Efecto antienvejecimiento del oligosacárido de quitosano sobre el envejecimiento subagudo inducido por D-galactosa en ratonesⅡ

3. Discusión

Ha sido ampliamente aceptado que el modelo de ratón de envejecimiento subagudo inducido por D-gal utilizado en nuestro presente estudio es un modelo de envejecimiento generalmente adoptado basado en la teoría metabólica del envejecimiento, cuyos síntomas son similares al proceso de envejecimiento natural. D-gal es un nutriente normal que existe naturalmente en el cuerpo (21). A medida que se inyecta una cierta dosis de D-gal en los ratones dentro de un período de tiempo, la concentración de la misma en las células será demasiado alta para ser catalizada por la galactosa oxidasa a aldosa y peróxido de hidrógeno, generando finalmente aniones superóxido (22). Eloxidación en el cuerpoproduce una gran cantidad de radicales libres, que están más allá de la capacidad de eliminación del cuerpo y conducen aPeroxidación lipídica; Mientras tanto, los productos de descomposición final (como MDA) pueden combinarse directa o indirectamente con proteínas, ácidos nucleicos, fosfolípidos y otras sustancias, no solo destruyendo la estructura química de las sustancias vivas intracelulares y alterando la función celular, sino también dañando las células normales del tejido. afectando la presión osmótica normal, lo que conduce aún más a trastornos metabólicos de órganos vitales y eventualmenteenvejecimiento del organismo(23,24). De este modo,Envejecimiento subagudo inducido por D-gal in ratones ha sido elegido en nuestro estudio actual para investigar laposibles efectos antienvejecimiento de COSyexplorar el mecanismo subyacenteEn el presente estudio, los resultados revelaron que los ratones del grupo modelo tenían una diferencia significativa en sus comportamientos diarios en comparación con los ratones del grupo normal. Además, el bazo y el timo de los ratones modelo se atrofiaron significativamente, mientras que los índices de su bazo y timo fueron significativamente más bajos que los de los ratones normales. Además, las vitalidades deenzimas antioxidantes, como GSH-Px, CAT y SOD en el hígado y el riñón de ratones modelo se redujeron, mientras que ocurrió lo contrario para el nivel de MDA. Estos resultados están en línea con estudios previos (6,7,22-24), lo que indica que en nuestro estudio actual se estableció con éxito en ratones.

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Con elaumento de la edad, el sistema inmunológicodel cuerpo sufre cambios degenerativos que no solo disminuyen la respuesta inmune a un antígeno específico extraño sino que también se presentan con un desequilibrio general de la función inmune, lo que finalmente lleva a la aparición de diversas enfermedades (25). Por lo tanto, la regulación de la inmunidad corporal es uno de los principales métodos en el estudio anti-envejecimiento. Además, el timo y el bazo son dos órganos inmunitarios importantes del cuerpo, cuyos índices de órganos pueden reflejar inicialmente la fuerza de un sistema inmunitario no específico, y que también son los índices preliminares para estimar la función inmunitaria no específica del cuerpo (26,27. Los presentes resultados mostraron que, en comparación con el grupo normal, los órganos inmunitarios, como el timo y el bazo de los ratones en el grupo modelo inyectado con D-gal durante ocho semanas, estaban obviamente encogidos, y el timo y el bazo Los índices de bazo se redujeron claramente Cuando se comparó con el grupo modelo, aunque, para el tratamiento, no hubo un impacto de promoción obvio en esta disminución inducida por D-gal de los índices de timo y bazo, los índices de estos dos órganos en el COS bajo-medio los grupos de dosis altas aumentaron gradualmente (especialmente para el índice de bazo), lo que indica que COS podría mejorar los índices de calidad del bazo y el timo de ratones seniles, inhibir la degeneración de los órganos inmunitarios y, en última instancia, mejorar la inmunidad no específica hasta cierto punto. Por otro lado, como uno de los factores inmunitarios inespecíficos del organismo, el sistema de anticuerpos desempeña un papel importante en la respuesta inmunitaria y la adaptación inmunitaria del organismo, mientras que la inmunoglobulina (lg) es un indicador comúnmente utilizado del estado inmunitario humoral ({{12 }}].La lg sérica incluye lgG, IgM, IgA, IgD e IgE, de las cuales lgG e IgM son los componentes principales de los anticuerpos séricos, ya que su contenido puede reflejar la capacidad de respuesta inmune y la inmunidad humoral del cuerpo (31). Los resultados en el presente estudio mostraron que los niveles séricos de IgG en los ratones del grupo modelo fueron significativamente más bajos que los del grupo normal. En comparación con los del grupo modelo, para el tratamiento con VE, tampoco hubo un efecto promotor marcado sobre Estos D-gal produjeron una reducción de los niveles de lgG e lgM en suero de ratones, mientras que estos niveles séricos de IgG' e lgM de ratones senescentes tratados con COS aumentaron significativamente, lo que indica que COS podría mejorar la capacidad de respuesta inmunitaria y mejorar la función inmunitaria humoral del cuerpo. . En resumen, COS tiene un buen papel regulador en la función inmunológica de ratones envejecidos inducidos por D-gal, que supuestamente sirve para retrasar el envejecimiento.

