Respuestas bioquímicas e histopatológicas de Biomphalaria Alexandrina a RIPEX (regulador del crecimiento vegetal)Ⅱ

3 resultados

3.1 Toxicidad RIPEX

Los resultados de toxicidad de RIPEX para Biomphalaria alexandrina después de 1 día indicaron que los valores de LC50 y LC90 fueron 39,9 5 y 73,6 µL/L, respectivamente. Las concentraciones subletales de CL10 y CL20 fueron de 8 y 16 µL/L, respectivamente (Tabla 1 y Fig. 1).

3.2 Efecto de RIPEX sobre los marcadores de estrés oxidativo

La exposición a RIPEX afectó las actividades de SOD y GST y los niveles de MDA en la glándula digestiva de B. Alexandrina (Cuadro 2). Los caracoles expuestos a RIPEX a 8 µL/L mostraron un aumento insignificante (p=0.6) en la actividad de SOD en comparación con los caracoles de control. Sin embargo, los caracoles B. alexandrina expuestos a 16 µL/L durante 7 días exhibieron una reducción significativa en la actividad de SOD (p=0.05). La actividad de GST aumentó significativamente (p menor o igual a 0,001) después de la exposición a ambas concentraciones. El aumento más alto se observó en caracoles expuestos a 16 µL/L durante 1 día (39,7±3,2 U/mg) y el valor más alto a la concentración de 8 µL/L fue (33,7±1,7 U/mg) a los 7 días, en comparación con los controles a 17,1±3,6 U/mg (después de 1 día) y 22,6±1,3 U/mg (después de 7 días).

Click to cistanche beneficios para la testosterona

Según los intervalos de tiempo, la exposición durante 7 días provocó un aumento significativo (p=0.0{{20}}3). La exposición a diferentes concentraciones de RIPEX provocó un aumento significativo (p menor o igual a 0,04) en los niveles de MDA. La concentración de 8 µL/L aumentó el nivel de MDA (45,06±4,1) en comparación con el control (16,4±2,1). Según el tiempo de exposición, los niveles de MDA fueron 45,06±4,1 y 56,1±0,7 nmol/g en las concentraciones de 8 y 16 µL/L, respectivamente, en comparación con 13,5±0,7 nmol/g para el control (Tabla 2).

3.3 Efecto de RIPEX sobre la actividad de las hormonas esteroides

La exposición a 16 µL/L provocó un aumento significativo en la concentración de testosterona (52,6±2,5 nmol/L) (p=00,002) en comparación con el control (34,6±2,3 nmol/L). Mientras que la concentración de 8 µL/L de RIPEX provocó un aumento significativo (p=0.005) en la testosterona después de 3 días de exposición en comparación con 16 µL/L. Dependiendo de los intervalos de tiempo, no hay significado excepto la disminución significativa en la concentración de testosterona que ocurrió a los 7 días (19.6±2 nmol/L) de exposición (p=0.003) en comparación con los 3 días (47.3± 6 nmol/L). En cuanto al estradiol, hubo un aumento significativo (p=0.003) en la concentración de la hormona después de 3 días de exposición a 16 µl/L (73.6±3.5 pg/mL en comparación con el control (43.3 pg/mL) y 7 días de exposición a 8 µL/L (56,3±1,5 pg/mL en comparación con el control (50,3±5,6 pg/mL) (Fig. 2, b).

3.4 Efecto de RIPEX sobre las enzimas con potencial inmunitario

La exposición de B. Alexandrina a dos concentraciones de RIPEX provocó un aumento significativo en la actividad de la enzima MPO (Fig. 3a) dependiente del tiempo de exposición a los 3 días (p=0.0{ {35}}4) y 7 días (p=0.01). La exposición a 8 µL/L de RIPEX aumentó significativamente la actividad de la MPO (55,3±4,8 mU/mg de proteína (p=00,004) en comparación con 15,4±1,2 mU/mg del control. Mientras que la exposición a 16 µL/L caracoles la actividad fue (53,03±2,3 mU/mg de proteína y 73,9±2,8 mU/mg de proteína, p menor o igual a 0,05), también la concentración de 16 µL/L provocó un aumento significativo (p=0 .05) en la actividad en comparación con 8 µL Ambas concentraciones (8 y 16 µL/L) incrementaron significativamente (p menor o igual a 0.009) la actividad de ADA en comparación con el control (Fig. 3b) en todo momento puntos. El aumento de la actividad a la concentración de 16 µL/L. Dependiendo de los intervalos de tiempo, la exposición durante 7 días registró un aumento significativo en comparación con 1 día y 3 días (p menor o igual a 0.05). Los valores de la actividad a los 7 días fue de 27,03±14 y 74,3±1,9 U/mg de proteína

