El echinacósido mejora la lesión hepática diabética
Mar 28, 2022
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Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *
RESUMEN
Objetivos:El echinacósido (ECH) es un compuesto natural extraído del tallo de la planta Cistanche deserticola, tiene importantes propiedades biológicas, que incluyen propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, neuroprotectoras, antitumorales, hepatoprotectoras e inmunomoduladoras. En este estudio, nuestro objetivo fue explorar los efectos y mecanismos protectores de ECH sobre la lesión hepática diabética en ratones DB/DB.
Métodos principales:En general, ratones DB/DB de 6-semanas de edad (n=20) se asignaron aleatoriamente a 2 grupos: grupo modelo diabético (grupo DB/DB, administración intragástrica de solución salina normal, n=10 ) y grupo tratado con ECH (DB/DB más grupo ECH, n=10). Además, el grupo de control normal comprendía ratones db/m de 6- semanas de edad (grupo db/m, administración intragástrica de solución salina normal, n=10). ECH se administró una vez al día durante 10 semanas. El peso y la glucemia en ayunas (FBG) se midieron quincenalmente. La tinción HE y la tinción Oil O se utilizaron para evaluar los cambios patológicos del tejido hepático y la acumulación de lípidos, respectivamente. Se usaron tinción de inmunofluorescencia, Western blot y análisis RT-PCR para detectar la expresión de componentes del eje de señalización AMPK/SIRT1.
Resultados clave:Los resultados mostraron que la administración de echinacósido durante 10 semanas podría mejorar significativamente la lesión hepática y la resistencia a la insulina en ratones DB/DB (p < 0.01).="" además,="" el="" tratamiento="" con="" equinacósido="" ayudó="" a="" reducir="" los="" lípidos="" y="" la="" glucosa="" en="" sangre="" (p="">< 0,01).="" además,="" ech="" activó="" la="" señalización="" de="" ampk/sirt1,="" el="" coactivador="" gamma="" 1="" alfa="" del="" receptor="" activado="" por="" el="" proliferador="" de="" peroxisomas="" (pgc-1),="" el="" receptor="" activado="" por="" el="" proliferador="" (ppar),="" la="" carnitina="" palmitoiltransferasa-1a="" (cpt1a)="" en="" ratones="" db/db="" (p=""><>
Significado:El efecto de ECH puede ser provocado por la activación de la vía hepática AMPK/SIRT1 y sus factores posteriores para mejorar la adiposidad, la resistencia a la insulina y la dislipidemia.
cistanche redditmejoraadiposidad, resistencia a la insulina y dislipidemia.
1. Introducción
La diabetes mellitus tipo 2 (DM2) es una enfermedad metabólica crónica y una grave amenaza para la salud física y mental humana. Puede causar daño a múltiples órganos, incluyendo daño hepático. La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) es la lesión hepática más común [1,2]. La acumulación excesiva de lípidos en los hepatocitos interrumpe el proceso metabólico y causa inflamación, fibrosis hepática e incluso cáncer de hígado [3,4]. La patogenia de la enfermedad sigue sin estar clara. Aunque existe una alta prevalencia de complicaciones hepáticas clínicamente significativas en pacientes con DM2, a menudo se pasan por alto en el entorno del tratamiento. Los agentes utilizados actualmente para tratar la diabetes incluyen metformina, sulfonilureas, tiazolidinedionas (TZD) e inhibidores de la dipeptidil peptidasa-4 (DPP-4). Sin embargo, la mayoría de estos agentes causan disfunción hepática y no se recomiendan en pacientes con insuficiencia hepática, lo que implica la necesidad de investigar agentes con eficacia terapéutica y un bajo perfil de eventos adversos. Los estudios han demostrado las propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antitumorales, hepatoprotectoras e inmunomoduladoras del equinacósido (ECH), el componente principal de Cistanche deserticola [5]. Además, la vía de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) ha sido reconocida como el principal interruptor del metabolismo energético celular asociado con la regulación de lípidos en el hígado y un objetivo terapéutico para NAFLD. AMPK mejora la actividad de la proteína reguladora de silenciamiento de mamíferos-1(SIRT1) al aumentar los niveles celulares de NAD plus, lo que resulta en la desacetilación y modulación de la actividad de los objetivos de SIRT1 aguas abajo que incluyen el receptor-coactivador 1 activado por el proliferador de peroxisomas (PGC{ {20}} ) [6]. Debido a muchas funciones positivas tanto en la enfermedad del hígado graso alcohólico (AFLD) como en la NAFLD, SIRT1 ha sido ampliamente estudiado entre la familia SIRT. La proteína es un regulador clave del metabolismo de los lípidos y la glucosa y puede mejorar la sensibilidad a la insulina del hígado y otros tejidos y reducir la esteatosis hepática [7]. PPAR- pertenece a los PPAR, una subfamilia de receptores hormonales nucleares, PPAR- mejora el metabolismo de los lípidos a través de la beta-oxidación de ácidos grasos mitocondrial y peroxidasa, mediada a través de CPT1A. Los ratones Db/DB son ratones diabéticos tipo 2 obesos espontáneos. A medida que estos ratones envejecen, puede haber una manifestación gradual de condiciones diabéticas como bulimia, obesidad, hiperglucemia evidente, hiperlipidemia y resistencia a la insulina [8]. La patogenia es similar a la observada en pacientes con DM2. Este estudio planteó la hipótesis del efecto terapéutico de ECH sobre la lesión hepática inducida por T2DM y la mediación de este efecto mediante la activación de la vía AMPK/SIRT1 y sus efectores aguas abajo. Los ratones DB/DB se usaron como modelo de daño hepático T2DM y se administró ECH por vía intragástrica.
