El efecto protector de Herba Cistanches sobre la miotoxicidad inducida por estatinas in vitro
Mar 24, 2022
Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correo electrónico:audrey.hu@wecistanche.com
Elaine Wat a,b,1, Chun Fai Ng a,b,1, Chi Man Koon a,b, Eric Chun Wai Wong a,b, Brian Tomlinson c, Clara Bik San Lau a,b,n
un Instituto de Medicina China, Universidad China de Hong Kong, Shatin, Nuevos Territorios, Hong Kong
b Laboratorio Estatal Clave de Fitoquímica y Recursos Vegetales en China Occidental, Universidad China de Hong Kong, Shatin, Nuevos Territorios, Hong Kong
c División de Farmacología Clínica, Departamento de Medicina y Terapéutica, Universidad China de Hong Kong, Shatin, Nuevos Territorios, Hong Kong
Resumen:
Relevancia etnofarmacológica: HerbaCistanches(HC,Cistanchedeserticola, oCistanchetubulosa) es una hierba china utilizada tradicionalmente para problemas musculares. Estudios previos demostraron que el extracto de HC podría reducir el daño muscular y mejorar el almacenamiento de ATP en ratas después del ejercicio. Sin embargo, nunca se ha investigado su efecto sobre la toxicidad muscular inducida por las estatinas.
Apuntar:El objetivo de este estudio fue determinar si el extracto acuoso de HC (HCE) podría prevenir la toxicidad inducida por simvastatina en células de músculo esquelético de rata L6 y si el verbascósido es el componente bioactivo principal que contribuye a los efectos.
Materiales y métodos:Se realizó MTT para determinar los efectos de HCE ({{0}}–2000 mg/ml) o verbascósido (0–160 mM) en células L6 tratadas con simvastatina (10 mM). Se realizaron el ensayo de apoptosis de anexina V-FITC/PI y el ensayo de caspasa 3 para determinar el papel protector de HCE en la muerte celular inducida por simvastatina y para evaluar si HCE ejercía su efecto protector a través de la vía de caspasa. Se midió la producción de ATP para investigar si HCE podría prevenir la reducción inducida por simvastatina en la producción de ATP in vitro.
Resultados:La simvastatina aumentó significativamente la muerte celular apoptótica en las células L6. HCE ejerció significativamente una reducción dependiente de la dosis en las células apoptóticas inducidas por simvastatina, posiblemente a través de una vía de caspasa-3. La simvastatina redujo la producción de ATP en las células L6, lo que fue prevenido de forma dependiente de la dosis por HCE. Solo hubo una tendencia pero no un efecto significativo (excepto en dosis altas) de verbascósido en la protección de la toxicidad muscular inducida por simvastatina.
Conclusiones:En conclusión, demostramos por primera vez que HCE podría ejercer un efecto protector dependiente de la dosis sobre la toxicidad inducida por simvastatina in vitro, lo que era poco probable debido a la presencia de verbascósido. Nuestro estudio sugirió el uso potencial de HC en la situación de toxicidad muscular inducida por simvastatina.
