Huella digital de la naturaleza: análisis de penetración en la piel de una planta de ortiga Formulación de cristales

Abstracto:

Antecedentes: Los cristales vegetales son un nuevo concepto para producir formulaciones a base de plantas. Su principio se basa en la disminución de partes o plantas enteras. En este estudio, se investigó el efecto de un surfactante en PlantCrystals de hoja de ortiga. En segundo lugar, se compararon los contenidos del material a granel y la formulación de PlantCrystals. Además, por primera vez, se investigó la penetración cutánea de PlantCrystals.

Métodos: Se molieron hojas de ortiga con homogeneización a alta presión. Los tamaños se analizaron mediante microscopía de luz y dispersión de luz estática. Para investigar el efecto de la molienda, se determinaron los contenidos de flavonoides y carotenoides totales, y se midió la capacidad antioxidante de la formulación mediante el contenido de polifenoles totales y el ensayo DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazilo). .

Finalmente, se investigó el impacto en la penetración de la piel. Resultados: El análisis de tamaño mostró un efecto estabilizador del surfactante, y el análisis químico reveló contenidos más altos de flavonoides y polifenoles para PlantCrystals. La penetración de la formulación en el estrato córneo demostró ser prometedora; PlantCrystals poseía una mayor fluorescencia y homogeneidad percibidas visualmente en comparación con el material a granel. Conclusión: El concepto de PlantCrystals mejoró la disponibilidad de componentes valiosos y la eficacia de penetración. La utilización de la fluorescencia de clorofila natural para el análisis de penetración en la piel de formulaciones a base de plantas demostró ser muy eficaz.

La piel es uno de los órganos más grandes del cuerpo humano y sus signos de envejecimiento se revelan gradualmente con la edad. El envejecimiento de la piel se caracteriza por piel seca, aumento de las arrugas y disminución de la elasticidad. Cistanche contiene una gran cantidad de flavonoides y polisacáridos, estos ingredientes tienen efectos antioxidantes, antiinflamatorios, antioxidantes y otros efectos, y pueden prevenir y revertir el envejecimiento de la piel.

Los flavonoides en Cistanche pueden inhibir la generación y eliminación de radicales libres, reducir el daño del estrés oxidativo a las células de la piel, proteger las células de la piel y retrasar el proceso de envejecimiento de la piel. Los estudios han demostrado que los polisacáridos en Cistanche pueden estimular el crecimiento y la división de las células de la piel y mejorar la elasticidad y el brillo de la piel.

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Palabras clave:

antioxidantes; antienvejecimiento; PlantaCrystals; urtica dioica; penetración de la piel.

1. Introducción

La eterna juventud y la belleza siempre han sido deseables para la humanidad, y los intentos por lograrlos han tenido lugar desde la antigüedad. Hoy, la idea se ha traducido en estrategias antienvejecimiento. El objetivo ya no es la conservación de la salud general para siempre, sino el apoyo integral de un cuerpo sano y el retraso de los mecanismos metabólicos relacionados con la edad [1,2]. Desde un punto de vista cosmético, el antienvejecimiento está predominantemente relacionado con la percepción visual de la piel humana, porque el envejecimiento puede reconocerse fácilmente, por ejemplo, las arrugas o la flacidez de la piel [1,3].
Sin embargo, la piel no debe ser considerada únicamente desde un punto de vista cosmético; es el órgano más grande y la barrera entre el cuerpo y el mundo exterior [4]. Por lo tanto, una piel intacta y saludable también es importante desde una perspectiva médica. El fotoenvejecimiento (exposición a la luz ultravioleta) se conoce más comúnmente como un factor exógeno responsable del envejecimiento de la piel junto con otros factores, por ejemplo, el tabaquismo o la contaminación del aire [5]. Estos factores son a menudo oxidantes en sí mismos o inducen procesos frecuentemente relacionados con la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), respectivamente [1,6].

Además, un estrato córneo (SC) deteriorado con una función de barrera perdida puede causar la generación de ROS, dañando así las capas celulares subyacentes, lo que da como resultado, por ejemplo, envejecimiento extenso, inflamación o cáncer de piel. Por lo tanto, la entrega de antioxidantes a la piel puede retrasar o prevenir el efecto dañino de ROS, fortalecer el SC y aumentar su función protectora [7,8]. Hoy en día, el efecto antienvejecimiento de los antioxidantes ha aumentado su popularidad, y las demandas de los consumidores no solo se centran en la eficacia y el precio de un producto, sino también en la sostenibilidad [9]. Estudios recientes han demostrado que los materiales vegetales podrían refinarse de manera sostenible mediante la anodización, lo que puede estimular un potencial no descubierto [10–12].

Sobre la base de estos resultados, PlantCrystals es un nuevo concepto para el procesamiento de plantas al reducir el tamaño de todo el material al rango inferior de micro o incluso nano sin la necesidad de solventes orgánicos o la producción de desechos orgánicos. Otra ventaja de PlantCrystals en comparación con los extractos ordinarios es la ruptura celular del material orgánico. Esto conduce a la liberación de todos los activos del material utilizado y su retención dentro de la formulación. Por el contrario, un extracto se limita a uno oa una fracción de ingredientes con propiedades químicas similares (por ejemplo, solubles en agua o en etanol). En consecuencia, en este estudio, se usaron hojas de ortiga (SN) (Urtica dioica), también llamada la "Reina de las hierbas", para la producción de PlantCrystals y se aplicaron sobre la piel [13].

Por lo general, SN se conoce como diurético, pero el efecto farmacéutico no se limita a eso. Se pueden atribuir numerosos beneficios para la salud a la SN y todavía se están investigando muchos efectos farmacológicos, por ejemplo, antioxidantes, antimicrobianos, antimitóticos, analgésicos, antiinflamatorios y anticancerígenos [14,15]. Teniendo en cuenta la piel como objetivo, la SN tiene una gran variedad de componentes con efectos beneficiosos, por ejemplo, clorofila, carotenoides y polifenoles [15,16]. La literatura informa varias propiedades farmacológicas favorables después de la aplicación dérmica de extractos de SN, por ejemplo, antiinflamatorio y antioxidante [17].

Hasta ahora, PlantCrystals nunca se ha aplicado ni analizado en la piel. Como PlantCrystals se puede producir con un número incontable de plantas, sería beneficioso un análisis sin la necesidad de un método individualizado para cada muestra. El enfoque para superar este problema fue la utilización de una cosa que la mayoría de las plantas tienen en común: la clorofila (ayb) (Figura 1). La fluorescencia de la clorofila es bien conocida y ha sido investigada [18]. Si las secciones histológicas exhiben clorofila penetrada en una cantidad suficiente, que puede reconocerse mediante microscopía de fluorescencia, la penetración en la piel de las formulaciones a base de plantas podría analizarse fácilmente.

