Efectos de un nutracéutico a base de frutas y verduras sobre biomarcadores de inflamación y estado oxidativo en el plasma de una población sana: un ensayo clínico aleatorizado, doble ciego y controlado con placebo

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Resumen: Existe evidencia científica del efecto positivo depolifenolesde los alimentos vegetales eninflamación yoxidativoestado. El objetivo del presente estudio fue investigar si el tratamiento con un nutracéutico rico en polifenoles reduce la concentración plasmática de ciertosoxidativoyinflamatoriobiomarcadores en una población sana. Ciento ocho sujetos fueron seleccionados y estratificados por sexo en el grupo de intervención (n {0}}) y el grupo de placebo (n=55). Noventa y dos sujetos completaron el estudio después de dos períodos de tratamiento de 16-semanas separados por un período de lavado de cuatro semanas. Los resultados revelaron diferencias estadísticamente significativas en los sujetos tratados con el extracto polifenólico en comparación con el placebo: disminución de homocisteína, lipoproteína de baja densidad oxidada (OxLDL), TNF-, sTNFR1 y proteína C reactiva (CRP). La disminución más significativa se observó en OxLDL (de 78,98 ± 24,48 a 69,52 ± 15,64; p < 0.05)="" y="" pcr="" (de="" 1,50="" ±="" 0.="" 33="" a="" 1,39="" ±="" 0,37;="" p="">< 0,05),="" mostrando="" ambos="" diferencias="" significativas="" frente="" al="" placebo="" (p="">< 0,001).="" además,="" las="" catecolaminas="" aumentaron="" tras="" la="" administración="" del="" producto="" investigado,="" especialmente="" en="" el="" caso="" de="" la="" dopamina="" (de="" 15,43="" ±="" 2,66="" a="" 19,61="" ±="" 5,73;="" p="">< 0,05).="" por="" tanto,="" el="" consumo="" de="" un="" nutracéutico="" a="" base="" de="" frutas="" y="" verduras="" con="" alto="" contenido="" en="" polifenoles="" parece="" mejorar="" los="" parámetros="" relacionados="" con="" los="" beneficios="" para="" la="" salud="">oxidativoyinflamatoriobiomarcadores), incluyendo cambios notables en la expresión de catecolaminas.

Palabras clave: polifenol; biomarcadores; estrés oxidativo; Fruta; verdura; nutracéutico

1. Introducción

La literatura científica ha documentado el papel de la dieta en la prevención de enfermedades no transmisibles como la obesidad, las enfermedades cardiovasculares, el cáncer y todas las causas de muerte, especialmente a través del consumo de frutas y verduras por su alto contenido en compuestos bioactivos, principalmente polifenoles [1 ,2]. Existe una relación inversa entre la dieta mediterránea, caracterizada por un alto consumo de productos ricos en polifenoles, a través del consumo de alimentos y bebidas ricos en polifenoles como frutas, verduras, cacao, té y café, y el riesgo de sufrir cualquier causa. mortalidad [3,4]. A pesar de que se ha demostrado que el consumo de 800 g/día de frutas y verduras reduce el riesgo de enfermedad cardiovascular y mortalidad por todas las causas, y 600 g/día reduce el riesgo de cáncer, la OMS y varias guías alimentarias aún recomienda 400 g/día [5]. Sin embargo, la mayor parte de la población ni siquiera alcanza el mínimo establecido por las autoridades sanitarias, que equivale a cinco raciones de frutas y verduras al día [6,7]. Los beneficios relacionados con un estilo de vida saludable son mundialmente conocidos, surgiendo nuevos productos que ofrecen la posibilidad de incorporar los compuestos bioactivos antes mencionados a través de suplementos/nutracéuticos, lo que ayuda a alcanzar las recomendaciones nutricionales [8].

Además, debido al progresivo envejecimiento de la población, entre otros factores como la alimentación y el estilo de vida, se produce un aumento acelerado de las enfermedades neurodegenerativas, con la EA como principal exponente, cuya prevalencia se duplica cada 20 años. Debido al impacto y costo social que genera, se han realizado muchos estudios sobre la relación entre el consumo de frutas y verduras como aporte de antioxidantes que reducenoxidativodaños a nivel cerebral [9].