3.5 Recuento diferencial de hemocitos

El examen de muestras de hemolinfa de caracoles B. alexandrina indicó tres tipos morfológicamente distintos de hemocitos; hialinocitos, redondos, pequeños y hemocitos esparcidos. Los hialinocitos se caracterizan por su forma circular, membrana celular clara y densa y una gran proporción de núcleo a citoplasma. Se representa por un conteo alto en el control (56.3±0.5, 1 día). Las células redondas pequeñas son células intermedias con pocos gránulos citoplasmáticos y sin seudópodos. Los hemocitos en expansión tienen diferentes tamaños, con un núcleo pequeño y gránulos citoplasmáticos grandes. Son células fagocíticas porque pueden formar pocos seudópodos y de corta extensión. La exposición a las dos concentraciones de RIPEX aumentó el conteo de hemocitos, observándose un aumento significativo en los granulocitos de caracoles expuestos a 8 µL/L (p=0.02) y 16 µL/L (p{{12 }}.006) durante 1, 3 y 7 días en comparación con el control. (Tabla 3). El tratamiento provocó algunas anomalías morfológicas en los hemocitos, como hialinocitos con elongación filopodial, granulocitos deformados con vacuolas y filopodios diseminados (fig. 4).

3.6 Efecto de RIPEX en la histopatología de las glándulas digestivas y ovotestis

Las glándulas digestivas de B. Alexandrina están compuestas de túbulos, y cada túbulo consta de una capa de células epiteliales cilíndricas diferenciadas en células digestivas y secretoras, que se organizan alrededor de una luz central (Fig. 5a). Los túbulos están unidos entre sí por tejido conectivo. La exposición a RIPEX provocó algunas alteraciones, como la degeneración del tejido conectivo. Los caracoles expuestos a 8 µL/L mostraron la presencia de ampollas celulares, lo que indica la muerte de las células y la obstrucción de la luz. Se observó comida no digerida (Fig. 5b-d). Los caracoles expuestos a 16 µL/L mostraron degeneración de las células revestidas con algunos signos patológicos como vacuolización y dilatación de la luz. El túbulo se dañó, se deformó y se necrosó (Fig. 5e, f).

Los ovotestis de los caracoles B. alexandrina de control consisten en varios ácinos unidos por tejido conectivo. Cada acino está revestido con epitelio germinal compuesto por diferentes etapas de espermatogonias y ovogonias. Se diferencian en ovocitos primarios, secundarios y uno o dos maduros (ovogonias). Los espermatozoides maduros se encuentran en grupos dentro del acino (Fig. 6a). La estructura histológica de los ovotestis de los caracoles expuestos cambió después de 7 días de exposición a RIPEX. En caracoles expuestos a 8 µL/L, se observó un número creciente de espermatozoides, espermatozoides necróticos y atrofia. También fueron abundantes la deformación de los gametocitos masculinos o femeninos y la degeneración de los ácinos. Además, la exposición a 16 µL/L hizo que los acinos se degeneraran más y aumentara la necrosis (Fig. 6b-e).

4. Discusión

Existe un amplio uso de reguladores de crecimiento en las prácticas agrícolas. Estas sustancias tienen numerosos efectos nocivos sobre los organismos vivos. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar los impactos toxicológicos de RIPEX (un pesticida organofosforado que contiene etefón que contiene 48 por ciento de etefón como ingrediente activo más 52 por ciento de ingredientes inertes). Los ensayos de toxicidad de RIPEX con B. Alexandrina indicaron que los valores de LC50 y -LC90 de 1-días fueron 39,95 y 73,6 µl/L, respectivamente.

Estos resultados fueron respaldados por [54], quienes demostraron el valor EC50 del etefón contra embriones de Daphnia magna (125 mg/L después de 48 h de exposición). Este plaguicida parece más tóxico para Biomphalaria que otras formulaciones de compuestos organofosforados como el clorpirifos (LC50 9.6 mg/L; [30] y profenofos (LC50 1.10 mg/L; [10]) .

Existe una homeostasis entre la generación de radicales libres de oxígeno y la producción de moléculas antioxidantes en condiciones fisiológicas normales [23]. Un desequilibrio entre los sistemas antioxidante y oxidante se conoce como estrés oxidativo [32]. Tanto en eucariotas como en procariotas, la superóxido dismutasa (SOD) y la glutatión S-transferasas son enzimas antioxidantes cruciales que pueden eliminar demasiado oxígeno de los radicales libres y proteger al organismo del daño oxidativo [34, 38].

