Cistanche Lacerata Mycelium Culture Medium como un nuevo material microbiano antienvejecimiento para aplicaciones cosmecéuticas Ⅱ
Mar 27, 2023
3. Resultados y discusión
3.1. Medición de la actividad antioxidante
Elactividad antioxidantede las soluciones fue evaluada por los ensayos DPPH y ABTS. Dado el hecho de que la mayoría de los antioxidantes naturales contienen hidrógenos reactivos, que sirven como reductores, los ensayos DPPH y ABTS son una medida útil del perfil antioxidante estándar. Como se muestra en la figura2, la solución CLEPS (5 mg/mL) exhibió la capacidad de eliminar ~81 por ciento de DPPH (a) y ~85 por ciento de ABTS (b) radicales libres (oxígeno activo) como equivalente al ácido ascórbico (AA, 1 mg/mL).
3.2. Ensayo de viabilidad celular
Como se presenta en la figura3, no se observó toxicidad en la viabilidad de NHDF (a) y células de melanoma B16 (b) cuando se probó CLEPS en una amplia gama de concentraciones (0.05–7 mg/mL). Además, se determinó que el tratamiento con CLEPS podría inducirproliferación de células de fibroblastosde manera dependiente de la dosis a 1-7 mg/mL. Este hallazgo estaba en buen acuerdocon la de otro estudio, que informó sobre el efecto de proliferación celular de unpolisacárido bioactivoextracto de Cistanche Tubulosa [21].
3.3. Nivel de expresión de Filaggrin
Las filagrinas son adhesivos que mantienen unida la queratina, aplanando gradualmente la forma de los queratinocitos, aumentando la resistencia de la barrera cutánea y fortaleciendo la cohesión entre las células en la superficie de la piel [22]. Como se presenta en la figura3c, cuando las células HaCaT se trataron con CLEPS (30–300 µg/ml), el nivel de expresión de filagrina a 300 µg/ml aumentó significativamente en un 36 % en contraste con el grupo no tratado, lo que confirma que CLEPS podría mejorar o preservar la capacidad de la barrera de la piel e hidratar a través de la regulación al alza de la filagrina. Para evaluar la función eficaz contra la sequedad de la piel a través de la regulación al alza de la filagrina, los extractos de plantas derivados deArtemisa princeps[23], Rodiola crenulada[24], o una mezcla deActinidia argutayPerilla frutescens[25], mientras que un metabolito fúngico como GFF [26] fue investigado. En este sentido, CLEPS sería un nuevo ingrediente potenciador de la filagrina basado en un metabolito fúngico si se desarrolla más.
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3.4. Prueba de inhibición de melanogénesis de células de melanoma B16
Cuando se añadió CLEPS (0.5, 1,5 mg/mL) a los melanocitos inducidos por -MSH, la síntesis de melanina se inhibió efectivamente en un 43 %, 54 % y 57 %, respectivamente, de manera dependiente de la concentración (Cifra3d). Se ha confirmado que CLEPS puede regular a la baja la síntesis de melanina de manera más eficiente que 50 µg/ml de arbutina (41 por ciento). Como compuesto activo extraído de la planta de gayuba enArctostaphylos, la arbutina es un supresor de melanina bien conocido en melanocitos humanos cultivados o melanocitos murinos B16 [27]. Aunque, por lo tanto, se usa ampliamente como un agente para aclarar la piel en el mercado cosmético, quedan muchas incertidumbres, es decir, la arbutina es una hidroquinona glicosilada que puede causar riesgos de cáncer.28]. Teniendo en cuenta que la arbutina es un compuesto único blanqueador reconocido, es muy alentador que CLEPS no solo exhibiera un efecto blanqueador de la piel al inhibir la síntesis de melanina, sino que también mostró una función blanqueadora superior a la arbutina, a pesar de que es un compuesto complejo no identificado.
3.5. Ensayo antiinflamatorio de NO, iNOS, COX2 y TNF
Cuando se trató CLEPS 500 µg/mL, los niveles de factores relacionados con la inflamación, NO (a), iNOS (b), COX2 (c) y TNF (d) se redujeron significativamente en ~75 por ciento, ~85 por ciento, 62 por ciento y 55 por ciento, respectivamente (Figura4). Se confirmó que CLEPS ejerce un efecto antiinflamatorio al regular la vía de señalización inflamatoria mediante la supresión de la producción de NO y la expresión de genes relacionados con la inflamación. La potente inhibición de la actividad de NO y TNF fue comparable a la de los hongos comestibles disponibles comercialmente, como Enoki, Shiitake y Oyster, como las especies antiinflamatorias más potentes entre los hongos (IC50 < 0,1 mg/mL ) [29].
