La eliminación de MiR-29b2/c conduce a un envejecimiento acelerado y neuroprotección en ratones con enfermedad de Parkinson inducida por MPTP

Abstracto

Los estudios revelan un vínculo entre los miR-29s en el envejecimiento y la enfermedad de Parkinson (EP). Aquí mostramos que los niveles séricos de miR-29s en la enfermedad de Parkinson inducida por 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) los ratones exhibieron cambios dinámicos. El papel de miR-29b2/c en el envejecimiento y la enfermedad de Parkinson se estudió utilizando ratones knockout para el gen miR-29b2/c (miR-29b2/c KO). Los ratones miR-29b2/c KO se caracterizaron por un peso notablemente más ligero, cifosis, debilidad muscular y marcha anormal en comparación con los ratones de tipo salvaje (WT). El WT también desarrolló un aparente engrosamiento de la dermis y una reducción del tejido adiposo. Sin embargo, la deficiencia de miR-29b2/c alivió los daños inducidos por MPTP del sistema dopaminérgico y la activación glial en la vía nigroestriatal y, en consecuencia, mejoró la función motora de los ratones KO tratados con MPTP. La eliminación de miR-29b2/c inhibió la expresión de factores inflamatorios en cultivos primarios de glía mixta, astrocitos primarios o tratados con LPS tratados con 1-metil-4-fenilpiridinio (MPP plus). microglía primaria. Además, la deficiencia de miR-29b2/c mejoró la actividad de AMPK pero reprimió la señalización de NF-κB p65 en las células gliales. Nuestros resultados muestran que los ratones miR-29b2/c KO muestran el fenotipo similar a la progeria. Las células gliales menos activadas y la neuroinflamación reprimida podrían generar neuroprotección dopaminérgica en ratones miR- 29b2/c KO. En conclusión, miR-29b2/c está involucrado en la regulación del envejecimiento y juega un papel perjudicial en la enfermedad de Parkinson.

Palabras clave

MiR-29b2/c; neuroprotección; enfermedad de Parkinson inducida por MPTP;Beneficios de la cistanche.

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Introducción

La enfermedad de Parkinson (EP) es la segunda enfermedad neurodegenerativa más frecuente, caracterizada por la pérdida progresiva de neuronas dopaminérgicas en la sustancia negra par compacta (SNpc) del mesencéfalo, y una mayor activación glial y neuroinflamación [1–3]. Los microARN son moléculas cortas de ARN no codificantes que regulan la expresión génica a nivel postranscripcional [4, 5]. Los microARN están involucrados en la regulación del desarrollo del sistema nervioso, la plasticidad neuronal y las enfermedades neurodegenerativas. La familia MicroRNA29 (miR- 29s) está compuesta por dos grupos de genes: miR-29a/b1 y miR-29b2/c, que se encuentran en el cromosoma 6 y el cromosoma 1, respectivamente, de el genoma del ratón. miR-29a y miR-29c solo tienen una diferencia de nucleótidos, mientras que miR-29b1 y miR-29b2 son idénticos en secuencia [6]. Los miR-29s están involucrados en múltiples procesos biológicos. Se han verificado experimentalmente muchos genes diana de miR-29, incluidos los genes de supervivencia de Procell Bcl-2, Mcl-1, Cdc42 y p85- ; genes proapoptóticos Puma, Bim, Bak y Bmf; y citocinas proinflamatorias IFN- e IL-12 . En el sistema periférico, los estudios han demostrado que los miR-29s están involucrados en la fibrosis tisular [7–9], el metabolismo y la regulación inmunitaria [10–13].

