Análisis de composición de Cistanche Tubulosa: separación y estructura de glucósido de feniletanoide y glucósido de neolignan

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Los constituyentes del anzuelo Cistanche Tubulosa (Schrenk). F. II.1) Aislamiento y estructuras de un nuevo glucósido de feniletanoide y un nuevo glucósido de neolignan

Fumio Yoshizawa,* a Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ y Mansoor Ahmad6

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., a 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japón y Departamento de Farmacognosia, Facultad de Farmacia, Universidad de Karachi? Karachi-32, Pakistán. Recibido el 9 de noviembre de 1989

un nuevoglucósido feniletanoidellamado tubuloside E (I), y un nuevoglucósido de neolignano, alcohol dehidrodiconiferílico yO-0-D-glucopiranósido (II), se aislaron de plantas enteras deCistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. (Orobanchaceae), together with dehydrodiconiferyl alcohol 4-O-^-D-glucopyranoside (III), syringalide A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), isosyringalide S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxycatalpol (IX), 8-epiIoganic acid (X), 20-hydroxyecdysone (XI), 8-hydroxygeraniol l-j?-D-glucopyranoside (XII) and syringin (XIII). The structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethyl O-a-L-rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetil-4-Op-cumaroil-^-D-glucopiranósido sobre la base de pruebas químicas y datos espectrales.

Palabras clave Cistanche tubulosa-, Orobanchaceae;glucósido de feniletanoide;iridoide; tubulósido E; glucósido de alcohol deshidrodiconiferílico; ramnósido de siringalida;glucósido de neolignano; 13C-NMRMOE

glucósido feniletanoide en cistanche

En un artículo anterior, reportamos el aislamiento y la determinación estructural de nuevosglucósidos de feniletanoide, tubulósidos A一D de plantas enteras deCistanche tubulosa(Schrenk) Gancho. F. (Orobanchaceae) en Pakistán.

Este artículo trata del aislamiento y elucidación estructural de una nuevaglucósido feniletanoide, denominado tubuloside E (I), y un nuevoglucósido de neolignano, alcohol deshidrodiconiferílico ■/-QgD-glucopiranósido (II), así como el aislamiento de 11 compuestos conocidos, alcohol deshidrodiconiferílico 4-OgD-glucopiranósido (III), siringalida A 3'-aL-ramnopiranósido (IV), isosiringalida 3'-al-ramnopiranósido (V), (más)-siringaresinol OgD-glucopiranósido (VI), (más)-pinoresinol OgD-glucopiranósido (VII), liriodendro (VIII), 6-desoxicatalpol (IX) , 8-ácido epilogánico (X), 20-hidroxiecdisona (XI), 8-hidroxigeraniol 1-gD-glucopiranósido (XII) y siringina (XIII). Los compuestos VI, VIII, X, XII y XIII se aislaron previamente de la salsa Cistanche?'

El tubulosido E (I) se aisló como un polvo amorfo, C31H38O15 -3/2H2O, [a]D -134.0 grado (MeOH). El espectro infrarrojo (IR) sugirió la presencia de grupos hidroxilo (3430cm-1), éster conjugado (1734cm-x), un doble enlace (1634cm-1) y anillos aromáticos ( 1608 y 1518cm-1). El espectro de resonancia magnética nuclear de protones 0H-NMR) de I mostró señales debidas a un grupo metilo de ramnosa 0 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], un grupo acetoxilo {{22} },98 (3H, s)], protones de metileno bencílico 0 2,72 (2H, t, J—1 Hz)], un protón glucosanomérico 0 4,54 (1H, d, J{{ 32}} Hz)], un protón ramnoseanomérico 0 5.00 (1H, br s)], dos protones olefínicos [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

En la acetilación, el compuesto I proporcionó el octaacetato (la), cuyo espectro de 】H-RMN mostró cinco grupos acetoxilo alifáticos 0 1.87, 1.95, 2.02 (3H cada uno, s), 2.10x2 (6H, s)] y tres grupos acetoxilo aromáticos [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

En la metanólisis de I con cloruro de acetilo en metanol, se detectaron p-cumarato de metilo y alcohol 3,4-dihidroxifenetílico en cromatografía en capa fina (TLC) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

La hidrólisis ácida de I con ácido sulfúrico al 10 por ciento proporcionó glucosa y ramnosa en una proporción de 1 a 1.