También participan en la desintoxicación de varios xenobióticos [8, 15]. El presente estudio reveló que la exposición de los caracoles B. alexandrina a concentraciones subletales de RIPEX 48 por ciento EC alteró la actividad antioxidante de los caracoles expuestos. La exposición aguda (24 h) tiende a reducir las actividades generales de SOD y GST en los caracoles, seguido de un aumento después de 3 días de exposición y una fuerte inhibición después de 7 días de exposición.

Los niveles de MDA fueron significativamente más altos en los caracoles expuestos en comparación con los controles después de todos los períodos de exposición. Estos resultados sugieren un estado de estrés oxidativo en caracoles inducido por la exposición a RIPEX. Los caracoles experimentaron una disminución repentina en las actividades enzimáticas después de 1 día de exposición e intentaron compensar con una sobreproducción de enzimas después de 3 días de exposición. Sin embargo, al séptimo día de exposición, los caracoles no pudieron superar el exceso de producción de especies reactivas de oxígeno, como se manifiesta en el aumento de los niveles de MDA (peroxidación lipídica), lo que lleva a una inhibición de la producción de enzimas antioxidantes. La MDA se encuentra entre los principales impactos de la peroxidación lipídica y tiene el poder de interrumpir el intercambio iónico en la membrana celular, modificar la permeabilidad iónica e influir en la función enzimática [9].

El mecanismo del estrés oxidativo inducido por RIPEX 48 por ciento EC en Biomphalaria puede diferir de otros plaguicidas organofosforados. Provocó inhibición enzimática solo después de 7 días de exposición. Sin embargo, el clorpirifos, por ejemplo, provocó un aumento en la actividad de SOD y una reducción en la actividad de GST en B. Alexandrina poco después de 1 día de exposición [30]. La testosterona y el estradiol juegan un papel crucial en la reproducción de los caracoles B. alexandrina [20, 45]. Los cambios en estas hormonas se pueden utilizar como criterio de valoración de la toxicidad química [14]. RIPEX 48 por ciento EC causó una alteración hormonal en los caracoles B. alexandrina.

Los caracoles expuestos a 16 µL/L mostraron un aumento significativo de testosterona después de 3 días de exposición. Sin embargo, RIPEX disminuyó los niveles hormonales en caracoles expuestos a 8 µL/L después de 1 y 3 días de exposición. Sobre el estradiol, la hormona tiende a aumentar en los caracoles expuestos. Sin embargo, el aumento más destacado se observó en caracoles expuestos a 16 µL/L después de 3 días de exposición. Por lo tanto, RIPEX puede tener un efecto de alteración endocrina en los caracoles B. alexandrina. Ibrahim y Hussein [30] también informaron hallazgos similares, quienes informaron un aumento significativo en los niveles de testosterona y estradiol después de la exposición de B. Alexandrina a concentraciones subletales de clorpirifos al 48 por ciento EC. Sin embargo, otros agroquímicos, como el herbicida oxifluorfeno (24 por ciento EC), redujeron los niveles de testosterona y 17-estradiol en B. Alexandrina después de dos semanas de exposición [31]. La mieloperoxidasa (MPO), que convierte el H2O2 en ácido hipocloroso (HOCl), un potente antibiótico, se considera con frecuencia como la piedra angular de la citotoxicidad mediada por ROS, y existe una fuerte evidencia de que los hemocitos de los moluscos tienen una actividad de MPO comparable a la de los fagocitos de los mamíferos [22]. , 44, 49]. La adenosina desaminasa (ADA) desempeña un papel importante en el sistema inmunitario de los animales vertebrados e invertebrados, incluidos los caracoles Biomphalaria [51].

Su deficiencia está relacionada con la enfermedad de inmunodeficiencia combinada [25]. La exposición de B. Alexandrina a 8 y 16 µL/L de RIPEX provocó un aumento significativo en las actividades de las enzimas MPO y ADA en las glándulas digestivas de los caracoles después de 3 y 7 días de exposición. El aumento de la actividad enzimática parece depender del tiempo y de la concertación. Las glándulas digestivas son el sitio principal para el metabolismo de los contaminantes químicos en los gasterópodos [46]. El aumento de estas enzimas sugiere una respuesta inmunológica de B. Alexandrina a la toxicidad de RIPEX ya que MPO, por ejemplo, puede convertir contaminantes en radicales libres a través de abstracciones de un solo electrón [41], lo que puede dar lugar a eventos de ciclo redox que producen oxirradicales y posiblemente inicien peroxidación lipídica [36].