Los miR-29 se expresan ampliamente en el sistema nervioso central y sus transcripciones existen tanto en las neuronas como en las células gliales [14, 15]. La asociación entre miR-29s y enfermedades neurológicas se ha ilustrado cada vez más. Los miR-29 están involucrados en la regulación de la producción de -amiloide, y están regulados a la baja en el cerebro de los pacientes con EA [16, 17]; Los niveles de miR-29 también disminuyen en pacientes con enfermedad de Huntington (EH) y modelos de ratones con EH [18, 19], mientras que aumentan en pacientes con esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y modelos de ratones con ALS [16, 20]. Tanto los ratones con deficiencia de miR-29a/b-1- como los ratones con regulación negativa de miR-29 muestran un fenotipo similar a la ataxia [6, 21]. Con respecto a los efectos de la expresión de miR-29 sobre la neuroprotección y la promoción de la muerte neuronal en modelos de roedores isquémicos, se informaron resultados opuestos [22, 23]. En estudios anteriores, observamos que los niveles de miR-29s estaban notablemente disminuidos en el suero de pacientes con EP con una tendencia decreciente relacionada con un parkinsonismo más grave [24]. Además, los niveles de miR-29 se correlacionaron con el rendimiento de la memoria en pacientes con EP [25]. Llegamos a la conclusión de que miR-29b2/c está estrechamente relacionado con la EP, pero se desconocen en gran medida sus funciones fisiológicas y los mecanismos patológicos involucrados en la EP.

En este estudio, los niveles séricos de miR-29s en ratones en respuesta a la administración de MPTP se midieron hasta 120 días después de la inyección. Los efectos de las deficiencias de miR-29b2/c en los tejidos periféricos se estudiaron utilizando ratones miR-29b2/c KO. La neurotoxina dopaminérgica MPTP se utilizó además para inducir un modelo de ratón de la enfermedad de Parkinson. Luego se investigaron las lesiones del sistema dopaminérgico nigroestriatal, el desempeño conductual y los posibles mecanismos. Observamos que los niveles de miR-29s en el suero del ratón mostraron cambios dinámicos después de la administración de MPTP. Los ratones miR- 29b2/c KO mostraron un envejecimiento acelerado, indicado por un peso corporal más ligero, reducción del tejido adiposo, cifosis, engrosamiento de la piel, debilidad muscular y anomalías en la marcha. Sin embargo, la deficiencia de miR-29b2/c alivió el daño dopaminérgico y la activación glial y, en consecuencia, mejoró el rendimiento conductual en un modelo animal similar a la EP.

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Resultado

1. El fenotipo similar a la progeria en ratones miR-29b2/c KO

Los ratones knockout miR-29b2/c (miR-29b2/c KO) se generaron mediante la técnica CRISPR-Cas9. La estrategia de selección de genes y genotipado de ratones mutantes se presentó en la Figura complementaria 1. Los ratones miR-29b2/c KO de cuatro y 16- meses de edad tenían un peso corporal reducido (Figura 1A). A los tres meses de edad, las características de los ratones miR-29b2/c KO permanecieron inalteradas, como lo demuestra una microtomografía computarizada (micro-CT) de rayos X (Figura complementaria 2A). No hubo diferencias en la densidad mineral ósea (DMO), la DMO media de las trabéculas, la separación trabecular, el grosor trabecular y el índice del modelo estructural (SMI) entre los ratones miR-29b2/c KO y su contraparte WT a los 13 meses de edad ( Figura complementaria 2B). Mediante la tinción con hematoxilina y eosina (H&E), encontramos que los ratones miR-29b2/c KO de 13-mes de edad mostraban una dermis engrosada con arrugas más profundas y aumentadas (Figura 1B, 1C). Y la cifosis fue evidente en ratones miR-29b2/c KO de 16-meses de edad (Figura 1C). Los ratones miR-29b2/c KO a una edad temprana (3 meses de edad) tenían tejidos adiposos normales (Figura complementaria 2C, 2D). Sin embargo, el tejido adiposo abdominal (grasa subcutánea y grasa visceral combinadas) y el tejido adiposo marrón se redujeron drásticamente en los ratones miR-29b2/c KO en comparación con los ratones WT a la edad de 16 meses (Figura 1D). Además, se analizaron los niveles transcripcionales de los marcadores de senescencia p21 y p53 en el cerebro. Aumentaron notablemente en el hipocampo, pero no en la corteza de los ratones miR-29b2/c KO a la edad de seis meses. Los niveles de proteína p53 y p16 en el hipocampo deficiente en miR-29b2/c no diferían de los controles WT. Además, la actividad de -galactosidasa, una característica conocida de la senescencia celular, no difirió entre los cerebros de los ratones WT y miR-29b2/c KO de tres meses de edad.