From the above results, the structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethy 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetyl-4-O-/>-cumaroil-^- D-glucopiranósido.

El compuesto III se aisló como un polvo amorfo, [a]D - 56,4 grados (MeOH). La hidrólisis enzimática de III proporcionó una aglicona (Illb) como un polvo amorfo, [0]270 -11300, [a]D -31,6 grados (MeOH) y glucosa. Los compuestos IIIb y III se identificaron como alcohol deshidrodiconiferílico3,4) y su 4-O-#-D-glucopiranósido,3,4)respectivamente, en comparación con muestras auténticas (espectros TR,】H- y 13C-NMR) .

El compuesto II se aisló como un polvo amorfo, [a]D 一 7,4 grados (MeOH), cuyo espectro IR sugería la presencia de un grupo hidroxilo (3430 cm-1) y un anillo aromático (1614,1522,1502 cm T). La 〔H-NMR de II mostró señales debidas a dos grupos metoxilo aromáticos 0 3.74, 3.80 (3H cada uno, s)], un protón bencílico 0 5.45 (1H, d, J{{ 16}}Hz)], dos protones trans olefínicos 0 6.17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6,58 (1H, d, J= 16 Hz)] y cinco protones aromáticos 0 6.7一7.1 (5H, m)]. En la acetilación, el compuesto II proporcionó el hexaacetato (Ila), cuyo espectro de 'H-RMN mostró cinco señales de acetilo alifático 0 2.01, 2.03, 2.09, 2.06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. La hidrólisis enzimática de II proporcionó la aglicona (lib) y la glucosa. El compuesto lib se aisló como un polvo amorfo, [a]D más 34,8 grados (MeOH), cuyos espectros IR, iH- y 13C-NMR eran casi idénticos a los de Illb, excepto por los valores de [a]D y el dicroísmo circular (CD ) espectro.

La configuración absoluta de lib se aclaró comparando su espectro CD con el de IIIb y III, cuya estereoquímica se confirmó en los datos publicados.4) El espectro CD de lib mostró A& más 14100 (270) y más 15200 (283) como máximos positivos, por otro lado, el de IIIb mostró A& -11300 (270) y -10990 (283) como máximos negativos. Estos hechos sugieren que lib e Ilb son enantiómeros entre sí. La estereoquímica de lib debe ser la que se muestra en el gráfico 1.

Por lo tanto, se estableció que el compuesto II era monoglucósido de alcohol dehidrodiconiferílico. La posición de la glucosa.

respectivamente. Los desplazamientos de los carbonos correspondientes al ir a II desde lib fueron -4,4 y más 7,3 ppm, lo que indica que un resto glucosilo en II estaba unido al grupo hidroxilo en el átomo Cy'.5)

A partir de los resultados anteriores, el compuesto II se estableció como alcohol deshidrodiconiferílico y'-O-^-D-glucopiranósido.

Los compuestos IV y V se aislaron como un polvo amorfo (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). Los espectros IR sugirieron la presencia de grupos hidroxilo (3400 cm7), un doble enlace (1634 cm-1) y anillos aromáticos (1606 y 1518 cm-1). En la acetilación, los compuestos IV y V produjeron los octaacetatos ( IVa, Va), cuyos espectros de 1H-RMN mostraron cinco señales de acetoxilo alifático y tres de acetoxilo aromático, respectivamente. Los compuestos IVa y Va se identificaron como siringalida A 3'-aL-ramnopiranósido octaacetato e isosiringalida 3'-aL-ramnopiranósido octaacetato, respectivamente por comparación de (以 IR y 】H-NMR) con muestras auténticas. 6) El 'H- y El espectro de 13C-NMR de IV y V apoyó esas estructuras (ver Experimental). Los compuestos VI-XIII se identificaron como (más)-jeringas-esinol O-少-D-glucopiranósido (VI), 2c) (más)-pinoresinol O- jS-D-glucopiranósido (VII),7) liriodendrina (VIII),2Z,) 6-desoxicatalpol (IX),2c) 8-ácido epilogánico (X),2fl) {{50} }hidroxiecdisona (XI),8) 8-hidroxigeraniol 1-0-D-glucopiranósido (XII) y siringina (XIII),2d) respectivamente, en comparación con muestras auténticas

