Los glucósidos totales y los polisacáridos de Cistanche Deserticola previenen la osteoporosis

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Fujiang Wang 1, Pengfei Tu, Kewu Zeng*, Yong Jiang**

RESUMEN

Relevancia etnofarmacológica:La medicina tradicional china Cistanche deserticola YC Ma tiene el efecto de "tonificar los riñones y fortalecer los huesos". Sin embargo, los extractos activos específicos de C. deserticola y los mecanismos para el tratamiento de la osteoporosis no están claros.

Objetivo del estudio:Queríamos identificar los extractos componentes efectivos de C. deserticola para el tratamiento de la osteoporosis y los posibles mecanismos.

Materiales y métodos:Nuestro grupo investigó los extractos de C. deserticola con actividad antiosteoporótica, incluidos los glucósidos totales (TG), los polisacáridos (PS) y los oligosacáridos (OS) en ratones propensos a la senescencia acelerada del ratón 6 (SAMP6). Tricrómico de Goldner, tinción de Van Gieson (VG), safranina O-Fast Green y tinción de von Kossa se realizaron para investigar la formación de la estructura ósea y los depósitos de calcio. Se recogió suero para detectar marcadores bioquímicos. La microarquitectura ósea se detectó mediante micro-CT. Expresiones de proteína morfogenética ósea-2 (BMP-2), osteocalcina (OCN), osteoprotegerina (OPG), receptor activador del ligando del factor nuclear κ B (RANKL), p-glucógeno sintetasa quinasa{{11 }} (p-GSK-3) y p- -catenina se analizaron mediante transferencia Western e inmunohistoquímica.

Resultados:Los TG y los PS mejoraron los daños histopatológicos óseos, promovieron la formación de hueso nuevo, fibra colágena y condrocitos, y aceleraron los depósitos de calcio. Además, alteraron notablemente los biomarcadores del recambio óseo y mejoraron de manera efectiva la microarquitectura ósea. El estudio de otros mecanismos mostró que los TG y los PS redujeron significativamente las expresiones de RANKL, p- -catenina, así como también aumentaron la expresión de BMP-2, OCN, OPG y p-GSK{{ 4}} (Ser9).

Conclusión:Los hallazgos de este estudio sugieren que los TG y los PS pueden promover la formación de hueso osteoclastogénico y mejorar el daño de la microestructura ósea en ratones SAMP6, y su efecto terapéutico sobre la osteoporosis es a través de la activación de la vía de señalización Wnt/-catenina.

lata de cistanchepromover el hueso osteoclastogénicoformación y mejoradaño a la microestructura ósea.

1. Introducción

La osteoporosis es una enfermedad común en personas de edad avanzada que pone en grave peligro la salud de la humanidad (Ye et al., 2020). Los pacientes con osteoporosis pueden estar completamente asintomáticos antes de la fractura, por lo que la prevención y el tratamiento efectivos de la osteoporosis son primordiales (Tella y Gallagher, 2014).

Las investigaciones muestran que el aumento de la reabsorción ósea y la disminución de la formación ósea dan lugar a un desequilibrio en la remodelación ósea, lo que lleva a la osteoporosis (Sims y Gooi, 2008). Los osteoblastos y los osteoclastos son dos tipos de células que son fundamentales para la formación y resorción ósea. La vía wnt/-catenina es esencial para el crecimiento, desarrollo y mantenimiento del tejido óseo (Cadigan y Nusse, 1997), y también juega un papel clave en la regulación de la diferenciación de las células estromales de la médula ósea (BMSC, por sus siglas en inglés) del perro beagle (Jing et al. , 2018). GSK-3 previene la degradación de -catenina. -La catenina ingresa posteriormente en el núcleo y luego puede asociarse con el factor de unión del factor de células T/potenciador de linfoides y regula la expresión de los genes diana de Wnt. Mientras tanto, se encuentra que la señalización de Wnt/ -catenina disminuye la diferenciación de osteoclastos al estimular la producción y secreción de OPG (Glass et al., 2005), que es un antagonista natural de RANKL (Lacey et al., 1998). La OPG juega un papel regulador importante en la formación y resorción ósea. En cualquier caso, la deleción de -catenina en los osteoclastos aumenta el número de osteoclastos y la resorción ósea y disminuye la masa ósea (Wei et al., 2011). Los inhibidores de la resorción ósea y los promotores de la formación ósea se utilizan principalmente en el tratamiento de la osteoporosis. Teniendo en cuenta que las reacciones adversas de los fármacos utilizados actualmente en clínica con eficacia precisa también son obvias, es urgente buscar fármacos con menos efectos secundarios.

