Las vacunas provocan una inmunidad celular altamente reactiva contra la variante Omicron del SARS-CoV-2

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Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 Centro Médico Beth Israel Deaconess, Boston, MA, EE. UU.;

2 Instituto Ragon de MGH, MIT y Harvard, Cambridge, MA, EE. UU.

Se ha demostrado que la variante altamente mutada del SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) evade una fracción sustancial de las respuestas de anticuerpos neutralizantes provocadas por las vacunas actuales que codifican el inmunógeno WA1/2020 Spike1, lo que resulta en un aumento de las infecciones intercurrentes y reducción de la eficacia de la vacuna. Las respuestas inmunitarias celulares, en particular las respuestas de células T CD8 más, probablemente sean críticas para la protección contra la enfermedad grave por SARS-CoV-22-6. Aquí mostramos que la inmunidad celular inducida por las vacunas actuales contra el SARS-CoV-2 es altamente reactiva contra la variante Omicron del SARS-CoV-2. Las personas que recibieron las vacunas Ad26.COV2.S o BNT162b2 demostraron respuestas duraderas de células T CD8 plus y CD4 plus que mostraron una amplia reactividad cruzada contra las variantes Delta y Omicron, incluso en las subpoblaciones celulares de memoria central y efectora. La mediana de las respuestas de células T CD8 plus específicas de Omicron fue 82-84 por ciento de las respuestas de células T CD8 plus específicas de WA1/2020-. Estos datos sugieren que las vacunas actuales pueden brindar una protección considerable contra enfermedades graves con la variante Omicron del SARS-CoV-2 a pesar de la reducción sustancial de las respuestas de anticuerpos neutralizantes.

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Estudios recientes han demostrado que los anticuerpos neutralizantes (NAb) provocados por la vacuna se reducen sustancialmente a la variante Omicron del SARS-CoV-2 altamente mutada, lo que da como resultado una rápida propagación mundial, incluidas infecciones avanzadas en personas completamente vacunadas1. Para evaluar la reactividad cruzada de las respuestas inmunitarias celulares provocadas por la vacuna contra la variante Omicron del SARS-CoV-2, evaluamos las respuestas de células T CD8 plus y CD4 plus en 51 personas que fueron vacunadas con el Ad26 basado en el vector de adenovirus. vacuna COV2.S7 (Johnson & Johnson; N=20) o la vacuna BNT162b2 basada en ARNm8 (Pfizer; N=31).

Después de la vacunación con BNT162b2, observamos altas respuestas de NAb específicas de WA1/2020-en el mes 1, seguidas de una fuerte disminución en el mes 8, como se esperaba9,10 (Fig. 1a). Después de la vacunación con Ad26.COV2.S, hubo respuestas de NAb específicas de WA1/2020-inicial sustancialmente más bajas en el mes 1, pero estas respuestas fueron más duraderas y persistieron en los meses 89,11 (Fig. 1a). Sin embargo, se observaron NAbs específicos de Omicron con reactividad cruzada mínima para ambas vacunas (Fig. 1a), en consonancia con los datos recientes en ausencia de un refuerzo adicional1. Las respuestas de anticuerpos de unión específicos del dominio de unión al receptor (RBD) se evaluaron mediante ELISA y mostraron tendencias similares, con anticuerpos de unión específicos de Omicron con reactividad cruzada mínima (Fig. 1b). En contraste con las respuestas de anticuerpos, las respuestas inmunitarias celulares específicas de Spike evaluadas por Los ensayos ELISPOT de IFN-g de péptidos combinados mostraron una reactividad cruzada sustancial con Omicron (datos ampliados, Fig. 1). A continuación, evaluamos las respuestas de células T CD8 plus y CD4 plus específicas de Spike mediante ensayos de tinción de citoquinas intracelulares. Ad26.COV2.S indujo una mediana de respuestas de células T de IFN-g CD8 específico de Spike de 0.061 por ciento, 0.062 por ciento y {{ 72}}.051 por ciento contra WA1/2020, Delta y Omicron, respectivamente, en el mes 8 después de la vacunación (Fig. 2a). BNT162b2 indujo una mediana de respuestas de células T IFN-g CD8 más específicas de Spike de 0.028 por ciento y 0.023 por ciento contra WA1/2020 y Omicron, respectivamente, en el mes 8 después de la vacunación (Fig. 2a). Estos datos sugieren que las respuestas de células T CD8 plus específicas de Omicron fueron un 82-84 por ciento de reactividad cruzada con las respuestas de células T CD8 plus específicas de WA1/2020-. Las respuestas de células T CD4+ IFN-g específicas de Spike provocadas por Ad26.COV2.S fueron una mediana de 0.026 por ciento, 0.030 por ciento y 0.029 por ciento contra WA1/2020, Delta y Omicron, respectivamente, y por BNT162b2 fueron una mediana de 0,033 por ciento y 0,027 por ciento contra WA1/2020 y Omicron, respectivamente, lo que indica una reactividad cruzada sustancial de las respuestas de células T CD4 más también (Fig. 2b). También se observó una reactividad cruzada sustancial de Omicron para TNF-a e IL-2 específicos de Spike que secretan respuestas de células T CD8 plus y CD4 plus (Datos ampliados, Fig. 2).