Los polifenoles se producen como metabolitos secundarios de las plantas como mecanismo de defensa frente a condiciones adversas (parásitos, clima o contaminación, entre otras) [10] y forman un amplio grupo de fitoquímicos bioactivos, que incluyen ácidos fenólicos, estilbenos, lignanos, alcoholes fenólicos y flavonoides [11,12]. Proporcionan efectos potenciales en la prevención y tratamiento de varias patologías, como enfermedades cardiovasculares, cáncer, diabetes mellitus, envejecimiento y enfermedades neurodegenerativas [13] a través de varias bioactividades (actividad cardioprotectora, anti-inflamatorioantienvejecimiento, actividad antioxidante, actividad anticancerígena, efectos antimicrobianos, efectos neuroprotectores, efectos protectores de los pulmones, efectos protectores de los riñones, prevención de la osteoporosis y protección contra la radiación UV) [14]. Polifenoles atenuadosinflamaciónsuprimiendo pro-inflamatoriolos factores de transcripción interactúen con las proteínas implicadas en la expresión génica y la señalización celular [15]. La capacidad vasodilatadora, vasoprotectora, antitrombótica, antilipémica, antiesclerótica, antiinflamatoria y antiapoptótica de los polifenoles es consecuencia de sus propiedades saludables [12], considerando que los polifenoles son la principal fuente de antioxidantes (10 veces superior a la vitamina C y 100 veces mayor que la vitamina E y los carotenoides) [16]. De hecho, la quercetina, la miricetina y el kaempferol son flavanoles, los flavonoides con mayor capacidad neutralizadora de radicales libres, ya que su estructura de grupo fenólico es capaz de capturar los electrones desapareados de las ROS, generando especies reactivas neutralizadas [17]. Sin embargo, la concentración de polifenoles en plasma depende en gran medida de la estructura química y la fuente dietética, por lo que se recomienda la ingesta a largo plazo para obtener todos los beneficios relacionados [12].

El objetivo del ensayo clínico actual era evaluar si el consumo a largo plazo de una alta variedad de polifenoles a través de un nutracéutico a base de frutas y verduras es capaz de mejorar los biomarcadores relacionados coninflamaciónyoxidativoen sujetos sanos que no consumen las cantidades recomendadas de frutas y verduras. Además, la población sana no anciana ha sido objeto de pocos estudios de intervención que relacionen el consumo de frutas y verduras y los niveles de catecolaminas como variables relacionadas con la cognición [27,28,34].

2. Resultados

2.1. Población de estudio

En este estudio se incluyeron un total de 108 sujetos (en la tabla 1 se muestran sus datos demográficos), divididos en dos grupos homogéneos (N1 y N2). Finalmente, después del cruce y la pérdida durante el seguimiento, 92 sujetos (N1=48, N2=44) ​​completaron la intervención y se incluyeron en el análisis estadístico final, como se muestra en la Figura 1.

2.2. Biomarcadores plasmáticos

Las medias y desviaciones estándar de todos los biomarcadores analizados en todos los sujetos, tanto al inicio como al final de la intervención después de la ingesta de extracto polifenólico (EXT) o la ingesta de placebo (PLA), se muestran en la Tabla 2.

En cuanto al perfil lipídico, destaca la variación del colesterol unido a lipoproteínas de alta densidad (HDL) en función del tipo de producto consumido. Los valores de HDL se redujeron significativamente tras el consumo de PLA (∆4,52 mg/dL;<0.05),while increased="" significantly="" in="" the=""><0.05).additionally, the="" difference="" between="" both="" groups="" was="" also="" statistically="" significant="" at="" the="" end="" of="" the=""><0.05). finally,="" total="" cholesterol="" and="" triglycerides="" values="" did="" not="" show="" significant="" differences="" throughout="" the="" intervention="" after="" pla="" or="" ext="">
Regarding the vitamins analyzed, a slight increase in vitamin B12 was observed in both groups, as well as small non-significant variations in vitamin E values, as shown in Table2(p>0.05). Por ejemplo, la vitamina B12 varió después del tratamiento de ingesta en los grupos PLA y EXT; sin embargo, no se encontraron diferencias significativas (p=0.43 y p=0.20, respectivamente). En el caso de la vitamina E, los valores variaron en los grupos PLA(p=0.98) y EXT(p=0.91). Además, comparando entre grupos al final de la intervención, no se observaron diferencias significativas para la vitamina B12 (p=0.205) o la vitamina E (p=0.974).

