Efecto Terapéutico Y Mecanismo De La Extracción De Ligusticum Wallichii Y La Prescripción En Testosterona Inducida 57 HairL/6 B Cin C

RESUMEN:

OBJETIVO Observar los efectos de la aplicación local del extracto de Ligusticum wallichii y su extracto compuesto (incluyendo Ligusticum wallichii,Cistanche, Ginger, Platycladus orientalis, Ginseng, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflor/6 en C57Llorum) ratones modelo de alopecia seborreica y luego explorar los mecanismos involucrados en ella.

MÉTODOS Se indujo el modelo de alopecia seborreica de ratones C57BL/6 aplicandotestosteronasolución en la espalda durante 21 días. Después del tratamiento de los conceptos de diferencia de extracto de Ligusticum wallichii y su extracto de contrato, se evaluó la longitud y la cobertura del cabello nuevo en ratones. hair gtr Piel La humedad, el aceite y los cambios de temperatura se midieron mediante una prueba cutánea. Los cambios histológicos, como el grosor de la piel, la forma del folículo piloso y el tamaño de los ratones de cada grupo, se midieron al microscopio. Los niveles de -MSN, TGF- 1 y VEGF en la piel de ratones después

La administración fue detectada por ELISA.

RESULTADOS El extracto alcohólico de Ligusticum wallichii promovió el crecimiento del cabello de los ratones con alopecia, y el efecto del grupo de dosis baja fue mejor que el del grupo de dosis alta y el grupo de fórmula compuesta. Los resultados de los valores de humedad, aceite y temperatura mostraron que la humedad de la piel de los ratones modelo se redujo, el contenido de aceite aumentó y el templo aumentó ligeramente. Después del tratamiento, el contenido de agua, el contenido de aceite y la temperatura de los ratones volvieron a los valores normales. Los resultados histológicos mostraron que Ligusticum wallichii y su forma compuesta podrían aumentar el grosor de la piel y adormecer

folículos pilosos en la fase de crecimiento de ratones. Además, las dosis altas y bajas de Ligusticum wallichii y la fórmula del compuesto podrían promover los contenidos de -MSN, TGF- 1 y VEGF en la piel de los ratones en diferente medida.

CONCLUSIÓN La aplicación tópica demedicina tradicional chinaLigusticum wallichii puede promover el crecimiento del cabello en ratones con alopecia androgenética al restaurar la moi y la temperatura en modelos de ratones con alopecia y aumentar el VEGF, -MSN y TGF de la piel- 1.

PALABRAS CLAVE: Ligusticum wallichii; C57BL/6 ratones; alopecia seborreica;testosterona

Medicina tradicional chinacree que la formación de la caída del cabello está relacionada con ladeficiencia de hígado y riñóny eldebilidad del qi de sangre. Muchas medicinas tradicionales chinas tienen las funciones dehígado y riñón nutritivos, esencia nutritiva y sangre, enfriar la sangre y promover la circulación sanguínea, y se utilizan a menudo para la alopecia y la leucoplasia. Chuanxiong tiene las características de una naturaleza cálida, un sabor picante y un sabor ligeramente amargo. Se registró por primera vez en "Materia médica de Shen Nong", y se puede usar en combinación con otros medicamentos para promover la circulación sanguínea, promover el qi, expulsar el viento y aliviar el dolor [7]. Otras medicinas tradicionales chinas como el jengibre tienen las funciones de aliviar el exterior y disipar el resfriado, calentar el medio y aliviar el vómito, calentar los pulmones y aliviar la tos [8]; Polygonum multiflorum nutre la sangre y repone la esencia [9]

Arborvitae deja sangre fría y cabello negro [9-10]; Salvia miltiorrhiza promueve la circulación sanguínea, disipa la estasis sanguínea y alivia el dolor[11];

. La investigación moderna ha encontrado que muchosmedicina tradicional chinaLos compuestos o recetas individuales pueden promover el crecimiento de los folículos pilosos y el cabello, y tener un efecto significativo sobre la caída del cabello. Algunomedicinas tradicionales chinaspuede inhibir la actividad de la 5 -reductasa, tener actividades antiinflamatorias, antibacterianas, antioxidantes y otras actividades fisiológicas, todo lo cual ayuda a prevenir la caída del cabello. Dado que los ingredientes activos de la medicina tradicional china tienen efectos leves y tienen efectos tanto nutricionales como curativos, se han utilizado cada vez más en cosméticos para el crecimiento del cabello en los últimos años [13].