Debilidad muscular y anomalías en la marcha en ratones miR- 29b2/c KO

Se evaluaron los comportamientos de ratones deficientes en miR-29b2/c. La fuerza muscular se midió mediante las pruebas de suspensión de alambre y suspensión de rejilla. Los ratones miR-29b2/c KO obtuvieron una puntuación más baja que los ratones de control en la prueba de colgar con alambre (Figura 2A). Y la latencia hasta la caída fue dramáticamente más corta en los ratones miR-29b2/c KO en comparación con sus homólogos de tipo salvaje en la prueba de colgado de rejilla (Figura 2B), pero el rendimiento de la prueba Rotarod de WT y miR{{10} Los ratones }b2/c KO no difirieron significativamente (Figura 2C). La marcha animal fue detectada por el sistema de análisis Catwalk XT. Sorprendentemente, tanto la velocidad como la longitud de la zancada de los ratones miR-29b2/c KO fueron más altas que las de sus contrapartes, mientras que el ciclo de pasos, la posición de pie y el tiempo de balanceo fueron más cortos y el ciclo de trabajo reducido, en miR{ {15}} ratones deficientes en b2/c (Figura 2D).

Cambios de miR-29s en el suero de ratón PD inducido por MPTP

Los niveles de miR-29s disminuyeron en el suero de pacientes con EP en comparación con los controles sanos [24]. En este estudio, los niveles de miR-29s en el suero de ratones PD se cuantificaron a los 3, 30 y 120 días después de la administración de un régimen subagudo de MPTP. Los niveles de miR-29a y miR-29b disminuyeron 3 días después de la inyección y se recuperaron a los valores iniciales a los 30 días, y volvieron a disminuir a los 120 días. Sin embargo, el nivel de miR-29c no cambió significativamente (Figura 5 complementaria).

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La deficiencia de miR-29b2/c mitiga las lesiones nigroestriatales inducidas por MPTP y los déficits motores en ratones

A los ratones knockout miR-29b2/c y a los compañeros de camada WT se les inyectó MPTP para inducir el modelo de EP. Los niveles de expresión de p21, p53 y Pai1 en el estriado de ratones miR-29b2/c KO y controles WT no cambiaron después de la administración de MPTP. La exposición a MPTP causó reducciones significativas de las neuronas dopaminérgicas TH-positivas en el SNpc [F(1, 20)=5.441, P=0.0302], y las terminales nerviosas TH-positivas, proteínas TH [F(1, 20)=10.5, P=0.0041] y los niveles de dopamina, DOPAC y HVA en el cuerpo estriado (Figura 3A-3D). Sin embargo, las lesiones nigroestriatales en ratones miR-29b2/c KO tratados con MPTP se aliviaron drásticamente en comparación con los controles WT tratados con MPTP, ya que el número de neuronas dopaminérgicas, la densidad de las terminales nerviosas dopaminérgicas y los niveles de proteína TH estriatal y la concentración de dopamina fue significativamente mayor; Además, los cambios en las proporciones de DOPAC a DA y HVA a DA [F(1, 19)=12.64, P=0.0021] se mitigaron notablemente (Figura 3A–3D). En ratones miR-29b2/c KO inyectados con solución salina normal, las concentraciones estriatales de 5-HT y su metabolito 5-HIAA aumentaron en comparación con sus contrapartes WT, y las concentraciones de NE estuvieron cercanas entre los ratones de tipo salvaje y miR-29b2/c KO (Figura 3D). Las pruebas de Cría y del Polo se utilizaron para evaluar la actividad vertical espontánea [26, 27] y la actividad locomotora de los ratones [28], respectivamente. Dos días después de la última inyección de MPTP, la frecuencia de crianza disminuyó en los ratones WT durante los últimos 2 minutos en comparación con los controles WT tratados con solución salina normal. Experimentos similares no revelaron un efecto de la deficiencia de miR- 29b2/c en los cambios inducidos por MPTP en la frecuencia de crianza (Figura 3E). De manera similar, el tiempo total dedicado a girar y descender aumentó en los ratones WT después de la administración de MPTP en la prueba Pole, mientras que el tiempo total fue similar entre los ratones miR-29b2/c KO tratados con solución salina normal y los tratados con MPTP (Figura 3F) .