En cuanto a los valores de catecolaminas, el principal hallazgo fue el aumento significativo de dopamina (∆4.18pg/mL;p<0.001)after consumption="" of="" ext="" with="" respect="" to="" pla="" (p="0.22)," showing="" significant="" differences="" between="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" intervention=""><0.001). a="" significant="" increase="" in="" norepinephrine="" values="" was=""><0.05), with="" an="" increase="" of="" ∆="" 39.21="" pg/ml="" in="" the="" ext="" group,="" not="" observed="" in="" the="" pla="" group="" (p="0.72)." there="" was="" no="" signifificant="" difference="" between="" the="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" study.="" analyzing="" the="" cortisol="" and="" adrenaline="" values,="" no="" signifificant="" differences="" were="" observed="" in="" any="" group="" during="" the="" intervention,="" nor="" at="" the="" end="" of="" the="">

La función tiroidea fue determinada por las hormonas T3, T4 y TSH. Durante la intervención se observó que los valores de la hormona T3 disminuyeron significativamente en ambos grupos (p < 0.05).="" los="" valores="" de="" la="" hormona="" t4="" variaron="" de="" diferentes="" maneras,="" aumentando="" significativamente="" en="" el="" grupo="" pla="" (∆="" 0.57="" mcg/l;="" p="">< 0.001)="" y="" disminuyendo="" no="" significativamente="" en="" el="" grupo="" ext="" (∆="" 0.47="" mcg="" ).="" por="" su="" parte,="" los="" valores="" de="" la="" hormona="" tsh="" se="" mantuvieron="" constantes="" tras="" el="" consumo="" de="" ambos="" productos.="" comparando="" la="" evolución="" de="" las="" tres="" hormonas="" entre="" grupos="" al="" final="" del="" estudio,="" no="" se="" observaron="" diferencias="" significativas="" para="" t3="" (p="0.195)," t4="" (p="0.195)," ni="" tsh="" (p="">

Para determinar la seguridad de los productos investigados se analizaron las transaminasas (GOT, GPT y GAMMA GT) con el fin de evaluar la función hepática de los sujetos, no observándose cambios significativos (p > 0.05) en ningún de las enzimas hepáticas antes mencionadas después del consumo del producto o del placebo. Por lo tanto, se puede suponer que la ingesta de los productos es segura.

3. Discusión

Como se comentó anteriormente, los datos obtenidos en el presente manuscrito reflejan algunas diferencias entre los tratamientos. Sin embargo, en condiciones basales no se observaron diferencias significativas entre grupos, lo que refuerza los cambios significativos obtenidos tras el consumo del producto.

La homocisteína plasmática se considera un indicador de riesgo cardiovascular que se puede modificar a través del ejercicio y la dieta. Además, es bien conocido su alto efecto neuroprotector [35,36]. Sin embargo, parece que los alimentos proporcionan un suministro constante de nutrientes para mantener un metabolismo óptimo de la homocisteína [37]. En nuestro estudio, la homocisteína disminuyó significativamente después del consumo del producto, como en estudios previos [22,38]. Por tanto, el consumo de polifenoles en altas dosis ayuda a reducir la homocisteína, lo que podría considerarse como capacidad cardioprotectora. A su vez, el perfil lipídico, el colesterol total y los triglicéridos no se vieron afectados a lo largo de la intervención. Sin embargo, llamó la atención que el colesterol HDL plasmático aumentó significativamente después del consumo del producto y disminuyó después del consumo del placebo. Estos cambios en las lipoproteínas plasmáticas refuerzan la idea de la capacidad cardioprotectora del producto investigado.