Cistanche deserticola YC Ma (C. deserticola) es una de las plantas de origen de la hierba medicinal china tradicional tónica ampliamente utilizada Cistanches Herba, Roucongrong en chino, para el tratamiento de varias enfermedades, como la deficiencia renal, la infertilidad femenina y el estreñimiento senil para más de 1000 años en China (Comité Nacional de Farmacopea, 2020). De acuerdo con las teorías de la medicina tradicional china (MTC), "huesos que dominan los riñones" y "huesos tonificantes que fortalecen los riñones", la C. deserticola se usaba para tratar la osteoporosis. Los estudios indicaron que C. deserticola puede mejorar los niveles séricos de fosfatasa alcalina (ALP), osteocalcina e iones de calcio, promover la expresión de BMP-2 en osteoblastos de ratas (Gang et al., 2018). Además, los estudios han demostrado que C. deserticola ejerce efectos protectores contra la osteoclastogénesis inducida por RANKL (Zhang et al., 2019). Aunque C. deserticola tiene un efecto terapéutico sobre la osteoporosis, sus componentes activos específicos no están muy claros. Es de gran importancia explorar los tipos de componentes efectivos de C. deserticola para el tratamiento de la osteoporosis y los mecanismos relacionados.

Por lo tanto, realizamos este estudio para determinar si había algunos efectos beneficiosos de los extractos que contenían diferentes tipos de componentes químicos de C. deserticola en ratones SAMP6. Los resultados de los hallazgos pueden brindar guías precisas para la aplicación clínica de C. deserticola y también revelar la base material de C. deserticola para el tratamiento de la osteoporosis.

2. Materiales y métodos

2.1. Sustancias químicas y reactivos

Cistanche deserticola YC Ma se compró a Mandela Biotechnology Co., Ltd (Alashan, Inner Mongolia, China), y luego una persona de los autores las identificó (PF Tu). Los TG, PS y OS se prepararon según el método mencionado anteriormente (Gao et al., 2015). El análisis de los constituyentes de cada extracto se realizó mediante el uso de HPLC según el informe. (Li et al., 2019; Wang et al., 2020). Los kits H&E, tinción tricrómica de Goldner, tinción de Van Gieson (VG) y Safranin O-Fast Green se adquirieron de Boster (Hubei, China). Se adquirieron BMP-2 anti-ratón de conejo (ab14933), OCN (ab93876), OPG (ab183910) y RANKL (ab216484) de Abcam (Cambridge, Gran Bretaña). La tecnología de señalización celular fue la fuente de conejo anti-ratón p-GSK-3 (Ser9) (n.º 5558), GSK3 (n.º 12456), -catenina (n.º 13727) y p- -catenina (n.º 4176). Los anticuerpos secundarios se adquirieron de Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Beijing, China).

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2.2. animales

Se obtuvieron ratones hembra resistentes a la senescencia 1 (SAMR1) y SAMP6 de 5- meses de edad de Vital River Laboratory Animal Technology (Pekín, China). Todas las manipulaciones de animales se realizaron de acuerdo con las pautas emitidas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Pekín.

2.3. Administración de Drogas

Los ratones se separaron aleatoriamente en los siguientes cinco grupos: grupo SAMR1 (solución salina normal, n=10); grupo SAMP6 (solución salina normal, n =10); grupo TG (400 mg/kg, n=10); grupo de PS (400 mg/kg, n=10) y grupo de OS (400 mg/kg, n=10) (Gao et al., 2015). Todos los fármacos se administraron por vía ig y diariamente durante 12 semanas.

2.4. Tinción tricrómica de Goldner, tinción H&E, tinción SafraninO-Fast Green y tinción de Van Gieson (VG)

Después de 12 semanas, los fémures se extrajeron rápidamente y se fijaron con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 10 por ciento durante 7 días a 4 ◦C. A continuación, los fémures se seccionaron en un corte (5 μm) y se tiñeron con Goldner Trichrome, Van Gieson (VG), SafraninO-Fast Green y H&E siguiendo las instrucciones del fabricante. Las imágenes se observaron con un microscopio óptico (Leica, Solms, Alemania).