La deficiencia de miR-29b2/c atenúa la activación glial inducida por MPTP en ratones

La activación de las células gliales y la neuroinflamación mediada por células gliales están implicadas en la patología de la EP [29]. Los astrocitos aumentaron notablemente en la vía nigroestriatal de ratones WT, mientras que GFAP más astrocitos aumentaron en el estriado pero no en el SNpc [F(1, 8)=5.412, P=0.0484] de miR Ratones -29b2/c KO tres días después de la inyección de MPTP. En particular, las densidades de astrocitos no difirieron en las dos regiones de ratones WT y miR-29b2/c KO tratados con MPTP (Figura 4A, 4B). Iba 1 más microglía aumentó en la sustancia negra de los ratones WT y en el cuerpo estriado [F(1, 8)=12.74, P=0.0073] tanto de WT como de miR{{21} Ratones }b2/c KO después de la administración de MPTP. Además, en ratones miR-29b2/c KO, la inyección de MPTP redujo significativamente las densidades microgliales (Figura 4C, 4D).

2. Los efectos de la deficiencia de miR-29b2/c en astrocitos de cultivo primario

Se utilizó un ensayo de rascado para comprobar si una deficiencia de miR-29b2/c afectaba a la proliferación y migración de los astrocitos. Los astrocitos primarios miR-29b2/c KO no mostraron diferencias en la capacidad de proliferación y migración. La viabilidad celular de los astrocitos primarios WT y miR-29b2/c KO no manifestó ninguna diferencia al inicio del estudio. Después de la intoxicación con MPP más, la viabilidad celular de los astrocitos WT fue mayor en comparación con los controles, mientras que la viabilidad de los astrocitos mutantes no cambió [F(1, 18)=5.727, P=0.0278 ]. Se observaron productos ROS mejorados y captación de glucosa en astrocitos WT y miR-29b2/c KO tratados con MPP plus.

