Determinación del contenido de cinco compuestos en Semen Rehmanniae y establecimiento de su huella digital por HPLC

Tabla 3 Resultados de la prueba de recuperación (n=6)

2.4 Determinación de muestras

Los seis lotes de Rehmannia recolectados se prepararon según el método indicado en "2.2.2" y se tomaron muestras y se determinaron según las condiciones cromatográficas indicadas en "2.1". Los resultados de la determinación del contenido se muestran en la Tabla 4. Los resultados muestran que entre los cinco componentes, el contenido de glucósido D de rehmannia es el más alto, oscilando entre 0.460% y {{1 0}}.730%; el contenido de glucósido de leonuri ocupa el segundo lugar, oscilando entre 0,100% y 0,270%, y el contenido de los dos componentes en muestras de diferentes áreas de producción no es significativamente diferente. En la muestra SX1, a excepción del equinacósido, los contenidos de los otros cuatro componentes son significativamente mayores que los de otros lotes de muestras; los contenidos de echinacósido, cistanquésido A y verbascósido en Rehmannia glutinosa de diferentes áreas de producción son bastante diferentes e irregulares.

HIERBA DE CISTANCHE CONBUENA CONSISTENCIA DE CALIDAD

2.5 Establecimiento y evaluación de similitud de la huella digital HPLC de Rehmannia glutinosa

Los cromatogramas y los datos de la determinación del contenido de múltiples componentes en Rehmannia glutinosa se importaron al software "Sistema de evaluación de similitud de huellas dactilares cromatográficas de medicina herbaria china (2012 edición)" y se seleccionó el cromatograma de la muestra de prueba SX1. como espectro de referencia. El ancho de la ventana de tiempo se estableció en 0.10 min y se utilizó el método de la mediana para generar espectros superpuestos y espectros de referencia. Se identificaron un total de 23 picos comunes (ver Figura 3). La similitud entre las huellas dactilares de la muestra de Rehmannia glutinosa y la referencia fue de 0,904~0,950, lo que indica que las muestras de Rehmannia glutinosa de diferentes áreas de producción y entre Rehmannia glutinosa cruda y Rehmannia glutinosa cocida eran similares y tenían una consistencia de buena calidad.

Tabla 4 Resultados de la determinación del contenido de 5 componentes en Semen Rehmanniae/%

13. rehmanniosido D; 17. leonurida; 19. echinacósido; 20. castanósido A; 21. actósido

Figura 3 Cromatogramas de HPLC superpuestos de 6 lotes de Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) y referencia (R)

3 Discusión

3.1 Selección de condiciones cromatográficas.

En este estudio se investigaron cuatro sistemas de fase móvil: acetonitrilo-agua, acetonitrilo-0.solución de ácido fórmico al 1%, metanol-agua y metanol-0.solución de ácido fórmico al 1%. Los resultados mostraron que los cinco componentes tenían buenos efectos de separación en el sistema de acetonitrilo; En comparación con el sistema de fase móvil acetonitrilo-agua, los picos de rehmannia glutinosa y glucósidos de agripalma en la fase móvil de solución de ácido fórmico al 1% de acetonitrilo-0 eran más estrechos y tenían una buena simetría de pico. Al mismo tiempo, debido a la diferente absorción ultravioleta de los cinco componentes, el contenido de los componentes varía mucho. Para determinar con mayor precisión el contenido de cada componente y garantizar que la intensidad de absorción de los cinco componentes se distribuya uniformemente en el mismo cromatograma, la absorción ultravioleta deglucósido D de rehmannia, se analizó glucósido de agripalma, equinacósido, cistanquésido A y verbascósido, y se seleccionó la determinación de longitud de onda variable, es decir, 0-24 min, el primer glucósido de rehmannia separado se determinó a 203 nm, y 24-40 min, el echinacósido, el cistanquésido A y el verbascósido separados se determinaron a 330 nm. Además, este estudio también investigó los efectos de extracción del metanol, la solución de metanol al 70 %, la solución de metanol al 50 % y la solución de acetonitrilo al 50 % como disolventes de extracción. Los resultados mostraron que una solución de metanol al 70 % como disolvente de extracción puede disolver mejor los componentes a analizar y la muestra extraída tiene menos impurezas. Por lo tanto, este estudio seleccionó metanol al 70% como solvente de extracción, acetonitrilo-0.Solución de ácido fórmico al 1% como sistema de fase móvil y utilizó longitud de onda variable para determinar el contenido de los cinco componentes en Rehmannia.

3.2 Análisis de los resultados de la determinación de muestras.

De los resultados de la determinación se desprende que después de la vaporización, excepto por un ligero aumento en el contenido de echinacósido, los contenidos de los otros cuatro componentes se redujeron significativamente, especialmente el contenido de leonurisida y cistanchesida A; el contenido de rehmannia glucósido D y cistancheside A en Rehmannia glutinosa de la misma zona de producción fue ligeramente diferente, y el contenido de leonurisida, echinacósido y verbascósido fue significativamente diferente; el contenido de echinacósido en Rehmannia glutinosa del área de producción de Henan fue significativamente mayor que el de las muestras del área de producción de Shanxi, y el contenido de los otros cuatro componentes fue ligeramente diferente. Al mismo tiempo, según la huella digital de HPLC establecida en este estudio, la similitud entre los 6 lotes de muestras de Rehmannia y la huella digital de control fue 0.904~0,950, lo que indica que la sustancia química principal Los componentes de los 6 lotes de muestras de Rehmannia antes y después del procesamiento fueron muy consistentes.

En resumen, el método de determinación del contenido y la huella digital de HPLC establecidos en este estudio son precisos, confiables y tienen buena especificidad. Se pueden utilizar para caracterizar los cambios en los componentes y el grado de procesamiento de Rehmannia glutinosa antes y después del procesamiento, y brindar soporte técnico para el control de calidad de Rehmannia glutinosa. Sin embargo, este estudio tiene las desventajas de tener lotes de muestra pequeños y una cobertura incompleta de las áreas de producción, lo que requiere más análisis y verificación.

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