Palabras clave:HerbaCistanches, Estatina Colesterol, Hiperlipidemia, Toxicidad muscular, Verbascoside, Caspasa-3
1. Introducción
Los inhibidores de la HMG-CoA reductasa (estatinas), que son la clase de medicamentos recetados más vendidos en el mundo en la historia, están bien documentados por ser beneficiosos para pacientes de ambos sexos a diferentes edades con riesgo moderado y alto de enfermedad cardiovascular (ECV) (Golomb y Evans, 2008). Luego se desarrollaron y aprobaron clínicamente diferentes estatinas, incluidas pravastatina, atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, rosuvastatina y simvastatina. En general, todas las estatinas actúan inhibiendo la reducción de HMG-CoA a ácido mevalónico durante la etapa temprana de la vía del mevalonato para reducir la producción de colesterol (Kromer y Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). Aunque las estatinas suelen tolerarse bien, uno de los efectos adversos clínicos más importantes y conocidos es la toxicidad del músculo esquelético (rabdomiolisis) (Kobayashi et al., 2008). Las anomalías del músculo esquelético pueden variar desde una mialgia benigna hasta una miopatía grave. Si bien se propone una mezcla de mecanismos que podrían ser responsables de los efectos adversos musculares de las estatinas, se cree que los mecanismos mitocondriales desempeñan un papel importante (Golomb y Evans, 2008). El mevalonato no solo es un precursor del colesterol, sino también de otros compuestos, como selenoproteínas, dolicol y ubiquinona (Kaufmann et al., 2006; Vaklavas et al., 2009). Por lo tanto, la capacidad de las estatinas para inhibir el mevalonato también inhibiría la producción de selenoproteínas como la glutatión peroxidasa (GPx), que son enzimas importantes para mantener el mecanismo de defensa antioxidante (Kromer y Moosmann, 2009). Las estatinas también podrían conducir al agotamiento de la ubiquinona, provocando una reducción del consumo de oxígeno y la síntesis de ATP (Beltowski et al., 2009). Además, cada vez más estudios in vitro e in vivo demostraron que las estatinas también podrían actuar directamente sobre las mitocondrias de los tejidos para inducir la transición de permeabilidad de la membrana (MPT) dependiente de Ca2+ de una manera dependiente de la dosis (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006). ). También se asocia con un aumento de las especies reactivas de oxígeno (ROS) y el estrés oxidativo mitocondrial, lo que conduce a la muerte celular y, por lo tanto, contribuye a la lesión hepática y muscular (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006).
HerbaCistanches, toda la planta seca de Cistanche deserticola YC Ma, o Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (familia Orobanchaceae), son plantas parásitas que crecen predominantemente en las zonas desérticas del norte y noreste de China (Siu y Ko, 2010).HerbaCistancheses una hierba tónica china vigorizante de Yang que se usa principalmente para tratar la deficiencia renal con síntomas como impotencia, infertilidad, eyaculación precoz. La naturaleza espesa y empalagosa de la hierba también humedece los intestinos y ayuda a aliviar el estreñimiento. También es una hierba china que tradicionalmente se prescribe a los pacientes para el dolor en la región lumbar y las rodillas y es una hierba comúnmente utilizada en formulaciones chinas para el tratamiento de problemas musculares (Siu y Ko, 2010; Xiong et al., 1998). Curiosamente, esto también es consistente con los estudios científicos modernos que demostraron las actividades antifatiga de un extracto rico en polisacáridos y feniletanoide deHerbaCistanchesen ratas después del ejercicio al disminuir el daño muscular y mejorar el almacenamiento de ATP (Cai et al., 2010). Un trabajo reciente demostró que un extracto de metanol de Herba Cistanches podría mejorar la generación de ATP mitocondrial (Leung y Ko, 2008). Siu y Ko (2010) demostraron queHerbaCistanchestambién podría mejorar el estado del glutatión mitocondrial al mediar los niveles de síntesis de glutatión y GPx, protegiendo así los tejidos del estrés oxidativo en los corazones de las ratas. Siu y Ko (2010) también demostraron queHerbaCistanchespodría disminuir el contenido de Ca2+ mitocondrial, reduciendo así el MPT dependiente de Ca2+. Es más,HerbaCistanchesTambién se demostró que es un fuerte antioxidante y eliminador de radicales libres en varios órganos, reduciendo el estrés oxidativo y las actividades de ROS en estudios in vivo (Lu et al., 1995; Sui et al., 2011). Más interesante aún, en un intento por determinar la fracción activa que contribuye a la actividad antifatiga deHerbaCistanches, se encontró que el verbascósido era el componente principal de la fracción activa (Cai et al., 2010). También se ha demostrado que el verbascósido reduce la fatiga muscular en los sapos, posiblemente debido a sus actividades antioxidantes (Liao et al., 1999), lo que sugiere que el verbascósido podría ser el componente bioactivo que contribuye a los efectos beneficiosos de Herba Cistanches.