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Se midieron los niveles de expresión de factores neurotróficos, moléculas relacionadas con la inflamación, genes marcadores astrocíticos tipo A1 y tipo A2 en astrocitos tratados con MPP plus. A las 12 h después del desafío, la expresión de BDNF se elevó en los astrocitos WT y miR-29b2/c KO (Figura 5A). El nivel de expresión de TGF- 1 aumentó significativamente en los astrocitos WT después de la exposición a MPP plus, mientras que disminuyó en los astrocitos miR- 29b2/c KO en comparación con los astrocitos de tipo salvaje tanto al inicio como después. la intoxicación (Figura 5B). El nivel de base de la transcripción de TNF fue menor en los astrocitos miR-29b2/c KO en comparación con los astrocitos WT. Después de 12 h de tratamiento, los niveles de expresión de IL-1, IL-6 y COX-2 aumentaron significativamente en los astrocitos WT y miR-29b2/c, mientras que la transcripción de TNF se elevó solo en los astrocitos WT, y las transcripciones de IL-1, TNF y COX-2 disminuyeron en las células astrocíticas miR-29b2/c KO en comparación con las contrapartes de tipo salvaje (Figura 5C) . El marcador A1 H2-T23 y el marcador A2 CD14 fueron notablemente inferiores en los astrocitos miR- 29b2/c KO tratados con PBS en comparación con los controles WT. Después de 12 h de tratamiento, los marcadores A1 H2-D1, Ggta1 y C3, y los marcadores A2 Clcf1 y S100 10 aumentaron tanto en astrocitos WT como miR-29b2/c KO; H2-T23 aumentó solo en astrocitos WT; Gbp2 y CD14 no cambiaron en los dos genotipos de astrocitos. Además, las transcripciones de H2-T23, H2-D1 y CD14 se regularon a la baja en los astrocitos miR-29b2/c KO en comparación con los controles WT (Figura 5D, 5E). 12 h y 24 h después del tratamiento, los niveles de proteínas AMPK y proteínas AMPK fosforiladas no se alteraron en los astrocitos WT, mientras que, a las 24 h después de MPP más desafío, el nivel de proteína AMPK disminuyó en miR-29b2/ c KO astrocitos, y la proporción de p-AMPK a AMPK en astrocitos mutantes aumentó en comparación con los astrocitos WT y también con los astrocitos mutantes tratados con PBS (Figura 5F). Además, el medio acondicionado de células BV2 tratadas con PBS o LPS (abreviadamente denominados CM y LCM) se utilizó para estimular los astrocitos primarios de ratones WT y miR-29b2/c KO. Aunque la expresión de la proteína p-AMPK no cambió después de 12 h de tratamiento con LCM, fue significativamente mayor en los astrocitos miR-29b2/c KO en comparación con los astrocitos WT. Observamos que las proteínas pAMPK aumentaron en ambos genotipos de astrocitos después de 24 tratamientos de LCM. La estimulación de LCM aumentó notablemente la expresión de proteínas COX- 2 [F(2, 18)=10.29, P=0.0010], sin embargo, el nivel de proteína COX-2 en miR-29b2/c los astrocitos KO disminuyeron en comparación con los astrocitos WT (Figura 5G). La concentración de nitrito en los astrocitos miR-29b2/c KO tratados con LCM también fue significativamente menor en comparación con los astrocitos WT tratados con LCM [F(2, 30)=17, P<0.0001] (Figure 5H). Further, the expression of senescence marker genes was evaluated. 12 h-treatment of MPP+ increased p53 transcript levels in both WT and miR- 29b2/c KO astrocytes. p19 and Pai1 transcripts were elevated only in WT astrocytes, and Pai1 expression levels in miR-29b2/c KO astrocytes were decreased compared to WT astrocytes after the treatment. Moreover, Bcl-2, Bax protein levels, and the ratio of Bcl-2 to Bax did not change in WT and miR-29b2/c KO astrocytes.

3. Los efectos de la deficiencia de miR-29b2/c en microglía cultivada primaria

Para medir la respuesta de la microglía deficiente en miR-29b2/c a los estímulos inflamatorios, se utilizó LPS. El nivel de expresión de BDNF fue más bajo en la microglía miR-29b2/c KO al inicio del estudio. Cuatro y ocho horas después del tratamiento con LPS, la cantidad de transcritos de IL-1, IL-6, TNF y COX-2 aumentó, mientras que la expresión de IGF-1 disminuyó en WT y células microgliales miR-29b2/c KO, la expresión de BDNF solo disminuyó en la microglia WT [F(2, 27)=41.5, P<0.0001]. IL-10 transcript increased in WT and miR-29b2/c KO microglia [F(2, 27) = 3.753, P=0.0365], and TGF-β1 transcript decreased in WT microglia at eight hours after the LPS challenge. BDNF and TGF-β1 transcripts were not changed in miR-29b2/c KO microglia. In addition, IL-6 transcripts were significantly reduced in miR-29b2/c KO microglia after the challenge compared to WT controls, IGF-1 and IL-10 transcripts were markedly higher in miR-29b2/c KO microglia after four and eight hours of intoxication, respectively (Figure 6A–6C). At baseline, the p-AMPK protein level and pAMPK to AMPK ratio were dramatically elevated in miR-29b2/c KO microglia when compared with WT microglia. 24 h after the treatment of LPS, p-AMPK level [F(1, 17) = 5.066, P=0.0379] and the ratio [F(1, 17) = 5.537, P=0.0309] were elevated only in WT microglia (Figure 6D). At one hour after the treatment, the phosphorylated-NF-κB p65 (p-p65) proteins and pp65 to p65 ratio, but not p65 proteins, increased in wildtype and miR-29b2/c KO microglial cells, yet the ratio decreased modestly in miR-29b2/c KO microglial cells when compared with WT microglia (p=0.071) (Figure 6E). The expression of COX-2 was enhanced in the two genotypes of microglial cells; whereas, the level of COX-2 in mutant microglia decreased when compared with WT controls after 24 h-treatment of LPS [F(1, 17) = 5.33, P=0.0338] (Figure 6D). Nitrite product was induced by the treatment of LPS in both genotypes of microglia, however, it was dramatically lower in miR- 29b2/c KO microglia at baseline and after the treatment of LPS [F(1, 20) = 14.03, P=0.0013] (Figure 6F).