2. Materiales y métodos
2.1. animales de experimentación
El hígado de los ratones DB/DB diabéticos tipo 2 se consideró como modelo para la lesión hepática espontánea de DMT2, los ratones db/m se usaron como grupo de control y los ratones db/db diabéticos se usaron como grupo modelo y el grupo tratado con ECH (macho , 6 semanas de edad, grado SPF) con 10 ratones en cada grupo. Todos los ratones se compraron en la Universidad de Nanjing (Instituto de Biomedicina de Nanjing, China; Número de certificado de producción animal: SCKK (Su) 2015–0001). Los animales (n=5 por jaula) fueron alojados en la Sala de Animales del Laboratorio Central del Hospital Renmin de la Universidad de Wuhan (SPF) en condiciones estándar de temperatura (22 ◦C ± 2 ◦C), humedad relativa (60 por ciento) , y ciclo luz/oscuridad (12 h/12 h), con acceso ad libitum a agua de bebida y alimento durante el período experimental de 10 semanas. Los experimentos se realizaron de acuerdo con las pautas de ética animal experimental recomendadas por el Hospital Renmin de la Universidad de Wuhan.
2.2. Principales instrumentos y reactivos
medidor de glucosa en sangre OneTouch Ultra y tiras reactivas de glucosa en sangre (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); anticuerpo monoclonal antihumano de conejo SIRT-1 (Nº 9475; CST Company de los Estados Unidos); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934) y GAPDH (Ab37168; todos de Abcam Company); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); kit de detección de concentración de proteína BCA (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); kit de preparación de gel SDS-PAGE (Google Biotechnology Co., Ltd.); y el kit de transcripción inversa RT-PCR (Takara, Japón) se utilizaron para los experimentos.
2.3. Agrupación y administración de animales.
Antes de iniciar el experimento, los ratones de {{0}}semanas de edad se pusieron en cuarentena durante 1 semana y se alimentaron de forma adaptativa durante 1 semana. Los ratones Db/DB se numeraron al azar y se asignaron al grupo modelo diabético (grupo db/db, n=10) o al grupo tratado con equinacósido (grupo db/db más ECH, n =10), y Se asignaron 10 ratones db/m al grupo de control normal (grupo DB/m, n=10). A las 8 semanas de edad, se administró intragástricamente solución salina normal (0,05 ml/10 g) a los ratones del grupo de control normal y modelo diabético, y a los ratones del grupo tratado con ECH se les administró intragástricamente 300 mg/kg/día de ECH. Durante este período, a los ratones se les permitió acceso ad libitum a alimentos y agua durante 10 semanas.
2.4. Estado general y glucemia en ayunas
Durante el experimento se observaron condiciones de salud, ingesta de alimento y agua potable y brillo del pelaje. A partir de la primera semana del experimento, se midió el peso corporal de los ratones cada 2 semanas. Las muestras de sangre para analizar la glucosa en sangre en ayunas se obtuvieron de la vena de la cola. Después de 10-semanas de tratamiento con ECH, se realizó la prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT). Después del ayuno nocturno, los ratones recibieron glucosa (2 g/kg de peso corporal) y las concentraciones de glucosa en sangre se evaluaron antes (0 min.) y 15, 30, 60 y 120 min después. administración de glucosa. El área bajo la curva (AUC) se determinó utilizando GraphPad Prism 7.0.