El objetivo principal de este estudio fue el desarrollo de una formulación de SN PlantCrystals para aplicación dérmica y la estimación de la penetración SC. SN no se había procesado en PlantCrystals en el pasado; en consecuencia, el primer objetivo fue el establecimiento de un proceso que pueda reducir el tamaño del material grueso a un micrómetro más bajo o incluso a un rango de tamaño más pequeño. Además, se evaluó el impacto de un tensioactivo adicional sobre los tamaños obtenidos y la aglomeración de la formulación. En segundo lugar, se investigó una suspensión a granel y SN PlantCrystals con diferentes ensayos para comparar el contenido de polifenoles, flavonoides y carotenoides, y la capacidad antioxidante. Abrahán et al. ya mostró que el impacto de la disminución en la actividad depende de la planta elegida y del proceso de producción [11]. Por lo tanto, una comparación de material procesado y material a granel es inevitable para probar que el proceso aplicado es beneficioso para la planta formulada. Después de lograr estos requisitos previos, la aplicación dérmica se verificó con el nuevo concepto de "huella digital de la naturaleza" mediante la detección de la fluorescencia natural de la clorofila para estimar la penetración SC. Esto conduciría a un método que permite una posibilidad rápida, fácil y rentable de estimar la penetración de formulaciones a base de plantas en la piel.

2. Materiales y métodos

2.1. Producción de PlantCrystal

Blank's GmbH and Co. KG (Uplengen, Alemania) proporcionó amablemente hojas secas de SN de calidad orgánica (Figura 2A). El material grueso se redujo con un molino de café (CM) (CG9100, AICOK, Guangdong, China) para obtener una muestra en polvo para su posterior procesamiento. Posteriormente, la muestra en polvo (Figura 2B) se dispersó en agua a una concentración del 3 por ciento (p/p). Además, se produjo una muestra que contenía 3 por ciento (p/p) del tensioactivo TPGS aprobado por la FDA (-tocoferol polietilenglicol succinato, Gustav Parmentier GmbH, Frankfurt a. M., Alemania). Ambas muestras se agitaron durante la noche a temperatura ambiente para permitir que las partículas se hincharan para una mejor procesabilidad y para garantizar que no se produjera ningún cambio de tamaño más adelante (CM más S).

En el siguiente paso, las muestras se desaglomeraron con un Ultra-Turrax (T 25 digital, IKA-Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Alemania) durante un minuto aumentando la velocidad de rotación de 3000 a 25,{ {11}}. El siguiente paso de premolienda se realizó con un Miccra D27 (MICCRA GmbH, Heitersheim, Alemania) para reducir aún más el tamaño de las partículas más grandes. Las muestras se procesaron cuatro veces con una velocidad de rotación creciente durante 5 min con 7000, 12,000, 18 000 y 24 000 rpm.

La disminución final de partículas se realizó mediante homogeneización a alta presión (HPH) con un LAB 40 (APV Gaulin, Lübeck, Alemania) a 500, 750, 1000 y 1500 bar cinco veces cada uno (Figura 2C). Para el análisis de contenido, se analizaron muestras sin TPGS para excluir el impacto de TPGS durante las mediciones o una posible extracción adicional o protección de los ingredientes activos debido a la formulación de micelas de TPGS [19]. Para los estudios de penetración en la piel, se utilizaron muestras que contenían TPGS para garantizar una buena humectabilidad y capacidad de esparcimiento de la formulación de PlantCrystals. Como control, para mostrar el efecto de la disminución, se utilizó una suspensión a granel de hojas de SN hinchadas durante la noche (Figura 2A) con la misma concentración.

2.2. Análisis de tamaño de partículas

Se utilizó microscopía de luz (Olympus BX53, Olympus Cooperación, Tokio, Japón) para el examen visual de las muestras. Se llevó a cabo un análisis adicional del tamaño de partículas mediante dispersión de luz estática (SLS, Mastersizer 3000, Malvern Instruments, Kassel, Alemania), con un índice de refracción de 1,47 y un índice de absorción de 0,01. Los resultados se calcularon como una distribución volumétrica (D(v)) y numérica (D(n)). La distribución de tamaño basada en volumen es D(v)0.x significa que x por ciento del volumen total (volumen resumido de todas las partículas) está representado por partículas con un tamaño igual o inferior al número dado.

Por lo tanto, el valor D(v) enfatiza las partículas de mayor tamaño a la potencia de tres y es importante para comprobar si hay aglomerados y partículas grandes. Una distribución de tamaño basada numéricamente D(n)0,x significa que x por ciento de las partículas es igual o menor que el valor dado. El valor D(n) es de gran importancia con respecto al estudio de la piel, ya que enfatiza la fracción principal de los tamaños de partículas presentes en la muestra, que están principalmente involucradas en el proceso de penetración. Una combinación de resultados volumétricos y numéricos debería brindar más información sobre el procesamiento de la muestra y el impacto del surfactante en las fracciones de partículas de gran tamaño (D(v)) y la fracción de tamaño de partículas principal (D(n)).

2.3. Contenido total de polifenoles

Se utilizó el ensayo colorimétrico de Folin-Ciocalteu para evaluar el contenido de polifenoles totales y, posteriormente, la capacidad antioxidante de las muestras [20]. Primero, se mezclaron 100 µL de la suspensión de SN con 200 µL de reactivo de Folin-Ciocalteu (Merck KGaA, Darmstadt, Alemania) y 2 mL de agua purificada, y posteriormente se incubó a temperatura ambiente durante 5 min. Después de eso, se añadió 1 mL de Na2CO3 al 20 por ciento (p/v) y se incubó en la oscuridad durante 1 h. Finalmente, la mezcla de reacción obtenida se midió espectroscópicamente a 765 nm (Multiskan GO, Thermo Scientific, Dreieich, Alemania). El cálculo del contenido se realizó tomando como estándar el ácido gálico, y los resultados se expresan en equivalente de ácido gálico (mg GAE).

2.4. Contenido de flavonoides

Para la determinación del contenido de flavonoides se utilizó una reacción de formación de complejos de aluminio, que es un método espectrofotométrico ampliamente utilizado para determinar los diferentes compuestos flavonoides en muestras de alimentos y plantas [21]. Además, se añadieron 100 µL de cada suspensión diluida a 100 µL de una solución de etanol de AlCl3 al 2 por ciento (p/v) en una placa de 96-pocillos y se incubó en la oscuridad durante 1 h. Posteriormente, se midió la absorbancia de las muestras a 420 nm. El cálculo del contenido se realizó con quercetina (Biomol GmbH, Hamburgo, Alemania) como estándar y los resultados se expresan como equivalente de quercetina (µg QE).