Discusión

La expresión de los miembros de la familia miR-29 aumenta en múltiples tejidos cuando las personas envejecen [30–32]. Los trabajos de nuestro laboratorio y otros han demostrado un vínculo entre miR-29s y la enfermedad de Parkinson [33]. En el presente estudio, se estudiaron las funciones de miR- 29b2/c en el envejecimiento y la enfermedad de Parkinson. Los miR-29 ejercen efectos pro y antienvejecimiento según los tejidos, las especies y las etapas de desarrollo. Descubrimos que los ratones miR-29b2/c KO de 3-meses de edad tenían un esqueleto y tejido adiposo normales, y los ratones miR- 29b2/c KO de 4-meses de edad mostraron un peso corporal más ligero en comparación con su contraparte WT, lo que está de acuerdo con otros estudios [11, 34]. Se detectaron debilidad muscular y marcha inestable en ratones miR- 29b2/c KO de 3-meses de edad. Los ratones miR-29b2/c KO de trece meses de edad mostraron un engrosamiento de la dermis. Sin embargo, tenían la estructura fina normal del hueso del fémur. La reducción del peso corporal existió en ratones miR-29b2/c KO de 16-meses de edad. A esta edad, los ratones miR-29b2/c KO tenían menos grasa abdominal y grasa parda y mostraban cifosis aparente. Los miR-29 están involucrados en la detención del ciclo celular mediada por p53- [35, 36] y la senescencia celular impulsada por p16/Rb [37]. Sin embargo, la senescencia celular no fue evidente en el cerebro del ratón miR-29b2/c KO. Por lo tanto, aunque miR-29b2/c contribuye a la regulación del envejecimiento, sus funciones en los tejidos periféricos y el cerebro pueden ser diferentes.

Los niveles séricos de miR-29s estaban regulados a la baja en pacientes con EP en comparación con los controles sanos [24]. Aquí, encontramos que la expresión de miR-29s en suero de ratón PD fluctuó de 3 a 120 días después de la administración de MPTP. miR-29s son abundantes en el cerebro [6, 30]. A través del perfil GEO, se encuentra que la expresión de miR-29c está regulada al alza en la sustancia negra de los pacientes con EP (p=0.0059, mediante la prueba de Mann-Whitney), además, miR{{12 La expresión de }}c en la circunvolución frontal superior no difirió (p=0.47, mediante la prueba T de Student), en comparación con los sujetos de control (Figura 10 complementaria). Aquí, los ratones miR-29b2/c KO fueron desafiados con MPTP para inducir lesiones similares a la EP. Los ratones mutantes mostraron lesiones menos graves en el sistema dopaminérgico nigroestriatal y una activación glial más leve y, posteriormente, resistencia conductual hasta cierto punto. Por lo tanto, miR-29b2/c tiene un papel perjudicial en la patología de la EP. Observamos que en el modelo de PD de ratón inducido por MPTP, los niveles estriatales de las transcripciones de p21, p53 y Pai1 no cambiaron, lo que sugiere que la senescencia celular podría no ocurrir. El envejecimiento se considera un factor de alto riesgo para el desarrollo de la EP [38]; sin embargo, los cambios cerebrales relacionados con el envejecimiento, especialmente el sistema dopaminérgico, podrían ser un factor más relevante.