Experimental

Los puntos de fusión se determinaron en un microaparato de punto de fusión Mitamura y no están corregidos. Las rotaciones ópticas se midieron con un polarímetro digital JASCO DIP-140. Los espectros IR se registraron con un espectrofotómetro IR Hitachi 279-30 y los espectros ultravioleta (UV) con un espectrofotómetro Hitachi 200-20. Los espectros de CD se registraron con un espectrofotómetro de CD JASCO J-20A y los espectros de masas (MS) con un JEOL JMS-100. Los espectros de 'H-NMR y 13C-NMR se registraron con una máquina JEOL FX-90Q (89,55 y 22,5 MHz, respectivamente).

Los cambios químicos se dan en la escala d (ppm) con tetrametilsilano (TMS) como estándar interno. Las abreviaturas utilizadas para los datos de resonancia magnética nuclear (RMN) son las siguientes; s, camiseta; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; hermano, amplio. La cromatografía de gases (GC) se llevó a cabo en un aparato Shimadzu GC-4CM con un detector de ionización de llama. La HPLC se realizó en una máquina Hitachi 655A-11. Se usó gel de sílice (Wako gel C-300) para la cromatografía en columna. Se usaron placas recubiertas con gel de sílice 60 F254 (Merck) para TLC y la detección se llevó a cabo rociando H2SO4 al 10 por ciento seguido de calentamiento.

Aislamiento

plantas enteras deCistanche tubulosa(7 kg), recogidos en diciembre de 1986, en Karachi, Pakistán, se extrajeron con MeOH (20 1 x 2) a reflujo. El extracto se concentró a presión reducida y el residuo se suspendió en agua. Esta suspensión se extrajo con EtOAc saturado con agua. La capa de agua se sometió a una columna Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) y se lavó con H2O y luego se eluyó con MeOH. El eluido de MeOH (140 g) se cromatografió en una columna de poliamida C-200 (Wako Pure Chemical) usando H2O y luego MeOH para dar dos fracciones (fracción 1, eluido de H2O; fracción 2, eluido de MeOH). La fracción 1 se concentró para dar un residuo. El residuo se cromatografió en una columna de gel de sílice usando CHCl3-MeOH-H2O repetidamente. Después de repetidas cromatografías de HPLC (columna, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; solvente; H2O-CH3CN o H2O-MeOH), se aislaron 10 compuestos [II (45 mg), III (40 mg), VI (35 mg ), VII (43 mg), VIII (12 mg), IX (8 mg), X (10 mg), XI (20 mg), XII (10 mg) y XIII (3,6 mg)]. La fracción 2 se trató de la misma forma que la fracción 1 y dio los compuestos I (150 mg), IV (10 mg) y V (10 mg).

Tubulósido E (I)

Polvo amorfo, [a]p3 —134.0 grado (c= 1.5, MeOH). Anal. Calculado para C31H38O15 -3/2H2O: C, 54,98; H, 6.10. Encontrado: C, 55.01; H, 5,98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H・RMN (MeOH-4) 3: 1,07 (3H, d, J=6Hz, CH3 de ramnosa), 1,98 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J{ {37}}Hz, Ar-CH2~), 4,54 (1H, d, J=8Hz, Hl de glucosa), 5.00 (1H, brs, Hl de ramnosa), 6,34 ( 1H, d, J= 16Hz, Ar-CH=CH-), 6,5 a 6,8 (3H, H aromático), 6,80 (2H, d, J-9Hz, H{ {65}}; H-5'), 7,46 (2H, d, J=9Hz, H-2; H-6Z), 7,66 (1H, d, J= 16 Hz, Ar—CH=CH—). 13C-RMN: Tabla L

Alcohol deshidrodiconiferílico y^-O-^-D-GIucopyranósido (II)

Polvo amorfo, [a]^5 -7,4 grados (c= 1,6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H・NMR (DMSO-rf6) J: 3,74, 3,80 (3H cada uno, s, OCH3), 5,45 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6,58 (1H, d〃= 16Hz; H-az) , 6,7—7,1 (5H, m, H aromático) 13C-NMR: Tabla I.

