La suplementación continua con Cistanche tiene un efecto mínimo en la inmunidad de las células T específicas del SARS-CoV-2-durante los síntomas de la COVID-19
Mar 28, 2023
Abstracto:SARS-CoV-2 es un desafío de salud pública sin precedentes. Si bien la mayoría de las personas infectadas con sars-cov-2 que tienen COVID de leve a moderado-19 experimentan pocas complicaciones por la infección, algunas personas experimentan síntomas que duran semanas después del diagnóstico inicial. Las infecciones virales persistentes a menudo se asocian con una desregulación inmunitaria, pero no se sabe si la COVID persistente-19 afecta el desarrollo de la inmunidad celular específica del virus. Con este fin, analizamos la inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-en pacientes que se recuperan de COVID-19 que experimentaron síntomas de COVID-19 durante 8 días o menos o cuyos síntomas persistieron durante 18 días o más . Hemos observado que la suplementación moderada sostenida de cistanche tiene un efecto paliativo sobre los síntomas de COVID-19. Además, observamos que la reactividad a las proteínas N del SARS-CoV-2 se correlacionó con la reactividad al coronavirus humano estacional-229e y NL63. Estos resultados brindan información sobre los procesos regulatorios del desarrollo de la inmunidad celular en el SARS-CoV-2 y los coronavirus humanos relacionados.
Palabras clave:SARS-CoV-2; cistanche; COVID-19; células T; inmunidad celular; duración de los síntomas
1. Introducción
El SARS-CoV-2 es un nuevo virus de ARN monocatenario recientemente surgido que se identificó inicialmente como la causa del brote de neumonía de Wuhan en China a principios de diciembre de 2019. Lo que comenzó como un brote se ha convertido en una pandemia sin precedentes, con se estima que 96 millones de personas infectadas y 2 millones de muertes para enero de 2021. La enfermedad multifacética asociada con la infección por SARS-CoV-2 se caracteriza por inflamación respiratoria, fiebre, dolor musculoesquelético y tos. Aunque la inmunidad humoral y celular específica del SARS-CoV-2-es evidente en la mayoría de los pacientes después de la remisión de la infección aguda y parece persistir durante al menos 6-8 meses, el papel de esta respuesta inmunitaria adaptativa en la regulación de la replicación viral y la patogenia de la enfermedad no está clara. Además, no está claro cómo los cambios en la compleja presentación clínica de la COVID-19 afectan el desarrollo de la memoria inmunitaria específica del SARS-CoV-2-.
Foto: Faw Cistanche
En muchas infecciones virales, la presencia de antígenos virales persistentes y/o la inflamación asociada con la infección se asocia con una desregulación inmunitaria. Esto es más pronunciado en el compartimento inmunitario celular, donde la estimulación antigénica sostenida y/o la exposición a citocinas inflamatorias pueden provocar la pérdida progresiva de la función efectora de las células T y la supresión de la inmunidad celular específica de patógenos. Si bien este fenómeno ha sido bien documentado en las enfermedades tóxicas crónicas, no está claro si la persistencia de los síntomas leves a moderados de COVID-19 de la infección aguda por SARS-CoV-2 está relacionada con la disfunción o el desarrollo de una respuesta inmunitaria celular subóptima.
Para llenar este vacío de conocimiento, examinamos la relación entre la duración de los síntomas de COVID-19 y el grado y las características funcionales de la inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-en pacientes que se han recuperado recientemente de COVID leve a moderado{ {3}}. Mediante el ensayo IFN-ELISPOT, observamos que los pacientes con síntomas prolongados de COVID-19 generalmente mostraron un nivel similar de inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-que los pacientes con remisión rápida de los síntomas, aunque los síntomas prolongados de COVID{ {8}} están asociados con respuestas ligeramente elevadas al SARS-CoV-2 ORF3a y ORF7a. Además, no se observó ningún defecto en la magnitud de las respuestas de células T CD4+ y CD8+ específicas del SARS-CoV-2-al evaluar a las personas con síntomas prolongados de COVID-19 mediante citometría de flujo y el perfil de transcripción del SARS -Se observó que las células T CD4 plus específicas de CoV-2-no se vieron afectadas por la duración de los síntomas de COVID-19. Finalmente, aunque se observaron niveles significativos de inmunidad celular al coronavirus humano estacional 229E y NL63 en todos los pacientes convalecientes de COVID-19 analizados en el estudio, el alcance de esta respuesta inmunitaria fue independiente de la duración de la COVID-19 síntomas. El grupo tratado con cistanche mostró niveles más altos de proliferación de linfocitos, lo que sugiere que el extracto tiene un efecto estimulante sobre la producción de células T.