El principal hallazgo de la presente investigación fue la disminución significativa de OxLDL, junto con el incremento del colesterol HDL tras el consumo crónico del extracto rico en polifenoles con respecto al placebo. Estos resultados concuerdan con estudios previos que respaldan que los polifenoles muestran protección contra la aterosclerosis, lo que inhibe la proliferación del músculo liso vascular [12,39,40]. OxLDL es uno de los pocos parámetros reconocidos por la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA), en el marco de las declaraciones de función, y parece ser una variable de resultado apropiada para la sustanciación de declaraciones de propiedades saludables relacionadas con la reducción del daño oxidativo de los lípidos [ 41,42]. Además, OxLDL promueve la adhesión de los monocitos a las células endoteliales a través de un mecanismo independiente de la expresión de ICAM-1 y VCAM-1, generando células espumosas [43]. Sin embargo, esto no ocurre con las LDL [44]. Esta unión se realiza a través de determinados receptores, como el CD36. OxLDL es un ligando para PPAR y aumenta la expresión de CD36, lo que favorece la captación de OxLDL por los macrófagos [45] y, en consecuencia, contribuye al desarrollo de la aterosclerosis a través de la activación del sistema inmunitario [46]. Curiosamente, OxLDL promueve la disfunción endotelial y la aterosclerosis, lo que reduce el riesgo cardiovascular [47,48].

A su vez, el tratamiento con el producto en investigación condujo a la reducción plasmática de la PCR, una proteína de fase aguda sintetizada en el hígado, mediada por otras citoquinas, especialmente IL-1 e IL-6 [49]. Los niveles altos de PCR se correlacionan con un mayor riesgo de eventos cardiovasculares, incluso en individuos sanos [50]. Varios estudios han encontrado una asociación entre las concentraciones de PCR y eventos cardiovasculares como infarto agudo de miocardio, accidente cerebrovascular y la progresión de la enfermedad oclusiva arterial periférica [51,52]. Aunque los niveles obtenidos en PCR se encuentran dentro de los rangos normales para una persona sana, la disminución de estos niveles demuestra la validez de los polifenoles en este sentido.

Además, el marcador inmunoinflamatorio TNF- se redujo significativamente después del consumo del extracto. El TNF- es una citocina proinflamatoria que se expresa significativamente en el tejido adiposo, así como en leucocitos, células endoteliales y células musculares [53], participando en la desregulación endotelial, estimulando la migración de monocitos y macrófagos e induciendo la expresión de moléculas de adhesión [54]. De hecho, un aumento de TNF- puede ocurrir en una dieta con baja concentración de carotenos, lo que puede explicar la reducción observada en los niveles de TNF- [55]. Por tanto, tiene sentido que en nuestro estudio disminuya su valor tras el consumo del producto debido a la alta presencia de carotenos en el producto.

El extracto polifenólico utilizado para la presente investigación ha sido probado en varios estudios de intervención, con diferentes tiempos de consumo y en diferentes grupos poblacionales, dando lugar a resultados inconsistentes. En una intervención de {{0}}semanas en hombres entrenados pertenecientes a las fuerzas especiales de policía austriacas, se informaron reducciones significativas (p < 0,001)="" en="" la="" concentración="" de="" grupos="" carbonilo="" en="" proteínas="" y="" tnf-="" en="" las="" semanas="" 16="" y="" 28="" .="" una="" diferencia="" con="" nuestro="" estudio="" fue="" que="" en="" su="" estudio="" las="" muestras="" se="" obtuvieron="" en="" las="" semanas="" 4,="" 8,="" 16="" y="" 28.="" en="" particular,="" los="" valores="" aumentaron="" hasta="" la="" semana="" 8="" y="" disminuyeron="" a="" partir="" de="" la="" semana="" 16="" [56].="" en="" una="" intervención="" de="" ocho="" semanas="" en="" sujetos="" con="" sobrepeso="" y="" obesos="" mayores="" de="" 40="" años,="" se="" informaron="" reducciones="" significativas="" en="" el="" colesterol="" total,="" colesterol="" ldl="" y="" tnf-,="" que="" no="" se="" obtuvieron="" con="" el="" placebo;="" sin="" embargo,="" no="" se="" encontraron="" diferencias="" significativas="" en="" crp,="" stnfr1="" o="" oxldl="" [57].="" ambos="" resultados="" parecen="" confirmar="" que="" la="" ingesta="" de="" polifenoles="" a="" largo="" plazo,="" como="" en="" nuestro="" estudio="" (16="" semanas),="" se="" asocia="" con="" una="" mayor="" eficacia="" contra="" la="" inflamación.="" en="" otra="" intervención="" de="" ocho="" semanas="" en="" mujeres="" obesas,="" se="" observaron="" mejoras="" significativas="" en="" varios="" marcadores="" de="" oxidación="" de="" proteínas="" como="" las="" proteínas="" carbonilo,="" oxldl="" (p="0.015)" y="" la="" oxidación="" total="" de="" lípidos="" de="" todos="" los="" lípidos.="" con="" respecto="">inflamatoriomarcadores, se observaron reducciones significativas en TNF- (p=0.011). Al inicio del estudio, los valores de TNF estaban por encima del rango establecido en los grupos de placebo y extracto; al final de la intervención, permanecieron elevados en el grupo placebo y descendieron a valores normales en el grupo que consumió el producto [58]. Finalmente, la efectividad del extracto también ha sido probada en sujetos no sanos, reportando una reducción en OxLDL después de un período de consumo de tres meses por parte de fumadores empedernidos [59].