Alcohol dehidrodiconiferílico 4-Oj8-D-Glucopiranósido (III)

Polvo amorfo, [a]^5 -56.4.(c= 1.1, MeOH). IR cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-RMN (DMSO-(76) 6: 3,76, 3,82 (3H cada uno, s, OCH3), 5,52 (1H, d, J-7 Hz, Ha), 6,18 (1H, dt, J=16, 7 Hz, H-^), 6,49 (1H, d,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Siringalida A 3'-(xL-ramnopiranósido (IV)

Polvo amorfo, Anal. Calculado para C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56,11; H, 5,94. Encontrado: C, 56.4{{107}}; h, 6.04. IR cm— porcentaje 3400, 1606, 1518. 】H・RMN (MeOH-J4) d: 1,15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 de ramnosa), 2,90 (2H, t, J{{27 }} Hz, Ar-CH2-), 4,46 (1H, d, J=8Hz, Hl de glucosa), 5,27 (1H, brs, Hl de ramnosa), 6,35 (1H, d, J-16Hz, Ar—CH=CH—), 6,6—7,3 (3H, H aromático), 7,68 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH {{54 }} CH-). RMN 13C (CD3OD) 8: 130,6 (Cl), 116,1 (C-2), 130,8 (C-3, 156,6 (C-4), 116,1 (C-6 ), 72,1 (Ca, rham-2, 3), 36,2 (C-8), 127,6 (Cr), 114,6 (C2), 149,6 (C・3'), 146,6 (C{{94 }}'),116.4 (C-5'), 123.1 (C-6'),168.2 (C・a'),115.2 (C书),147.0 104.0 (gluc-1), 76,0

(glu-2), 81,5 (glu-3), 70,3 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Isosiringalida S^aL-Rhamnopiranósido (V)

Polvo amorfo, Anal. Calculado para C29H36O14-1/2H2O: C, 56,31; H, 5,96. Fundar; C, 56,4{{70}}; h, 6.04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-RMN (MeOH-J4) d: 1,09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 de ramnosa), 2,80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4,40 (1H, d, J=8Hz, Hl de glucosa), 5,23 (1H, br s, Hl de ramnosa), 6,37 (1H, d, J-18Hz, AsCH=C旦'一), 6,6—7,2 (3H, aromático H), 7,71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar -CH=CH-y 13C-RMN (CD3OD) S: 131,4 (Cl), 116,3 (C-2), 144,5 (C-3X 146,0 (C-4 ), 117,0 (C-5), 121,2 (C-6), 72,2 (Ca), 36,5 (C/), 127,1 (Cr), 116,8 (C-2\ 69, 131,2 (C-3\ 5'),161,2 (C-4'),168,2 (CH), 114,7 (C-^), 147,5 (Cy), 104,1 (glu-1), 76,1 (gluc-2), 81,5 (gluc-3),

70,2 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (ram-1), 72,1 (ram-2), 3 ), 73,7 (rham-4), 70,6 (rham-5), 18,4 (rham-6).

( más )-Syringaresinol Oj?-D-Glucopyranoside (VI)

Polvo amorfo, [a]g5 -14.4.(c=0.1, MeOH). Anal. Calculado para C28H36O13: C, 57,93; H, 6.25. Encontrado: C, 58.01; H, 6.26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. 】H・RMN (DMSO"6): 3,78 (12H, s?OCH3 x 4), 6,60, 6,66 (2H cada uno, s, H aromático).

( más )-Pinoresinol O-^-D-Glucopyranoside (VII)

Polvo amorfo, [a]^5 más 38,9 grados (c=0,6, MeOH). Anal. Calculado para C26H32O11 T/2H2O: C, 58,97; H, 6.28. Encontrado: 58,94; H, 6.29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-RMN (C5D5N) W 3,77, 3,80 (3H cada uno, s, OCH3), 6,9—7,7 (6H, m, H aromático).

Liriodendro (VIII)

Agujas incoloras (MeOH), pf 255 a 257 grados, [a]p5 -9,2 grados (c=L3, piridina). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. RMN XH (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Desoxicatalpol (IX)

Agujas incoloras (MeOH), pf 204-206 grados, [a]p5 -50,1 grado (c=0,7, MeOH). anal, calculado para C15H22O9: C, 52,02; H, 6.40. Encontrado: C, 52,12; H, 6.41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・NMR (D2O) 3:

yo 3—1,9 (1H, m, H-6), 2,1—2,7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3,65 (1H, tipo s, H-7), 3,90, 4,35 (2H, sistema AB, J=13Hz, H-10), 4,92 (1H, d, J=7 Hz, aromérico H), 5,10 (1H, dd, J=6, 4 Hz, H-4), 5,12 (1H, d, J-10Hz, Hl), 6,38 (1H, dd, 1 Hz, H-3).

