Efectos del extracto de Cistanche Deserticola sobre la respuesta eréctil del pene en ratas castradas

Resumen:Cistanche desertica(CD) ha sido considerado como un agente tónico en la función reproductiva durante miles de años. Los efectos del extracto de CD enpene eréctilrespuesta fueron investigados en el presente estudio. Después de la cirugía de castración, las ratas se trataron por vía intragástrica con extracto de CD ({{0}}.45, 0.90 y 1.8 g/kg) diariamente durante cuatro semanas.Pene eréctilse midió la respuesta y se ensayaron las hormonas séricas al final del experimento. Se evaluó que lalatencia eréctilse hizo más largo y elduración de la erecciónsignificativamente más corto en ratas castradas en comparación con los controles operados de forma simulada. Sin embargo, el extracto de CD acortó ellatencia eréctily prolongó la duración de la erección para minimizar los efectos negativos de la castración. A la dosis de 0.9g/kg, el extracto de CD reguló la concentración sérica de la hormona luteinizante acercándose al nivel normal en ratas castradas. Estos hallazgos indicaron que la CD facilitó la respuesta eréctil del pene y moduló el nivel de hormonas séricas hasta cierto punto.

Palabras clave:Cistanche desertica; respuesta eréctil; castración; hormona

Para más detalles sobre cistanche mejorar la función sexual

INTRODUCCIÓN

CistancheHoffmg. Et Link, uno de los géneros de la familia Orobanchaceae, se distribuye principalmente en las tierras áridas y desiertos del hemisferio norte, como Mongolia Interior,Xinjiang, Ningxia, regiones autónomas de China e Irán, India, Mongolia, etc. Las especies Cistanche pertenecen a las hierbas parásitas perennes, que comúnmente se adhieren a las raíces de las plantas fijadoras de arena como Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum y plantas Tamarix, etc. (Jiang y Tu 2009). Herba Cistanche, el tallo de la especie Cistanche, ha sido considerado como un tónico superior y se ganó el honor de "Ginseng de los desiertos". Entre las especies de Cistanche, Cistanche deserticola YC MA ha sido indicada como el principal material de origen de Cistanche (Stefanova et al. 2011). Sin embargo, debido a la sobreexplotación en los últimos años, los recursos naturales de C. deserticola (CD) silvestre son deficientes y se ha recolectado como una de las plantas de Clase II que necesitan protección en China, por lo que otras especies de este género, como C. salsa y C. sinensis, también se utilizan como sustitutos en algunas áreas. Desde que se registró por primera vez en el Material médico chino de ShenNong (un antiguo compendio farmacológico), se cree que el CD tonifica el riñón y fortalece el "Yang" en la práctica clínica según la teoría de la medicina tradicional china, que se alega que es eficaz para la función de reproducción, desarrollo y fertilidad. Mientras tanto, el CD también se ha hervido con cordero, patata o arroz para producir un alimento tónico para tratar el deterioro inducido por el sobreesfuerzo durante cientos de años, lo que sugiere que es seguro tomarlo por vía oral (Xiong et al. 2013). Sin embargo, estos usos anecdóticos existen principalmente en incunables chinos, con información científica limitada discutida en términos de conceptos farmacológicos modernos. La disfunción eréctil (DE) es una condición caracterizada por una erección inadecuada del pene o una erección que no dura lo suficiente en hombres adultos (Cohan y Korenman 2000). ). En respuesta a los agentes químicos modernos y sofisticados, ha habido un interés renovado por buscar medicamentos efectivos y seguros a partir de plantas para el tratamiento de la DE (Adimoelja 2000). Un estudio anterior (Liuet al. 2009) indicó que la CD electiva aceleró la erección del pene en ratas normales, sin embargo, no hubo datos relacionados con el efecto de la CD en la disfunción eréctil. En animales, la castración quirúrgica con orquiectomía bilateral se ha considerado como el estándar de castración. para investigar la DE (Tombal 2005). Por lo tanto, el presente estudio se llevó a cabo para evaluar los efectos potenciales de la EC contra la disfunción eréctil mediante la investigación de la latencia y la duración de la erección en ratas castradas.

MATERIALES Y MÉTODOS

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 por ciento) se compraron de los Institutos Nacionales para el Control de Alimentos y Drogas (Beijing, China). El metanol de grado HPLC se adquirió de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE. UU.). El agua purificada se produjo utilizando un sistema MilliporeMilli-Q Integral 3 y un sistema Q-POD Milli-Q (Bedford, MA, EE. UU.). Los tallos de C. deserticola se compraron de Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, China) y se molieron en polvo fino con un pulverizador pasado a través de un tamiz de malla 60. El análisis HPLC y la preparación del material vegetal Se determinaron los contenidos de echinacósido y acteósido del polvo de CD siguiendo nuestro método anterior (Zhao et al.2011). Luego, cada 100 g de polvo seco se hirvieron en 1,5 L de agua durante 1,5 h. Enfriando a temperatura ambiente, el licor mixto se centrifugó a 2000 rpm durante 10 min (Eppendorf 5810R, Alemania) y el precipitado se volvió a extraer dos veces en las mismas condiciones. Los sobrenadantes combinados se concentraron mediante un evaporador rotatorio al vacío (Heidolph laborota 4001-eficiente, Alemania) a 60 grados, y luego se liofilizaron y produjeron aproximadamente un 42 por ciento de polvo de extracto seco. Al realizar el experimento con animales posterior, el extracto seco se disolvió en agua purificada a temperatura ambiente.