2.5. Coleccion de muestra
Después de 10 semanas de intervención, se suspendió la comida pero no el agua durante 12 h, los animales fueron anestesiados para obtener muestras de sangre del plexo retroorbitario. El suero de la sangre recolectada se separó rápidamente y se almacenó a −80 ◦C para determinar el índice bioquímico. Después de obtener muestras de sangre, los ratones fueron sacrificados y perfundidos con solución salina normal. Se diseccionó el hígado y se pesó. El índice hepático (LI) se calculó mediante la siguiente fórmula: LI=[peso del hígado (g)/peso corporal (g)] × 100 %. Parte del tejido hepático fresco se retuvo para el análisis patológico, y el resto del tejido hepático se colocó en nitrógeno líquido durante 1 h y luego se almacenó a -80 ◦C para la detección de proteínas de seguimiento y la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real ( PCR).
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2.6. Examen histopatológico del hígado.
El tejido hepático fresco se separó rápidamente y una sección se fijó en paraformaldehído al 4 por ciento durante 24 h, seguido de deshidratación e inclusión en parafina. Las secciones se desparafinaron con xileno y se rehidrataron a través de un gradiente de etanol en agua. El núcleo y el citoplasma se tiñeron con hematoxilina y eosina (HE) y se sellaron con goma neutra después de la deshidratación. Otra parte del tejido usó cortes incrustados de compuesto de temperatura de corte óptimo (OTC) para la tinción con Oil Red-O.
2.7. Detección de índices bioquímicos de suero y tejido hepático
Las muestras de suero se enviaron al Departamento de Laboratorio del Hospital Renmin de la Universidad de Wuhan para un análisis bioquímico automatizado. Los índices de lípidos en sangre incluyeron triglicéridos (TG), colesterol total (CT), colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C), colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C). Los índices de función hepática incluyeron transaminasa glutámico pirúvica (ALT) y transaminasa glutámico oxaloacética (AST). Los niveles de insulina en ayunas (FINS) se determinaron utilizando el kit ELISA (Meimian Biological Inc. China). Se construyó una curva estándar basada en la concentración y la densidad óptica (OD) de la muestra estándar; luego se calculó la concentración de la muestra a partir de la curva estándar. Finalmente, el índice de sensibilidad a la insulina (ISI) y el índice de resistencia a la insulina (HOMA-IR) se calcularon de la siguiente manera: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × ALETAS/22.5.
2.8. Las expresiones de AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1 , PPAR- y CPT1A en el tejido hepático se detectaron mediante western blot
El tejido hepático congelado se cortó en secciones. Para la extracción de proteína total, se añadió 1 mL de lisado RIPA a una sección de 50 g y se sometió a centrifugación a 13,000 rpm a 4 ◦C durante 5 min, seguido de una recolección del sobrenadante. La concentración de proteína se determinó usando el kit de determinación de concentración de proteína BCA. Se tomaron muestras de aproximadamente 40 ug de proteína de cada grupo y se transfirieron a la membrana de fluoruro de polivinilideno (PVDF). Las membranas se marcaron con los anticuerpos secundarios indicados a temperatura ambiente durante 1 hy se revelaron. Se analizaron los valores grises de cada banda de proteína y se utilizó GAPDH como referencia interna para el análisis semicuantitativo.
2.9. Las expresiones de p-AMPK y SIRT1 en el tejido hepático se detectaron mediante tinción de inmunofluorescencia.
Los tejidos hepáticos se fijaron en paraformaldehído al 4 %, se incluyeron en parafina y luego se seccionaron en rodajas de hígado de 10- μm de grosor. Agregue 3 por ciento de BSA durante 30 min. Incube los portaobjetos con el anticuerpo primario durante la noche a 4 ◦C. Cubrir el tejido objetivo con el anticuerpo secundario, incubar a temperatura ambiente durante 50 min en condiciones de oscuridad. Luego incubar con solución de DAPI a temperatura ambiente por 10 min, en lugar oscuro. Agregue reactivo de extinción de fluorescencia espontáneo para incubar durante 5 min. Microscopía de detección y captura de imágenes por Microscopía de Fluorescencia.