En cuanto a las catecolaminas, se observaron aumentos significativos de noradrenalina y, especialmente, de dopamina tras el consumo del producto investigado. Sin embargo, no se observaron cambios significativos para el cortisol y la adrenalina en ningún grupo. A pesar de que algunos estudios previos han informado una reducción del cortisol en plasma [60] o saliva [61] después de la ingesta de polifenoles, esto no es habitual y los valores rara vez muestran cambios significativos [62–64] con respecto a la ingesta de polifenoles. El hecho de que tanto los valores de adrenalina como de cortisol no aumentaran implica que no se desarrolló una respuesta adrenérgica ligada al consumo del producto. La noradrenalina y la dopamina también aumentan en pacientes de edad avanzada con enfermedades neurodegenerativas [65,66] y están relacionadas con la ansiedad [67] y la mejora cognitiva [68]. Además, la norepinefrina está estrechamente relacionada con la atención, así como con el estado de alerta [69,70]. Los resultados obtenidos en el presente estudio en cuanto a dopamina y noradrenalina podrían estar relacionados con las mejoras a nivel cognitivo observadas en otra publicación [71]. Podemos afirmar que el consumo de polifenoles, por tanto, aumenta los niveles de alerta y atención, lo que se correlaciona con resultados a nivel de pruebas cognitivas [71]

Una limitación del presente ensayo clínico, tal como lo describen Di Lorenzo et al. [10] en un estudio sistemático sobre la biodisponibilidad de polifenoles, es que la inclusión de sujetos sanos en los ensayos clínicos dificulta la evaluación de diferencias significativas en los biomarcadores, que se alteran en condiciones patológicas. Otras limitaciones de este estudio incluyen el hecho de que los metabolitos de los compuestos fenólicos en el producto no se determinaron más allá del contenido de vitamina E o la respuesta individual, lo que podría afectar la biodisponibilidad y bioactividad de los polifenoles [72].

Es importante recordar que los voluntarios del presente estudio son sujetos sanos y los biomarcadores de inflamación que hemos determinado se encuentran entre valores normales en plasma. Por tanto, las diferencias observadas dentro del rango de valores normales de estos biomarcadores, a pesar de ser estadísticamente significativas, no son llamativas desde el punto de vista clínico. Sin embargo, si el producto en estudio ha logrado cambios estadísticamente significativos en personas sanas, estos cambios podrían ser aún mayores en pacientes con valores anormales [73,74], ya que los polifenoles del producto ayudarían a combatir al menos parcialmente el agente que causa esta alteración. del nivel plasmático [75].

Por tanto, futuras investigaciones podrían centrarse en considerar estos aspectos tanto en poblaciones sanas como no sanas.