El objetivo de este estudio fue determinar si el uso del extracto de agua de hierbas Cistanches (HCE) podría reducir la toxicidad muscular inducida por la simvastatina in vitro. Se planteó la hipótesis de que el uso de HCE podría corregir los efectos secundarios de la toxicidad muscular causada por la simvastatina. También se intentó determinar si los efectos beneficiosos deHerbaCistanchesse atribuyen a la presencia de verbascoside.
2. Materiales y métodos
2.1. Autenticación y preparación de materiales a base de hierbas.
Materia prima de hierbas deHerbaCistanchesse compró a un proveedor de renombre en Guangzhou, China.HerbaCistanchesfue autenticado químicamente usando cromatografía de capa fina (TLC) de acuerdo con la Farmacopea China (CP), 2010, con verbascoside y echinacoside como marcadores químicos (datos no mostrados). Tras la autenticación química, el espécimen de vale de herbario deHerbaCistanchesfue depositado en el Museo del Instituto de Medicina China de la Universidad China de Hong Kong (CUHK), con el número de muestra de comprobante 2014–3434.
Brevemente, se remojó 1 kg de la hierba cruda durante 1 h, seguido de extracción dos veces por calentamiento durante 1 h a reflujo a 100 grados usando 10 \mu l de agua destilada para cada extracción. Los extractos acuosos (HCE) se combinaron y filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida a 60 grados. El extracto concentrado se liofilizó a sequedad. El porcentaje de rendimiento fue del 50,1 por ciento p/p. Se usó una pequeña cantidad para determinar la cantidad de verbascósido y equinacósido usando cromatografía líquida de ultra rendimiento (UPLC). Todo el polvo extraído se envasó al vacío y se almacenó hasta su uso.
2.2. Análisis UPLC del extracto acuoso
Los análisis UPLC se realizaron utilizando el sistema LC Waters Acquity Ultra Performance (Waters, EE. UU.). Todos los disolventes necesarios para los análisis UPLC se adquirieron en el Departamento de Química de la Universidad China de Hong Kong. El verbascoside y el echinacoside se adquirieron del Instituto Nacional para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos de China. La solución de muestra se inyectó en una columna Waters Acquity UPLC BEH C18 (10{{20}} 2,1 mm2 d.i., tamaño de partícula 1,7 mm) con precolumna Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard ( 5-2.1 mm2 id, tamaño de partícula 1.7 mm). Todos los disolventes se prefiltraron con 0disco de filtro Millipore de 0,45 mm (Millipore) y se desgasificaron. La elución en gradiente se llevó a cabo utilizando los siguientes sistemas de solventes: fase móvil A – acetonitrilo; fase móvil B – agua bidestilada/ácido fórmico (99,9/ 0,1; v/v). La elución se realizó con un procedimiento de gradiente como sigue: 0–5 min, 88 por ciento B; 5 a 10 min, del 88 % de B al 83 % de B. El caudal utilizado fue de 0,4 ml/min y la detección se realizó a 331 nm de acuerdo con CP (2010). Cada muestra (5 ul) se inyectó en la columna después de la filtración a través de un filtro de disco de 0,2 mm. La identificación de los marcadores químicos se llevó a cabo comparando los tiempos de retención y la absorbancia UV de los picos desconocidos con los de los estándares. Se trazó una curva de calibración por una serie de concentraciones de verbascósido y equinacósido (40, 20, 10, 5, 2,5 y 1,25 mg/ml) para la cuantificación. La cuantificación de verbascoside y echinacoside dentro del extracto de hierbas se realizó por triplicado. El sistema fue monitoreado por una computadora equipada con el software Waters MassLynx para la recopilación, integración y análisis de datos.
2.3. Cultivo de células
La línea celular de músculo esquelético de rata L6 se adquirió de American Type Culture Collection (ATCC, Manassa, VA, EE. UU.). Las células se mantuvieron a una densidad subconfluente en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, ATCC, Manassas, VA, EE. UU.) complementado con suero fetal bovino (FBS) al 10 por ciento v/v y penicilina-estreptomicina (P/S) al 1 por ciento, y incubado a 37 grados en una atmósfera humidificada que contiene 5 por ciento de CO2 y 95 por ciento de aire.