2.10. Las expresiones de ARNm de SIRT-1, PGC-1 , PPAR- y CPT1A en el tejido hepático se detectaron mediante RT-PCR
Se utilizó aproximadamente 100 mg del tejido hepático almacenado a −80 ◦C de cada grupo. El ARN total se extrajo con el kit Trizol; se usó el método de absorción ultravioleta (UV) para determinar la calidad del ARN, y este ARN se transcribió luego de forma inversa en ADNc. La qPCR verde SYBR se ejecutó en el sistema de detección de PCR en tiempo real Bio-Rad CFX96 Touch (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU.). Las secuencias de cebadores de SIRT-1, PGC-1, PPAR- y CPT1A fueron diseñadas por el software Primer Premier5.0 y sintetizadas por Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., con el gen ama de llaves GAPDH sirviendo como referencia interna. Las condiciones de amplificación fueron las siguientes: predesnaturalización a 95 ◦C, desnaturalización a 95 ◦C y recocido a 60 ◦C (30 s), con un total de 40 ciclos. Al final de la reacción, la especificidad de la amplificación por PCR se determinó mediante el análisis de la curva de disolución, se leyó el valor de Ct y se calculó la expresión relativa del ARNm del gen diana mediante el método 2-ΔΔCt. Las secuencias de los cebadores se muestran en la Tabla 1.
2.11. métodos de estadística
Se utilizó el software estadístico SPSS22.0 para el procesamiento de datos y análisis estadístico y GraphPad Prism7.0 para el dibujo. Los datos normalmente distribuidos se presentan como media ± desviación estándar (varianza x ± s). La comparación por pares entre los grupos se realizó mediante un análisis de varianza de un solo factor. La importancia de las diferencias entre los grupos se identificó con la prueba de diferencias mínimas significativas (LSD) (homogeneidad de las varianzas) o la prueba t de Dunnett (no homogénea) para comparaciones múltiples. Si los datos no se ajustaban a la distribución normal, se utilizó la mediana y la diferencia de cuartiles, así como la prueba no paramétrica (prueba de Kruskal-Wallis). valor AP de<0.05 was="" considered="" statistically="">
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3. Resultados
3.1. ECH mejora el estado de salud general y LI de ratones db/db
A lo largo del experimento, los ratones del grupo db/m estaban sanos y activos y mostraban un pelaje brillante. Los ratones del grupo db/db demostraron una ingesta excesiva de agua y alimento, obesidad, letargo y agacharse, y cabello áspero y oscuro. En comparación con los ratones del grupo db/db, los ratones del grupo db/db más ECH demostraron mejores condiciones en todos los estudios. Además, su peso corporal e índice hepático fue menor que el de los ratones del grupo modelo diabético (P < 0.05)="" (tabla="">
Tabla 1 Cebadores de PCR cuantitativa de fluorescencia de RT.
Cuadro 2 Peso corporal, peso húmedo del hígado e índice hepático en los ratones de cada grupo.
3.2. ECH reduce la glucosa en sangre en ayunas y la resistencia a la insulina y aumenta la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en ratones db/db
A medida que avanzaba el experimento, en comparación con el grupo db/m, la glucosa en sangre en ayunas en el grupo db/db aumentó significativamente (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">
3.3. ECH mejora el trastorno estructural del hígado y alivia cambios patológicos como la acumulación de lípidos en ratones db/db
La tinción con HE reveló que el tamaño y la morfología de los hepatocitos en el grupo db/m eran normales, y las estructuras de los lóbulos hepáticos y los sinusoides estaban claras. Hubo una extensa degeneración de hepatocitos en el grupo db/db, aumento del volumen de hepatocitos, tamaño nuclear variable, necrosis celular focal e infiltración de células inflamatorias en el área portal. En el grupo db/db más ECH, hubo una disminución significativa de las gotitas de lípidos y de las células inflamatorias, y se alivió la lesión de células necróticas (Fig. 2A). El análisis microscópico del tejido hepático teñido con aceite rojo O reveló una disposición ordenada de las células, sin gotitas de lípidos ni cambios patológicos, en el grupo db/m. En el grupo db/db, las células tenían una disposición desordenada, y en el citoplasma se encontraban presentes un gran número de partículas grasas de diferentes tamaños. En comparación con el grupo db/db, el número de gotitas de lípidos en el grupo db/db más ECH fue significativamente menor, lo que sugiere el posible efecto protector de ECH en el hígado (Fig. 2B, C).
Fig. 1. ECH mejoró la tolerancia a la glucosa y atenuó la resistencia a la insulina de ratones db/db.