2.5. Contenido total de carotenoides

El contenido de carotenoide de las muestras se determinó midiendo la absorción espectral del carotenoide a una longitud de onda específica, utilizando el método de Rodríguez-Amaya [22]. La absorbancia de cada muestra se midió a 450 nm. El cálculo se realizó con respecto a la curva estándar de -caroteno (TCI Deutschland GmbH, Eschborn, Alemania), y los resultados se expresan como µg de -caroteno equivalente (µg CE).

2.6. Capacidad Antioxidante

La capacidad antioxidante se evaluó mediante el ensayo DPPH, que emplea los radicales libres 1,1-difenil2-picrilhidrazilo (DPPH) como indicador [23]. Brevemente, se preparó 0solución metanólica de 0,2 mM de DPPH (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, EE. mezclado con 100 μL de la solución DPPH. La placa se incubó en la oscuridad durante 30 min y se midió la absorbancia a 517 nm [23]. La actividad de eliminación de radicales libres se calculó de acuerdo con la siguiente ecuación:

donde el porcentaje de RSA es la actividad de eliminación de radicales en porcentaje, ADPPH es la absorbancia de DPPH y una muestra es la absorbancia de la muestra. Las concentraciones de la muestra y su correspondiente porcentaje de RSA se representaron en un gráfico para calcular el valor IC50.

2.7. Análisis estadístico

El análisis estadístico de los datos se realizó con el software GraphPad Prism® (v. 8.3, GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, EE. UU.), y se aplicó una prueba t pareada para comparar, donde los valores de p < {{4 }}.05 se consideraron estadísticamente significativos.

2.8. Determinación de la penetración en la piel

El estudio de penetración en la piel se realizó en orejas de porcino frescas, obtenidas de un matadero local como subproductos de la producción de carne. Las orejas de cerdo se utilizan como modelo de piel ex vivo, debido a la similitud entre la piel de cerdo y la humana [24–26]. Después de limpiar con agua purificada y secar cuidadosamente con toallas de papel, se aplicaron 50 mg de cada muestra en un área de examen de 2 × 2 cm. Posteriormente, las formulaciones se masajearon en la piel durante 1 minuto usando un guante saturado [27]. Todas las muestras se incubaron a 32 ◦C durante 6 h y la superficie de la piel se limpió cuidadosamente con toallas de papel húmedas para eliminar cualquier residuo de muestra.

Posteriormente, se tomaron biopsias en sacabocados de 15 mm de diámetro, se incluyeron en Tissue-Tek® (Sakura Finetek Europe BV, Alphen aan den Rijn, Países Bajos) y se congelaron inmediatamente a −80 ◦C. La criosección en cortes verticales de 20 µm de espesor se llevó a cabo con un microtomo criogénico (Mod. 2700, Reichert-Jung, Nußloch, Alemania). Las imágenes de fluorescencia de todos los cortes se realizaron con la Olympus CKX53 (Olympus, Japón), equipada con una fuente de luz Olympus U-HGLGPS y un aumento de 200-veces. La intensidad de la fuente de luz fluorescente se ajustó al 50 por ciento. El tiempo de exposición se mantuvo constante en 50 ms para todas las imágenes. El filtro seleccionado para el análisis fue el sistema de bloque de filtro DAPI HC (filtro de excitación: 540-560 nm, espejo dicroico: 570 nm, filtro de emisión: a partir de 580 nm (LP)).

3. Resultados y discusión

3.1. Producción de PlantCrystals y Análisis de Tamaño de Partículas

La producción de PlantCrystals a partir de material a granel de hojas gruesas de SN fue un éxito. HPH dio como resultado partículas muy pequeñas y no se observaron células intactas mediante microscopía óptica. No se pudo observar visualmente una diferenciación clara de las muestras procesadas sin estabilización adicional (Figura 3A) y TPGS (Figura 3B) como tensioactivo después del examen con microscopio óptico. Solo se pudo percibir una tendencia ligeramente menor de aglomeración para la muestra con TPGS como tensioactivo.

El análisis de tamaño de partícula basado volumétricamente a través de SLS reveló que el proceso de molienda fue capaz de reducir los tamaños de varios 100 µm a un rango de tamaño inferior de dos dígitos µm (D(v){{8 }}.50). Una comparación de las muestras mostró que el tensioactivo tuvo un impacto reconocible en la muestra molida e hinchada (CM más S). Se pudo reconocer que la muestra sin surfactante tenía el mismo valor de D(v)0.10-que la muestra estabilizada con TPGS (Figura 4), pero para los valores de D(v) más altos, los tamaños se duplicaron aproximadamente . Como ambas muestras se compusieron y trataron de manera idéntica excepto por la adición de tensioactivo, esto demuestra que TPGS pudo evitar aglomeraciones de muestra más grandes durante el hinchamiento. Las muestras procesadas mostraron resultados similares para todos los valores de D(v) excepto para D(v)0.99, lo que podría interpretarse como un signo de una aglomeración pronunciada para la muestra estabilizada con TPGS (Figura 4). No obstante, debe tenerse en cuenta que D(v)0.99 es considerablemente variable y no siempre el parámetro más confiable, ya que una o muy pocas partículas de mayor tamaño podrían tener una gran influencia, por ejemplo, debido a la preparación de la muestra [28].

Los tamaños obtenidos son muy prometedores en comparación con los resultados obtenidos con material a base de hojas por parte de Abraham et al. [11]. Las mediciones de SLS dieron como resultado casi los mismos tamaños y distribuciones de tamaño para la formulación final de PlantCrystals. Un posible inconveniente de este estudio en comparación con Abraham et al. es que la molienda previa no fue tan efectiva en el presente estudio y que se utilizó el Miccra D27, que introdujo mucho calor y aire en la muestra. Por otro lado, la disminución final de las partículas por HPH fue más suave en este estudio, ya que el número de ciclos de HPH se redujo de 18 a 15 ciclos con presiones menores o iguales a 1000 bar y de 10 a 5 ciclos con una presión de 1500 bares [11]. Los tamaños similares obtenidos para PlantCrystals en ambos estudios conducen en consecuencia a una teoría interesante: se aplicaron dos procesos tremendamente diferentes y, además, se usaron dos tensioactivos diferentes (o ninguno), pero al final se obtuvieron tamaños similares. Esto lleva a suponer que la disminución de material vegetal a través de HPH está limitada hasta cierto punto. Al menos para las hojas SN (este estudio) y las hojas de salvia/laura (Abraham et al.), las indicaciones parecen ser muy sólidas y deberían investigarse en estudios futuros [11].

En general, ambos estudios muestran que HPH es muy eficiente en la producción de PlantCrystals, pero el fresado previo es inevitable para evitar el bloqueo del espacio del pistón. Todavía hay potencial para una optimización del proceso de producción, que debería, por un lado, ser más eficaz, pero también introducir la menor cantidad de calor y aire posible en la muestra para conservar la mayor cantidad posible de ingredientes, por el otro. .