Para determinar los efectos de la HCE sobre la toxicidad muscular inducida por estatinas, las células L6 se trataron con simvastatina a 10 μM durante 48 h para inducir la toxicidad. Se añadió HCE (en concentraciones 0, 250, 500, 1000 y 2000 ug/ml) o verbascósido (en concentraciones 0, 20, 40, 80 y 160 μM) como co-tratamiento con una estatina para determinar si el El extracto de hierbas podría prevenir la toxicidad inducida por estatinas en las células del músculo esquelético y si el verbascósido podría ejercer efectos protectores similares a los del extracto acuoso de hierbas.
Efecto protector del extracto de Herba Cistanche sobre la toxicidad inducida por simvastatina in vitro
2.4. Citotoxicidad in vitro
Células L6 (1x105/pocillo) se sembraron en {{0}}placas de cultivo de fondo plano (Iwaki, Japón) durante la noche, seguido de tratamiento con 10 μM de simvastatina, junto con o sin varias dosis de HCE ( 0-2000 ug/ml) o verbascoside (0-160 μM), durante 48 h. Se añadió medio simple (DMEM) a los pocillos de control. El extracto de hierbas y el compuesto se disolvieron en DMEM.
Tras el tratamiento de 48 h, se descartó el medio de todas las células y se añadieron 30 ul de 5 mg/ml de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,{{ Se añadió bromuro de 8}difenil-tetrazolio (MTT; Sigma, EE. UU.) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) a cada pocillo y las placas se incubaron durante 3 ha 37 grados. A continuación, se eliminó el sobrenadante y se añadieron 100 ul de DMSO a cada pocillo para disolver los cristales de formazán de color púrpura (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.). La absorbancia de cada muestra se leyó a 540 nm utilizando un lector de microplacas (Biotek μ-Quant, EE. UU.). Los resultados se expresaron como el porcentaje de absorbancia de MTT con respecto a las células de control.
2.5. Ensayo de tinción FITC/PI de anexina-V
Células L6 (3 x105/bien) fueron tratados con simvastatina, junto con o sin varias dosis de HCE o verbascoside. A continuación, las células se recogieron, lavaron y tiñeron con el kit FITC de anexina-V de acuerdo con el protocolo del fabricante (Trevigen, MD, EE. UU.). Brevemente, las células se lavaron dos veces con tampón de unión 1x y se incubaron en 100 ul de solución de marcado que contenía 1 ul de conjugado FITC de anexina-V y 10 ul de PI en la oscuridad durante 15 min a temperatura ambiente. La fluorescencia de las muestras se detectó por citometría de flujo (Becton Dickinson FACSCanto II, EE. UU.).
2.6. Ensayo de actividad de caspasa 3
La actividad de caspasa 3 se determinó utilizando un ensayo enzimático inmunoabsorbente fluorométrico (Sigma) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, las células L6 (3 105/pocillo) tratadas con simvastatina, junto con o sin varias dosis de verbascósido HCE se lisaron usando el tampón de lisis. La 7-amino-4-metilcumarina libre (AMC) generada a través de la escisión proteolítica del sustrato por Caspase 3 se midió y cuantificó fluorométricamente con la longitud de onda de excitación a 360 nm y la longitud de onda de emisión a 460 nm con una microplaca BMG FLUOstarOptima. lector (BMG LABTECH GmbH, Alemania).
2.7. Ensayo de ATP celular
Células L6 (3x105/bien) fueron tratados con simvastatina, junto con o sin varias dosis de HCE o verbascoside. Después del tratamiento, se recogieron las células y se midió el contenido de ATP usando el kit colorimétrico comercialmente disponible (Abcam, Reino Unido) midiendo el contenido de fosfato de glicerol de las células lisadas y leyendo a 570 nm usando un lector de microplacas (Biotek μ-Quant, EE. UU. ). La medición de la producción de ATP se expresó como un porcentaje relativo al grupo de control.