3.4. ECH mejora el metabolismo de los lípidos y la función hepática en ratones db/db
En comparación con el grupo db/m, los niveles de lípidos en sangre de TC, TG y LDL aumentaron significativamente, y HDL disminuyó significativamente en el grupo db/db (P < {{0}}.{{4}="" }1).="" sin="" embargo,="" los="" niveles="" de="" tc,="" tg="" y="" ldl="" disminuyeron,="" y="" el="" nivel="" de="" hdl="" aumentó="" en="" el="" grupo="" db/db="" más="" ech="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (fig.="" 3a).="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" db/m,="" los="" niveles="" de="" alt="" y="" ast="" aumentaron="" significativamente="" en="" el="" grupo="" db/db="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" los="" niveles="" de="" ast="" y="" alt="" fueron="" significativamente="" más="" bajos="" en="" el="" grupo="" db/db="" más="" ech="" que="" en="" el="" grupo="" db/db="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01)="" (fig.="" 3b,="">
Fig. 2. Trastorno estructural del tejido hepático atenuado por ECH y acumulación de lípidos en ratones con NAFLD.
3.5. El efecto de ECH en la activación de la vía AMPK/SIRT1 en diferentes grupos de ratones
De acuerdo con los resultados de Western blot, en comparación con el grupo db/m, los niveles de proteína p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR- y CPT1A en el tejido hepático fueron significativamente más bajos en el grupo db/db ( P < 0.01).="" sin="" embargo,="" los="" niveles="" de="" proteína="" fueron="" significativamente="" más="" altos="" en="" el="" grupo="" db/db="" más="" ech="" que="" en="" el="" grupo="" db/db="" (p="">< 0,01)="" (fig.="" 4a,="" b).="" además,="" la="" tinción="" de="" inmunofluorescencia="" mostró="" que="" la="" expresión="" de="" p-ampk="" y="" sirt1="" se="" encontró="" obviamente="" en="" el="" tejido="" hepático="" de="" ratones="" tratados="" con="" ech="" que="" en="" el="" grupo="" db/db="" (fig.="">
3.6. Efecto del equinacósido sobre la expresión del ARNm de la vía SIRT1 en el hígado de diferentes grupos de ratones
Según los resultados de la RT-PCR, los niveles de SIRT1, PGC-1, PPAR- y CPT1A disminuyeron significativamente en el grupo db/db en comparación con el grupo db/m. Sin embargo, estos niveles aumentaron significativamente en el grupo db/db más ECH en comparación con el grupo db/db (Fig. 5).
Fig. 3. Los índices relacionados con el suero en los ratones de cada grupo.
4. Discusión
La diabetes es una preocupación médica importante en el mundo, y se espera que la cantidad de personas con diabetes aumente a alrededor de 592 millones para 2035 [9]. La tasa de prevalencia de diabetes, predominantemente DMT2, en China, muestra una tendencia significativamente creciente [10,11]. Existe una relación compleja entre la DM2 y la enfermedad hepática, y la NAFLD, caracterizada por un depósito excesivo de grasa en el hígado, es la lesión hepática más común causada por la DM2 y la enfermedad hepática crónica más frecuente en el mundo [12,13]. La investigación de pruebas genéticas clínicas sugiere que el gen asociado con T2DM está asociado con un mayor IMC, hipercolesterolemia y HDL-C disminuido, lo que confiere un mayor riesgo de NAFLD [14]. NAFLD está estrechamente relacionado con la resistencia a la insulina y la dislipidemia y, por lo tanto, es muy frecuente en pacientes con DM2 y/u obesidad. Aunque varios factores metabólicos parecen estar relacionados con el desarrollo de NAFLD, su patogenia sigue siendo compleja y poco clara [15]. Cistanche deserticola es una planta parásita perenne que crece en las raíces de las plantas fijadoras de arena. Según la Farmacopea china, Cistanche deserticola se usa como medicina tradicional para tratar la enfermedad renal y la infertilidad [16,17]. En los últimos años, los estudios han confirmado que Cistanche deserticola puede inhibir significativamente el aumento de los niveles de glucosa en sangre en ayunas y posprandiales en ratones diabéticos, mejorar la resistencia a la insulina y la dislipidemia, y ayudar a perder peso [18]. Como componente principal de Cistanche deserticola, se espera que ECH contribuya aún más a mejorar la lesión hepática asociada con DM. Nuestros resultados experimentales revelaron que la obesidad y la diabetes podrían causar daño hepático en ratones, caracterizado por aumentos significativos en los niveles séricos de ALT y AST y cambios histopatológicos típicos. ECH redujo significativamente el LI y la glucosa en sangre, disminuyó los niveles de TC, TG y LDL, aumentó los niveles de HDL y mejoró la sensibilidad a la insulina. El examen histopatológico reveló una reducción de la degeneración de esteatosis de hepatocitos y de la infiltración de células inflamatorias en ratones tratados con ECH, lo que confirma que el agente puede mejorar la lesión hepática en ratones obesos y diabéticos.