El análisis de regresión lineal mostró que las respuestas de células T CD8 más específicas de Omicron se correlacionaron con las respuestas de células T CD8 más específicas de WA1/2020-para la vacuna Ad26.COV2.S para ambos puntos de tiempo (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Nuestros datos demuestran que Ad26.COV2.S y BNT162b2 provocan una amplia inmunidad celular de reacción cruzada contra las variantes del SARS-CoV-2, incluido Omicron. La consistencia de estas observaciones en dos tecnologías de plataformas de vacunas diferentes (vector viral y ARNm) sugiere la posibilidad de generalizar estos hallazgos. La amplia reactividad cruzada de las respuestas de células T CD8 plus y CD4 plus específicas de Omicron contrasta marcadamente con las respuestas de anticuerpos neutralizantes y de unión específicas de Omicron marcadamente reducidas. Estos datos son consistentes con estudios previos que muestran una mayor reactividad cruzada de las respuestas inmunitarias celulares provocadas por la vacuna en comparación con las respuestas inmunitarias humorales contra las variantes alfa, beta y gamma del SARS-CoV-212. El 82-84 por ciento de reactividad cruzada de las respuestas de células CD8 más T a Omicron es coherente con las predicciones teóricas basadas en las mutaciones de Omicron6.

Los estudios preclínicos han demostrado que las células T CD8 plus contribuyen a la protección contra el SARS-CoV-2 en macacos rhesus, particularmente cuando las respuestas de anticuerpos son subóptimas5. También se informaron respuestas duraderas de células T CD8 plus y CD4 plus después de la infección y la vacunación2- 4,6,9,11,13,14. Dado el papel de las células T CD8 plus en la eliminación de infecciones virales, es probable que la inmunidad celular contribuya sustancialmente a la protección de la vacuna contra la enfermedad grave por SARS-CoV-2. Esto puede ser particularmente relevante para Omicron, que evade una parte sustancial de las respuestas de anticuerpos. Nuestros datos sugieren que las vacunas actuales pueden proporcionar una protección sustancial contra la enfermedad grave debido a la variante Omicron del SARS-CoV-2 a pesar de la reducción de las respuestas de anticuerpos neutralizantes y el aumento de las infecciones intercurrentes.

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Métodos

Población de estudio

Las muestras de personas que recibieron la vacuna BNT162b2 se obtuvieron del biodepósito de muestras del Centro Médico Beth Israel Deaconess (BIDMC). Las muestras de personas que recibieron Ad26.COV2.S se obtuvieron del estudio COV1001 (NCT04436276). Ambos estudios fueron aprobados por la junta de revisión institucional de BIDMC. Todos los participantes dieron su consentimiento informado. Las personas fueron excluidas de este estudio si tenían antecedentes de infecciones por SARS-CoV- 2, recibieron otras vacunas COVID-19 o recibieron medicamentos inmunosupresores. Ensayo de anticuerpos neutralizantes de pseudovirus

Los pseudovirus SARS-CoV-2 que expresan un gen indicador de luciferasa se usaron para medir los anticuerpos neutralizantes de pseudovirus. En resumen, el empaque construye psPAX2 (Programa de recursos y reactivos para el SIDA), el plásmido informador de luciferasa pLentiCMV Puro-Luc (Addgene) y pcDNA3 que expresa la proteína de pico.1-SARS-CoV-2 SΔCT fueron co- transfectadas en células HEK293T (ATCC CRL_3216) con lipofectamina 2000 (ThermoFisher Scientific). Se generaron variantes de pseudovirus del SARS-CoV-2 mediante el uso de la cepa WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, ID de acceso de GISAID: EPI_ISL_402124), variante B.1.1.7 (Alfa, ID de acceso a GISAID: EPI_ISL_601443), variante B.1.351 (Beta, ID de acceso a GISAID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, ID de acceso de GISAID: EPI_ISL_2020950), o B.1.1.529 (Omicron, ID de GISAID: EPI_ISL_7358094.2). Los sobrenadantes que contenían los pseudotipos de virus se recogieron 48 horas después de la transfección; Los pseudotipos de virus se purificaron por filtración con un filtro de 0,45-μm. Para determinar la actividad de neutralización del suero humano, se sembraron células HEK293T-hACE2 en 96-placas de cultivo de tejidos con una densidad de 1,75 × 104 células por pocillo durante la noche. Se prepararon diluciones seriadas triples de muestras de suero inactivado por calor y se mezclaron con 50 ul de pseudovirus. La mezcla se incubó a 37 grados durante 1 hora antes de agregarla a las células HEK293T-hACE2. Después de 48 h, las células se lisaron en Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los títulos de neutralización de SARS-CoV-2 se definieron como la dilución de la muestra en la que se observó una reducción del 50 por ciento (NT50) en unidades de luz relativas en relación con el promedio de los pocillos de control del virus.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