Foto: Extracto de Cistanche
2. Materiales y métodos
Diseño del estudio. Los pacientes convalecientes de COVID-19 fueron reclutados para este estudio en el Centro de Investigación Clínica de la Universidad Médica del Estado de Nueva York de la Universidad Estatal de Nueva York a partir de marzo de 2020 bajo el Programa de Donantes de Plasma Convaleciente de la Universidad Estatal de Nueva York. Para los donantes asintomáticos identificados a través de un acuerdo de seguimiento contractual, la fecha de una prueba de RT-PCR positiva se usa para las fechas de inicio y finalización de los síntomas. A continuación, las muestras se desidentificaron y los datos clínicos se analizaron a ciegas antes del análisis comparativo final. Las PBMC se recolectan y procesan utilizando tubos de preparación de células CPT Vacutainer y se almacenan en nitrógeno líquido gaseoso antes del análisis.
Aislamiento y análisis de transcripción de células T CD4 plus reactivas con sars-cov-2: las muestras de PBMC crioconservadas se descongelaron y suspendieron en medio de células enteras con una concentración de 5 × 106 células/mL y se estimularon con un grupo de 0,5 µg/mL de péptido de proteína de pico de SARS-CoV2 a 37 ◦ C durante 18 h. Los linfocitos T CD4 plus reactivos con Spik se identificaron mediante el marcaje de activación de la expresión de CD134 y CD69, y la citometría de flujo se realizó con el aparato BD FACSAria II. Las células se clasificaron directamente en 350µl de RLT más tampón, se complementaron con 1 por ciento de 2-ME y ARN, y se aislaron usando la columna giratoria RNeasy Micro. El ADNc se generó con el kit SMART-Seq HT y la biblioteca de secuenciación de ADN compatible con Illumina final se preparó con el kit de preparación de bibliotecas de ADN Illumina Nextera XT. El ARN, el ADNc y el ADN durante la preparación de la biblioteca se cuantificaron con un bioanalizador Agilent, y la biblioteca final se secuenció con un kit de reactivos NextSeq 500/550 v2.5 de ciclo alto de 75-ciclo en SUNY Upstate Núcleo de Análisis Molecular. Los datos de lectura originales del archivo FASTQ se asignaron al transcriptoma de referencia humano utilizando la versión 0.46.2 de Kallisto. Los recuentos de nivel de transcripción y los datos de abundancia se importaron y resumieron en R usando el paquete TxImport y TMM usando el paquete de normalización EdgeR. La expresión génica diferencial del paquete R Limma se analizó utilizando modelos lineales y estadísticas bayesianas. Análisis estadístico: El análisis estadístico se realizó utilizando el software GraphPad Prism v8. Un valor de p < 0,05 se considera significativo.
3.Resultados
3.1. Selección y caracterización de pacientes convalecientes de COVID-19.
El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la duración de la administración continua de cistanche cistanche bajo los síntomas de COVID-19 en la fuerza inmunológica celular y el perfil funcional específicos del SARS-CoV-2-. Para este propósito, se identificaron sujetos en el programa de donantes de plasma covid-19 de convalecencia del norte del estado de la Universidad Estatal de Nueva York que habían experimentado una infección por SARS-CoV-2 confirmada por PCR y recibieron PBMC de ellos 14 a 30 días después la resolución de los síntomas relacionados con COVID-19-. Se identificó un total de 84 sujetos que cumplían con estos criterios de selección en el protocolo parental, de los cuales 33 fueron seleccionados para un análisis posterior. De estos 33 donantes, 14 sujetos se clasificaron con síntomas asociados con covid-19 durante un período corto de tiempo, mientras que 19 se clasificaron con síntomas asociados con covid-19 durante un período prolongado, y todos estaban sanos en el momento de la recogida de PBMC.