2.8. análisis estadístico
Los datos se presentaron como media7SD, se utilizó Prism 5 for Window (versión 5.0c, GraphPad Software, Inc., EE. UU.) para el análisis estadístico. Las diferencias significativas entre todos los grupos se evaluaron mediante ANOVA unidireccional, seguido de la prueba de comparación múltiple de Bonferroni. Se consideró estadísticamente significativa una probabilidad de po0.05.
3. Resultados
3.1. Análisis UPLC del extracto acuoso de Herba Cistanches
La Fig. S1A mostró el perfil UPLC de una mezcla estándar que contenía equinacósido y verbacósido. Los puntos de tiempo de retención de cada uno de estos marcadores se compararon con el perfil UPLC deHerbaCistanchesextracto acuoso (Fig. S1B). La cantidad de echinacósido y verbacósido dentroHerbaCistanchesse encontró que el extracto acuoso era {{0}}.45 por ciento p/py 0.085 por ciento p/p, respectivamente.
3.2. Efecto de HCE y verbascósido sobre la citotoxicidad in vitro de simvastatina en células de músculo esquelético L6
Como se muestra en la Fig. 1A, la simvastatina provocó una citotoxicidad significativa en las células L6 como se refleja en la reducción significativa de la viabilidad de las células L6 con simvastatina 10 mM. El tratamiento con HCE previno significativamente y de forma dependiente de la dosis la citotoxicidad inducida por simvastatina a 500, 1000 y 2000 mg/ml. Verbascoside ejerció una tendencia a mejorar la viabilidad de las células L6 tratadas conjuntamente con simvastatina. Sin embargo, ninguna de las concentraciones había alcanzado significación estadística (Fig. 1B).
Fig. 1. Efecto protector de (a) HCE; y (b) verbascósido sobre la citotoxicidad inducida por simvastatina en células L6. Los valores representan medias7SD (n¼3). Una diferencia significativa entre el tratamiento con simvastatina sola y el grupo de control utilizando la prueba t de Student: ### po0.{{10}}01. Diferencia significativa entre todos los grupos tratados con simvastatina con o sin cotratamiento con verbascósido HCE usando ANOVA unidireccional: ** po0.01,*** po0.001.
3.3. Efecto de HCE y verbascósido sobre la muerte celular inducida por simvastatina en células de músculo esquelético L6
Para examinar el modo de muerte celular inducida por simvastatina y determinar el papel protector de HCE o verbascósido en la muerte celular inducida por simvastatina, se detectó la proporción de células apoptóticas mediante tinción con yoduro de propidio (PI). Los resultados mostraron que la simvastatina indujo un aumento significativo en la proporción de células apoptóticas tempranas (positivas para anexina V-FITC y negativas para PI, Q4-2) y células muertas/apoptóticas tardías (positivas para anexina V-FITC y positivas para PI, Q2-2). 2) en comparación con el grupo de control. El cotratamiento con HCE redujo la proporción de células apoptóticas tempranas y apoptóticas tardías/muertas de manera dependiente de la dosis hasta 1000 mg/ml (Fig. 2A). Este efecto protector también se observó en los grupos de tratamiento conjunto con verbascósido. Sin embargo, ninguna de las concentraciones probadas había alcanzado significación estadística (Fig. 2B).
Fig. 2. Efecto de simvastatina con o sin HCE o cotratamiento con verbascósido sobre la externalización de fosfatidilserina en células L6. Las células se tiñeron con anexina-V FITC e I y se detectaron mediante citometría de flujo
3.4. Efecto de HCE y verbascósido sobre la actividad de caspasa 3 en células de músculo esquelético L6 tratadas con simvastatina
Como se muestra en la Fig. 3A, la simvastatina 10 mM indujo significativamente la actividad de la caspasa 3 en las células L6, lo que sugiere que la simvastatina indujo la apoptosis en las células L6 a través de la cascada de caspasas. Sin embargo, en células L6 tratadas conjuntamente con simvastatina y HCE, HCE redujo significativamente y de forma dependiente de la dosis la actividad de caspasa 3, lo que sugiere la capacidad de HCE para prevenir la apoptosis inducida por simvastatina a través de la cascada de caspasas. Por otro lado, aunque el verbascósido también ejerció una tendencia a reducir el aumento inducido por la simvastatina en la actividad de la enzima caspasa 3, solo la concentración a 160 mM alcanzó significación estadística (Fig. 3B).