2.5. Medición de los niveles de BGP, BALP, P1NP, PICP, ALP, S-CTX, TRACP, U-CTX, U-NTX, D-Pyr y Pyr

Las concentraciones de proteína gla ósea (BGP), fosfatasa alcalina específica del hueso (BALP), propéptido N-terminal de procolágeno tipo 1 (P1NP), propéptido C-terminal de procolágeno tipo I (PICP), fosfatasa alcalina (ALP), S-C -telopéptido de colágeno tipo I (S-CTX), fosfatasa ácida resistente al tatrato (TRACP), telopéptido U–C de colágeno tipo I (U-CTX), telopéptido U–N de tipo I- colágeno (U-NTX), D-piridinolina (D-Pyr) y piridinolina (Pyr) se determinaron mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Jiangsu, China).

2.6. Tinción de von Kossa

Los cortes de fémur se sumergieron en nitrato de plata al 1 por ciento durante 30 min bajo un intenso rayo de sol y luego se lavaron tres veces con agua desionizada. Posteriormente, se añadió tiosulfato de sodio al 5 por ciento durante 5 min para eliminar la plata que no había reaccionado. Las sales de fosfato de calcio se visualizaron como tinción negra. Para analizar cuantitativamente el contenido de calcio en el fémur, se aplicó el software Image-Pro Plus versión 6.0 y Adobe Photoshop.

2.7. Análisis de microtomografía computarizada

Todas las muestras de fémur se escanearon con una resolución de 9 μm mediante un escáner micro-CT (PerkinElmer, MA, EE. UU.). Se realizó un análisis adicional con el software Analyze12.0 para calcular la densidad mineral ósea (BMD), el volumen óseo/volumen total (BV/TV), el número trabecular (Tb. N), la separación trabecular (Tb. Sp), espesor trabecular (Tb. Th), y densidad mineral tisular (TMD). Las imágenes tridimensionales se reconstruyeron utilizando el software CTVox (PerkinElmer, MA, EE. UU.).

2.8. Acumulación de tetraciclina y calceína

Cada animal recibió por vía intraperitoneal 25 mg/kg de tetraciclina y 5 mg/kg de calceína el día 13 y el día 3 antes de la eutanasia, respectivamente. La acumulación de tetraciclina y calceína se sondó utilizando el sistema de imágenes de patología cuantitativa automatizada Vectra® Polaris™ (PerkinElmer, MA, EE. UU.). La distancia entre la tetraciclina y la calceína se puede observar con la versión 6 del software Image-Pro Plus.0.

2.9. Análisis de transferencia Western

Los tejidos del fémur se homogeneizaron y lisaron en tampón de lisis RIPA. La concentración de proteína se determinó utilizando un kit de reactivos de ensayo de proteína de ácido bicinconínico (BCA) (Beijing TransGen Biotech, Beijing, China). Las proteínas totales se cargaron en geles SDS-PAGE al 10 por ciento o al 12 por ciento y luego se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa. La membrana se bloqueó y luego se incubó durante la noche con anticuerpos primarios y GAPDH (Los Ángeles, EE. UU.) a 4 ◦C seguido de incubación con anticuerpo secundario. El análisis de bandas de proteínas se analizó utilizando Tanon 5200 Multi (Shanghai, China).

2.10. Análisis inmunohistoquímico

Las secciones de tejido de fémur se incubaron con los anticuerpos primarios a 4 ◦C. Los anticuerpos policlonales contra BMP-2, OCN, OPG y RANKL se diluyeron a 1:200 y 1:100, respectivamente. Anticuerpo secundario IgG anti-conejo de ratón (1:200) a 37 ◦C durante 1 h. Uso del sistema automatizado de imágenes de patología cuantitativa Vectra® Polaris™ (PerkinElmer, MA, EE. UU.). Para analizar cuantitativamente la expresión de la proteína se aplicó el software Image-Pro Plus versión 6.0 y Adobe Photoshop.