animales de experimentación

Se obtuvieron ratas Sprague-Dawley macho adultas (200-220g) de Medicine Experimental Animal

Centro de la provincia de Guangdong (Guangzhou, PR China), mantenido en cuartos con temperatura controlada con ciclos de luz/oscuridad de 12- horas a temperatura ambiente (22-24 grados) y humedad constante (40-70 por ciento) en SPF (específico libres de patógenos) de laboratorio y alimentados ad libitum. Los procedimientos experimentales cumplieron con la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud. Procedimiento experimental

Una semana antes de la administración, cincuenta ratas macho SD fueron anestesiadas con pentobarbital sódico por vía intraperitoneal (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) y asignadas aleatoriamente a cinco grupos: excepto las ratas en el grupo de operación simulada (Sham), el resto fueron castrados bilateralmente por vía escrotal (Anderes 2003, Schlatt et al. 2002). Mientras tanto, a los grupos tratados con EC se les administró por vía intragástrica 0,45 g/kg (dosis baja de extracto de CD, LCD más Cas), 0,9 g/kg (dosis mediana de extracto de CD, MCD más Cas) y 1,8 g/kg (dosis alta de extracto de CD, MCD más Cas). extracto, HCD más Cas) extracto de CD, respectivamente, mientras que a los grupos simulado y castrado se les administró la cantidad correspondiente de agua solamente. La medición del peso corporal se tomó al comienzo del procedimiento y luego cada semana. Todas las ratas se sometieron a laparotomía inmediatamente después de la muerte para la extracción y pesaje posterior de los siguientes órganos: glándulas prepuciales, vesícula seminal, glándula prostática y músculo elevador del ano.

Medición de la respuesta eréctil del pene

La función eréctil de las ratas de cada grupo se evaluó siguiendo los métodos anteriores (Ji et al. 2009, Luo et al. 2006). Brevemente, se colocó cuidadosamente un electrodo bipolar de acero inoxidable (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) en el pene hasta que se erigió con el pulso de la estimulación eléctrica (5 V) 0,2 s. El tiempo desde la estimulación hasta la erección se registró como la latencia eréctil del pene. Cuando se observó la respuesta eréctil del pene, el electrodo se pudo retirar del pene, y el tiempo que el pene mantuvo la erección se registró como la duración de la erección.

Muestreo de sangre y análisis de hormonas séricas

Las ratas se anestesiaron con pentobarbital sódico por vía intraperitoneal (40 mg/kg) (Jung et al. 1999).

Se extrajeron muestras de sangre y se coagularon a 4 grados durante 4 h, de las cuales se recogió el suero mediante centrifugación a 4000 rpm durante 5 min a 4 grados (Eppendorf 5810 R, Alemania) e inmediatamente se almacenó en un congelador de -20 grados hasta análisis adicionales. Los niveles totales de LH y FSH se midieron utilizando kits comerciales de radioinmunoensayo (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Beijing, China) siguiendo las instrucciones del fabricante (Matsumoto et al. 1986). Basado en la técnica inmunológica radioactiva competitiva, se usó LH (o FSH) marcada con I125-en el ensayo. 100 µl de anticuerpo de conejo purificado a 4 grados (o 37 grados) durante la noche. Luego, se añadió un agente de separación inmune burro-anti-conejo al complejo antígeno-anticuerpo y se centrifugó (3500 rpm, 15 min) para separar la 125I-LH (o FSH) libre y unida al anticuerpo. A continuación, se midió la radiactividad del precipitado en un contador de radioinmunoensayo (DMF-96, Zhongcheng Electrical Technology Development Co., Ltd., Hefei, China). Los límites de sensibilidad de LH y FSHassay fueron ambos de 1,0 mUI/ml.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

El análisis de datos se realizó con el software SPSS versión 16.0.

Los valores se expresaron como media ± desviación estándar (DE). Los datos paramétricos se analizaron mediante análisis de varianza unidireccional (ANOVA) seguido de pruebas LSD post hoc. Los datos no paramétricos se analizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas si la probabilidad de desviación era inferior a 0,05.

RESULTADOS

Determinación cuantitativa del contenido de equinacósido y acetónido del polvo de CD

Los contenidos de equinacósido y acetónido en polvo de CD fueron 1,27±0,01 por ciento y 0,52±0,003 por ciento, lo que se ajustaba a los requisitos de la Farmacopea China. El cromatograma de HPLC del polvo de CD se muestra en la fig. 1.