3.6. Síntesis de Colágeno e Inhibición de Colagenasa
El colágeno no solo es un componente clave que sustenta la estructura de la piel, sino que también puede controlar directamente el microambiente de la herida, servir como andamio para la adhesión y función celular, o proporcionar ingredientes biológicamente activos para ayudar a la cicatrización de heridas [1]. Cuando está dañada o deficiente, la piel puede arrugarse, deformarse o causar enfermedades de la piel. Para confirmar el antiarrugasla eficacia del CLEPS, la síntesis del colágeno y la inhibición de los ensayos de colagenasa se realizaron como se muestra en la Figura5. En comparación con los grupos de control, los grupos tratados con 10 ng/mL de TGF- como control positivo mostraron un aumento sustancial en la síntesis de colágeno de ~52 por ciento. La síntesis de colágeno aumentó al 27,4 %, 31,9 % y 65,4 % en los grupos tratados con CLEPS en concentraciones de 0,5, 1 y 5 mg/mL, según la concentración. El PMA es una de las principales sustancias generadoras de ROS y se ha utilizado habitualmente como inductor endógeno de la producción de superóxido, que puede aumentar la actividad de las MMP en los fibroblastos dérmicos, lo que provoca la degradación de las proteínas de la matriz extracelular (ECM) y el envejecimiento prematuro de la piel.30]. En este trabajo, las proteínas MMP-1 aumentaron sustancialmente después de ser tratadas con 50 nM de PMA, mientras que se redujeron sustancialmente al 93,4 por ciento en presencia de CLEPS (5 mg/mL) de manera dependiente de la concentración, lo que indica que CLEPS suprimió la actividad de colagenasa al inhibir el estrés oxidativo inducido por PMA para hacer que las células NHDF mueran. Por lo tanto, se confirmó que CLEPS podría ser eficaz en la mejora de las arrugas a través de la síntesis de colágeno y la reducción de la colagenasa en la ECM de la piel.
Figura 5. Efecto de CLEPS sobre la síntesis de colágeno (a) (p > 0.05 vs. control) e inhibición de la colagenasa (b) (p > 0,05 vs. sin PMA).
3.7. Ensayo de cicatrización de heridas in vitro
Figura 6. Realizado desde 0 ha 48 h para analizar los efectos de CLEPS (0-1 mg/mL) en células HaCaT Barra de escala=100 um (a). Se cuantificó la recuperación de heridas mediante el tratamiento con CLEPS en comparación con cada grupo de dosis cero (* p < 0.05) (b).
Por lo tanto, CLEPS puede contener ingredientes bioactivos relacionados con propiedades antienvejecimiento, antioxidantes y antiinflamatorias. En el estudio inicial anterior, una condición de cultivo sumergido para la producción de biomasa de micelio y EPS porC. lacerarfueron estudiados [33]. Como resultado de los análisis de EPS mediante HPLC, FT-IR y RMN, se descubrió que estaba compuesto de polisacáridos, incluidos manosa (83,36 por ciento), galactosa (12,54 por ciento) y glucosa (4,10 por ciento). Algunos flavonoides (p. ej., dimetil chalcona) y sesquiterpenoides tremulantes (p. ej., trifenilo) también se han aislado como potentes componentes bioactivos.34,35]. Sin embargo, se necesita más investigación para aclarar estos compuestos activos.
En conjunto, nuestros hallazgos indicaron que CLEPS como una nueva solución para el cuidado de la pielejerce un efecto cosmecéutico potencial sobre el envejecimiento de las células de la piel humanaa través deantioxidante, anti inflamatorio,anti-ruptura de la barrera de la piel, ycicatrización de la herida. Especialmente, CLEPS no solo aumentó significativamente la síntesis de colágeno y filagrina, sino que también inhibió notablemente la actividad de la colagenasa, lo que posiblemente indica que CLEPS podría prevenir el daño de la barrera cutánea o las arrugas de la piel. Aunque se desconocen los compuestos exactos que producen estos efectos, CLEPS como ingrediente antienvejecimiento natural novedoso podría usarse como un cosmético funcional innovador. Además, el proceso de fabricación de CLEPS no es un proceso de extracción que utilice principalmente disolventes químicos orgánicos o realice pruebas con animales, sino un proceso de cultivo microbiano ecológico, ecológico y ecológico, que puede encajar bien con las últimas tendencias de belleza en el "veganismo". "mercado de cosméticos.
Contribuciones de autor:Conceptualización, J.-HK y YSK; curación y análisis de datos, CA y J.-HK; administración de proyectos, J.-HK y YSK; adquisición de fondos, YSK; redacción—borrador original, J.-HK; redacción: revisión y edición, J.-HK, CA y SDH Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.
Fondos:Esta investigación fue financiada en parte por la Agencia de Promoción del Clúster Nacional de Alimentos de Corea (FOODPOLIS) del Ministerio de Agricultura, Alimentación y Asuntos Rurales de Corea, nombre de la subvención: "Nuestros alimentos para el mundo (Evaluación de seguridad y eficacia)".
Declaración de la Junta de Revisión Institucional:No aplica.
Declaración de consentimiento informado: No aplica.
Conflictos de interés: No se conocen conflictos de interés asociados con esta publicación y no ha habido apoyo financiero significativo para este trabajo que podría haber influido en su resultado.
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Referencias
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