2.11. análisis estadístico

Los resultados se expresan como media ± desviación estándar. Se realizó ANOVA de una vía al comparar los diferentes grupos. Se utilizó el software SPSS versión 22.0 para el análisis estadístico y se consideró estadísticamente significativa una P <>

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3. Resultados

3.1. Los TG y los PS mejoran los daños histopatológicos óseos y promueven la formación de fibras colágenas y condrocitos en ratones SAMP6

El daño patológico del fémur puede observarse mediante tinción con H&E. Las estructuras histomorfológicas del hueso del grupo SAMR1 están dispuestas de forma regular. Sin embargo, las estructuras óseas mencionadas anteriormente estaban dañadas en el grupo SAMP6. Los cambios de morfología en los grupos TG y PS fueron menores que en el grupo SAMP6. Sin embargo, el grupo de tratamiento de OS no mostró una mejora significativa de los cambios morfológicos (Fig. 1A). Se realizaron tinciones con Tricrómico de Goldner, Van Gieson (VG) y Safranina O Fast Green para revelar la formación de la estructura ósea. Los resultados ilustraron que el hueso nuevo, la fibra de colágeno y los condrocitos en los grupos TG y PS mejoraron en comparación con el grupo SAMP6. Sin embargo, el grupo de tratamiento con OS no mostró una mejora significativa de los cambios en la estructura ósea (Fig. 1B-D).

Fig. 1. Los TG y los PS mejoran el daño histopatológico en ratones SAMP6.

3.2. Los TG y los PS alteran los biomarcadores del recambio óseo en ratones SAMP6

Cuando se produce la osteoporosis, los niveles de biomarcadores de formación ósea se reducirán significativamente, como la BGP y la PICP séricas. Por el contrario, los niveles de biomarcadores asociados con la resorción ósea aumentaron notablemente, incluidos TRACP y S-CTX séricos (Fig. 2). De manera alentadora, los grupos de TG y PS podrían revertir los niveles de BGP, BALP, P1NP, PICP, ALP, S-CTX, TRACP, U-CTX, U-NTX, D-Pyr y Pyr, pero los OS no.

Fig. 2. Efectos de TG y PS sobre biomarcadores de recambio óseo en ratones SAMP6.

3.3. Los TG y PS promueven la formación de hueso nuevo y el depósito de calcio en ratones SAMP6

Para probar si la formación ósea y la deposición de minerales de fosfato podrían ser promovidas por el tratamiento con TG, PS y OS, se realizaron el marcaje con tetraciclina calceína y la tinción de Von Kossa. Los resultados mostraron que la formación de hueso nuevo en los ratones SAMP6 fue significativamente menor que en los ratones SAMR1, mientras que los TG y los PS promovieron significativamente la formación de hueso nuevo (Fig. 3A). La tinción de Von Kossa reveló que se depositó una gran cantidad de calcio en los grupos de tratamiento con TG y PS (Fig. 3B).

Fig. 3. Los TG y PS promueven la formación de hueso nuevo y el depósito de minerales en ratones SAMP6.

3.4. Los TG y los PS mejoran la microarquitectura ósea en ratones SAMP6

La microarquitectura ósea se detectó mediante micro-CT. En comparación con los ratones SAMR1, los ratones SAMP6 tenían una microarquitectura más deteriorada, mientras que la condición ósea en los ratones tratados con TG y PS durante 12 semanas mejoró (Fig. 4). También encontramos que los índices de DMO, BV/TV, Tb.N y Tb. Th se redujeron y los índices de Tb. Sp y TMD aumentaron en ratones SAMP6, en comparación con los de ratones SAMR1. Los TG y PS aumentaron significativamente la DMO, BV/TV, Tb. N, Tb. Th y disminución de Tb. Sp y TMD comparados con ratones SAMP6. Sin embargo, no se observaron cambios significativos en el grupo de OS.

3.5. Los TG y los PS alteran las expresiones de BMP-2, OCN, OPG y RANKL en ratones SAMP6

Examinamos las expresiones proteicas de BMP-2, OCN, OPG y RANKL. Los TG y los PS indujeron la notable regulación al alza de BMP-2, OCN y OPG, mientras que la expresión de RANKL se reguló a la baja (Fig. 5). Sin embargo, no hubo diferencias significativas en el grupo de terapia con OS.

Fig. 4. Efectos de los TG y los PS sobre la densidad mineral ósea y la microarquitectura ósea.