El análisis de distribución de tamaño numérico mostró nuevamente que la muestra hinchada incluía tamaños ligeramente más grandes para las muestras sin surfactante en comparación con las muestras que contenían TPGS (Figura 5). La muestra procesada poseía tamaños similares para valores D más bajos (D(n)0.10 y D(n)0.50), y se podían reconocer grandes diferencias para valores D más altos ( D(n)0,99.

Para tener una mejor idea del proceso, el efecto del surfactante y las muestras procesadas resultantes, se deben considerar y combinar todos los análisis de tamaño (D(v), D(n), microscopía óptica). En general, la configuración de medición para SLS no puede distinguir entre una partícula de gran tamaño y una aglomeración de partículas. Es posible hacer una Figura 5. Distribución de tamaño basada numéricamente de muestras SN sin procesar y procesadas. Arriba a la izquierda: Sin surfactante. Abajo, izquierda: Con surfactante. Derecha: Resultados reescalados para las muestras de PlantCrystals correspondientes para una mejor visualización y comparación. Para tener una mejor idea del proceso, el efecto del surfactante y las muestras procesadas resultantes, se deben considerar y combinar todos los análisis de tamaño (D(v), D(n), microscopía óptica). En general, la configuración de medición para SLS no puede distinguir entre una partícula de gran tamaño y una aglomeración de partículas. Es posible realizar mediciones adicionales para comprobar si hay aglomeraciones, si la aglomeración no es demasiado fuerte y se puede descomponer, por ejemplo, cambiando la velocidad de agitación o la sonicación [29,30].

Sin embargo, estos procedimientos no son de uso común y es posible que no tengan el efecto deseado. Una solución rápida y sencilla es el uso de microscopía óptica, que permite una suposición rápida, incluso para aglomeraciones estrechas. Con respecto al análisis microscópico, se pudo reconocer que para la muestra sin TPGS, las aglomeraciones eran más oscuras y, en general, la muestra parecía más turbia. Por otro lado, las partículas individuales de ambas muestras parecían estar en el mismo rango de tamaño (Figura 3). Esto significa que las diferencias en el tamaño de las mediciones de SLS probablemente estén relacionadas con la aglomeración y no con los tamaños "reales" de las partículas.

Para una interpretación de los datos SLS, es importante saber que los valores D(v) representan y enfatizan partículas de mayor tamaño exponencialmente a la potencia de tres, mientras que el valor D(n) representa la cantidad de partículas [ 28]. Para comparar los resultados, se realizó una relación de los valores D dividiendo el valor D(v) o D(n) de la muestra sin tensioactivo por el valor D correspondiente con tensioactivo adicional (Tabla 1). Una relación superior a 1.{{10}} significaría que el tensioactivo tuvo un efecto estabilizador, mientras que una relación inferior a 1.0 indicaría un efecto desestabilizador, y una relación de 1.0 precisamente indica ningún efecto.

Para la muestra molida en seco e hinchada (CM más S), el fuerte aumento en la relación del valor D(v)- muestra que el TPGS podría prevenir preferentemente los aglomerados grandes, mientras que la relación constante de la D(n)- El valor revela que la estabilización con TPGS tuvo solo un impacto menor en aglomerados más pequeños o partículas individuales. Para las muestras procesadas se puede observar lo contrario; la relación del valor D(v) es casi constante, pero la relación del valor D(n) aumenta con valores D(n) más altos. Esto significa que en el caso de las muestras procesadas, se producen aglomerados más grandes con y sin TPGS (D(v)). Por otro lado, el tensioactivo inhibió la aglomeración de partículas individuales, y también, las agregaciones grandes podrían al menos reducirse hasta cierto punto (D(n)).

En general, se puede resumir que el TPGS como tensioactivo no tuvo un impacto importante en el tamaño o la distribución de tamaños, pero se puede reconocer un efecto. No se pudo observar un efecto autoestabilizador de la formulación de PlantCrystals. Por el contrario, la formulación de PlantCrystals se benefició de la adición del tensioactivo. HPH demostró una vez más que es una técnica altamente efectiva para producir formulaciones de PlantCrystals y fue capaz de reducir el tamaño de partícula principal al rango deseado alrededor o por debajo de 1 µm. Sin embargo, requiere extensos pasos de fresado previo para evitar el bloqueo de la máquina y no puede usarse como una técnica independiente [11].

3.2. Estudios de análisis de contenido y capacidad antioxidante (AOC)

En esta sección, el análisis se realizó en la muestra inicial sin procesar (suspensión a granel) y PlantCrystals para investigar el impacto de la molienda en los bioactivos de SN, especialmente los antioxidantes. El SN es bien conocido por su contenido de polifenoles, flavonoides y carotenoides, que muestran grandes beneficios para la salud. Tienen actividades antioxidantes, antiinflamatorias y antitumorales, así como muchas otras actividades [23,31,32].

Además, contiene altas cantidades de clorofila, la cual posee una marcada actividad antioxidante y antimutagénica; además, se puede utilizar como antiacné y como agente estimulante de los tejidos [33,34]. Todos esos bioactivos pueden servir como soporte natural superior para fortalecer la función de barrera del SC. Se realizaron varios estudios espectrofotométricos para investigar el efecto de las técnicas de molienda en el contenido de SN y antioxidantes. Los contenidos de flavonoides y carotenoides se midieron antes y después de la molienda. Además, se utilizó el contenido de polifenoles totales y el ensayo DPPH para estimar la capacidad antioxidante. Todos los resultados del análisis de contenido y los ensayos se muestran en la Tabla 2.

Se esperaba que la disminución mejorara la disponibilidad de los componentes vegetales mediante la destrucción de las células vegetales, lo que debería dar como resultado una mayor liberación de los compuestos activos, mejorando así el potencial farmacológico de la formulación. En línea con eso, se observó una mejora significativa en el contenido de flavonoides (valor p=0.0165). Para el material a granel, el valor fue de 107 ± 2 µg QE y podría mejorarse a 288 ± 38 µg QE para la suspensión PlantCrystals.

Por lo tanto, se puede afirmar que HPH conduce a una disponibilidad doble de flavonoides de los SN PlantCrystals en comparación con el volumen. Esta mejora es particularmente importante para subrayar la eficacia de la técnica PlantCrystals porque los flavonoides SN como el ácido ursólico y la quercetina se consideran los activos más importantes responsables del efecto antienvejecimiento de SN en la piel. Este efecto se basa en la capacidad de los constituyentes para inhibir la elastasa y la colagenasa [17]. Además, la mejora en el contenido de flavonoides fue respaldada por el uso de medios hidrofílicos en la formulación de PlantCrystals como Bourgeois et al. mostró la superioridad de un extracto hidrofílico con respecto a las actividades antioxidantes y antienvejecimiento [17].