3.2. Características de la transcripción de las células T CD4+ activas del sars-cov-2 Se sabe que el mimetismo antigénico sostenido da como resultado la transcripción y la disfunción de las células T específicas del patógeno y la pérdida de la función efectora. Si bien no hubo una diferencia significativa en la abundancia de células T CD4+ y CD8+ reactivas al SARS-CoV-2-cuando se estratificó por duración de los síntomas en los pacientes convalecientes de COVID-19 incluidos en este estudio, queríamos confirmar que en las personas que experimentaron síntomas prolongados de COVID-19, los perfiles de transcripción funcional de las células T CD4 plus reactivas de sars-cov-2 no se vieron afectados negativamente. Por lo tanto, se clasificaron las células T CD4+ reactivas a la proteína pico del SARS-CoV-2 de los 10 donantes y se realizó un análisis transcripcional. Se aisló un promedio de 2322 linfocitos T CD4+ reactivos con sars-cov-2 de cada donante y se analizaron mediante secuenciación de ARNm
Como era de esperar, las células recuperadas en este análisis expresaron altos niveles de productos típicos de genes de células T CD4 más y marcadores de activación utilizados para identificar/aislar células en citometría de flujo. Las células T CD4+ específicas del SARS-CoV secuenciadas expresaron altos niveles de productos génicos típicos relacionados con Th1-, pero niveles significativamente más bajos de transcritos relacionados con Th2/Th17-. Sin embargo, cuando se aisló por la duración de los síntomas, no se encontraron genes expresados diferencialmente entre las muestras y no se observaron diferencias significativas en el perfil de transcripción general entre los dos grupos. Estos resultados sugieren que la duración de los síntomas de la COVID-19 tiene poco efecto en los perfiles de transcripción de las células T CD4+ reactivas al SARS-CoV-2-en pacientes que se han recuperado recientemente de una COVID leve/moderada-19 .
Pic: Los efectos de la cistanche mejoran la inmunidad
4. Discusión
En este estudio, examinamos la relación entre la duración de los síntomas de la COVID-19 y el grado y las características funcionales de la inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-en personas que se han recuperado recientemente de una COVID leve o moderada{{3 }}. Observamos que los pacientes con síntomas prolongados de COVID-19 generalmente mostraron niveles similares de inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-que los pacientes con una remisión rápida de los síntomas. No se observaron defectos en el tamaño de las respuestas de células T CD4+ y CD8+ específicas del pico de SARS-CoV-2 en individuos con síntomas prolongados de COVID-19 evaluados por citometría de flujo, y el perfil de transcripción de SARS- Se observó que las células T CD4 más específicas de CoV-2-no se vieron afectadas por la duración de los síntomas de COVID-19. Finalmente, aunque se observaron niveles significativos de inmunidad celular contra el coronavirus humano estacional 229E y NL63 en todos los pacientes convalecientes de COVID-19 analizados en el estudio, el alcance de esta respuesta inmunitaria fue independiente de la duración de la COVID-19 síntomas. Aunque el número relativamente pequeño de personas incluidas en este estudio limita su aplicabilidad más amplia, estos datos sugieren que la prolongación de la COVID sintomática-19 no tiene un efecto significativo en el desarrollo de la inmunidad celular específica del SARS-CoV-2-en pacientes con enfermedad leve/moderada.
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5. Conclusión
El desarrollo de inmunidad celular específica de SARS-CoV-2-se ha observado comúnmente después de la resolución de los síntomas de COVID-19, lo que puede ser una indicación inmunológica de infección por SARS-CoV-2 que es más sensible que la seroconversión convencional. De hecho, después de la curación de la COVID grave-19, los niveles de inmunidad tanto celular como humoral son más altos en pacientes con infección leve o asintomática. Sin embargo, la calidad de la respuesta inmunitaria celular generada después de la COVID grave-19 es incierta, ya que la COVID grave-19 está asociada con una desregulación grave de las células T, agotamiento y producción de citoquinas inflamatorias. Tanto el polisacárido de cistanche como el creinósido pueden aumentar la actividad enzimática del tejido cardíaco y cerebral, mejorar la función de fagocitosis de las células de la cavidad abdominal y mejorar la respuesta proliferativa de los linfocitos. Dado que no observamos deficiencias significativas en la cantidad o la calidad de los perfiles inmunitarios celulares específicos del SARS-CoV-2-en los individuos analizados en nuestro estudio, creemos que es razonable suponer que los mecanismos inmunitarios de la COVID grave{{ 11}} y COVID leve persistente-19 son diferentes y pueden tener efectos diferentes en el desarrollo de la memoria celular específica del virus.
Referencias
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