3.6. Los TG y PS alteran las expresiones de p-GSK-3 (Ser9) y p- -catenina en ratones SAMP6

Para comprender los mecanismos de los TG y PS que promueven la osteoblastogénesis, se midieron las expresiones de p-GSK-3 (Ser9) y p- -catenina en tejidos óseos de ratones SAMP6 mediante transferencia Western (Fig. 6). Los resultados mostraron que los tratamientos con TG y PS mejoraron notablemente la expresión de p-GSK-3 (Ser9) y redujeron la expresión de p- -catenina en el fémur en comparación con el grupo SAMP6. Sin embargo, el grupo de tratamiento de OS no mostró cambios significativos.

4. Discusión

En el trabajo actual utilizando ratones SAMP6 y SAMR1 para encontrar los componentes efectivos de C. deserticola contra la osteoporosis. Se utilizaron tres extractos de C. deserticola para evaluar los efectos terapéuticos, así como los posibles mecanismos. Además, también se analizaron las expresiones de RANKL, OPG, OCN y BMP-2 así como otros reguladores de la resorción ósea. En comparación con el grupo SAMP6, los TG y los PS pueden mejorar el daño histopatológico del hueso, así como promover la formación de hueso nuevo, fibra de colágeno, condrocitos y depósitos de calcio. Mientras tanto, ambos pueden cambiar los biomarcadores del recambio óseo y mejorar efectivamente la microestructura ósea. Sin embargo, no se observaron efectos protectores para el tratamiento de OS.

Fig. 5. Los TG y PS promueven las expresiones de BMP-2, OCN y OPG y reducen la expresión de RANKL.

Los MTC se han utilizado ampliamente para aliviar los síntomas de muchas enfermedades, como la osteoporosis. aliviar varios síntomas de enfermedades, incluida la osteoporosis. Se han identificado numerosos compuestos bioactivos antiosteoporóticos de docenas de hierbas medicinales chinas naturales que generalmente se usan para tonificar los riñones y preservar la esencia renal (Xu et al., 2017; Liu et al., 2018). C. deserticola posee una seguridad relativamente alta y una amplia gama de funciones terapéuticas para el tratamiento de la deficiencia renal. Numerosos estudios de investigación han descubierto los efectos terapéuticos de los extractos de C. deserticola sobre la osteoporosis (Li et al., 2012; Liang et al., 2013; Song et al., 2018).

Los osteoblastos formadores de hueso y los osteoclastos reabsorbentes de hueso, que se originaron a partir de la diferenciación de células madre mesenquimales multipotenciales (MSC), son células diferenciadas terminalmente con vidas cortas (Teitelbaum y Ross, 2003). Ambos necesitan ser reemplazados continuamente por otros nuevos que se originen a partir de células madre (Long, 2011). La vía de señalización de Wnt/ -catenina, que juega un papel vital en la diferenciación de los tejidos óseos, estimula la producción de osteoblastos al promover la orientación y diferenciación de MSC multipotenciales en osteoblastos (Rodda y McMahon, 2006). Además, los Wnt previenen la apoptosis de los osteoblastos maduros y, por lo tanto, prolongan su vida útil tanto por vías dependientes como independientes de -catenina (Almeida et al., 2005). Por lo tanto, la vía de señalización de Wnt/-catenina juega un papel importante en la clarificación de la patogénesis de la osteoporosis. En el presente experimento, se usaron ratones SAMP6 para examinar la eficacia de los antiosteoporóticos de diferentes extractos de C. deserticola. Los TG y PS regularon significativamente a la baja los niveles de RANKL y p- -catenina y aumentaron las expresiones BMP-2, OCN, OPG y p-GSK-3 . En resumen, el efecto terapéutico de los TG y PS en ratones SAMP6 se ​​produjo principalmente mediante la activación de la vía de señalización Wnt/-catenina.