Los resultados obtenidos para el contenido de carotenoides totales no revelaron ninguna mejora significativa después del proceso de homogeneización. Una posible razón de esto es la exposición al calor, el aire y la luz durante la producción, además de la naturaleza hidrofílica de la formulación, que puede no ser compatible con la libre disponibilidad de activos lipofílicos como los carotenoides [22].

Los polifenoles son bien conocidos por su gama ampliada de beneficios para la salud como agentes antioxidantes, antimicrobianos, antiinflamatorios, antiulcerosos, antitumorales y muchos otros efectos [35–37]. La SN se considera una fuente rica en diferentes tipos de polifenoles, como el ácido gálico, el ácido cafeico, el ácido ferúlico, la quercetina y la rutina [36,38]. El análisis del contenido de polifenólicos se realizó para brindar una mejor comprensión de la formulación. Este ensayo también se considera un ensayo de capacidad antioxidante y puede medir los polifenoles hidrofílicos y lipofílicos simultáneamente [39]. Comparable a los resultados de los contenidos de flavonoides, el contenido total de polifenoles podría mejorarse significativamente (valor p=0.0013). La muestra de PlantCrystals mostró un contenido 65 por ciento más alto en comparación con el material a granel. No se esperaba este fuerte aumento, ya que estudios previos de Abraham et al. mostró un aumento del 1,1 por ciento después de la homogeneización solo para semillas de argán [11]. La explicación de esto podría ser los diferentes antioxidantes de las plantas: es decir, el SN es rico en antioxidantes hidrofílicos y clorofila, mientras que las semillas de argán contienen principalmente antioxidantes lipofílicos.

Los resultados del ensayo DPPH mostraron que la tecnología PlantCrystals no podía mejorar el valor IC50 de la formulación. El ensayo DPPH es un ensayo antioxidante eficiente que se usa comúnmente en la literatura, pero tiene un inconveniente principal con respecto a las formulaciones ricas en carotenoides y clorofila. La presencia de estos constituyentes se superpone fotométricamente con la medición de DPPH, lo que lleva a una lectura falsa positiva. Esta superposición podría explicar el valor IC50 inesperadamente alto para la formulación de PlantCrystals. Esto no se esperaba, ya que las formulaciones anteriores de PlantCrystals siempre lograron una mejora en el AOC analizado mediante el ensayo DPPH [10,11,40].

En resumen, HPH pudo aumentar el contenido de flavonoides y el AOC a través de mediciones de polifenoles, pero no el contenido de carotenoides ni la medición de AOC a través del ensayo DPPH. Por un lado, se pueden asignar posibles mejoras a la reducción del tamaño de partícula, lo que conduciría a una mayor área superficial y, en consecuencia, a una mejor difusión y disponibilidad de los activos. La destrucción de células vegetales con HPH también conduce a una mejor liberación de ingredientes activos.

Por otro lado, la técnica de disminución tiene un impacto en la estabilidad fisicoquímica de los constituyentes. Los procesos utilizados en este estudio introdujeron calor y aire en la formulación hasta cierto punto, lo que podría conducir a una pérdida de componentes sensibles, por ejemplo, debido a la oxidación. La protección contra la luz, el enfriamiento adecuado y la esterilización de la muestra podrían ser mejoras adicionales para producir PlantCrystals en estudios futuros y garantizar una mejor protección de los valiosos ingredientes.

3.3. Determinación de la penetración en la piel

En la última parte de este estudio, se investigó una comparación del comportamiento de penetración de las suspensiones SN bulk y PlantCrystals. La microscopía de fluorescencia permitió la visualización de la muestra de hoja de SN en la piel, mediante el seguimiento de la penetración de los tipos de clorofila a y b. El SN es conocido por sus grandes cantidades de estos colorantes naturales, que son los responsables del color verde de la planta. Ambas sustancias pueden absorber luz azul (400–420 nm) y roja (640–680 nm), lo que da como resultado una fluorescencia de clorofila a aproximadamente 690 y 740 nm [41]. Esta luz roja fluorescente por la clorofila se puede rastrear mediante microscopía de fluorescencia.

Los resultados del estudio de penetración en la piel de las muestras de hojas de SN se muestran en la Figura 6. Inicialmente, la autofluorescencia de la piel se ajustó al mínimo (Figura 6A). Debe mencionarse que incluso la clorofila derivada del material a granel sin procesar mostró una fluorescencia detectable visualmente en la SC. Sin embargo, la penetración en la piel es inconsistente y no homogénea (Figura 6B). La formulación de PlantCrystals indicó una mayor fluorescencia más consistente y visualmente percibida en el SC (Figura 6C).

Debe enfatizarse que la concentración del material vegetal es la misma, y ​​la principal diferencia es el tamaño de partícula y el número de células vegetales destruidas. Esto significa que las diferencias en la penetración pueden explicarse por dos efectos. En primer lugar, la ruptura de las células conducirá a un mayor contenido de cloroplastos libres, lo que dará como resultado una mayor concentración y, en consecuencia, un mayor gradiente de concentración y una mejor penetración [42,43]. En segundo lugar, el material y los constituyentes no solubles son mucho más pequeños para la formulación de PlantCrystals, y esto sería comparable a los efectos conocidos de los nanocristales, por ejemplo, adhesión mejorada y eficacia de penetración. Además, se mejoraría la homogeneidad debido al tamaño de partícula más pequeño y al área de contacto total más alta de las partículas.

No obstante, la penetración en el SC fue el objetivo de este estudio, y se puede reconocer que no se pudo observar visualmente un efecto distinto en la profundidad de penetración en PlantCrystals en comparación con el material a granel. El hecho de que la clorofila mostrara penetración transdérmica en las capas vivas de la piel, incluso después de HPH, puede explicarse aplicando la regla de cinco de Lipinski a la molécula. Esta regla se utilizó originalmente para predecir el comportamiento de absorción o permeabilidad de los fármacos después de la administración oral. La aplicación de esta regla con respecto a la predicción de la penetración cutánea de un fármaco está actualmente en discusión (46).

Establece que la permeabilidad deficiente de un fármaco se puede predecir si se aplica más de un criterio para la molécula: más de cinco grupos donantes de enlaces de hidrógeno, grupos aceptores de enlaces de hidrógeno, un peso molecular de más de 500 Da o un octanol-agua. coeficiente de partición (valor log P) superior a 5 (47. La clorofila a y b cumplen todos los criterios mencionados además de los grupos donantes de enlaces de hidrógeno (Figura 1). Esto indica propiedades de penetración deficientes per se para las moléculas. Por lo tanto, PlantCrystals puede solo mejoran la consistencia y la profundidad de penetración de la piel de la clorofila hasta cierto punto. Sin embargo, la producción de PlantCrystals a través de HPH aumentó la cantidad de clorofila a y b en el SC. Se puede suponer que si la clorofila penetra de manera más homogénea y se pronuncia en el SC, otros activos de plantas con una mayor permeabilidad serán entregados en la piel en gran medida.