Los caracoles dependen principalmente de la citotoxicidad mediada por células para deshacerse de los objetos invasores [5, 53]. Las células defensivas mejor estudiadas en los caracoles son los hemocitos. Los hemocitos progresan de células agranulares pequeñas y redondeadas a células grandes, granulares y en expansión a través de fases intermedias [6, 53]. Los hemocitos granulares en su mayoría fagocitan sustancias extrañas [28]. La exposición a dos concentraciones de RIPEX 48 por ciento EC aumentó el conteo de hemocitos. Los hialinocitos aparecieron con vacuolas en muestras recolectadas de caracoles expuestos. Se observó un aumento significativo en los granulocitos, lo que indica un aumento en la respuesta inmunitaria celular del caracol para desafiar la toxicidad de RIPEX. Ibrahim y Hussein [30] demostraron que la exposición de B. Alexandrina al clorpirifos tuvo un impacto negativo en la morfología y el recuento total de hemocitos de los caracoles expuestos.

Además, la microscopía óptica reveló que algunos hialinocitos tenían núcleos encogidos, división celular incompleta y formación de pseudópodos. Estos efectos sobre el recuento de hemocitos y la morfología de B. Alexandrina tienen una implicación negativa sobre la inmunidad de los caracoles, ya que estos organismos dependen en gran medida de los hemocitos para su protección contra encuentros con el exterior. Las investigaciones histopatológicas de las glándulas digestivas de B. Alexandrina mostraron que la exposición a RIPEX durante 7 días provocó algunas alteraciones patológicas, como la degeneración del tejido conectivo, ampollas celulares y la degeneración de las células revestidas en la luz. Los túbulos digestivos se dañaron, deformaron y necróticos. La histopatología es un punto final importante en la evaluación de los cambios patológicos en los animales acuáticos expuestos a contaminantes [33].

La alta sensibilidad de las glándulas digestivas se atribuye directamente a su papel en la homeostasis, la absorción de contaminantes, la digestión, el metabolismo y el proceso de desintoxicación [24]. Los efectos observados pueden deberse a la acumulación directa de RIPEX en las células de la glándula digestiva o indirectamente a través del daño oxidativo causado por la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). De hecho, el estrés oxidativo extremo se ha relacionado con el daño tisular que involucra una variedad de procesos fisiológicos y variables ambientales, incluida la muerte celular necrótica y apoptótica [19]. Además, la exposición a dos concentraciones diferentes de RIPEX durante 7 días alteró la estructura histológica de los ovotestis con un aumento en el número de espermatozoides necróticos, atrofia, deformación de los gametocitos masculinos o femeninos y degeneración de los ácinos. Es probable que estos cambios reduzcan el potencial reproductivo de los caracoles y, por lo tanto, su aptitud en el sistema acuático.

5. Conclusión

Las concentraciones subletales de RIPEX 48 por ciento EC tuvieron un efecto multifacético en los caracoles Biomphalaria alexandrina. En caracoles, la exposición crónica a RIPEX redujo la producción de las enzimas antioxidantes SOD y GST mientras aumentaba la producción de MDA, lo que indica un estado de estrés oxidativo. Además, tuvo un efecto disruptor endocrino en los caracoles, como lo demuestra un aumento general en los niveles de hormonas esteroides. El sistema inmunológico del caracol parece ser vulnerable a la exposición a RIPEX. Provocó un aumento significativo de la actividad de las enzimas MPO y ADA en las glándulas digestivas de los caracoles después de 3 y 7 días de exposición, así como un aumento significativo de los granulocitos en los grupos de caracoles expuestos. Las anomalías patológicas en las glándulas digestivas y los ovotestículos de los caracoles expuestos también fueron signos de cambios histopatológicos causados ​​por la exposición a RIPEX. Estos hallazgos muestran que RIPEX daña la fauna acuática, incluida B. Alexandrina. Por lo tanto, los caracoles Biomphalaria se pueden utilizar como bioindicadores de la contaminación ambiental con reguladores del crecimiento vegetal.

El mecanismo de Cistanche potencia el efecto de la testosterona

Se ha descubierto que Cistanche aumenta los niveles de testosterona de varias maneras. En primer lugar, contiene compuestos conocidos como equinacósido y acteósido, que se ha demostrado que mejoran la producción de la hormona luteinizante (LH) en la glándula pituitaria. LH estimula las células de Leydig en los testículos para producir testosterona. Cistanche también contiene polisacáridos y glucósidos feniletanoides, que han demostrado tener propiedades antioxidantes y antiinflamatorias. Esto puede ayudar a reducir el estrés oxidativo y la inflamación en los testículos, lo que puede afectar la producción de testosterona. Además, se ha descubierto que Cistanche aumenta la expresión de genes involucrados en la síntesis de testosterona y reduce la actividad de las enzimas que descomponen la testosterona, como {{1} }alfa-reductasa. En general, se cree que la combinación de estos mecanismos contribuye a los efectos potenciadores de la testosterona de Cistanche.