{{0}}Ácido epilogánico (X) Agujas incoloras (MeOH), pf 147一149 grados, [a]p5 — 135.0 grados (c= 1.0, piridina ). Anal. Calculado para C16H24O10 H2O: C, 48,73; H, 6,65. Encontrado: C, 48,60; H, 6,70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・NMR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2,60 (1H, m, H-8), 3,08 (1H, dt, J=3, 8,5 Hz, H-9), 3,58 ( 1H, m, H-5), 5,40 (1H, d, J=7,5 Hz, H anomérico), 5,91 (1H, d〃=3Hz, Hl), 7,92 (1H , s, H-3).

20-Hidroxiecdisona (XI)

Sólido cristalino, pf 241 a 242 grados, [a]p5 más 70.0 grados (c= LI, MeOH). Anal. Calculado para C27H44O7: C, 67,47; H, 9.23. Encontrado: C, 67,28; H, 9.18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-RMN (C5D5N) 1,06 (3H, s, H-19), 1,20 (3H, s, H-18), 1,36 (6H, s, H-26, H-27)? 1,58 (3H, s, H-21), 6,24 (lH,d, J=2Hz, H-7). RMN 13C (C5D5N): 38,0 (Cl),

68,2 (C-2, C-3), 32,5 (C・4), 51,5 (C-5), 203,7 (C-6), 121,8 (C-7), 166,3 (C-8), 34,6 (C-9), 38,8 (C-10), 21,3 (C-ll), 31,9 (C {{30}}), 48,2 (C-13), 84,4 (C-14), 32,1 (C-15), 21,6 (C-16 ), 50,2 (C-17), 18,0 (C-18), 24,6 (C-19), 77,0 (C-20), 21,8 (C-21 ), 77,7 (C-22), 27,6 (C-23), 42,7 (C-24), 69,8 (C-25), 30,1 (C-26 , 27).

8-Hidroxigeraniol 1-^-D-GIucopyranoside (XII)

Agujas incoloras (MeOH), pf 58-60 grados, [a]^5 -40,1.(c=L2, MeOH). Anal. Calculado para C16H28O71/2H2O: C, 56,29; H, 8.56. Encontrado: C, 56,40; H, 8.50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. RMN XH (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Jeringina (XIII)

Agujas incoloras (MeOH), pf 188 a 189 grados, [a]^5 - 15,3 grados (c=0,4, MeOH). Anal. Calculado para C17H24O9: C, 55,13; H, 6.53. Encontrado: C, 54,83; H, 6,50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. RMN 'H (DMSO/6)W 3,78 (6H, s, OCH3 x 2), 6,3—6,5 (2H, m, —CH=CH—), 6,72 (2H, s, H aromático).

Acetilación de I El compuesto I (50 mg) se disolvió en piridina (1 ml) y anhídrido acético (1 ml) y se dejó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo y luego se extrajo con EtOAc. El extracto de EtOAc se concentró al vacío y el residuo se cromatografió en una columna de gel de sílice utilizando benceno-acetona (5:1) para dar el octaacetato (la) (35 mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1,02 (3H, d, J=6Hz, CH3 de ramnosa), 1,87, 1,95, 2,02 (3H cada uno, s, OAc), 2,10 (6H, s, OAc x 2), 2,27, 2,28, 2,31 (3H cada uno, s, Ar-OAc), 2,90 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH{ {43}}), 6,38 (1H, d, J=16Hz, AR~CH=CH-), 6,80—7,15 (3H, m, aromático H), 7,24 (2H, d, J-9 Hz, H-3\ H・5'), 7,55 (2H, d,丿=9Hz, H-2, H-6), 7,72 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-).