Dado que el SC era el objetivo previsto de este estudio, la tecnología PlantCrystals es un enfoque de formulación muy prometedor y versátil para explotar los beneficios de muchas hierbas naturales en las propiedades de la piel. Así, por ejemplo, muchas plantas poseen un efecto hidratante coherente con los principios de la corneoterapia para generar una piel más sana [48,49]. Además, componentes como los ácidos grasos esenciales también poseen efectos positivos, por ejemplo, fortalecen y reparan la barrera de la piel, e incluso pueden usarse como potenciadores de la penetración [50,51]. Todos estos efectos positivos de los activos y excipientes derivados de plantas se incorporan naturalmente en una formulación de PlantCrystals sin producir ningún desperdicio.

En general, podría demostrarse que la microscopía de fluorescencia puede detectar la penetración en la piel de formulaciones a base de plantas. Esto no solo es interesante desde un punto de vista científico, sino también para la comercialización y la satisfacción del cliente, ya que el efecto de una formulación a base de plantas (p. ej., remedio casero o mascarillas para la piel) puede probarse fácilmente, p. ej., con una lámpara UV especial. después del tratamiento en estudios cosméticos. Desde un punto de vista científico, este método es muy rápido y rentable para estimar la eficacia de una formulación sin la adición de marcadores de fluorescencia. Además del inconveniente de que solo se pueden analizar los componentes activos de fluorescencia (en su mayor parte clorofila, pero no se pueden excluir otros), se puede hacer una suposición general sobre la homogeneidad y la cantidad. Además, para estudios de la piel con PlantCrystals o materiales a base de plantas, el concepto de "huella digital de la naturaleza" permite el análisis del efecto de una formulación (por ejemplo, base utilizada (geles, cremas, etc.) o potenciadores de penetración) sin alterar la formulación original o la adición de químicos.

4. Conclusiones

El concepto de "huella dactilar de la naturaleza" demostró su valor en este estudio. La detección de la clorofila fluorescente natural en el estrato córneo se logró para PlantCrystals, así como para el material a granel. Se logró el objetivo principal de desarrollar una formulación SN PlantCrystals con una penetración SC mejorada y la penetración SC de la formulación PlantCrystals fue homogénea en comparación con la penetración no homogénea del material a granel. El concepto de "huella digital de la naturaleza" debería ser beneficioso para otras formulaciones vegetales ricas en clorofila como una técnica fácil y rápida para estimar su penetración.

Durante la preparación de SN PlantCrystals, que se describe aquí por primera vez, el tamaño de partícula principal del material grueso se pudo reducir al rango de tamaño micro más bajo. El TPGS como tensioactivo adicional evitó la aglomeración hasta cierto punto. La clave para activar todo el potencial de PlantCrystals es la ruptura de las células vegetales, que se logró según el análisis de tamaño. Esta teoría fue enfatizada por la liberación mejorada de activos y la actividad antioxidante pronunciada. Los valores más altos de contenido de flavonoides y un mejor AOC medido utilizando el contenido total de fenoles hacen de SN PlantCrystals una formulación prometedora para la terapia antioxidante de la piel.

Los estudios futuros deben demostrar que estos resultados no solo se pueden lograr con "la reina de las hierbas". También se deben probar métodos adicionales para medir el AOC para determinar su aplicabilidad a los cristales vegetales ricos en clorofila. Desafortunadamente, el ensayo DDPH de uso común, también utilizado en este estudio, no se pudo usar en este estudio debido a la superposición espectrofotométrica entre los reactivos usados ​​y el carotenoide y la clorofila de la muestra.

Contribuciones de autor:

Conceptualización, DK y CMK; metodología, DK, RMA y SW; análisis formal, DK, RMA y SW; investigación, DK, RMA y SW; recursos, CMK; curación de datos, DK, RMA y SW; redacción—preparación del borrador original, DK, RMA y SW; redacción—revisión y edición, DK, RMA y JB; visualización, DK, RMA y SW; supervisión, JB; administración de proyectos, CMK; adquisición de fondos, CMK Todos los autores han leído y están de acuerdo con la versión publicada del manuscrito.

Fondos:

El trabajo fue financiado en parte por el proyecto ZIM: KF ZF4114903AJ8.

Declaración de la Junta de Revisión Institucional:

No aplica.

Declaración de consentimiento informado:

No aplica.

Declaración de disponibilidad de datos:

Todos los datos incluidos en el manuscrito.

Expresiones de gratitud:

Los autores quisieran agradecer amablemente a Blank's GmbH & Co.KG por la donación de las muestras de ortiga, utilizadas en este estudio. También nos gustaría agradecer a Udo Bakowsky que concedió el uso gratuito del microscopio de fluorescencia. Los autores también agradecen a Soma Sengupta por su ayuda con la revisión del borrador. Reem M. Alnemari quisiera agradecer a la Universidad de Taif en Arabia Saudita por su apoyo financiero.

Conflictos de interés:

Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

Referencias

1. Kohl, E.; Steinbauer, J.; Landthaler, M.; Szeimies, R.-M. Envejecimiento de la piel. J.Eur. Academia Dermatol. Venereol. 2011, 25, 873–884. [Referencia cruzada]

2. Mohiuddin, AK Skin Aging & Modern Edge Anti-Aging Strategies. En t. J. Dermatol. Cuidado de la piel 2019, 1, 8–62. [Referencia cruzada]

3. Trojahn, C.; Dobos, G.; Lichterfeld, A.; Blume-Peytavi, U.; Kottner, J. Caracterización del envejecimiento de la piel facial en humanos: desenredar los fenómenos biológicos extrínsecos de los intrínsecos. Res. biomédica. En t. 2015, 2015, 318586. [Referencia cruzada]

4. Grice, EA; Segre, JA El microbioma de la piel. Nat. Rev. Microbiol. 2011, 9, 244–253. [Referencia cruzada]

5. Cannarozzo, G.; Fazia, G.; Bernardo, L.; Tamburi, F.; Amoruso, GF; Del Duca, E.; Nisticò, SP Un nuevo dispositivo láser de 675 nm en el tratamiento del envejecimiento facial: un estudio observacional prospectivo. Fotobiomódulo. Fotomed. Cirugía Láser 2021, 39, 118–122. [Referencia cruzada] [PubMed]

6. Farage, MA; Miller, KW; Elsner, P.; Maibach, HI Factores intrínsecos y extrínsecos en el envejecimiento de la piel: una revisión. En t. J. Cosmet. ciencia 2008, 30, 87–95. [Referencia cruzada] [PubMed]