Fig. 3. Efecto protector de (a) HCE; y (b) verbascósido sobre la actividad enzimática de caspasa 3 inducida por simvastatina en células L6. Los valores representan medias7SD (n¼3–5). Una diferencia significativa entre el tratamiento con simvastatina sola y los grupos de control utilizando la prueba t de Student: ###po0.001. Diferencia significativa entre todos los grupos tratados con simvastatina con o sin HCE o cotratamiento con verbascósido usando ANOVA unidireccional: *po0.05, **p o0.01, ***po0.001.
3.5. Efecto de HCE en la reducción inducida por simvastatina en la producción de ATP en células de músculo esquelético L6
La simvastatina (10 mM) redujo significativamente la producción de ATP en las células L6 en aproximadamente un 60 por ciento en comparación con el grupo de control (Fig. 4A). El cotratamiento con HCE atenuó de forma dependiente de la dosis la reducción en la producción de ATP en las células tratadas con simvastatina, de las cuales solo las concentraciones de 500, 1000 y 2000 mg/ml alcanzaron significación estadística. Por otro lado, aunque el verbascósido ejerció una tendencia a restaurar la producción de ATP a 50 mg/ml, no alcanzó significación estadística (Fig. 4B).
Fig. 4. Efecto protector de (a) HCE y (b) verbascósido sobre la reducción inducida por simvastatina en la producción de ATP en células L6. Los valores representan medias7SD (n¼3–5). Una diferencia significativa entre el tratamiento con simvastatina sola y los grupos de control utilizando la prueba t de Student: ###po0.001. Diferencia significativa entre todos los grupos tratados con simvastatina con o sin HCE o cotratamiento con verbascósido usando ANOVA de una vía: *po0.05, **po0.01.
4. Discusión
Con el aumento de la prevalencia de las enfermedades cardiovasculares (ECV) y los pacientes diagnosticados con hipercolesterolemia en todo el mundo, el uso de estatinas se ha vuelto más común. Aunque las estatinas en general se toleran muy bien, la lesión muscular es un efecto secundario asociado con el uso de estatinas que se informa con frecuencia y que puede ocurrir de forma aguda semanas o meses después de que se haya iniciado el fármaco (Fine, 2003). Los síntomas musculares pueden variar desde problemas leves, por ejemplo, dolor, sensibilidad o debilidad con o sin elevación de la creatina cinasa (CK), hasta la condición más grave de rabdomiólisis (Armitage, 2007; Hu et al., 2012). Debido a la aparición de estos efectos secundarios y a que no existe un tratamiento eficaz para la toxicidad muscular inducida por las estatinas, las estatinas siguen estando infrautilizadas. En una amplia encuesta sobre 10.409 sujetos franceses realizada a través de una entrevista telefónica, el 10 por ciento de los pacientes que recibieron tratamiento con estatinas informaron síntomas musculares, de los cuales el 30 por ciento de estos pacientes sintomáticos provocaron la interrupción del tratamiento (Rosenbaum et al., 2013).
Hemos demostrado por primera vez que el extracto acuoso deHerbaCistanches, una hierba china tradicional de uso común, podría ejercer un efecto protector contra la toxicidad inducida por simvastatina in vitro en las células del músculo esquelético L6, lo que sugiere el potencial deHerbaCistanchesextracto acuoso (HCE) por su papel protector toxicidad muscular inducida por estatinas, que es un efecto secundario común reconocido en pacientes que toman estatinas. La potente capacidad de HCE para proteger contra la toxicidad muscular inducida por estatinas sería, por lo tanto, de gran potencial.