Cistanche Antiedad

En este experimento, el modelo AGA se estableció en ratones C57BL/6 aplicandotestosteronaen la espalda, y se estudiaron los efectos del extracto de Chuanxiong y la fórmula compuesta (que incluye Chuanxiong, jengibre, hoja de oriental orientalis, ginseng, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflorum) y sus efectos. mecanismo con el fin de aportar nuevas ideas para el desarrollo de nuevos preparados y nuevas formulaciones para la prevención de la caída del cabello.

1 Materiales

1.1 Reactivos y fármacos

Chuanxiong, Ginger, Cistanche, Arborvitae, Panax ginseng, Salvia miltiorrhiza y Polygonum multiflorum se adquirieron de CHENGDU WECISTANCHE BIOTECH; La testosterona (Lote: 58-22-0) se compró a Ron Reagent Company; La tintura de minoxidil (lote: 20210615) se adquirió de Zhejiang Wansheng Pharmaceutical Co., Ltd.; el etanol anhidro (número de lote: 2021-12-1) se adquirió de Jindong Tianzheng Fine Chemical Reagent Factory; el hidrato de cloral (número de lote: 302-17-0) se adquirió de McLean Reagent Company; - El kit de hormona estimulante de melanocitos (-MSH) se adquirió de CUSABIO Reagent Company (número de lote: N20016218); El kit del factor de crecimiento transformante- 1 (TGF- 1) se adquirió de Signalway Antibody Reagent Company (número de lote: 211230); El kit del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) se adquirió de Signalway Anti-body Reagent Company (número de lote: 211230).

Aperitivo Cistanche

1.2 Instrumentos

Lector de microplacas (Thermo Fisher Scientific), máquina de inclusión EG1160 (Leica, Alemania); Máquina automática de sellado de tipo cerrado Tissue-Tek® GlasTM 6410 (Sakura, Japón); esparcidor YD-AB (Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd.); Balanza analítica 1/100, 000 (sartorius, MSX), máquina de limpieza ultrasónica (tipo KQ-100), probador de piel (Fuxi), manta calefactora (PTHW HEAT-ER), microscopio óptico (BX53 , Olympus), evaporador rotatorio, homogeneizador de tejidos (KFBIO), centrífuga (Cence, H1650R).

1.3 Animales

Ratones C57BL/6 (clase SPF), macho, 5-6 semanas de edad, físico

La cantidad de 18-22 g fue proporcionada por el Experimental Animal Center of Southern Medical University, número de licencia: SCXK (Guangdong) 2016-0041.

2 Método experimental

2.1 Preparación de la solución medicinal

Para el extracto de Chuanxiong (fármaco único), pese los materiales medicinales de Chuanxiong, agregue 4 veces la cantidad de etanol al 75 por ciento (v/v) y caliente a reflujo para la extracción durante 4 h. Para el extracto compuesto, pese Chuanxiong, jengibre, hojas de árbol de la vida, ginseng, Salvia y Polygonum multiflorum (la proporción es 1:1:1:1:1:1) y agregue 4 veces la cantidad de etanol al 75 por ciento (v/v) a reflujo para extracción 4 horas. Los extractos de fármaco único y compuesto se filtraron con gasa para eliminar los residuos de fármaco residual y se concentraron en un evaporador rotatorio. El extracto de Chuanxiong se concentró a 1 g·mL-1 (incluido el fármaco crudo), como el grupo de dosis alta de Chuanxiong; antes del uso, el grupo de dosis alta se diluyó a 0.5 mg·mL-1 como el grupo de dosis baja de Chuanxiong. Para el grupo de compuestos de Chuanxiong, Ginger, Arborvitae, Panax ginseng, Danshen y Polygonum multiflorum, concentrado a 1 g·mL

-1 (incluida la cantidad total de medicamentos crudos). Guarde el extracto preparado en un refrigerador a 4 grados.

Cistanche mejora la testosterona

2.2 Modelado

Excepto por el grupo blanco, los ratones C57BL/6 en otros grupos fueron anestesiados por inyección intraperitoneal de hidrato de cloral (4 por ciento, p/v), y el vello de la espalda se eliminó con crema depilatoria a una dosis de 10 mg·kg.

-1 dosis de testosterona se untó en la espalda de los ratones durante 21 días. Después de 21 días, cuando el dorso del ratón estaba liso y rosado y el pelo ya no crecía, el modelado se consideró exitoso.

