructura es similar a la Vit E, es decir, tiene un grupo hidroxilo fenólico y un grupo hidroxilo. Por lo tanto, se especula que Glucósidos de Cistanchepuede proporcionar los átomos de hidrógeno en el grupo hidroxilo fenólico de su estructura molecular al radical lipídico (LOO -), que lo convierte en hidroperóxido de lipo (LOOH), que luego se descompone en hidroxilo no tóxico por GSH-Px. Previene la peroxidación de ácidos grasos insaturados en el biofilm por radicales libres, reduciendo así el daño de Dox a los cardiomiocitos. El mecanismo queda por estudiar en profundidad.
Referencias:
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