4. Materiales y Métodos

4.1. Diseño de prueba

Este estudio consistió en un ensayo clínico aleatorizado, cruzado, doble ciego, estratificado por sexo y controlado con placebo para evaluar la eficacia del consumo diario de un nutracéutico encapsulado (Juice Plus plus Premium®, The Juice Plus plus Company, Collierville , TN, EE. UU.) basado en diferentes frutas y verduras en biomarcadores de inflamación y estado oxidativo del plasma sanguíneo. La intervención tuvo una duración de 36 semanas: dos períodos de 16 semanas separados por un período de lavado de 4 semanas. Durante la intervención, los sujetos acudieron al laboratorio en cuatro ocasiones (al inicio y al final de cada fase), obteniendo muestras de sangre en ayunas. Al inicio de cada fase se entregaba el producto (EXT o PLA) a los sujetos, y al final de cada fase se pedía a los sujetos que devolvieran los envases para que los investigadores cuantificaran los productos restantes.

Cada sujeto firmó un documento de consentimiento informado y se le asignó un código numérico por orden de llegada; posteriormente, un investigador externo llevó a cabo la aleatorización mediante un generador computarizado (Epidat v4.1 Epi-dat, España) asignando a los sujetos a uno de los grupos. Ni los investigadores ni los sujetos sabían a qué grupos pertenecían los sujetos. Tanto el producto como el placebo fueron marcados con códigos proporcionados por la empresa distribuidora y clasificados en A y B, y solo al final del estudio se notificó a los investigadores qué código correspondía al producto y cuál al placebo. El protocolo fue aprobado por la Comisión de Revisión Institucional de la Universidad Católica San Antonio de Murcia (UCAM) (fecha: 24 de noviembre de 2017; código: CE111072). Este estudio se llevó a cabo siguiendo los Estándares de Buena Práctica Clínica y se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki. El ensayo se registró en www.clinicaltrials.gov (consultado el 11 de junio de 2020) (identificador CFE/JU/44-17). El estudio se llevó a cabo en el Departamento de Farmacia de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Católica San Antonio de Murcia (UCAM). Se cumplió con la legislación europea vigente en materia de protección de datos personales (Reglamento (UE)2016/679).

4.2. Participantes

Los sujetos debían cumplir con todos los criterios de inclusión (firmar el consentimiento informado, IMC entre 18,5 y 35 kg/m2, no padecer una enfermedad crónica, no consumir más de tres raciones de frutas y verduras al día y edad entre 18 y 65 años) y no cumplir ninguno de los criterios de exclusión (estar medicado o en tratamiento farmacológico, tomar multivitaminas, ser alérgico a frutas o verduras, estar a dieta, ser vegetariano o vegano, fumar, consumir más de 3 vasos de alcohol ( vino o cerveza) al día, estar embarazada, haber tenido una cirugía mayor en los últimos tres meses, tener problemas para dormir y haber donado 0.5 L de sangre en los últimos tres meses). Tras comprobar los criterios de inclusión/exclusión, un total de 108 sujetos de ambos sexos iniciaron el estudio. Se llevó a cabo una verificación para garantizar que los sujetos seguían cumpliendo los criterios durante todas las visitas a la unidad mediante una encuesta del índice de estilo de vida mediterráneo (MEDLIFE) para evaluar los hábitos dietéticos y la actividad física [76]. Durante la intervención, 16 sujetos se perdieron durante el seguimiento, por lo que el

el número de sujetos que completaron el estudio fue de 92, cuyos datos demográficos se muestran en la Tabla 1.

4.3. Suplemento de prueba

El producto bajo investigación y el placebo tenían las mismas características, y ambos fueron fabricados y proporcionados por The Juice Plus plus Company, Collierville, TN, EE. UU. La presentación fue en forma de productos farmacéuticos encapsulados de color blanco, provistos en frascos diferenciados únicamente por un código. Una vez finalizado el estudio, se proporcionó a los investigadores qué código pertenecía al producto y cuál al placebo. Las diferencias en el producto comercial eran que consistía en la ingesta de tres tipos diferentes de cápsulas por día: dos de bayas mixtas, dos de frutas mixtas y dos de verduras mixtas, cada una proporcionada en una botella separada. Por ello, y con el fin de poder fabricar un producto similar y un placebo, se decidió fabricar unas cápsulas que contenían una mezcla de las tres cápsulas mencionadas (bayas, frutas y verduras), siendo el consumo diario para este estudio de seis cápsulas, tres antes del desayuno y tres a media tarde, acompañadas de agua.