7. Trouba, KJ; Hamadeh, Hong Kong; Amín, RP; Germolec, DR El estrés oxidativo y su papel en las enfermedades de la piel. antioxidante Señal redox. 2002, 4, 665–673. [Referencia cruzada] [PubMed]

8. Lademann, J.; Vergou, T.; Darvin, ME; Patzelt, A.; Meinke, MC; Voit, C.; Papakostas, D.; Zastrow, L.; Sterry, W.; Doucet, O. Influencia de la aplicación tópica, sistémica y combinada de antioxidantes en las propiedades de barrera de la piel humana. Farmacolo de la piel. Fisiol. 2016, 29, 41–46. [Referencia cruzada]

9. Amberg, N.; Fogarassy, ​​C. Comportamiento del Consumidor Verde en el Mercado de Cosméticos. Recursos 2019, 8, 137. [Referencia cruzada]

10. Grifo, S.; Sarfraz, M.; Farida, V.; Nasim, MJ; Ebokaiwe, AP; Kek, CM; Jacob, C. No hay tiempo para desperdiciar desechos orgánicos: el nanodimensionamiento convierte los restos del procesamiento de alimentos en materiales refinados. J. Medio Ambiente. Administrar 2018, 210, 114–121. [Referencia cruzada]

11. Abrahán, AM; Alnemari, RM; Jacob, C.; Keck, CM PlantCrystals: material vegetal nanométrico para mejorar la bioeficacia de las plantas medicinales. Materiales 2020, 13, 4368. [Referencia cruzada]

12. Abrahán, AM; Alnemari, RM; Brüßler, J.; Keck, CM Capacidad antioxidante mejorada de los desechos de té negro utilizando PlantCrystals. Molecules 2021, 26, 592. [CrossRef] 13. Mehegan, MA Ortigas punzantes: reina de las hierbas. Curación alquímica a base de hierbas, 1ª ed.; Bookbaby: Municipio de Pennsauken, NJ, EE. UU., 2011.

14. Upton, R. Hoja de ortigas punzantes (Urtica dioica L.): medicina vegetal extraordinaria. J. Hierba. Medicina. 2013, 3, 9–38. [Referencia cruzada]

15. Semalty, M.; Adhikari, L.; Semwal, D.; Chauhan, A.; Mishra, A.; Kotiyal, R.; Semalty, A. Una revisión completa sobre la fitoquímica y los efectos farmacológicos de la ortiga (Urtica dioica). actual tradición Medicina. 2017, 3, 156–167. [Referencia cruzada]

16. Kregiel, D.; Pawlikowska, E.; Antolak, H. Urtica spp.: Plantas ordinarias con propiedades extraordinarias. Moléculas 2018, 23, 1664. [CrossRef] [PubMed]

17. Burgués, C.; Leclerc, EA; Corbin, C.; Doussot, J.; Serrano, V.; Vanier, J.-R.; Seigneuret, J.-M.; Auguín, D.; Pichón, C.; Lainé, É.; et al. La ortiga (Urtica dioica L.) es una fuente de fitoquímicos antioxidantes y antienvejecimiento para aplicaciones cosméticas. Comptes Rendus Chim. 2016, 19, 1090–1100. [Referencia cruzada]

18. Maxwell, K.; Johnson, GN Fluorescencia de clorofila: una guía práctica. Exp. J. Bot. 2000, 51, 659–668. [Referencia cruzada] [PubMed]

19. Hosseinzadeh, R.; Khorsandi, K.; Hemmaty, S. Estudio del Efecto de Surfactantes en la Extracción y Determinación de Compuestos Polifenólicos y Capacidad Antioxidante de Extractos de Frutas. PLoS ONE 2013, 8, e57353. [Referencia cruzada]

20. Gao, X.; Ohlander, M.; Jeppson, N.; Björk, L.; Trajkovski, V. Cambios en los efectos antioxidantes y su relación con los fitonutrientes en frutos de espino amarillo (Hippophae rhamnoides L.) durante la maduración. J. Agric. Química alimentaria 2000, 48, 1485–1490. [Referencia cruzada]

21. Ordóñez, A.; Gómez, J.; Vattuone, M.; Isla, MI Actividades antioxidantes de los extractos de Sechium edule (Jacq.) Swartz. Química alimentaria 2006, 97, 452–458. [Referencia cruzada]

22. Rodriguez-Amaya, DB Una guía para el análisis de carotenoides en los alimentos; ILSI Press: Washington, DC, EE. UU., 2001.

23. Katsube, T.; Tabata, H.; Ohta, Y.; Yamasaki, Y.; Anuurad, E.; Shiwaku, K.; Yamane, Y. Detección de actividad antioxidante en productos vegetales comestibles: comparación del ensayo de oxidación de lipoproteínas de baja densidad, el ensayo de captación de radicales DPPH y el ensayo de Folin-Ciocalteu. J. Agric. Química alimentaria 2004, 52, 2391–2396. [Referencia cruzada]

24. Summerfield, A.; Meurens, F.; Ricklin, ME La inmunología de la piel porcina y su valor como modelo para la piel humana. mol. inmunol. 2015, 66, 14–21. [Referencia cruzada] [PubMed]

25. Ranamukhaarachchi, SA; Lehnert, S.; Ranamukhaarachchi, SL; Sprenger, L.; Schneider, T.; Mansoor, I.; Rai, K.; Hafeli, UO; Stoeber, B. Una comparación micromecánica de la piel humana y porcina antes y después de la conservación por congelación para el desarrollo de dispositivos médicos. ciencia Rep. 2016, 6, 32074. [Referencia cruzada]

26. Jacobi, U.; Kaiser, M.; peaje, R.; Mangelsdorf, S.; Audring, H.; Otberg, N.; Sterry, W.; Lademann, J. Piel de oreja porcina: un modelo in vitro para piel humana. Res. de la piel Tecnología 2007, 13, 19–24. [Referencia cruzada] [PubMed]

27. Nagelreiter, C.; Mahrhauser, D.; Wiatschka, K.; Skipiol, S.; Valenta, C. Importancia de un protocolo de trabajo adecuado para los experimentos de pelado de cinta en la piel de la oreja porcina: influencia de las formulaciones lipofílicas y deterioro de la adhesión de la tira. En t. J. Pharm. 2015, 491, 162–169. [Referencia cruzada] [PubMed]

28. Stetefeld, J.; McKenna, SA; Patel, TR Dispersión de luz dinámica: una guía práctica y aplicaciones en ciencias biomédicas. Biografía. Rev. 2016, 8, 409–427. [Referencia cruzada] [PubMed]

29. Brar, SK; Verma, M. Medición de nanopartículas por técnicas de dispersión de luz. Tendencias Anales. química 2011, 30, 4–17. [Referencia cruzada]