Dado que la absorción excesiva de osteoclastos es una causa importante de la osteoporosis, los factores relacionados con la activación y diferenciación de los osteoclastos pueden considerarse objetivos importantes para prevenir la pérdida ósea (Takatsuna et al., 2005). En nuestro estudio, la expresión de RANKL se reguló notablemente a la baja, al mismo tiempo que los TG y los PS podrían regular al alza el nivel de OPG. Está bien documentado que el proceso de formación y remodelación ósea de la diferenciación de células osteoblásticas se caracteriza principalmente por un aumento de las expresiones de BMP-2 y OPN (Canalis, 2009). En este estudio, encontramos que los TG y PS de C. deserticola aumentaron las expresiones de BMP-2 y OPG y mejoraron la mineralización ósea. Por lo tanto, los TG y los PS intervienen en la formación de hueso mediante la regulación positiva de BMP-2 y OPN y la regulación negativa de RANKL.

Los marcadores de formación ósea reflejan la actividad de las células constructoras de hueso, los mismos marcadores de resorción ósea reflejan la actividad de los osteoclastos. La microarquitectura se deteriora como resultado de la alteración de los marcadores de recambio óseo. En nuestro estudio, los marcadores de resorción ósea (S-CTX, TRACP, U-CTX, D-Pyr, U-NTX, Pyr) se redujeron significativamente en los grupos TG y PS, a la inversa, los marcadores de formación ósea (BGP, BALP , P1NP, PICP, ALP) aumentan notablemente. Por lo tanto, se puede ver que los TG y PS de C. deserticola promueven la reconstrucción del hueso osteoporótico.

La vía Wnt/ -catenina estimula la expresión de marcadores de diferenciación y mineralización de osteoblastos, al mismo tiempo que activa la expresión del factor osteogénico maestro BMP-2 en osteoblastos (Zhang et al., 2013). Además, la -catenina aumenta la expresión de OPG en el osteoblasto, lo que indirectamente reprime la diferenciación de osteoclastos al inhibir la resorción ósea (Baron y Kneissel, 2013). Nuestro presente estudio muestra que los TG y los PS regulan significativamente la p-GSK-3 y regulan a la baja el nivel de p- -catenina. Estos resultados respaldan la conclusión de que la función de los TG y los PS en la lucha contra la osteoporosis se regula mediante la activación de la vía de señalización Wnt/-catenina.

Nuestro análisis de HPLC anterior mostró que cinco glucósidos de feniletanoide, incluidos el equinacósido, el cistanosido A, el actósido, el isoactósido y el 2′-acetilactósido, eran los componentes principales de los TG (Li et al., 2019; Shi et al., 2019). Las estructuras de los cinco glucósidos feniletanoides anteriores eran todas ricas en grupos hidroxilo fenólicos, que son responsables de la propiedad antioxidante de C. deserticola (Chen et al., 2016). Se ha informado que mejorar el sistema antioxidante puede prevenir la pérdida ósea, por lo que estos glucósidos feniletanoides podrían ser los posibles componentes activos de C. deserticola responsables de la actividad antiosteoporótica. Hay informes de que el equinacósido y el acteósido pueden mejorar las características patológicas típicas de la osteoporosis, como la mejora de la calidad ósea y la DMO del fémur total, la promoción de la formación ósea y la inhibición de la resorción ósea (Chen et al., 2020). Además, el echinacósido tiene un sorprendente efecto antiosteoporótico (Li et al., 2013). Estudios anteriores demostraron que el cistanosido A podría promover la formación ósea y prevenir la resorción ósea mediante la inhibición de NF-κB y la activación de las vías PI3K/Akt (Xu et al., 2017). No se ha informado el efecto antiosteoporótico de los polisacáridos de C. deserticola. Sin embargo, otros estudios han demostrado que los polisacáridos de astrágalo podrían suprimir la expresión de RANKL, aumentar el nivel de OPG en suero y finalmente bloquear la diferenciación de osteoclastos (Huo y Sun, 2016; Hwang et al., 2018). Los OS de C. deserticola se componen principalmente de manitol, betaína, fructosa, glucosa y sacarosa (Shi et al., 2019), los cuales no tienen reporte de actividad antiosteoporótica, por lo tanto, los OS no tienen efecto terapéutico sobre la osteoporosis. En resumen, los TG y los PS son los componentes activos de C. deserticola para el efecto anti-osteoporosis.

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5. Conclusiones

En conclusión, los TG y PS de C. deserticola pueden mejorar la formación ósea en ratones SAMP6 mediante la regulación de la vía de señalización de Wnt/-catenina, pero no de los OS. En el futuro, los TG y los PS pueden convertirse en agentes terapéuticos protectores óseos prometedores para la osteoporosis.