Se cultivó glía primaria de ratones WT y miR-29b2/c KO para investigar los mecanismos subyacentes. El tratamiento con MPP más aumentó la expresión de GDNF y disminuyó la expresión de IL-1 en la glía mixta deficiente en miR-29b2/c. MPP plus también aumentó la expresión de genes proinflamatorios en astrocitos WT pero no en astrocitos deficientes en miR- 29b2/c. Asimismo, los astrocitos mutantes produjeron menos NO en comparación con los astrocitos WT después de ser expuestos al medio acondicionado de células BV2 tratadas con LPS. En el cultivo de microglía primaria, en comparación con los controles WT tratados con LPS, las transcripciones de la citoquina antiinflamatoria IL-10 y el factor neurotrófico IGF-1 fueron notablemente más altas, y las transcripciones de la citoquina proinflamatoria IL{ {15}} disminuyó en la microglía miR-29b2/c KO tratada con LPS. Los niveles de NO se redujeron en miR-29b2/c KO microglia al inicio del estudio y después de la intoxicación con LPS. Los estudios han demostrado que los miR-29s y muchos genes diana predichos están involucrados en los procesos metabólicos [34, 39–41]. Como regulador esencial, se ha demostrado que la AMPK protege en la EP cuando se activa [42]. La activación de AMPK estimula la sirtuina 1 e inhibe indirectamente la activación de NF-κB y los genes diana inflamatorios aguas abajo [43]. Observamos que el nivel de proteína AMPK fosforilada y la proporción de p-AMPK a AMPK aumentaron en los astrocitos miR- 29b2/c KO tratados con LCM y MPP plus, respectivamente. El nivel de proteína COX-2 disminuyó en los astrocitos mutantes tratados con LCM en comparación con los astrocitos WT. Al inicio del estudio, la actividad de AMPK se elevó en miR-29b2/c KO microglia. La cantidad de proteína COX-2 se redujo significativamente en la microglía miR-29b2/c KO en comparación con los controles WT después del tratamiento con LPS. Bajo el tratamiento con LPS, la relación p-p65 y p65 se reguló ligeramente a la baja en la microglía mutante, lo que implica una vía de señalización de NF-κB mitigada. Nuestros resultados indican que la actividad mejorada de AMPK y la respuesta inflamatoria reducida en la glía protegen la vía nigroestriatal en ratones miR-29b2/c KO (Figura 6G). En conclusión, miR-29b2/c juega un papel importante en el envejecimiento y el daño en el sistema dopaminérgico nigroestriatal.

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Xiaochen Bai 1,2, Xiaoshuang Zhang 1, Rong Fang 1, Jinghui Wang 1, Yuanyuan Ma 1, Zhaolin Liu 1, Hongtian Dong 1, Qing Li 1, Jingyu Ge 1, Mei Yu 1, Jian Fei 3,4, Ruilin Sun 4, Colmillo Huang 1

1. Departamento de Neurociencia Traslacional, Jing'an District Center Hospital of Shanghai, State Key Laboratory of Medical Neurobiology and MOE Frontiers Center for Brain Science, Institutes of Brain Science, Fudan University, Shanghai 200032, China

2. Departamento de Medicina de Rehabilitación, Sexto Hospital Popular afiliado a la Universidad Jiao Tong de Shanghái, Shanghái 200233, China

3. Escuela de Ciencias de la Vida y Tecnología, Universidad de Tongji, Shanghái 200092, China

4. Centro de Investigación de Ingeniería de Shanghái para Organismos Modelo, Centro de Organismos Modelo de Shanghái, INC, Shanghái 201203, China