Acetilación de II y III

Los compuestos II y III (20 mg cada uno) se acetilaron de la misma manera que se describe para el compuesto I y dieron los hexaacetatos [Ila (12 mg), Ila (15 mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・RMN (CDC13) 5: 2,01, 2,03, 2,09 (3H cada uno, s, OAc), 2,06 (6H, s, OAc x 2 ), 2,30 (3H, s, OAc), 3,84 (3,95 (3H cada uno, s, OCH3), 5,54 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,05 (1H5 dt, J{{38} }, 7 Hz, H-^), 6,53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6,8一7,1 (5H, m, aromático H). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-RMN (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, aromático H).

Acetilación de IV y V

Los compuestos IV y V se acetilaron de la misma manera que se describe para el compuesto I y dieron los octaacetatos [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・RMN (CDC,) W 1,03 (3H? d, J=6Hz, CH3 de ramnosa), 1,87, 1,94, 1,99 (3H cada uno, s, OAc), 2,09 (6H, s, OAcx2), 2,28 (6H, s, OAcx2), 2,30 (3H, s, OAc), 2.86 (2H, t, J=6 .6Hz, Ar■-CH?—), 3.67 (2H, t, J=7.2Hz Ar-CH2~CH2-), 6.35 (1H, d, J=16Hz , AsCH=CU—), 6,87—7,35 (3H, m, Ar—7,09 (4H, q, J=8,6 Hz, A2/B2/tipo), 7,65 (1H, d, J =16Hz, Ar CH=CH ). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-RMN (CDC13) 1,03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/tipo), 7,71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH=CH ).

Metanólisis de I

El compuesto I (aprox. 1 mg) se calentó a reflujo con CH3COC1 metanólico al 5 por ciento (2 ml) durante 30 min, y luego el reactivo se evaporó al vacío. La presencia de p-cumarato de metilo y alcohol 3,4-dihidroxifenetílico en el residuo se detectó mediante TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] y HPLC [columna, Develosil ODS -7 (4,6 x 250 mm); disolvente, MeOH al 55 por ciento; detector (UV), 220 nm; caudal, 1,0 ml/min]. p-cumarato de metilo; Rf 0,82, ;R (min) 8,8, 3,4-alcohol dihidroxifenetílico;母0,31, tR (min) 3,2.

Hidrólisis ácida de IA

una solución del compuesto I (2 mg) en 10 por ciento de H2SO4 (1 ml) se calentó en un baño de agua hirviendo durante 30 min. La solución se pasó a través de una columna Amberlite IR-45 y se concentró para dar un residuo, que se redujo con borohidruro de sodio (aprox. 3 mg) durante 1 h. La mezcla de reacción se pasó a través de una columna Amberlite IR-120 y se concentró hasta sequedad. El ácido bórico se eliminó por destilación con MeOH y el residuo se acetiló con anhídrido acético (1 gota) y piridina (1 gota) a 100 grados durante 1 hora. Los reactivos se evaporaron al vacío. Se detectaron acetato de glucitol y acetato de ramnitol en una proporción de 1 a 1 del compuesto I mediante GC. Condición: columna, 1,5 por ciento OV-17, 3 mm x 1,5 m; temperatura de la columna, 180 grados; gas portador, N2 (30ml/min). tR (min): 2,0 (acetato de ramnitol), 5,5 (acetato de glucitol).

Hidrólisis enzimática de II y III Compuesto II

(13 mg) o III (40 mg) se hidrolizó con celulasa (40 mg) en agua (1 ml) durante 2 horas a 37 grados. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. El extracto de EtOAc se concentró al vacío para dar el residuo, que se cromatografió en HPLC [columna, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); solvente. II: H2O-CH3CN (77,5:22,5); III: H2O-CH3CN (80:20); detector (UV), 205 nm; caudal, 6,0 ml/min] para dar lib (3,3 mg), Ilb (5,7 mg). lib: [a]^5 más 34,8 grados (c=0,3, MeOH). CD (c=3.3mg/10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232 ). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/z (porcentaje): 358 (M plus, 53), 340 (M plus -H2O, 100), 338 (58), 325 ( 47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59). XH-NMR (acetona-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h"'),5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

ReconocimientoAgradecemos al Prof. A. Ueno y al Dr. T. Miyase, Universidad de Shizuoka, por las mediciones de los espectros de RMN y CD, y por sus valiosas sugerencias, y al Dr. M. Kikuchi, Tohoku College of Pharmacy, por proporcionar muestras auténticas.

referencias y notas

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