30. Kubart, SA; Keck, CM Difractometría láser de nanopartículas: trampas frecuentes y oportunidades pasadas por alto. J. Pharm. Tecnología Res. de drogas 2013, 2, 17. [Referencia cruzada]

31. Kukric, Z.; Topalic-Trivunovic, L.; Kukavica, B.; Matos, S.; Pavicic, S.; Boroja, M.; Savic, A. Caracterización de las actividades antioxidantes y antimicrobianas de las hojas de ortiga (Urtica dioica L.). Período Acta. Tecnología 2012, 2012, 257–272. [Referencia cruzada]

32. Pereira, L. Las algas marinas como fuente de sustancias bioactivas y terapia para el cuidado de la piel: cosmecéuticos, algoterapia y talasoterapia. Cosméticos 2018, 5, 68. [CrossRef]

33. Hayes, M.; Ferruzzi, MG Actualización sobre la biodisponibilidad y los mecanismos quimiopreventivos de los derivados de la clorofila en la dieta. Nutrición Res. 2020, 81, 19–37. [Referencia cruzada] [PubMed]

34. Canción, BH; Lee, DH; Kim, BC; Ku, SH; Parque, EJ; Kwon, IH; Kim, KH; Kim, KJ Terapia fotodinámica con clorofila-a en el tratamiento del acné vulgar: un estudio aleatorizado, simple ciego, de cara dividida. Mermelada. Academia Dermatol. 2014, 71, 764–771. [Referencia cruzada] [PubMed]

35. Gülçin, I.; Küfrevioglu, OI; Bien, M.; Büyükokuroglu, ME Actividades antioxidantes, antimicrobianas, antiulcerosas y analgésicas de la ortiga (Urtica dioica L.). J. Etnofarmaco. 2004, 90, 205–215. [Referencia cruzada] [PubMed]

36. Ðurovi´c, S.; Pavli´c, B.; Šorgi´c, S.; Popov, S.; Savi´c, S.; Petronijevi´c, M.; Radojkovi´c, M.; Cvetanovi´c, A.; Zekovi´c, Z. Composición química de hojas de ortiga obtenidas por diferentes enfoques analíticos. Función J. Alimentos 2017, 32, 18–26. [Referencia cruzada]

37. Ghaima, K.; Hashim, Nuevo México; Ali, SA Actividades antibacterianas y antioxidantes del extracto de acetato de etilo de ortiga (Urtica dioica) y diente de león (Taraxacum officinale). Aplicación J. Farmacia ciencia 2013, 3, 96–99. [Referencia cruzada]

38. Orˇci´c, D.; Franciškovi´c, M.; Bekvalac, K.; Svirˇcev, E.; Beara, I.; Lesjak, M.; Mimica-Duki´c, N. Determinación cuantitativa de compuestos fenólicos vegetales en extractos de Urtica dioica mediante cromatografía líquida de alta resolución junto con detección espectrométrica de masas en tándem. Química alimentaria 2014, 143, 48–53. [Referencia cruzada]

39. Everette, JD; Bryant, QM; verde, AM; Abadía, YA; Wangila, GW; Walker, RB Estudio exhaustivo de la reactividad de varias clases de compuestos hacia el reactivo de Folin-Ciocalteu. J. Agric. Química alimentaria 2010, 58, 8139–8144. [Referencia cruzada]

40. Grifo, S.; Tittikpina, NK; Al-Marby, A.; Aljayer, R.; Denezhkin, P.; Witek, K.; Gbogbo, KA; Batawila, K.; Duval, RE; Nasim, MJ; et al. Convertir residuos en valor: materiales vegetales naturales nanométricos de Solanum incanum L. y Pterocarpus erinaceus Poir con actividades antimicrobianas prometedoras. Farmacéutica 2016, 8, 11. [CrossRef]

41. Guidi, L.; Tatini, M.; Landi, M. ¿Cómo protege el cloroplasto a la clorofila contra la luz excesiva? en clorofila; Jacob-Lopes, E., Zepka, LQ, Queiroz, MI, Eds.; InTech: Londres, Reino Unido, 2017.

42. Scheuplein, RJ; Blanco, IH Permeabilidad de la piel. Fisiol. Rev. 1971, 51, 702–747. [Referencia cruzada] [PubMed]

43. Godín, B.; Touitou, E. Entrega transdérmica de la piel: predicciones para humanos a partir de modelos in vivo, ex vivo y animales. Adv. Entrega de drogas Rev. 2007, 59, 1152–1161. [Referencia cruzada] 44. Pyo, S.; Meinke, MC; Kek, CM; Müller, RH Rutina: aumento de la actividad antioxidante y la penetración en la piel mediante la tecnología de nanocristales (smartCrystals). Cosméticos 2016, 3, 9. [CrossRef]

45. Vidláˇrová, L.; Romero, GB; Hanus, J.; Štˇepánek, F.; Müller, RH Nanocristales para mejorar la penetración dérmica: efecto de la concentración y mecanismos subyacentes utilizando la curcumina como modelo. EUR. J. Pharm. Biofarmacia 2016, 104, 216–225. [Referencia cruzada] [PubMed]

46. ​​Chaulagain, B.; Jain, A.; Tiwari, A.; Verma, A.; Jain, SK Entrega pasiva de fármacos proteicos por vía transdérmica. Artefacto Células Nanomed. Biotecnología. 2018, 46, 472–487. [Referencia cruzada] [PubMed]

47. Lipinski, CA; Lombardo, F.; Dominio, BW; Feeney, PJ Enfoques experimentales y computacionales para estimar la solubilidad y la permeabilidad en entornos de descubrimiento y desarrollo de fármacos. Adv. Entrega de drogas Rev. 1997, 23, 3–25. [Referencia cruzada]

48. Gediya, S.; Mistry, R.; Patel, U.; Blessy, M.; Jain, H. Plantas a base de hierbas: utilizadas como cosméticos. J.Nat. Pinchar. Recurso Vegetal. 2011, 1, 24–32.

49. Kapoor, S.; Saraf, S. Formulación y evaluación de humectantes que contienen extractos de hierbas para el manejo de la piel seca. Farmacogn. J. 2010, 2, 409–417. [Referencia cruzada]

50. Dorni, AC; Amalraj, A.; Gopi, S.; Varma, K.; Anjana, S. Nuevos cosmecéuticos de plantas: una revisión guiada por la industria. Aplicación J. Res. Medicina. Aromat. Plantas 2017, 7, 1–26. [Referencia cruzada]

51 Herman, A.; Herman, AP Los aceites esenciales y sus constituyentes como potenciadores de la penetración en la piel para la administración transdérmica de fármacos: una revisión. J. Pharm. Farmacol. 2014, 67, 473–485. [Referencia cruzada]

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