El producto bajo investigación se suministró en cápsulas blancas opacas y contenía jugo de frutas, verduras y bayas en polvo y pulpa de manzana, naranja, piña, arándano, melocotón, cereza acerola, remolacha, ciruela, dátil, mango, zanahoria, perejil, col rizada, brócoli, repollo, espinacas, salvado de arroz, tomate, hojas de alcachofa, arándanos, moras, grosellas negras, arándanos rojos, uvas concord, bayas de saúco, extracto de semilla de uva, extracto de té verde, raíz de jengibre, frambuesas, cacao, granada, mezcla natural de tocoferoles ( , δ, , -tocoferoles, girasol -tocoferol), mezcla de carotenoides naturales (luteína, -caroteno, licopeno, astaxantina), pectina cítrica, bioflavonoides cítricos, cáscara de limón, carbonato de calcio, ajo en polvo, espirulina, mezcla natural de enzimas, dióxido de silicio , estearato de magnesio de origen vegetal, tangeretina y Lactobacillus acidophilus. Una dosis diaria de 6 cápsulas proporcionó 2,91 mg de caroteno, 18,7 mg de vitamina E, 159 mg de vitamina C, 318 µg de folato, 6,1 mg de luteína, 1 mg de licopeno y 0,15 mg de astaxantina. El placebo consistió en celulosa microcristalina, almidón de arroz, cápsula vegetal (celulosa), estearato de magnesio y colorantes artificiales (FD&C amarillo n.º 6 y FD&C azul n.º 1).

La caracterización polifenólica del producto se realizó en un estudio previo de Bresciani et al. a través de UHPLC-QqQ-MS, mostrando un total de 119 compuestos polifenólicos de diferentes familias fenólicas, incluyendo flavonoles como kaempferol y quercetina, antocianinas y flavonas [77]. En cuanto a la biodisponibilidad, el conocimiento de la cantidad biodisponible de polifenoles es más interesante que la cantidad total, ya que, en muchas situaciones, los polifenoles más abundantes no son los más activos para el organismo [78]. Por esta razón, Bresciani et al. evaluaron la biodisponibilidad del producto, encontrando que de las 92 moléculas monitoreadas, solo se identificaron 20 metabolitos circulantes en plasma, todos ellos como restos de sulfato, glucurónido o glicina, apareciendo en diferentes momentos en plasma dependiendo del lugar de absorción en el tracto digestivo [79].

4.4. Variables de estudio

Todas las variables se analizaron cuatro veces durante el estudio: al principio y al final de cada fase de consumo de producto de 16-semana. Durante el estudio, no se permitió a los sujetos iniciar o modificar ningún tratamiento hormonal, ni realizar cambios significativos en la dieta o la actividad física que pudieran afectar las variables del estudio.