2.3 Agrupamiento y administración de animales

Los ratones macho C57BL/6 (grado SPF) se dividieron aleatoriamente en 6 grupos, con 6 ratones en cada grupo, que se almacenaron en jaulas separadas y se numeraron [grupo en blanco, grupo modelo, grupo positivo para minoxidil, grupo chuanxiong de dosis baja y grupo alto -dosis grupo chuanxiong. , Grupo compuesto (Chuanxiong: Ginger: Arborvitae: Ginseng: Salvia: Polygonum multiflorum=: 1: 1: 1: 1: 1)].

Después de un modelado exitoso, los ratones del grupo modelo no recibieron administración; los otros grupos de ratones fueron untados con 0.3 mL de solución de minoxidil (2 por ciento), dosis altas y bajas de extracto de Chuanxiong y formulaciones compuestas en sus espaldas, respectivamente. Durante 12 días, una vez al día. Después de la administración, se cubrieron las espaldas de los ratones con un envoltorio de plástico del tamaño adecuado para evitar la pérdida de la solución del fármaco por la espalda. Durante el período de administración, se observó y registró todos los días el crecimiento del pelo en la espalda de los ratones de cada grupo.

2.4 Determinación de la nueva longitud y cobertura del cabello

En los días 8, 10 y 12 de la administración, se extrajeron aleatoriamente 10 cabellos de cada ratón y se midió la longitud del cabello (mm) con una regla. El efecto promoción EE1 (Efecto potenciador) se calcula según la siguiente fórmula:

Efecto potenciador (longitud del cabello) =

Longitud del cabello (grupo administrado)

Longitud del cabello (Conjunto de modelos)

Fórmula 1)

En la fórmula (1), la longitud del pelo (grupo de administración) es el valor medio de la longitud del pelo recién nacido de ratones en cada grupo de medicación (n=6); la longitud del cabello (grupo modelo) es el valor medio de la longitud del cabello recién nacido de ratones en el grupo de control (modelo) ( n=6).

En los días 4, 8 y 12 de la administración, el software imageJ calculó el área cubierta por el cabello recién nacido en la parte posterior de los ratones, y la cobertura del cabello (porcentaje) y el efecto de promoción EE2 se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula :

Cobertura del cabello (porcentaje)=Área del cabello Área de depilación de la espalda

Fórmula (2)

Efecto de promoción (tasa de cobertura del cabello)=tasa de cobertura del cabello (grupo de administración) tasa de cobertura del cabello (grupo de modelos)

En la fórmula (3), el área de cabello en la fórmula (2) es el área cubierta por el cabello recién nacido en la parte posterior del ratón, y el área depilada en la parte posterior es el área de toda el área afeitada en la parte posterior del ratón. ratón; en la fórmula (3), la cobertura de cabello (grupo de administración) es el área de cada El porcentaje promedio de cobertura de cabello nuevo en el grupo de administración (n=6), y la cobertura de cabello (grupo de control) fue el valor promedio del porcentaje de cabello nuevo en el grupo de control (modelo) (n=6).

2.5 Determinación de la humedad, el aceite y la temperatura de la piel

Después del tratamiento de 12-días de ratones, se utilizó un probador de piel (Fuxi) para medir y registrar los valores de humedad, aceite y temperatura de la piel de la espalda de los ratones, para investigar los diferentes efectos de la testosterona y las drogas en estos indicadores de la piel, y para evaluar el efecto de las drogas en los ratones modelo AGA. el efecto terapéutico.

2.6 Observación histológica de piel de ratón

Después de 12 días de tratamiento, los ratones fueron sacrificados, inmediatamente se retiró la piel del dorso, se fijó con solución de paraformaldehído al 4 por ciento, se deshidrató, se incrustó en parafina, se seccionó, se tiñó con hematoxilina-eosina (HE) y los cortes teñidos se colocaron en una totalmente automático La estructura de la piel, los cambios de grosor y el crecimiento del folículo piloso de ratones en diferentes grupos se observaron escaneando en un escáner de diapositivas (KFBIO).

2.7 Determinación de los factores -MSH, TGF- 1 y VEGF en piel de ratón

Los factores -MSH, TGF- 1 y VEGF se operaron de acuerdo con las instrucciones relevantes del kit Mouse -MSH, el kit Mouse TGF- 1 y el kit Mouse VEGF, respectivamente.

2.8 Método de procesamiento estadístico

Se utilizó el software estadístico SPSS 21.0 para el análisis estadístico, y los datos experimentales se expresaron como media ± desviación estándar (x ± s).

Apoyo:

wallence.suen@wecistanche.com