AMPK es una proteína quinasa altamente conservada ampliamente distribuida en los organismos y se denomina receptor del metabolismo energético. Desempeña un papel en el alivio del estrés oxidativo, la inflamación, la proliferación y la apoptosis [19]. La activación de la enzima por activadores indirectos atrae la atención científica para tratar la diabetes, la obesidad, el cáncer y otros trastornos metabólicos relacionados [20,21]. Puede regular el metabolismo de los lípidos a través de varios enfoques, como inhibir la síntesis de ácidos grasos y triglicéridos, inhibir la síntesis de colesterol y promover la oxidación y descomposición de ácidos grasos [22]. En el hígado, la AMPK regula el metabolismo de los lípidos por fosforilación.
Cuando aumenta la proporción intracelular de AMP a ATP, se activa AMPK, lo que aumenta p-AMPK/AMPK y aumenta la expresión de SIRT1 al aumentar los niveles celulares de NAD plus [23,24]. Recientemente se ha demostrado que SIRT1, una desacetilasa dependiente de NAD, está relacionada con la fisiopatología de NAFLD [25]. La enzima participa en varios procesos fisiológicos celulares, como la homeostasis de los lípidos y la glucosa y la sensibilidad a la insulina, y es un regulador clave del metabolismo [26]. Los pacientes obesos, especialmente aquellos con resistencia a la insulina, diabetes y NAFLD, tienen niveles más bajos de SIRT1 [27,28]. Precio et al. examinaron el papel de SIRT1 en la prevención de la esteatosis hepática y encontraron que la expresión de SIRT1 está disminuida en pacientes con NAFLD [29]. Otros estudios han demostrado que la inactivación específica de hepatocitos de SIRT1 puede reducir la oxidación de ácidos grasos e inducir esteatosis e inflamación en el hígado, mientras que la sobreexpresión de SIRT1 puede mejorar el metabolismo de los lípidos a través de la vía PGC-1 [30]. SIRT1 regula la actividad de PGC-1 y ambos son cruciales para mantener la homeostasis energética celular. Por lo tanto, SIRT1 y los factores posteriores PGC-1 pueden ser el objetivo clave de la lesión hepática. El coactivador de PGC es una proteína que puede unirse a factores de transcripción o receptores nucleares para aumentar la actividad transcripcional [31]. La mayoría de los factores de transcripción necesitan coactivadores, especialmente PPAR-, principalmente en tejidos oxidados como el hígado, el miocardio y el músculo esquelético. Puede activar la transcripción de genes que promueven el transporte y la oxidación de ácidos grasos, la producción de cetonas y la gluconeogénesis [32,33]. CPT1A es una enzima limitante de la velocidad clave en la oxidación de ácidos grasos. Su expresión está regulada por mecanismos transcripcionales complejos, que involucran varios factores de transcripción y coactivadores, incluidos SIRT1, PGC-1 y PPAR [34]. En este estudio, encontramos que bajo la alta concentración de glucosa en sangre en el grupo db/db, la acumulación de lípidos en los hepatocitos aumentó con la regulación a la baja de los factores aguas abajo de la expresión de la vía de señalización AMPK/SIRT1; en el grupo tratado con ECH, las expresiones de p AMPK/AMPK, SIRT1 y PGC-1 aumentaron significativamente, y las expresiones de los factores posteriores PPAR y CPT1A aumentaron significativamente, lo que indica que el eje de señal AMPK/SIRT1 y sus factores posteriores juegan un papel beneficioso en el tratamiento de la lesión hepática diabética (Fig. 6). Sin embargo, los datos proporcionados aquí se basaron en experimentos in vivo; por lo tanto, se necesitan estudios in vitro adicionales para confirmar el impacto de ECH en las vías de señalización de AMPK/SIRT1 y las proteínas efectoras.
En general, ECH puede regular la glucosa en sangre y el metabolismo de los lípidos al regular la expresión de AMPK/SIRT1 y sus factores posteriores, mejorando así la lesión hepática diabética.
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