Mediciones de muestras de sangre

Los sujetos debían llegar después de un período de ayuno de 12 h, permitiendo solo la ingesta de agua en las 3 h anteriores. No se permitió el ejercicio de intensidad moderada-alta 24 h antes de la extracción. Las muestras de sangre se recolectaron de la vena antecubital en un tubo de recolección de sangre k3E/K3EDTA (3 mL) y tubos de recolección de sangre Serum Gel and Clot Activator (5 mL) *3. Antes de su envío al laboratorio (Laboratorios MUNUERA SL Murcia, España), únicamente se centrifugaron los tubos de recogida de sangre Serum Gel y Clot Activator (4500 rpm, 5 min, 4 ◦C). Los biomarcadores analizados para cada variable fueron: (a) Biomarcadores proinflamatorios: OxLDL (ng/mL) por ensayo ELISA en muestras de suero, TNF- (pg/mL) ysNTFR1 (ng/mL) por ELISA competitivo (marca de diagnóstico DRG), PCR (mg/L) por inmunoensayo turbidimétrico (PETIA), y homocisteína (pg/mL) en analizador BN ProSpec® (según protocolo proporcionado en el kit Siemens N Latex HCYOPAX 03); (b) vitaminas: Vitamina E (mcg/mL) por HPLC con un cromatógrafo JASCO (PU-980 IntelligentPLC-Plus) y una columna Betasil-C18 (tamaño de partícula 5 µm, 250 × 4,6 mm) conectada a una fluorescencia JASCO detector (FP-920 Intelligent Fluorescense Detector), y vitamina B12 (pg/mL) por quimioluminiscencia con inmunoensayos comerciales utilizando equipo automatizado Centaur XPSiemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (c) catecolaminas: Cortisol (mcg/L) usando la técnica de quimiominiscencia con inmunoensayo Immulite 2000 (DPC, Gwynedd, RU), y noradrenalina (pg/mL), adrenalina (pg/mL) y dopamina (pg/mL) por HPLC con caudal de 0,5mL/min, Tº de 35 ◦C, sensibilidad de 20, potencial de 0,7, fase móvil de acetonitrilo-agua, y fase inversa de C18 mediante n detector electroquímico; (d) hormonas tiroideas: T3 (mcg/L), T4 (mcg/L) y TSH (mU/l) usando equipo automatizado CentaurXP Siemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); e) estado inmunológico: IgA (mg/L) mediante la técnica de turbidimetría con el test Monolab. Como reactivos, se utilizaron tampón Tris (20 mmol/L), PEG 8000 y pH 8,3 como diluyente y suero de cabra, IgA antihumana y pH 7,5 como anticuerpo.

4.5. Análisis estadístico

Las variables continuas se presentan como media ± desviación estándar (DE) al inicio y en su evolución, aplicando la prueba de Kolmogorov-Smirnov para verificar la distribución normal de los datos discontinuos. El análisis se realizó para todos los sujetos que participaron en el estudio, tanto en el período de consumo del producto como del placebo. Para las variables cuantitativas se realizó una prueba de la t de Student de comparación entre las dos ramas del estudio. Para analizar las diferencias entre los grupos (EXT y PLA) en la evolución de las diferentes variables, se realizó un análisis de varianza de medidas repetidas con el tiempo como factor intrasujeto. De esta forma, se establecieron diferencias para cada variable analizada, considerando estos factores. Se realizó una prueba de Bonferroni para el análisis post-hoc. Se compararon las diferencias significativas (con la opción de asumir igualdad de varianza o no). En el conjunto de pruebas estadísticas, el nivel de significancia elegido fue 0.05. El análisis estadístico se llevó a cabo con el software SPSS 24 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EE. UU.).

5. Conclusiones

Nuestra investigación demostró que el consumo crónico de un extracto polifenólico a base de bayas, frutas y verduras en una población sana que no consume las cantidades diarias recomendadas de frutas y verduras mejora el estado oxidativo y la inflamación a través de una mejora en varios biomarcadores sanguíneos, especialmente OxLDL, CRP y HDL-colesterol, mejorando también los valores de las catecolaminas, en particular la dopamina.

Contribuciones de los autores: Adquisición de fondos, MPZ y JM; investigación, RA y JM; metodología, RA, J.Á.C., RX-M., BC, DV, MPZ y JM; administración de proyectos, JM; supervisión, JM; validación, JM; redacción: revisión y edición, RA, J.Á.C. y JM Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.
Financiamiento: Este estudio fue financiado por Juice Plus Company. En ningún momento la empresa ha colaborado en el diseño o gestión de los datos obtenidos.
Declaración de la Junta de Revisión Institucional: Este estudio se realizó de acuerdo con las pautas de la Declaración de Helsinki, aprobada por el Comité de Ética de la Universidad Católica San Antonio de Murcia (UCAM) (fecha: 24 de noviembre de 2017; código: CE111702).
Declaración de consentimiento informado: Se obtuvo el consentimiento informado de todos los sujetos involucrados en el estudio.

Declaración de disponibilidad de datos: No es necesario.
Agradecimientos: Los autores agradecen a los sujetos por participar en el estudio, así como a la empresa JuicePlus por el apoyo y la promoción de la investigación.
Conflictos de interés: Los autores declaran que no tienen ningún conflicto de interés con respecto al presente manuscrito.
Disponibilidad de muestra: No aplicable.

Referencias

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