2 métodos de prueba

2.1 Análisis farmacológico de la red

2.1.1 Ingredientes activos de Cistanche deserticola

Sobre la base de estudios existentes [7, 22], "Echinacoside", "Verbascósido", "Cistanósido A", "Tubulosido A", "isoactósido", "2-Acetilactósido" y "Tubulosido B"fueron seleccionados como componentes bioactivos para el análisis. Encuentre los datos de la estructura química tridimensional de los siete ingredientes anteriores a través de Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) y guárdelos en formato sdf.

2.1.2 Predicción y selección de objetivos potenciales

Importa los archivos de estructura tridimensional delingredientes activos en la base de datos PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Seleccione "solo objetivos de proteína humana" como especie objetivo y mantenga las otras opciones predeterminadas para obtener los datos correspondientes de diferentes ingredientes. Objetivo objetivo correspondiente.

Se utilizó la base de datos UniProt (https://www.uniprot.org/) para obtener la información del nombre de la proteína y del nombre del gen correspondiente a cada objetivo. Fusiona los puntos objetivo correspondientes a los 7 componentes.

En la base de datos GeneCards (https://www.genecards.org/), utilice "enfermedad inflamatoria intestinal" como palabra clave para buscar genes relacionados con la enfermedad inflamatoria intestinal y organice los resultados de la búsqueda.

Suplemento Cistanche Suplemento de apoyo antiinflamatorio PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 Interacción proteína-proteína (PPI)

Construcción de red Utilice jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) para dibujar un diagrama de Venn en línea para obtener la intersección de los objetivos de ingrediente activo de Cistanche deserticola y los objetivos de EII. Cargue los objetivos de intersección obtenidos en la base de datos String para el análisis de detección de PPI. Descargue el archivo TSV de la red PPI, impórtelo a Cytoscape 3.8.0, calcule el valor de grado de la red de interacción de proteínas y luego embellezca el diagrama de red PPI según el valor de grado.

2.1.4 Ontología genética (GO)

El enriquecimiento funcional y el análisis de enriquecimiento de la vía de la Enciclopedia de genes y genomas de Kyoto (KEGG) se realizaron utilizando la base de datos DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) para identificar los objetivos de los efectos protectores de los ingredientes activos de Cistanche deserticola en la EII. Se realizó un análisis GO en los puntos y luego se utilizó la base de datos DAVID para realizar un análisis de enriquecimiento de la vía KEGG en los objetivos donde los ingredientes activos de Cistanche deserticola desempeñan un papel protector en la EII.

2.1.5 Construcción de la red "ingrediente activo-objetivo-vía" de Cistanche deserticola

Los ingredientes activos de Cistanche deserticola, los objetivos de intersección de los ingredientes activos de Cistanche deserticola y la EII y las vías enriquecidas por KEGG se utilizaron para construir una red de ingrediente activo-objetivo-vía.

2.2 Validación del modelo animal

2.2.1 Establecimiento de modelo animal

Se utilizaron ratones BALB/c macho de grado SPF (5 ~ 8 semanas, 18 ~ 21 g), proporcionados por el Centro de pruebas de alimentos saludables de la Facultad de Artes y Ciencias Aplicadas de la Universidad Unión de Beijing [Número de licencia de uso de animales experimentales: SYXK (Beijing ) 2017-0038], se mantuvieron en una habitación para animales con protección SPF con una temperatura de (23 ± 2) grados, una humedad relativa del 50 % al 70 % y 12 h de exposición a luz fluorescente alternando día y noche. . Todos los protocolos de experimentos con animales fueron aprobados por el Laboratorio de Animales del Centro de Pruebas de Alimentos Saludables de la Facultad de Artes y Ciencias Aplicadas de la Universidad Unión de Beijing. Después de una alimentación adaptativa durante 3 días, 20 ratones se dividieron aleatoriamente en 4 grupos según el peso corporal, con 5 ratones en cada grupo. ①Grupo de control (CZ): beba agua esterilizada libremente y administre agua esterilizada por sonda durante 7 días consecutivos; ②Grupo de control DSS

(DZ): Libre para beber solución DSS al 3% preparada diariamente durante 7 días consecutivos; ③ Grupo de dosis baja de glucósidos totales de Cistanche deserticola (LZ) (concentración líquida: 0.1 g/mL): solución de DSS al 3 % preparada diariamente durante 7 días; , administrar líquido por sonda durante 7 días consecutivos; ④ Grupo de dosis alta (HZ) de glucósidos totales de Cistanche deserticola (concentración líquida 0.4 g/

mL): Beba libremente la solución DSS al 3% recién preparada todos los días y administre la solución por sonda durante 7 días consecutivos. Después de 7 días de modelado continuo, fueron ayunados durante 12 horas y luego sacrificados por dislocación cervical. Se inyectaron glóbulos rojos de pollo por vía intraperitoneal 4 horas antes de la ejecución. Inmediatamente después de la ejecución, se extrajeron los globos oculares para recoger sangre. Se extrajo el líquido peritoneal y se abrió la cavidad abdominal. Se midió la longitud del colon y se extirparon el bazo del ratón, el nudo de Peyer y otros órganos.

Suplemento Cistanche Suplemento de apoyo antiinflamatorio

2.2.2 Índice de actividad de la enfermedad (DAI)

Los ratones se pesaron antes de la administración intragástrica a una hora fija todos los días y se observaron el estado mental y las propiedades fecales de los ratones. La sangre oculta en heces se midió y se calificó en consecuencia. Los estándares de puntuación se muestran en la Tabla 1. Puntuación DAI=(puntuación de peso corporal + puntuación de carácter fecal + puntuación de sangre oculta en heces)/3 (1)

Tabla 1 Criterios de puntuación de DAI

2.2.3 Detección de la vía de señal inmune (qRT-PCR) de detección de PCR cuantitativa por fluorescencia en tiempo real

Se recogieron bazos de ratón, se cortaron en bloques de tejido de 0.5 cm y se empaparon en una solución estabilizadora de ARN tisular para su almacenamiento. Retire el tejido y córtelo en pedazos, agregue la solución de extracción de ARN y muela en pedazos para extraer el ARN total. Después de la transcripción inversa y la amplificación por PCR, se detectó la activación de dos vías clave de señalización inmunitaria, mTOR y TGF-, en el bazo de ratón. Las secuencias de cebadores utilizadas en qRT-PCR se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2 Tabla de secuencia de cebadores