(4,6 mm × 250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, EE. UU.); fase móvil: 0 solución acuosa de ácido acético al 5 por ciento (V/V) (A) y metanol ( B) ingrediente (0min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B=40: 60; 30 min, A: B=0: 100); caudal: 1ml/min; longitud de onda detectable: 330 nm; temperatura: 30.

Fig. 2: Latencia y duración de la erección del pene en ratas castradas. Los datos se expresan como la media ± DE (n=10). ##pags<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Fig. 3: Los efectos del extracto de CD en las concentraciones de LH en suero en ratas castradas. Los datos se expresan como la media ± DE (n=10). #pags<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

Además, los pesos relativos medios de la glándula prepucial, la glándula prostática y la vesícula seminal y el músculo elevador del ano en ratas incastradas fueron significativamente más bajos (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Niveles de hormonas séricas

Analizado mediante el ensayo RIA, la concentración sérica media de LH en ratas castradas fue de 2,50±0,34 mIU/ml, mostrando un aumento en comparación con el control operado simulado (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

DISCUSIÓN

Nuestros resultados demostraron que la castración prolongó significativamente la latencia eréctil del pene y acortó la duración de la erección, con notable atrofia de órganos accesorios. Sin embargo, el extracto de CD facilitó la respuesta eréctil del pene y moduló el nivel sérico de LH hasta cierto punto en ratas castradas. La erección espontánea es estimulada y mantenida principalmente por andrógenos a través de mecanismos celulares, moleculares y fisiológicos, que implican la relajación del músculo liso cavernoso (Traish et al. 2007, Talha et al.2007). Los niveles insuficientes de testosterona conducen a una disminución de su relajación (McClure 1988), lo que en consecuencia provoca impotencia en los hombres (Bivalacqua et al. 2000).

Especialmente en ratas, se mantiene mediante un amplio rango de concentraciones sistémicas de testosterona como {{0}} por ciento, por debajo del cual la respuesta eréctil se atenúa de manera dependiente de la dosis (Armagan et al. 2006). En el presente estudio, la concentración de testosterona en circulación fue demasiado baja para alcanzar el límite de sensibilidad (0,02 ng/ml) en todas las ratas castradas (los datos no se mostraron en los resultados). Sin embargo, CDextract redujo significativamente la latencia eréctil del pene en tres dosis y prolongó la duración de la erección a 0,90 g/kg y 1,8 g/kg. Probablemente fue la consecuencia del efecto androgénico de la EC mencionado en algunos estudios previos (He et al. 1996a, He et al. 1996b). Algunos órganos accesorios, como la próstata y la vesícula seminal, dependen de los andrógenos, por lo que los cambios de peso pueden reflejar la alteraciones en el estado endocrino (Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).

Existía un nivel umbral de testosterona, por debajo del cual se inhibía el metabolismo de estos órganos (Trachtenberg1985). En nuestro estudio se confirmó que la castración inducía la disminución del peso de los órganos reproductivos accesorios debido a la deficiencia de testosterona. un papel importante en el mantenimiento de la función del pene de los animales castrados (Robert et al. 2004). Como el eje hipotálamo-hipófisis-gónada (HPG) es un mecanismo de control de retroalimentación de circuito cerrado, los niveles bajos de hormonas gonadales pueden regular la secreción de LH y FSH a su vez (Morales et al. 2004). Nuestro estudio ha investigado que el nivel sérico de LH aumentó significativamente en ratas castradas y luego descendió a los niveles normales con extracto de CD a 0,90 g/kg, lo que coincidió con la conclusión anterior de que el aumento del nivel de LH se asoció con un mayor riesgo de disfunción eréctil (Kupelian et al. 2006).

En los testículos, la LH estimula la síntesis y liberación de testosterona, cuyo control de retroalimentación es relativamente consistente, mientras que la FSH actúa directamente sobre las células de Sertoli para nutrirse con el complejo de control de retroalimentación (Hellqvist et al. 2008). Estos hallazgos ofrecieron más apoyo a la suposición de que CD expresaba un efecto similar al de los andrógenos, que podría ser principalmente responsable de la reducción de la LH sérica más que de la FSH. et al. 2006), mientras que contrariamente a los resultados en ratas hembra (Pantaleão et al. 2010). El extracto de CD no pudo mejorar significativamente el peso corporal, lo que probablemente se debió a la duración insuficiente del tratamiento o a los efectos complejos en el estado general de salud. El extracto de CD facilitó la respuesta eréctil del pene al acortar la latencia eréctil y prolongar la duración de la erección en ratas castradas. Estos efectos probablemente se debieron al efecto similar a los andrógenos, que fue respaldado por la observación de que el extracto de CD normalizó las concentraciones séricas de LH, especialmente a la dosis de 0,90 g/kg.

Sin embargo, se necesitan evidencias adicionales para demostrar el efecto del extracto de CD contra los niveles límbicos y atipotalámicos de la disfunción eréctil y se podría ganar más atención a esta valiosa medicina tradicional en el mundo moderno.