Los anticuerpos de unión específicos del dominio de unión al receptor (RBD) del SARS-CoV-2 se evaluaron mediante ELISA. 96-las placas de pocillos se recubrieron con 2 ug/mL de SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Beta), o proteína RBD B.1.1.529 (Omicron) en solución salina tamponada con fosfato Dulbecco 1x (DPBS) e incubada a 4 grados durante la noche. Después de la incubación, las placas se lavaron una vez con tampón de lavado (Tween 20 al 0,05 % en DPBS 1x) y se bloquearon con 350 μl de solución de bloque de caseína por pocillo durante 2 a 3 horas a temperatura ambiente. Después de la incubación, la solución de bloque se descartó y las placas se secaron. Se añadieron a los pocillos diluciones en serie de suero inactivado por calor diluido en bloque de caseína y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente, antes de 3 lavados más y una incubación de 1- horas con una dilución 1:4000 de anti- peroxidasa de rábano picante IgG humana (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) a temperatura ambiente en la oscuridad. Las placas se lavaron 3 veces y se añadieron 100 μL de solución SeraCare KPL TMB SureBlue Start a cada pocillo; El desarrollo de la placa se detuvo agregando 100 μL de SeraCare KPL TMB Stop solution por pocillo. La absorbancia a 450 nm, con referencia a 650 nm, se registró con un lector de microplacas VersaMax (Molecular Devices). Para cada muestra, el título de punto final de ELISA se calculó mediante un ajuste de curva logística de 4-parámetros para calcular la dilución de suero recíproca que produce un valor de absorbancia corregido (450 nm-650 nm) de 0,2. Se informaron los títulos de punto final interpolados.

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Ensayo de inmunopunto ligado a enzimas (ELISPOT).

Las placas ELISPOT se recubrieron con anticuerpo monoclonal IFN-antihumano de ratón de MabTech a 1 µg/pocillo y se incubaron durante la noche a 4 grados. Las placas se lavaron con DPBS y se bloquearon con medio R10 (RPMI con 10 % de FBS inactivado por calor con 1 % de penicilina-estreptomicina 100x, HEPES 1 M, piruvato de sodio 100 mM, L-glutamina 200 mM y 0,1 % de 55 mM 2-mercaptoetanol) durante 2-4 h a 37 grados. Se prepararon péptidos S combinados de SARS-CoV-2 de SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) o B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) y se sembró en placa a una concentración de 2 µg/pocillo, y se añadieron a la placa 100,000 células/pocillo. Los péptidos y las células se incubaron durante 15-20 ha 37 grados. Todos los pasos posteriores a esta incubación se realizaron a temperatura ambiente. Las placas se lavaron con tampón de lavado ELISPOT y se incubaron durante 2-4 h con un anticuerpo monoclonal anti-IFN humano de ratón biotinilado de MabTech (1 µg/ml). Las placas se lavaron una segunda vez y se incubaron durante 2-3 h con antibiotina AP de cabra conjugada de Rockland, Inc. (1,33 µg/ml). El lavado final fue seguido por la adición de solución de sustrato de cloruro de tetrazolio azul de nitor/5-bromo-4-cloro 3' indolil fosfato p-toluidina (cromógeno NBT/BCIP) durante 7 min. El cromógeno se descartó y las placas se lavaron con agua y se secaron en un lugar oscuro durante 24 h. Las placas se escanearon y contaron en un analizador de inmunospot de Cellular Technologies Limited.