Además, las endógenassistema enzimático antioxidante, incluyendo principalmenteCÉSPED(una enzimadedicado aeliminación de radicales anión superóxidoyreduciendo la producción de peroxidación lipídica), GATO(una enzima dedicada a la eliminación de H2O2 protegerperoxidación de lípidos y lipoproteínas de la pared celular), y GSH-Px (una enzima concentrada en catalizar GSH en GSSG y estimular el peróxido tóxicoreducción en compuestos de hidroxilo no tóxicos), es un importante sistema de defensa contra los radicales libresdaño en el cuerpo, cuya función principal es mantener la homeostasis de ROS en el interiorambiente y eliminar niveles excesivamente altos de ROS [4,5,32,33]. Se exhiben numerosas pruebasque la producción excesiva de ROS en los sistemas biológicos puede causar daño oxidativo a los tejidos,alteran las funciones de la membrana, afectan el metabolismo celular y pasivan proteínas y enzimas, especialmenteen los órganos con procesos metabólicos rápidos como el hígado y el riñón [34–36]. De acuerdo con estosestudios, encontramos que repetidosD-gal-inyección indujo una disminución observable en las actividades deestas enzimas antioxidantes clave (SOD, CAT y GSH-Px), y peroxidación lipídica marcadamente agravada,manifestado como la acumulación de MDA, lo que indica que se produjeron daños oxidativos en el hígado de ratonesy riñón. Además, los niveles séricos de ALT, AST y ALP se utilizan ampliamente para evaluar la función hepática.funciones, en las que la ALP juega un papel muy importante en la desfosforilación de enzimas proteicas,mientras que ALT y AST son los indicadores más tempranos y sensibles de daño hepático. Mientras tanto, UA yLos CREA son los principales indicadores de la función renal, que serán filtrados a través del líquido glomerularen el torrente sanguíneo en grandes cantidades cuando se produce daño renal durante el proceso de envejecimiento [37,38]. Acompañado por el daño tisular oxidativo del hígado y el riñón de los ratones, los niveles séricos de ALT, AST yALP, así como CREA y UA en los ratones del grupo modelo, fueron significativamente más altos que los de ratones normales.ratones de grupo. Sin embargo, COS, a partir de quitosano de cáscara de camarón por hidrólisis enzimática, no solo exhibiópropiedades antioxidantes favorables al mejorar las actividades de estas antioxidasas y disminuir lanivel de MDA, mostrando el efecto de oposición enD-daño oxidativo inducido por gal en el hígado de ratones yriñón, sino que también mitigó estos aumentos excepcionales de los niveles séricos de ALT, AST, ALP, CREA y UAen una medida menor que el grupo modelo, lo que indica un papel importante en la preservación de la normalidadfunción del hígado y riñón. Mientras tanto, VE también mostró, hasta cierto punto, un antioxidanteefecto principalmente al intensificar las actividades de SOD en el hígado y el riñón de los ratones, así como al reducirlos niveles de MDA, para implementar un grado de efectos protectores sobre las funciones hepáticas y renales de los ratones.Además, el examen histológico mostró que los niveles de infiltración de células inflamatorias yla necrosis de los hepatocitos, así como la atrofia del glomérulo renal se intensificaron en el modelogrupo, mientras que la aplicación de COS y VE mejoró estos daños en la estructura hepática y renalinducida por la administración crónica conD-gal hasta cierto punto, y el estado histológico en elEl grupo COS-H se parecía mucho al del grupo normal. Estos resultados de evaluaciones histológicascorrespondió bien con el análisis bioquímico.

En resumen, VE, cuyo monómero se utiliza a menudo como control positivo para los estudiosdel envejecimiento subagudo en ratones inducido porD-gal, es una conocida vitamina liposoluble con excelenteactividad antioxidante [37,39,40]. Dado que VE no mostró un efecto promotor destacado en esta reducción producida por D-galde los indicadores de la función inmune de los ratones, era razonable inferir queel cierto efecto protector de la VE sobre el hígado y el riñón deD-los ratones que envejecen inducidos por gal podrían ser principalmentepor su cualidad antioxidante. Relativamente, COS, derivado de las conchas de camarones y cangrejos enel océano, posee una variedad de efectos biológicos, como el aumento del efecto sobre esta reducción inducida por D-galde indicadores de la función inmune de ratones, yD-gal-causó disminuciones en las actividades de claveenzimas antioxidantes en hígado y riñón de ratones [12,15–17]. Para concluir exhaustivamente nuestros resultados,podría considerarse que COS poseía efectos hepatoprotectores y renoprotectores enD-gal-inducidoratones de envejecimiento subagudo para darse cuenta de su actividad antienvejecimiento, que podría estar asociada con el antioxidantecapacidad de COS, así como su buen papel regulador en la función inmune de los ratones en mayor medida.