De acuerdo con la teoría tradicional de la MTC, el Yang está relacionado con el metabolismo energético mitocondrial en el cuerpo, y se descubrió que la prescripción de hierbas vigorizantes del Yang mejora la generación de ATP mitocondrial (Ko y Leung, 2007). Curiosamente, observamos una reducción en la producción de ATP en las células del músculo esquelético L6 tratadas con simvastatina, y esta reducción en la producción de ATP mejoró significativamente con el tratamiento conjunto con HCE. En nuestro estudio, utilizando células de músculo esquelético de rata L6, demostramos una reducción en la viabilidad celular causada por la simvastatina. Esta reducción en la viabilidad celular mejoró significativamente con el co-tratamiento deHerbaCistanchesde manera dependiente de la dosis. Aunque el mecanismo exacto de la toxicidad muscular inducida por estatinas no se ha dilucidado por completo, se sugirió que la apoptosis inducida por estatinas de miocitos esqueléticos sanos es un factor que contribuye a causar miopatía, el efecto secundario más común que experimentan los usuarios de estatinas (Dirks y Jones, 2006) . En nuestro estudio, observamos un aumento significativo en las células apoptóticas inducidas por la simvastatina, que se asoció con una actividad de caspasa 3 significativamente elevada. Estos datos también son consistentes con estudios previos, que demostraron que varias estatinas podrían inducir la apoptosis en mioblastos esqueléticos, miotubos y en células musculares esqueléticas humanas primarias diferenciadas a través de la activación de las actividades de caspasa-9 y caspasa-3 (Dirks y Jones, 2006). Nuestro HCE fue capaz de prevenir este aumento inducido por simvastatina en la apoptosis activada por caspasa-3 de una manera dependiente de la dosis.
HerbaCistanches
Además, la literatura previa sugirió que el verbascósido es uno de los principales componentes activos dentroHerbaCistanches. El verbacósido, también conocido como acteósido, pertenece a un miembro de los glucósidos feniletanoides, un grupo natural de compuestos polifenólicos que es soluble en agua (Liao et al., 1999). Previamente, se ha demostrado que el verbascósido es un potente antioxidante que podría exhibir fuertes actividades antioxidantes y de eliminación de ROS (Liao et al., 1999). En nuestro estudio, para determinar si el verbascósido es el componente principal dentro de nuestro HCE que contribuye a los efectos beneficiosos observados, probamos los efectos del verbascósido en concentraciones de 0–160 mM. Dado que hemos demostrado que nuestro HCE es activo en el rango de concentración de 250–2000 mg/ml, según nuestros resultados de HPLC que sugirieron que nuestro HCE contenía verbascósido en una concentración de 0,085 % en peso /peso, la concentración activa de verbascósido debe oscilar entre 0,2125 y 1,7 mg/ml (es decir, 0,34-2,72 mM), ¿debería ser el componente activo el verbascósido? Sin embargo, no pudimos observar un efecto beneficioso significativo del verbascósido con el rango de concentración probado, aunque sí observamos una tendencia dependiente de la dosis para un efecto beneficioso del verbascósido en las células del músculo esquelético L6. Estos datos sugirieron que es poco probable que el efecto beneficioso de nuestro HCE observado en las células esqueléticas L6 se atribuya al efecto del verbascósido solo, lo que sugiere que los componentes distintos del verbascósido podrían ser responsables de los efectos beneficiosos observados. También es posible que el verbascósido pueda interactuar con otros compuestos bioactivos dentro del extracto para contribuir a los efectos beneficiosos. Los experimentos adicionales que utilicen el fraccionamiento guiado por bioensayo serán útiles para proporcionar más información sobre el descubrimiento de los componentes bioactivos responsables de contribuir a los efectos protectores observados de la HCE sobre la toxicidad muscular inducida por la simvastatina.
En conclusión, el presente estudio indica que la HCE podría ejercer potentes efectos protectores sobre la reducción inducida por la simvastatina en la viabilidad de las células musculares in vitro. Estos resultados proporcionan la evidencia preliminar que sugiere que nuestro extracto acuoso de HC podría tener valor terapéutico como alimento funcional o nutracéutico para pacientes hiperlipidémicos que deben retirarse del tratamiento con estatinas debido a la miotoxicidad inducida por estatinas.
Agradecimientos Este estudio fue apoyado financieramente por la Oficina de Alimentos y Salud de la RAEHK, el Fondo de Investigación Médica y de Salud no. 11120831.
Referencias
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