Ensayo de tinción de citoquinas intracelulares (ICS)

Las respuestas de células T CD4 plus y CD8 plus se cuantificaron mediante ensayos combinados de tinción de citoquinas intracelulares estimuladas por péptidos (ICS). Los grupos de péptidos contenían péptidos de 15 aminoácidos superpuestos por 11 aminoácidos que abarcan el SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) o B.1.1 .529 (Omicron) Spike proteins (21st Century Biochemicals). Se resuspendieron 106 pocillos de células mononucleares de sangre periférica en 100 µl de medio R10 suplementado con anticuerpo monoclonal CD49d (1 µg/ml) y anticuerpo monoclonal CD28 (1 µg/ml). Cada muestra se evaluó con simulacro (100 µL de R10 más 0,5 por ciento de DMSO; control de fondo), péptidos (2 µg/mL) y/o 10 pg/mL de acetato de miristato de forbol (PMA) y 1 µg/ml de ionomicina (Sigma- Aldrich) (100 µL; control positivo) y se incubó a 37 grados durante 1 h. Después de la incubación, se añadieron a cada pocillo 0,25 µl de GolgiStop y 0,25 µl de GolgiPlug en 50 µl de R10 y se incubaron a 37 grados durante 8 hy luego se mantuvieron a 4 grados durante la noche. Al día siguiente, las células se lavaron dos veces con DPBS, se tiñeron con tinte aqua vivo/muerto durante 10 minutos y luego se tiñeron con títulos predeterminados de anticuerpos monoclonales contra CD279 (clon EH12.1, BB700), CD4 (clon L200, BV711), CD27 (clon M-T271, BUV563), CD8 (clon SK1, BUV805), CD45RA (clon 5H9, APC H7) durante 30 min. A continuación, las células se lavaron dos veces con tampón FBS/DPBS al 2 % y se incubaron durante 15 min con 200 µl de solución de fijación/permeabilización BD CytoFix/CytoPerm. Las células se lavaron dos veces con 1X Perm Wash buffer (BD Perm/WashTM Buffer 10X en el kit CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization diluido con agua MilliQ y se pasó a través de un filtro de 0,22 µm) y se tiñeron intracelularmente con anticuerpos monoclonales contra IFN- (clon B27; BUV395), y CD3 (clon SP34.2, Alexa 700), durante 30 min. Las células se lavaron dos veces con tampón de lavado permanente 1X y se fijaron con 250 µl de formaldehído al 1,5 por ciento recién preparado. Las células fijadas se transfirieron a una placa de fondo redondo de 96-pocillos y se analizaron con el sistema BD FACSymphony™. Los datos se analizaron utilizando FlowJo v9.9.

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Referencias

1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron tiene un escape extenso pero incompleto de la neutralización provocada por Pfizer BNT162b2 y requiere ACE2 para la infección. medRxiv 2021.

2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. Memoria inmunológica al SARS-CoV-2 evaluada hasta 8 meses después de la infección. Ciencia 2021;371.

3. Sette A, Crotty S. Inmunidad adaptativa al SARS-CoV-2 y COVID-19. Celda 2021;184:861-80.

4. Goel RR, Pintor MM, Apostolidis SA, et al. Las vacunas de ARNm inducen una memoria inmune duradera al SARS-CoV-2 y variantes preocupantes. Ciencia 2021;374:abm0829.

5. McMahan K, Yu J, MercadoNB, et al. Correlatos de protección contra el SARS-CoV-2 en macacos rhesus. Naturaleza 2021;590:630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramírez SI, et al. Objetivos de las respuestas de células T al coronavirus SARS-CoV-2 en humanos con enfermedad de COVID-19 e individuos no expuestos. Celda 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, et al. Seguridad y eficacia de la vacuna Ad26.COV2.S monodosis contra el Covid-19. N Engl J Med 2021;384:2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Seguridad y eficacia de la vacuna Covid-19 de ARNm BNT162b2. N Engl J Med 2020.

9. Collier AY, Yu J, McMahan K, et al. Cinética diferencial de las respuestas inmunitarias provocadas por las vacunas Covid-19. N Engl J Med 2021;385:2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. Neutralización del SARS-CoV-2 con dosis de vacuna BNT162b2 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Respuestas inmunitarias humorales y celulares duraderas 8 meses después de la vacunación con Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021;385:951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Inmunogenicidad de la vacuna Ad26.COV2.S frente a variantes del SARS-CoV-2 en humanos. Naturaleza 2021;596:268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. La infección por SARS-CoV-2 genera memoria inmunológica localizada en tejidos en humanos. Inmunología científica 2021;6:eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Correlatos de neutralización contra SARS-CoV-2 variantes de preocupación por sueros pandémicos tempranos. J Virol 2021;95:e0040421.

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