4.1. Materiales y Químicos

estudio fueron de grado analítico.

4.2. animales

ciclo de iluminación durante el período experimental de ocho semanas. Podían acceder al pellet estándardieta y bebida de agua ad libitum durante todo el período de estudio.

4.3. Preparación del modelo de ratón de envejecimiento subagudo y tratamiento COS

Después de la adaptación durante una semana, los ratones se dividieron aleatoriamente en seis grupos de ocho ratones cada uno.según Tabla3. Para establecer un modelo de ratón de envejecimiento natural,D-gal (250 mg/kg/día) fueinyectado por vía subcutánea en la parte posterior del cuello de los ratones una vez al día durante 56 días consecutivos. Mientraslos ratones del grupo normal recibieron cantidades iguales de solución salina fisiológica una vez al día en lugar deD-galón.Después de la inyección subcutánea deD-gal en ratones durante una hora, los ratones en los grupos normal y modelo fuerontratados con agua destilada por sonda (20 mL/kg/día); mientras tanto, los ratones del grupo VE fueron tratadoscon VE por sonda (50 mg/kg/día) como control positivo según informes recientes [37,39,40]. Ratonesen los grupos COS-L, COS-M y COS-H fueron tratados con las soluciones de muestra (tres dosis diferentesde COS) por día por sonda, respectivamente, que se administraron diariamente como el programa de tratamientomostrado en la tabla3.

4.4. Observación diaria de ratones

Durante el período experimental, el peso corporal de los ratones se midió mediante una balanza electrónicauna vez por semana. Además, el apetito, la apariencia, el estado mental y la actividad conductual de los ratonesen cada grupo fueron observados y registrados por semana, respectivamente.

4.5. Preparación de Ratones y Recolección de Muestras

calculado como el índice de órganos. Después de eso, el hígado y el riñón se almacenaron inmediatamente en−80 ◦C parael posterior análisis bioquímico. No hubo signos casuales o evidentes de toxicidad en todo elcurso de los experimentos y todos los ratones involucrados sobrevivieron.

4.6. Determinación de índices séricos

El suero se separó de la sangre entera por centrifugación a 4000 rpm durante 15 min a 4◦C y luego almacenado en−80 ◦C para análisis biológico. Un analizador automático de bioquímica (MindaryBS-480, Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd., Shenzhen, China) para medirlos niveles de ALT, AST, ALP, CREA, UA, IgG e IgM en el suero de ratones según el ensayoinstrucciones del equipo.

4.7. Medición de la Actividad Anti-Oxidación en Hígado y Riñón de Ratón

Para el análisis bioquímico, los tejidos de los órganos de cada ratón, incluidos el hígado y el riñón, seeliminado para preparar el 10 por ciento (w/v) se homogeneiza en una solución de NaCl al 0,9 % enfriada con hielo, seguido de centrifugacióna 3000 rpm durante 15 min a 4◦C, y luego el sobrenadante se mantuvo congelado a−70 ◦C hasta bioquímicaanálisis. Las concentraciones de proteína se midieron por el método del ácido bicinconínico (BCA) utilizando bovinoalbúmina sérica como estándar. Las actividades de SOD, CAT y GSH-Px, así como los niveles de MDAen el hígado y el riñón, fueron determinados por los kits de ensayo.

4.8. Examen histológico de hígado y riñón

Después del sacrificio, las muestras de tejido de órganos, incluidos el hígado y el riñón, se extrajeron rápidamente, se fijaron enParaformaldehído al 4 por ciento durante 24 h, deshidratado en grados ascendentes de alcohol, luego incrustado en parafina,y finalmente seccionada a un espesor de 5µmetro. Estas muestras fueron teñidas por HE para un examen de rutina.de estos tejidos.

4.9. Análisis estadístico

Todos los datos cuantitativos se presentaron como medias± DAKOTA DEL SUR. Los valores experimentales fueron analizados porANOVA de una vía. un valor dep < 0.05 was considered to be statistically signifificant. All analyses were realizado utilizando el Software de Análisis Estadístico (SPSS 17.0).

Conflictos de interés:Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

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